כל ההליכים הנוגעים לבעלי חיים והטיפול בהם תואמים את החוקים והמדיניות הלאומיים והבינלאומיים. אישור המחקר התקבל מוועדת הביקורת המוסדית של אוניברסיטת מילאנו וממוסד ממשלתי (אישור משרד הבריאות מס' 84/2014-PR). נתונים התומכים בממצאי מחקר זה זמינים מהמחבר המתאים על פי בקשה סבירה. מודל הניסוי ודיאגרמות פרוטוקול אקוקרדיוגרפיה מפורטים באיור 1 ובאיור 2.
1. הכנת בעלי חיים
- חזירי בית זכרים מהירים (משקל 39.8 ± 0.6 ק"ג) במשך 8 שעות לילה לפני הניסוי. לספק גישה חופשית למים.
2. השראת הרדמה ותחזוקה, טיפול מונע אנטיביוטי
- יש לגרום להרדמה כללית על ידי הזרקה תוך שרירית של קטמין (20 מ"ג/ק"ג) ואחריה פרופופול תוך ורידי (iv) (2 מ"ג/ק"ג). בדוק עומק מספיק של הרדמה על ידי אובדן טונוס הלסת, אובדן רפלקס הקרנית עם הרפיה שרירים וצורך אוורור מכני.
- הכניסו קטטר לווריד הצוואר הימני וקדמו אותו לווריד הווריד הנבוב העליון.
- שמור על הרדמה עם עירוי IV רציף של פרופופול (4-8 מ"ג / ק"ג / שעה).
- יש להזריק סופנטניל (0.3 מק"ג/ק"ג) ולאחר מכן אמפיצילין (1 גרם) עד iv.
3. הנשמה מכנית, ניטור אלקטרוקרדיוגרפי והמודינמי
- הניחו צינור קנה נשימה אזוק כך שהחזירים מאווררים מכנית עם נפח גאות של 15 מ"ל/ק"ג ו-FiO2 של 0.21.
- התאם את תדר הנשימה ושמור על הלחץ החלקי של פחמן דו חמצני (EtCO2) בין 35-40 מ"מ כספית עם קפנומטר אינפרא אדום.
- לגלח את החזיר עם סכין גילוח מכני על כל החזה ורגל שמאל (שבו צנתרים אנדו-וסקולריים למדידות המודינמיות יוכנסו בניתוח).
- יש למרוח פלאקים של אק"ג (ECG) במישור הקדמי על כפות הרגליים המגולחות והבטן התחתונה, באמצעות שלוש רפידות אק"ג. הניחו שניים מהם על הרגליים הקדמיות, והשלישי בצד שמאל של הבטן.
- הכנס קטטר מלא נוזל לעורק הירך הימני למדידות לחץ עורקים ממוצע ולדגימת דם עורקי למתח חמצן בדם עורקי (PO 2), מתח פחמן דו חמצני (PCO2) ו- pH.
- מקדמים צנתר 7 F pentalumen thermodilution מווריד הירך הימני לעורק הריאה כדי למדוד לחץ פרוזדורים ימני, טמפרטורת ליבה ותפוקת לב.
- יש להכניס צנתר בלון 5F מעורק התרדמה המשותף הימני. מקדמים אותו לתוך אבי העורקים, ולאחר מכן לתוך העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי מעבר לענף האלכסוני הראשון בעזרת אנגיוגרפיה. אשר את המיקום הנכון על ידי הזרקת מדיום ניגודיות רדיוגרפי.
- הקדמו צנתר בקצב 5F מהווריד התת-קלאבי הימני לחדר הימני (RV) כדי לגרום לפרפור חדרים (VF).
4. אקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה בסיסית
הערה: אקוקרדיוגרפיה אורכת בממוצע 20-30 דקות. עבור TTE, נעשה שימוש בבדיקה מרובת תדרים במערך שלבים של 2.5 עד 5 מגה-הרץ, בעוד אק"ג נרשם ברציפות. קבוצות של מסגרות ולולאות cine המורכבות מלפחות שלושה מחזורי לב רצופים מאוחסנות לניתוח לא מקוון.
