קיבוע ושיטת הפעלה לעיסוי בטן בעכברי T2DM

Summary

מחקר זה מציג מכשיר עיסוי בטן לעכברים המשכפל עיסוי ידני תוך מזעור מתח ונזק לרקמות. המכשיר מוריד משמעותית את רמות הגלוקוז בדם, משפר את חילוף החומרים של השומנים ומשפר את הרגישות לאינסולין בעכברי סוכרת מסוג 2, ומציע גישה טיפולית מבטיחה ולא פולשנית עם פוטנציאל קליני.

Abstract

סוכרת מסוג 2 (T2DM) היא בעיה עולמית הגדלה במהירות בבריאות הציבור, המשפיעה על למעלה מ-500 מיליון אנשים ברחבי העולם. למרות שעיסוי בטן הראה יתרונות פוטנציאליים בניהול סוכרת מסוג 2, יעילותו נותרה לא ברורה, במיוחד במחקרים בבעלי חיים, שבהם אתגרים כמו ציות לבעלי חיים והצורך בבקרת לחץ מדויקת מסבכים את היישום. כדי להתמודד עם אתגרים אלה, מחקר זה מציג מכשיר סימולציה חדשני לעיסוי בטן שתוכנן במיוחד עבור עכברים. מכשיר זה נותן פתרון מעשי לביצוע התערבויות עיסוי בטן בצורה מבוקרת תוך מזעור מתח ונזק לרקמות לבעלי החיים. הוא מרסן היטב את גפיהם של העכברים, מאפשר להם להישאר בהכרה במהלך העיסוי, ומציע שליטה מדויקת הן על הלחץ והן על תדירות העיסוי המופעל על הבטן. יכולתו של המכשיר לדמות עיסוי בטן ידני בדיוק פותחת אפשרויות חדשות למחקרים ניסיוניים המעריכים את השפעותיו על סוכרת מסוג 2. המטרה העיקרית של פרוטוקול זה היא לחקור את ההשפעה של עיסוי בטן על סמני T2DM מרכזיים כגון רמות גלוקוז בדם, חילוף חומרים של שומנים ורגישות לאינסולין בעכברים. על ידי מתן שיטה אמינה וניתנת לשחזור לעיסוי בטן, מכשיר זה יכול להציע תובנות חשובות לגבי הפוטנציאל שלו כהתערבות טיפולית לא פולשנית לסוכרת מסוג 2. הממצאים ממחקר זה עשויים לתרום לקידום אסטרטגיות קליניות למניעה וטיפול בסוכרת, במיוחד בשיפור ההבנה של טיפולים מסורתיים כמו עיסוי בטן בפרקטיקה הרפואית המודרנית.

Introduction

סוכרת מסוג 2 (T2DM) היא מחלה כרונית המאופיינת בתנגודת לאינסולין ותפקוד לקוי של תאי β בלבלב. זהו נושא בריאות הציבור כלל ארצי, עם שכיחות הולכת וגוברת במהירות ברחבי העולם¹. על פי דו"ח נטל המחלות המטבוליות העולמי, יותר מ-500 מיליון אנשים ברחבי העולם סובלים מסוכרת, כאשר למעלה מ-90% מהם סובלים מסוכרת^{מסוג 2}. עיסוי בטן הוא התערבות חשובה לטיפול בסוכרת מסוג 2. גוף גדול של מחקרים הראה כי עיסוי בטן יכול לשפר משמעותית את רמות הגלוקוז בדם, איכות החיים, הרכב חיידקי המעיים ותוצריה המטבוליים בחולי סוכרת מסוג 2, ובכך לשפר את הרגישות לאינסולין ^3,4,5. בנוסף, עיסוי בטן מקדם תנועתיות במערכת העיכול, משפר את תפקוד העיכול, מפחית קיפאון במערכת העיכול ומייעל את ספיגת החומרים המזינים וחילוף החומרים של הגלוקוז ^6,7,8. למרות הפוטנציאל שדרכו עיסוי בטן משפר את תוצאות T2DM, לא נחקרו במלואם. באופן ספציפי, הוכח כי עיסוי בטן משפר את הרגישות לאינסולין ואת חילוף החומרים של הגלוקוז על ידי ויסות מסלולים מטבוליים כגון מסלול איתות האינסולין, אך התהליכים הפיזיולוגיים המדויקים עדיין אינם מובנים במלואם. מחקר זה נועד לגשר על הפער הזה על ידי מתן תובנות מכניסטיות מפורטות יותר לגבי האופן שבו עיסוי בטן יכול לשפר T2DM במודלים של בעלי חיים.

