פטריות נלאמנטיות

1. הכנת דגימת קרקע

1. ראשית, לקבוע את תכולת הלחות הראשונית של הקרקע על ידי ייבוש בן לילה של כמות ידועה של האדמה לחה, ו reweigh על האדמה היבשה. המשוואה לקביעת תכולת הלחות הראשונית של האדמה היא:
   
   (משוואה 1)
   איפה:
   MC = תכולת לחות
   W = משקל נטו
   D = משקל יבש
2. חשב את כמות המים שיש להוסיף ל 25 גרם של אדמה כדי להגדיל את תכולת הלחות הקרקע ל 10% על בסיס משקל יבש.
3. לאחר מכן, להוסיף את כמות המים ל 25 גרם של הקרקע.
4. לכסות את המיכל בניילון נצמד ולנקב את הסרט מספר פעמים עם בדיקה כדי לאפשר aeration במהלך הדגירה. אבטחו את הסרט עם גומייה.
5. שוקלים את האדמה ועוטפים, ואז מדגירים את הדגימה בטמפרטורת החדר במשך שבוע.

2. חיסון חנק ופטריות

1. לאחר הדגירה הושלמה, לשקול את דגימת הקרקע עם העטיפה ואת הגומייה. לחשב את הירידה במשקל עקב ירידה בלחות.
2. חשב את תכולת הלחות החדשה בקרקע.
3. לאחר מכן, הכינו סדרת דילול של 1/10 של הקרקעות כפי שמוצג באיור 2. התוצאה תהיה דילול של 10^-1 (בקבוק A), 10^-2 (צינור B), 10^-3 (צינור C), 10^-4 (צינור D), ו 10^-5 (צינור E) g קרקע לכל מתלים mL.
4. הכינו צלחות אגר סטריליות של רוז בנגל-סטרפטומיצין. הן רוז בנגל והן סטרפטומיצין מעכבים צמיחה חיידקית. עבור קרקעות פוריות מאוד שבהן אוכלוסיות מיקרוביות הקרקע גבוהות, הדילול הנבחר צריך להיות גבוה יותר, כלומר,10^-3,10^-4, ו 10^-5, אדמה g לכל צלחת.
5. לכל אחת^מ-10-3 הצלחות, הוסיפו 0.1 מ"ל מצינור דילול 10-2, והתפשטו על פני אגר באמצעות מפזר זכוכית מעוקר להבת אתנול. מכיוון שכמות של 0.1 מ"ל מצופה, זה הופך את הדילול היעיל 10^-3. חזור על שלבים אלה עבור כל הדילולים.
6. צלחות דגירה בטמפרטורת החדר במשך שבוע.

3. ספירת מושבות ובדיקה על ידי מיקרוסקופיה

1. הפוך מושבה לספור באחד ורק דילול אחד של כל אדמה. הלוחיות שנספרות צריכות להיות מושבות דיסקרטיות שניתן לספור. אין לספור צלחות מגודלות. כמו כן, אין לספור לוחות עם פחות מ -10 מושבות. שים לב ותיאר את המאפיינים התרבותיים של שלוש מושבות שונות.
2. הכן קלטת לחץ (סרט שקוף) טעינה על שקופיות למחקר מיקרוסקופ מפורט באמצעות ההליך הבא:
   1. הפקדת טיפה של נוזל הרכבה לקטופנול במרכז מגלשת זכוכית נקייה
   2. חותכים רצועה של סרט צלופן שקוף באורך של כ-3 ס"מ מגליל המניות. כדי למנוע זיהום משטח הדבק, השתמש במלקחיים בעת הטיפול בסרט. מחט ניתוח תסייע בשחרר את הקלטת מהמלקחיים.
   3. הצד הדביק של הסרט מוחל על פני השטח של מושבת פטריות מנקבת. יש להקפיד להימנע מלחץ מוגזם על הקלטת או צפופה מדי תיאסף מסה של הייפאה ונבגים.
   4. הסר את הקלטת ממגע עם מושבת הפטרייה ולהחיל אותו, צד דבק כלפי מטה, על טיפת נוזל הרכבה על שקופית הזכוכית. לשפשף את הקלטת בעדינות עם כלי חלק, שטוח כדי לבטא בועות אוויר.
   5. בדוק את הסרט הרכבה מיקרוסקופית תחת המטרה טבילת שמן עם שמן.
   6. זהה שני סוגים פטרייתיים שונים באמצעות מפתח הזיהוי הפטרייתי שסופק(איור 4).

איור 4. מפתח זיהוי פטרייתי.