- צלם תמונות חד-ממדיות (מצב M) ודו-ממדיות (דו-ממדיות) של ציר קצר וארוך ברמת אבי העורקים וברמת LV כדי להעריך את עובי הקיר, אבי העורקים, פרוזדורים וממדי LV, פונקציית LV ותנועת דופן מגזרית.
- צלם תצוגה דו-ממדית של ציר קצר ברמת אבי העורקים. תצוגה זו מציגה את האטריום השמאלי (LA, מרכז תחתון), מסתם אבי העורקים (מרכז), אטריום ימין (למטה משמאל), מסתם טריקוספיד (שמאל), מערכת זרימת החדר הימני (למעלה) ושסתום הריאה (מימין). מקם את הסמן באמצע אבי העורקים ובלוס אנג'לס כדי להקליט את התמונות המתאימות במצב M.
- קבל תצוגה דו-ממדית של צירים ארוכים. תצוגה זו מאפשרת הדמיה של שורש אבי העורקים ועלוני שסתום אבי העורקים, מחיצות בין-חדריות, LV ו- LA. אבי העורקים חייב להיות באותו מישור אופקי וברצף עם המחיצה הבין-חדרית; עלוני אבי העורקים צריכים להיות גלויים בבירור. מקם את המתמר בחלל הבין-קוסטלי השמאלי השלישי או הרביעי, עם המחוון שלו לכיוון האגף הימני, ומבצע שינויים קטנים בזווית הגשושית על מנת לקבל תצוגה סטנדרטית.
הערה: תצוגות פרסטרנליות קצרות וארוכות ציר משמשות למדידת רוחב שורש אבי העורקים והממד האנטרופוסטרי של LA. ניתן לצלם את תמונות M-Mode מציר ארוך או מציר קצר ברמת המסתם האאורטלי (ראה שלב 4.1).
- קבל תצוגה דו-ממדית של ציר קצר של LV ברמת הפפילרי. השתמש בתצוגת ציר קצר ברמת הפפילרי או האקורד למדידות ממד LV; בדרך זו, בחיה מאווררת, קל יותר לקבל תמונה סטנדרטית, בהשוואה לזו שבתצוגה ארוכת הציר.
הערה: ה- LV חייב להיראות מעגלי ושני השרירים הפפילריים צריכים להיות גלויים בבירור. שרירים פפילריים נקראים, על פי המוסכמות, anterolateral ו posteromedial. אם העלונים המיטרליים גלויים לעין והדופן החופשית של החדר הימני אינה רצף, התמונה אינה סטנדרטית.
- מקם את הסמן באמצע ה- LV והקלט תמונה במצב M של ה- LV ברמת הפפילרי.
- חזור על שלבים 4.1.3 ו- 4.1.4 בחיפוש אחר הרמה התת-פפילרית והאפיקלית של ה- LV.
- צלם תצוגה דו-ממדית אפית בעלת 4 תאים (AP4CH). ה- LV, ה- LA, החדר הימני (RV) והאטריום הימני (RA) נראים יחד עם השסתומים המיטרליים והטריקוספידים ומחיצה בין-פרוזדורית ובין-חדרית. מקם את הבדיקה ברמה של קודקוד הלב (שטח בין-קוסטלי רביעי; הסמן על הבדיקה צריך להיות מכוון שמאלה). המבנה המסייע לתקנן את הנוף הוא המחיצה הבין-חדרית, אשר אמורה להיות מוצגת במקביל לקרן האולטרסאונד. זה אפשרי על ידי הזזת המתמר או מדיאלי או לרוחב.
הערה: קיצור מקדים מתרחש כאשר מישור ההדמיה אינו עובר דרך קודקוד LV האמיתי, וכתוצאה מכך נוצר מבט אלכסוני על חלל ה-LV. Foreshortening מעריך בחסר את נפחי LV ומעריך יתר על המידה את LVEF. הקיצור נמנע על ידי שינוי מיקום הגשושית ו/או העברתה לחלל בין-קוסטלי נמוך יותר ולרוחב. הציר הארוך LV צריך להיות גדול מ 4.8 ס"מ בחזירים עם משקל גוף 33-35 ק"ג.