המטרה העיקרית של מחקר זה היא לתכנן ולפתח שיטה סטנדרטית וניתנת לשחזור לחקר ההשפעות של עיסוי בטן על סוכרת מסוג 2 באמצעות מכשיר חדשני שתוכנן במיוחד עבור עכברים. מכשיר זה נועד לספק שליטה מדויקת על פרמטרי העיסוי, כגון לחץ ותדירות, תוך מזעור לחץ בעלי חיים והבטחת עמידה ברווחת בעלי החיים.

עם זאת, ביצוע עיסוי בטן על מודלים של בעלי חיים, במיוחד עכברים, מציב מספר אתגרים. שיטות המחקר הנוכחיות מתמודדות עם אתגרים, כולל יישום עיסוי לא עקבי, קושי לשמור על לחץ ותדירות אחידים והבטחת היענות לבעלי חיים במהלך ההתערבות. מגבלות אלו מעכבות את יכולת השחזור ומציגות שונות בתוצאות, ומדגישות את הצורך בטכניקה יעילה ואמינה יותר. ניסויים בבעלי חיים חיוניים כדי לענות על שאלה זו. לעיסוי בטן אצל בעלי חיים, יש צורך לשמור על לחץ ותדירות מסוימים. אולם בפועל, לא קל לגרום לבעלי חיים לציית להוראות ולהישאר במצב הנדרש בתוך המכשיר, מכיוון שהם פעילים באופן טבעי. כמו כן, מאתגר להבטיח לחץ ומהירות עקביים במהלך ההתערבות, מה שמקשה על השגת היציבות הנדרשת לטכניקות עיסוי בטן. לכן, ביצוע התערבויות עיסוי בטן בעכברים, חולדות ומודלים אחרים של בעלי חיים נותר אתגר משמעותי במחקר. יתרה מכך, ניסויים בבעלי חיים חייבים לטפל בנושאים הקשורים לרווחת בעלי חיים, כגון הפגת מתח וחרדה, הפחתת כאב ושיפור התנאים הכלליים. שיטות קיימות, כגון עיסוי לאחר הרדמה או ריסון ידני, הן לרוב עתירות עבודה, מציגות הטיה ניסיונית, או אינן מצליחות לשכפל תנאים פיזיולוגיים טבעיים בבעלי חיים מודעים. פתרונות קודמים כללו דגמי עיסוי בטן חולדות ^9,10,11. כדי להתגבר על מגבלות אלו, אנו מציגים מכשיר עיסוי בטן חדשני לעכברים. במחקר זה, אנו מציגים מכשיר עיסוי בטן חדשני שנועד להתגבר על מגבלות אלו. בהשוואה לטכניקות מסורתיות, מכשיר זה מציע יתרונות משמעותיים, כולל פעולה יציבה, שליטה מדויקת על פרמטרי עיסוי, הפחתת מתח של בעלי חיים ויכולת שחזור משופרת. בנוסף, העיצוב החסכוני שלו משפר את הנגישות ליישומים רחבים יותר בחקר מחלות מטבוליות. על ידי שילוב הנדסה מודרנית עם גישות טיפוליות מסורתיות, מכשיר זה ממלא פער קריטי במתודולוגיות ניסוי לא פולשניות עבור T2DM.

גישה זו תורמת לגוף הרחב יותר של ספרות על טכניקות טיפוליות לא פולשניות לסוכרת מסוג 2, במיוחד אלה שמקורן ברפואה הסינית המסורתית (TCM), המדגישה את ההשפעות הרגולטוריות של עיסוי בטן על תפקודי העיכול והמטבוליות. חוקרים עשויים למצוא שיטה זו מתאימה במיוחד למחקרים על התערבויות לא תרופתיות לסוכרת מסוג 2 והפרעות מטבוליות אחרות. על ידי התמודדות עם אתגרי ניסוי מרכזיים, שיטה זו מספקת בסיס לקידום מחקר קליני ותרגומי בתחום זה.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת נאנג'ינג לרפואה סינית (אישור מס': 202409A033). כאן, נבחרו 24 עכברי C57BL/6J זכרים בריאים בדרגת SPF, בני 8 שבועות ובמשקל 22 גרם ±-2 גרם. העכברים שוכנו במחזור אור/חושך של 12 שעות בטמפרטורה של 20-22 מעלות צלזיוס ועם לחות יחסית של 45%-50%. לבעלי החיים הייתה גישה חופשית למזון ולמים.

