המחברים מבקשים להודות Ikiel Ptito עבור התמיכה הטכנית שלו. אנו מודים פרנק ארווין, רוברטה Palmour ואנשי מדעי ההתנהגות קרן מעבדות ממוקם בסנט קיטס, הודו המערבית, על המשך התמיכה עבודתם הפרימטים שלנו.

חלק 1: טרום עיבוד של רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות צריך להיות perfused היטב עם paraformaldehyde, glutaraldehyde, או פורמלין. זו יכולה להיות מושגת באמצעות זלוף transcardial הסטנדרטית המשמשת בדרך כלל כדי לקצור איברים אחרים. מומלץ כי זמן קצר לאחר להקריב את העיניים להיות מוזרק עם מקבע רק תחת עדשת ומאוחסנים מקבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במחקר הנוכחי הנושא היה מורדמת עם קטמין הידרוכלוריד (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג, IM), מורדמים עם ממנת יתר של pentobarbital נתרן (25 מ&quot;ג / ק&quot;ג, ד) ו perfused transcardially עם 0.1 מ PBS עד exsanguinated לחלוטין. זה ואחריו פתרון paraformaldehyde 4% PBS דקות 5 (~ 1 ליטר). </li></ol> חלק 2: הסרת גלגל העין מחלל מסלולית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור גישה קלה יותר גלגל העין מומלץ להסיר תחילה את המוח. לאחר במוח הוסרה עצם דק דופן במסלול היא ברורה ממבט ראשון. השתמש rongeurs העצם לאט לפורר את החומה של מסלול. לחתוך את שרירי העין עם אזמל ולהסיר את רקמת החיבור של גלגל העין. לחתוך בזהירות את עצב הראייה, זה יכול לשמש במחקרים מיקרוסקופיה אלקטרונית. גלגל העין אמור כעת להשתחרר חלל מסלולית. </li></ol> חלק 3: מנתחים את הרשתית מן עיינית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העין לתוך צלחת פטרי עם PBS לשמור על הרשתית מפני התייבשות. מיקרוסקופ לנתח או שולחן רכוב מגדלת לעמוד באור שימושי לנתיחה, אך לא הכרח. הסר את הקרנית על ידי חיתוך sclera הדוק למתחם של הקרנית ברמה של serrata אורה עם זוג מספריים באביב ולהסיר את העדשה עם מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במכחול, מלקחיים, ומספריים באביב כדי להסיר את הרשתית מן בלובן העין. הדבר נעשה על ידי הפרדת הרשתית מן בלובן העין ולאחר מכן חיתוך sclera משם עם המספריים. צריך לבצע את התהליך הזה במרווחים קטנים כדי לא לגרום נזק או לקרוע את רקמת הרשתית. בלובן העין אינו מופרד בקלות מן העצב שריד אופטיים כך בזהירות לחתוך את sclera סביב עצב הראייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנקודה זו הרשתית שמרה צורה מעוגלת שלה צריך להיות שטוח לדגימה. לפני משטחת את הרשתית, שבזגוגיות, אשר יש לו את העקביות של ג&#39;לי, ניתן להסיר גוש. כדי לשטח את הרשתית על גבי שקופית, לבצע חתכים רדיאליים עם להב מספר אזמל. שבזגוגיות שיורית כעת ניתן להסיר עם נייר סינון רגיל במכחול. השכבה הרשתית תא גנגליון נחשף בשלב זה, כך קיים הכרח להיות עדין כאשר הסרת הומור זגוגי. אם עצב הראייה מחוברת עדיין דיסק אופטי, להסיר את עצב הראייה בלי לקרוע את הרשתית באמצעות להב אזמל מספריים האביב. זהו עכשיו הרשתית הר שטוח (איור 1) ואת הגומה צריך להיות ברור ככתם כהה לכיוון הזמני / הגחון מדיסק אופטי. </li></ol> חלק 4: דגימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ישנן מספר אפשרויות עבור הדגימה את הרשתית. כאן נתאר את ההכנות flatmount ודגימה isodentric. עבור פרוצדורות הן flatmount הרשתית עם שכבת סיבים אופטיים מן השקופית. אם הכוונה היא לבחון את תא הגנגליון ברשתית השכבה בהכנת flatmount, יש צורך להסיר או להלבין את פיגמנט אפיתל. כדי להסיר את האפיתל פיגמנט להשתמש במכחול קל להסיר חלק של שכבה זו, זה נוטה לגרום נזק לשכבת photoreceptor. הלבנה כולל השריית הרשתית בפתרון permanganate אשלגן (0.25%) במשך שעה 1, שטיפה במים מזוקקים, וסליקה, חומצה אוקסלית (5%) במשך 5 דקות. 2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הכוונה היא לבחון את חלוקת התא המורפולוגיה של כל שכבה בכל הרשתית, ולאחר מכן אנו מציעים דגימה איזומטרי של הרשתית. הרשתית יש flatmounted בשקופית והמשיך לח עם PBS. עבור דגימה איזומטרי לחתוך חתיכות קטנות של רקמה במרחק שווה מדיסק אופטי ב, כיוונים האף הזמני, העליון והתחתון (איור 1). אין זה הכרחי כדי להלבין את האפיתל פיגמנט בהכנה זו. חלקים אלה יכולים עכשיו להיות מחולק במישור העטרה עם cryostat, vibratome, או ultramicrotome בהתאם שאלת המחקר. עבור חתך cryostat, החלקים צריכים להיות cryoprotected ב סוכרוז 30% בין לילה קפוא בהקשר של מדיום גובר על קרח יבש. לחלופין, הדגימות יכול להיות מוטבע אגר ופרוסים על vibratome. Cryostat וההכנות vibratome יהיה אמין תשואה סעיפים רזה כמו 4 מטר אם הסעיפים רזה נדרשים (למשל להכנת מיקרוסקופ אלקטרונים), יש צורך להכין את דגימות ultramicrotome. כדי לעשות זאת, הסעיפים צריך להיות פוסט קבוע tetroxide אוסמיום שעה 1 תחת fumehood. זה ואחריו התייבשות בסדרה אתנול מדורגים (50, 70, 95, 95, 100, 100%) ותחמוצת פרופילן 100%. הרקמהמוטבע אז EPON (שבץ-812 ערכת הטבעה). </li></ol> חלק 5: תוצאות נציג: במעבדה שלנו, אנו מבצעים באופן שגרתי אימונוהיסטוכימיה על רשתיות cryosectioned (איור 2). במקרה זה אנו מעוניינים isodensity של קולטנים קנבינואידים (CB1) ברשתית הפרימטים. יש לנו גם לבחון את ההשפעות של החשיפה אתנול טרום לידתי על מערכת הראייה הפרימטים. לשם כך, אנו מעוניינים צפיפות התאים ואת עובי השכבה ואת הגומה ברשתית ההיקפית. כדי להשיג זאת, עלינו להטביע פיסות של הרשתית ב EPON, פרוסה ב 700nm על ultramicrotome, ואת הכתם עם 1% toluidine כחול (איור 3). <img src="/files/ftp_upload/1261/fig1.jpg" alt="דמות 1" /> איור 1 רשתית Flatmount. חתכים מחוגי משמשים לשטח את הרשתית. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig2.jpg" alt="דמות 2" /> איור 2 Immunostaining. Cryosection של הרשתית ההיקפית immunostained עבור CB1 שבו תאים הגנגליון ברשתית מסומנים בכבדות עם תיוג כמה בשכבות הגרעין הפנימי לחיצוני. העובי של סעיף זה הוא 14 מ &#39;ומוכתמת בשקופית. RG - שכבת הגנגליון ברשתית; IP - השכבה הפנימית plexiform; ב - שכבת הגרעין הפנימית; OP - השכבה החיצונית plexiform; על - השכבה החיצונית גרעיני. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig3.jpg" alt="דמות 3" /> איור 3 הגומה. סעיף דרך הגומה שהיה מוטבע EPON ופרוסים על ultramicrotrome ב 700nm. השכבה photoreceptor (PR) שימש כדי ליישר את הסעיפים. שימו לב עד כמה כל photoreceptors ניתן לזהות המציין זווית המתאים המטוס העטרה. מדידות צפיפות צולמו 300 מ &#39;, 500 מ&#39;, ו - 800 מ &#39;ממרכז הבור foveal באמצעות מערכת דימות Bioquant. RG - שכבת הגנגליון ברשתית; IP - השכבה הפנימית plexiform; ב - שכבת הגרעין הפנימית; OP - השכבה החיצונית plexiform; על - השכבה החיצונית גרעיני; בר בקנה מידה = 50 מ &#39;