- קבל תצוגה אפית דו-קאמרית (AP2CH). מ-AP4CH, סובב את המתמר בזווית של 45-60° נגד כיוון השעון; רק LA ו- LV חייבים להיות גלויים, לכן הימנעו מהמחיצה הבין-חדרית וודאו שהסמן עובר באמצע LA ו- LV.
- קח תצוגת שלושה תאים אפית (AP3CH) או ציר ארוך אפי. מ-AP4CH, סובב את המתמר ב-45-60° נגד כיוון השעון. ב-AP3CH ניתן לראות את קודקוד ה-LV, יחד עם מקטעי המחיצה הקדמית וה-LV הפוסטרולטרלי. המבנים הנראים האחרים הם LVOT, LA, ושסתום אבי העורקים.
- קבל תצוגה אפית בת חמישה חדרים (AP5CH). התחל מתצוגת AP4CH וסובב את הגשושית בגחון, ולאחר מכן לרוחב על מנת לדמיין מחיצה אלכסונית, אבי העורקים עם LVOT, LV, RV ושניהם אטריה.
- אקוקרדיוגרפיה דופלר פועם (PW)
הערה: שיטה זו מאפשרת: (1) מדידה של מהירויות זרימה transvalvular, תפוקת הלב ונפח שבץ; (2) מדידת מרווחים, כגון זמן האצת עורק ריאתי, ו-(3) הערכת תפקוד דיאסטולי LV.
הערה: תופעת הכינוי נמנעת על ידי הורדת תדירות החזרה של הדופק הבסיסי או הגדלתו כאשר מופיעים תדרים מטרידים חדשים.- לקבלת תצוגת AP4CH מתוקננת, השתמש בדופלר צבע והקליט לולאת cine.
- מקם את נפח הדגימה PW על סף עלונים מיטרליים, והשתמש בדופלר צבע כדי למקם את הסמן בצורה אורתוגונלית לזרימה המיטרלית ומיושר לציר הארוך של LV. לאחר מכן, עבור ל- PW ורשום לפחות שלושה מחזורי לב.
- לקבלת תצוגת AP5CH מתוקננת, השתמש בדופלר צבע והקלט לולאת cine עם שלושה מחזורי לב לפחות.
- השתמש בדופלר צבע כדי למקם את הסמן באופן אורתוגונלי לזרימת אבי העורקים. הזז את נפח הדגימה לכיוון שסתום אבי העורקים עד להאצת מהירות הזרימה. רשום לפחות שלושה מחזורי לב.
- השתמש בהדמיית דופלר רקמות (TDI): מ- AP4CH סטנדרטי דו-ממדי, PW TDI מודד מהירות שיא אורכית של שריר הלב מקטע יחיד.
הערה: המגבלה העיקרית של TDI היא תלות הזווית שלו. אם זווית ההיארעות עולה על 15°, יש הערכת חסר של כ-4% של המהירות.
5. אינדוקציה של אוטם שריר הלב
- לנפח את הבלון של הצנתר בעורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי עם 0.7 מ"ל אוויר. אשר את החסימה על ידי הרמה מהירה מתקדמת של אק"ג ST-סגמנט5.
6. דום לב
- דום לב מוגדר ברגע שמתרחש פרפור חדרים. לאחר 10 דקות של חסימה, פרפור חדרים עלול להתרחש באופן ספונטני. אחרת, יש להשרות אותו באמצעות קטטר קצב עם זרם חלופי של 1 עד 2 mA (AC) המועבר לאנדוקרדיום החדר הימני.
- יש להפסיק את ההנשמה לאחר תחילת פרפור החדרים ולנפח את הצנתר 5 עם הבלון.