1. הקמת דגם העכבר T2DM

1. האכילו עכברים בצ'או סטנדרטי למשך שבוע כדי להסתגל לסביבה החדשה במתקן החיות. לאחר שבוע אחד, חלקו באופן אקראי את 24 עכברי C57BL/6J המחולקים לקבוצת הביקורת (6 עכברים) ולקבוצת מודל T2DM (18 עכברים) באמצעות טבלת מספרים אקראית. תנו לקבוצת הביקורת צ'או סטנדרטי מטוהר בעוד שקבוצת מודל T2DM מקבלת דיאטה עתירת שומן. המשיכו בדיאטה למשך 6 חודשים.
2. עקוב אחר השתייה, האכילה, משקל הגוף, הגלוקוז בדם בצום והגלוקוז האקראי בדם של העכברים לאורך תקופה זו. אם שתי קריאות רצופות של גלוקוז בדם עולות על 7.8 מ"מ/ליטר, בצע בדיקת סבילות לאינסולין (ITT). שקול את הערך של השטח מתחת לעקומה (AUC) גדול מ-35 כמודל T2DM מוצלח.
3. התחל את ההתערבות לאחר שמודל T2DM התייצב.

2. קיבוץ וטיפול בעכברים

1. לאחר מידול T2DM מוצלח, הקצה באופן אקראי את עכברי T2DM לאחת מהקבוצות הבאות באמצעות טבלת מספרים אקראית כדי להבטיח בחירה בלתי מוטה: קבוצת מודל, קבוצת מטפורמין וקבוצת עיסוי בטן, עם שישה עכברים בכל קבוצה.
2. לא לבצע התערבות בקבוצת הביקורת. השתמש בטבלת המספרים האקראית כדי להקצות כל עכבר לאחת מקבוצות הניסוי, וודא שהקבוצות היו דומות מבחינת משקל הגוף ההתחלתי ורמות הגלוקוז כדי למזער את ההטיה במשימה.
3. האכילו את קבוצת המודל בתזונה עתירת שומן לאורך כל הניסוי ותנו 0.2 מ"ל של מי מלח פיזיולוגיים על ידי גבאג' מדי יום, פעם ביום, 6 ימים בשבוע, במשך 8 שבועות.
4. האכילו את קבוצת המטפורמין בתזונה עתירת שומן לאורך כל הניסוי. טבליות מטפורמין טחונות ומתמוססות למתן גבאז' פעם ביום במינון של 200 מ"ג/ק"ג/יום, מדולל ל-0.2 מ"ל עם מי מלח פיזיולוגיים. יש לתת את זה פעם אחת ביום, 6 ימים בשבוע, במשך 8 שבועות.
5. לקבוצת עיסוי הבטן האכילו תזונה עתירת שומן לאורך כל הניסוי. גב' את העכברים עם 0.2 מ"ל של מי מלח פיזיולוגיים מדי יום. בצע עיסוי בטן פעם אחת לאחר 5 דקות ממתן התרופה. יש לתת התערבות בעיסוי בטן 6 פעמים בשבוע בזמן קבוע, עם יום מנוחה אחד, לתקופה רצופה של 8 שבועות.
   1. תקנו עכברים באמצעות מסנן מכרסמים ביתי וחשפו את הבטן שלהם תוך הקפדה על כך שהם יישארו רגועים לעיסוי הבטן.
   2. התייחסות למפת נקודות הדיקור לעכברים לאיתור נקודות שנקה וטיאנשו. השתמש במרחק משנקה לטיאנשו כרדיוס ובצע עיסוי סיבובי עם כיוון השעון למשך 30 דקות ב-100-120 פעמים בדקה. טווח הלחץ שהופעל במהלך ההתערבות היה 0.1-0.3 N/cm. התאם את הלחץ לרמה שהעכברים יכולים לסבול תוך שמירה על רוגע וניטור באמצעות מערכת בדיקת הלחץ FPS.

3. הכנת מכשיר האימון לעיסוי בטן

1. הכינו לוח פוליפרופילן בעובי 1 מ"מ ליצירת לוחית קיבוע, ועצבו אותו לחצי עיגול ברדיוס של 4.5 ס"מ מצד אחד ו -3 ס"מ מצד שני. כאשר הוא נפרש, הוא יוצר צורה טרפזית עם בסיס עליון של 8 ס"מ, בסיס תחתון של 10 ס"מ ואורכי צד של 10 ס"מ. השתמש בצלחת שקופה כדי להתבונן בקיבוע העכבר כפי שמוצג באיור 1A-C.
2. בהתאם לגודל העכברים, נקב ארבעה חורים ארוכים בלוחית הקיבוע, כפי שמוצג באיור 1A.
3. הכינו בד לא ארוג רך ועמיד, חתכו אותו לצורה אליפטית למרכז עם ארבע רצועות ישרות מוארכות בפינות שישמשו כבד הקיבוע. ודא שהרצועות הארוכות והישרות יכולות לעבור דרך ארבעת החורים המוארכים בצלחת. בהתבסס על גודל העכבר, חתכו ארבעה חורים עגולים ברצועות הבד כדי לאפשר לגפיים של העכבר לעבור, כפי שמוצג באיור 1B.
4. בחר חיישן סרט רגיש ללחץ המבוסס על גודל הבטן של העכבר והצמד את סרט הלחץ לחלק של בד הקיבוע המתאים לבטן העכבר. חבר את הסרט למכשיר ניטור הלחץ, כפי שמוצג באיור 1D.