<ol>
	<li>Hendrickson, A., Kupfer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histogenesis+of+the+fovea+in+the+macaque+monkey.">The histogenesis of the fovea in the macaque monkey.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 15, 746-756 (1976).</li><li>Herbin, M., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+distribution+of+retinal+ganglion+cells+in+the+St.+Kitts+green+monkey+(Cercopithecus+aethiops+sabeus).">Size and distribution of retinal ganglion cells in the St. Kitts green monkey (Cercopithecus aethiops sabeus).</a> J Comp Neurol. 383, 459-472 (1997).</li><li>Stone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Wholemount Handbook. , (1981).</li><li>Herbin, M., Boire, D., Theoret, H., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transneuronal+degeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+early+hemispherectomized+monkeys.">Transneuronal degeneration of retinal ganglion cells in early hemispherectomized monkeys.</a> Neuroreport. 10, 1447-1452 (1999).</li><li>Krebs, W., Krebs, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Primate Retina and Choroid Atlas of Fine Structure in Man and Monkey. , (1991).</li><li>Pow, D., Sullivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+kinesis,+neurite+sprouting+and+abnormal+axonal+projections+of+cone+photoreceptors+in+the+aged+and+AMD-afflicted+human+retina.">Nuclear kinesis, neurite sprouting and abnormal axonal projections of cone photoreceptors in the aged and AMD-afflicted human retina.</a> Exp Eye Res. 84, 850-857 (2007).</li></ol>