7. החייאה לב-ריאה
- לאחר 12 דקות של פרפור חדרים לא מטופל, התחל בתמרוני החייאה לב-ריאה (החייאה). אלה כוללים דחיסת חזה עם מדחס החזה המכני אוורור מכני עם חמצן (נפח גאות 500 מ"ל, 10 נשימות לדקה).
- לאחר 2 דקות וכל 5 דקות של החייאה, יש להזריק אפינפרין (30 מק"ג/ק"ג) דרך הצנתר הממוקם באטריום הימני.
- לאחר 5 דקות של החייאה, נסו דפיברילציה עם שוק חשמלי של 150 ג'אול, באמצעות דפיברילטור.
הערה: החייאה מוצלחת מוגדרת כשחזור קצב לב מאורגן עם לחץ עורקי ממוצע >60 מ"מ כספית5.
8. טיפול תומך לאחר דום לב
- לאחר החייאה מוצלחת, יש להמשיך בהרדמה ולנפח את הבלון בעורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי.
- ארבעים וחמש דקות לאחר ההחייאה, יש לנפח את הבלון ולמשוך את צנתר העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי5 (איור 1).
- אם ההחייאה לא מושגת באופן מיידי, יש לחדש את ההחייאה ולהמשיך אותה במשך דקה אחת לפני הדפיברילציה שלאחר מכן.
- אם פרפור החדרים חוזר, יש לטפל בו על ידי דפיברילציה מיידית.
- אין להשתמש באמצעים תומכים מלבד אפינפרין.
9. תצפית של ארבע שעות (ח)
- לאחר החייאה מוצלחת, לשמור על הרדמה.
- עקוב אחר בעלי החיים באופן המודינמי במהלך תקופת התצפית של 4 שעות (לטווח קצר).
- שמור על טמפרטורת בעלי החיים על 38 ± 0.5 °C (75 °F).
- בשעה 2 ו -4 שעות לאחר ההחייאה, חזור על בדיקת אקו לב מלאה, בהתאם לשלבים המתוארים בסעיף 4.
הערה: צלעות שבורות עשויות להיות תוצאה של דחיסת חזה. במקרה זה, חשוב להזיז את הגשושית לחיצה עליה בעדינות בחללים הבין-קוסטליים.
- לאחר תצפית של 4 שעות, הוציאו את החזירים והחזירו אותם לכלוב שלהם.
- תן שיכוך כאבים עם butorphanol (0.1 מ"ג / ק"ג) על ידי הזרקה תוך שרירית (IM) או לפי ההמלצות על ידי הנחיות מוסדיות לטיפול בבעלי חיים.
- לאחר מכן, להזריק ampicillin (1 גרם) על ידי IM.
10. 96 שעות השגחה והמתת חסד
- בתום 96 שעות לאחר דום לב AMI-ROSC (אמצע הקדנציה), מרדימים מחדש את בעלי החיים (שלב 2) לבדיקת אקו לב (שלב 4). נטר את האק"ג ברציפות כפי שתואר קודם לכן (שלב 3).
11. מדידות אקוקרדיוגרפיות
הערה: קח את כל ההקלטות והמדידות בהתאם להמלצות ההנחיות של האגודה האמריקאית והאירופית לאקוקרדיוגרפיה 6,7. שלח את כל הקלטות האקו לב באמצעות חיבור שולחן עבודה מרוחק לאחסון במסד נתונים מקומי לניתוח. קרדיולוג עיוור לקבוצות המחקר מבצע בממוצע לפחות שלוש מדידות לכל משתנה.
- עבור קוטר אבי העורקים וקוטר LA, מדדו ממצב M של תצוגות הציר הקצר ברמת הסינוסים של אבי העורקים בשיטת קצה מוביל לקצה מוביל.
- עבור קוטר LV outflow tract (LVOT), יש למדוד אותו 0.5-1 ס"מ מתחת לקוצר אבי העורקים (פרוקסימלי) מנקודת מבט פרסטרנלית ארוכת ציר.
- לעובי דופן דיאסטולי אנטרוזפטלי ואחורי ברמת הפפילרי, יש למדוד בקצה הדיאסטולה מהגבול שבין דופן שריר הלב לחלל והגבול בין דופן שריר הלב לקרום הלב.