4. הליך עיסוי בטן

1. העבירו את ארבע הרצועות הארוכות של בד הקיבוע דרך החורים בלוחית הקיבוע, וצרו מעבר שדרכו העכבר יכול לעבור בקלות.
2. הניחו את העכבר על הצד ברדיוס של 4.5 סנטימטרים, תוך שימוש באינסטינקט ההתחפרות שלו כדי לעודד אותו לנוע לכיוון הצד ברדיוס של 3 סנטימטרים, כפי שמוצג באיור 2A.
3. שימו לב למיקום העכבר מגב לוחית הקיבוע השקופה. כאשר העכבר מגיע למצב המתאים, הדק את ארבע רצועות הבד כדי לקשור את העכבר לחלק המרכזי של בד הקיבוע. קושרים את הרצועות בקשרים כדי לאבטח את העכבר.
4. הפוך את לוחית הקיבוע והשתמש במלקחיים כדי למשוך את גפי העכבר מתוך 4 החורים העגולים של מטלית הקיבוע כדי לתקן את העכבר עוד יותר, כפי שמוצג באיור 2B.
5. החזק את הצלחת ביד אחת, הנח את מכשיר העכבר הקבוע בכף היד כדי למקם את העכבר בשכיבה. בצע את עיסוי הבטן על בטן העכבר בעזרת האגודל. במהלך ההליך, עקוב מקרוב אחר הערכים במכשיר ניטור הלחץ כדי להבטיח שהכוח המופעל על חיישן סרט הלחץ על בטן העכבר יישאר קבוע ואחיד, כפי שמוצג באיור 2C - D.
   1. אם האף והשפתיים של העכבר נראים סגולים במהלך עיסוי הבטן, זה עשוי להצביע על כך שבד הקיבוע הדוק מדי, מה שגורם למחסור בחמצן. במקרים כאלה, הפסק את ההליך מיד, שחרר את רצועות הבד ושחרר את העכבר כדי להתאושש ממחסור בחמצן.
   2. במהלך עיסוי הבטן, העכבר עלול לעשות את צרכיו או להשתין בתדירות גבוהה יותר, וזו תגובה נורמלית לעיסוי הבטן. בצע ניקוי מהיר.
6. לאחר 20 דקות של עיסוי בטן, שחרר את הקשרים על רצועות הבד, ואפשר לעכבר להשתחרר ממכשיר הקיבוע.
7. לאחר שהעכבר מסתגל לעיסוי הבטן, התהליך אמור להתנהל בשקט, במינימום מאבק. אם העכבר נאבק יתר על המידה, בדוק את המכשיר לאיתור בעיות, כגון לוחית קיבוע שבורה או בד קיבוע הדוק מדי. עקוב כל הזמן אחר נוחות העכבר והסימנים החיוניים לאורך כל ההליך.
8. שקלו את בעלי החיים ובצעו קריאות גלוקוז בדם לאחר השלמת הניסוי.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

על פי התוכנית לעיל, בטן העכברים נשמרה קבועה במקומה, והמיקום הקבוע יחסית איפשר לעכברים לשמור על יציבה יציבה. עיסוי הבטן בתדירות קבועה, הלחץ ומשך העיסוי נשלטו בטווח הניתן לניהול. גישה זו דומה לעיסוי בטן מסורתי ברפואה הסינית¹². על ידי ביצוע תוכנית התערבות זו, נית...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

עיסוי בטן הוא טכניקה בסיסית מייצגת בעיסוי הרפואה הסינית המסורתית (TCM), המיושמת באופן נרחב במניעה קלינית וטיפול במחלות מערכת שונות, במיוחד בוויסות וטיפול במערכת העיכול של הטחול והקיבה 13,14,15. עיסוי בטן משפיע ישירות על פני ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
High-density lipoprotein cholesterol assay kit	A112-1-1	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute
Low-density lipoprotein cholesterol assay kit	A113-1-1	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute
Metformin tablets		Sino-US Shanghai Squibb Pharmaceutical Co
Pressure Thin Film Sensors	FSR16	Vickers Electronic Technology (Luoyang) Co.
Retainer sleeve		No special requirement?Preferably, the material should be PP.
Strips of cloth for fixing		1mm thick, unfolded to a trapezoidal shape with an upper base of 8cm, a lower base of 10cm and two waists of 10cm.
Total cholesterol assay kit	A111-1-1	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute
Triglyceride assay kit	A110-1-1	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute