次の手順では、小動物から生体内およびex vivo NIRF画像を収集するために必要な詳細な手順を示します。

1.実験的なセットアップ

1. 光ファイバ光源を光ファイバ光ガイドを使用して蛍光イメージングシステムに接続します。
2. 実験に適した励起フィルタを選択します。励起フィルタは、サンプルに送達される光の波長を決定し、サンプルに導入された蛍光色素の励起スペクトルと一致するように選択する必要があります。
3. 適切な放出フィルタを選択します。発光フィルタは、自己蛍光に起因する可能性のある望ましくないスペクトル成分をブロックし、蛍光体の発光スペクトルに一致するように選択する必要があります。

2. サンプル調製

1. イン・ヴィヴォ
   1. 流量計ダイヤルで3〜4%の濃度でイソフルランを使用して誘導室内で動物を麻酔する。
   2. イメージング段階で固定された鼻コーンに動物を移し、1〜2%の濃度でアイソフルランを維持する。動物は通常短期間(>5分)しか画像化されず、体温が実質的に低下しないため、熱源は必要ありません。
   3. モーションアーティファクトを最小限に抑えるために、動物の足を固定します。脱毛クリームを塗ることによって、対象の領域から髪を削除します。
   4. 必要な最小領域に脱毛クリームを塗布します。30sの後、ガーゼパッドで拭き取り、エチルアルコール湿ったガーゼパッドでもう一度領域を拭き取り、脱毛クリームを完全に除去します。
   5. 角膜の乾燥を防ぐために眼に眼軟膏を塗布する。
   6. 活性化可能な蛍光分子プローブを動物に注入する。この特定のアプリケーションについて、MMP2活性化可能なプローブを尾静脈に静脈内に注入した。この時点で、マウスをイメージできます。続行するには、このプロトコルの「イメージの取り付け」に進みます。短い手順を通して定期的な呼吸のために動物を監視します。
2. Ex Vivo
   1. 蛍光プローブの注入後、動物の安楽死のための2013 AVMAガイドラインに従って、人道的な方法で動物を安楽死させる。二酸化炭素_(CO2)過剰摂取は、小動物を安楽死させる標準的な習慣である。
   2. 外科的に目的の組織または器官を抽出し、鉗子で余分な脂肪組織を慎重に除去する。
   3. リン酸緩衝生理食塩水で組織をすすいで残りの血液を除去し、サンプルをイメージング段階に直接置きます。

3. 画像取得

1. 分子イメージングソフトウェアを開き、光ファイバ光源と蛍光イメージングシステムの両方をオンにします。
2. 集録ウィンドウを開き、スタディに適した露出のタイプを指定します。利用可能な露出には、単一の画像をキャプチャするための標準露出、一定の時間間隔で一連の画像をキャプチャするTime Lapse Exposure、異なる露光時間で連続した露出をキャプチャするプログレッシブ露出などがあります。
3. イルミネーション ソースとしてUV トランスイルミネーションを選択します。
4. プレビューされた画像を参照として使用して、レンズの焦点、視野、およびキャプチャシステムチャンバー内のfストップ/絞りを調整して、サンプリングされた画質を最適化します。サンプルの露光時間と位置を調整します。
5. プレビュー ウィンドウを閉じ、取得ウィンドウのすべてのパラメータがカメラとフィルタの設定と一致していることを確認します。
6. [公開] をクリックして、イメージを取得して保存します。
7. 標準的な分子イメージングソフトウェアは、通常、画像解析用の蛍光信号を定量化するためのさまざまな分析、測定、および画像補正ツールを提供します。
8. イメージングセッションの最後に、サンプル/動物を取り外し、システムの電源を切り、イメージングステージを清掃してシステムへのダメージを最小限に抑えます。