- עבור מקטע פליטת LV (LVEF), חשב אותו כך: (נפח דיאסטולי קצה LV (EDV)-נפח סיסטולי קצה LV (ESV)) / (LVEDV) * 100. הגדר את דיאסטולה הקצה כמסגרת הראשונה לאחר סגירת המסתם המיטרלי או המסגרת שבה ממד LV הוא לרוב הגדול ביותר. הגדר את הסיסטולה הסופית כמסגרת לאחר סגירת המסתם האאורטלי או המסגרת שבה ממדי הלב הם הקטנים ביותר. עקוב אחר העקבות של מדידות שטח LV בגבול בין שריר הלב לחלל LV. מדוד אזורי LV וחשב נפחי LV על-ידי שינוי כלל המישור היחיד של סימפסון מתצוגת AP4CH.
- חזור על שלב 11.4 בתצוגת AP2CH עבור שיטת סימפסון הדו-כנפית המשתמשת בתצוגות AP4CH ו-AP2CH הסיסטוליות הסופיות כדי לחשב אמצעי אחסון LV ו- LVEF.
- עבור מהירות זרימה מיטרלית בשיא PW (E vel) (cm/s), מהירויות A (A vel) וזמן האטת גל E (DT), מדדו אותן מספקטרום הזרימה המיטרלית (איור 6).
- עבור מהירויות TDI סיסטוליות s ומהירויות e' ו-a דיאסטוליות, מדדו אותן מתמונות ספקטרום TDI בתצוגת AP4CH מביטול המחיצה או הלטרלי וחשבו ממוצעים בקו הבסיס וב-96 שעות לאחר חסימה כלילית.
הערה: יחס מהירות E vel ל-TDI נגזר e' (cm/sec) (E/e') הוא אינדיקטור לתפקוד דיאסטולי. יחס E/e′ הרגיל צריך להיות 9 או פחות או יותר מ-15; ערכים בין 8-14 מציגים משמעות לא מוגדרת.
- חשב נפח שבץ (SV) כנפח הדם הנשאב מהחדר השמאלי עם כל סיסטולה. נוסחת SV היא: SV = π * [קוטר LVOT/2]2 * LVOT VTI.
- חשב את תפוקת הלב (CO, מ"ל/דקה) כזרימת הדם העוברת על פני מערכת הזרימה היוצאת בכל דקה. זה מחושב באמצעות הנוסחה: CO = SV * HR.
- לניתוח תנועתיות אזורית של LV, חלקו את LV ל-16 מקטעים (ניתן לראות בתצוגות הציר הקצר ו/או בתצוגות החדר האפיקליות 2, 3, 4). ניקוד כל קטע לפי הקריטריונים הבאים: נורמו-קינזיה (נקודה אחת) לעיבוי דופן רגיל וטיול; היפוקינזיה (2 נקודות) לעיבוי קירות מופחת וטיול קיר מופחת; Akinesia (3 נקודות) אין עיבוי קיר או סיור קיר; דיסקינזיה (4 נקודות); דילול דופן סיסטולי כלפי חוץ או LV כולל תנועת דופן מפרצתית, עם בליטות אקסצנטריות במהלך הסיסטולה והדיאסטולה. חשב את מדד ציון תנועת הקיר (WMSI) באמצעות הנוסחה: ציון כולל/16. בחדר נורמו-קינטי, WMSI הוא 1.
12. ניתוח סטטיסטי
- אקספרס נתונים כממוצע ± SEM. השתמש ב- ANOVA חד-כיווני, למדידות חוזרות ונשנות ולמבחן הפוסט-הוק של Tukey. *p < 0.05 לעומת נקודת הבסיס (BL); § p < 0.05 2 שעות לאחר דום לב AMI-ROSC לעומת 96 שעות לאחר דום לב AMI-ROSC; # p < 0.05 4 שעות פוסט AMI-דום לב-ROSC לעומת 96 שעות פוסט AMI-דום לב-ROSC.