ההכנה של הרשתית כמו wholemount מאפשר ניתוח של הטופוגרפיה ואת הפריסה המרחבית של השכבה או תא גנגליון או לתאי אנדותל של כלי הדם ברשתית 3. כימות צפיפות התאים בפריפריה של הרשתית הפרימטים מושגת בקלות. עם זאת, באזורים perifoveal ו foveal, הערימה של שכבות מרובות בשכבה תא גנגליון מונע...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Scalpel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10003-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scalpel blades</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10011-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spring scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15020-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14090-11</td>
<td>Any surgical scissors are sufficient</td>
</tr>
<tr>
<td>Rongeurs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>16121-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11027-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filter paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>09-924-150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Camel or Sable Hair paintbrush</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Art supply store</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

the gateway to the brain: dissecting the primate eye

מערכת הראייה בבני אדם נחשב השער העולם, משחקת תפקיד עיקרי שפע של תהליכים חושית תפיסתית וקוגניטיבית. לכן זה לא מפתיע כי איכות הראייה קשורה איכות החיים. למרות מחקר קליני ובסיסי נרחב המקיף את הסיבות של הפרעות ראייה, צורות רבות של ליקויי ראייה, כגון רטיניטיס פיגמנטוזה ניוון מקולרי, העדר טיפולים יעילים. Non-אנושי הפרימטים יש תכונות כלליות הקרוב של התפתחות העין לזו של בני האדם. לא רק שיש להם אנטומיה של כלי הדם דומה, אבל בקרב יונקים אחרים, יונקים יש מאפיין ייחודי של בעל האזור ברשתית הזמני מיוחדים עבור חדות הראייה גבוהה, את הגומה<sup&gt; 1</sup&gt;. כאן אנו מתארים טכניקה כללית לנתח את הרשתית הפרימטים לספק רקמה היסטולוגיה אימונוהיסטוכימיה רשתית, microdissection לייזר ללכוד, כמו גם אור במיקרוסקופ אלקטרונים. עם השימוש המורחבת של פרימטים לא אנושיים כמודל translational, תקוותנו היא כי הבנה משופרת של הרשתית יספק תובנות גישות יעיל לקראת הפחתת או להפוך את ההשפעה השלילית של הפרעות ראייה על איכות החיים של אנשים מושפעים.

Watch this Scientific Journal Video about The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye at JoVE.com

The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

פרימטים שאינם בני אדם היא מין translational חשוב להבנת התפתחות והזדקנות. הארגון האנטומי של הרשתית הפרימטים עשויה לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם.

השער המוח: בניתוח עיניים הפרימאטים

The visual system in humans is considered the  gateway  to the world and plays a principal role in the plethora of sensory, perceptual and cognitive ...

the-gateway-to-the-brain-dissecting-the-primate-eye

Research

JoVE Journal

Biology

14.1K Views.  University of Montreal. פרימטים שאינם בני אדם היא מין translational חשוב להבנת התפתחות והזדקנות. הארגון האנטומי של הרשתית הפרימטים עשויה לספק תובנות חשובות בתנאים נורמליים ופתולוגיים אצל בני אדם.

Video: The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale. This complex process requires the coordinated activity of many pre- and post-synaptic proteins to ensure appropriate synaptic connectivity, conduction of electrical signals, targeting and priming of secretory vesicles, calcium sensing, vesicle fusion, localization and function of postsynaptic receptors and finally, recycling mechanisms. As neuroscientists it is our goal to elucidate which proteins function in each of these steps and understand their mechanisms of action. Electrophysiological recordings from synapses provide a quantifiable read out of the underlying electrical events that occur during synaptic transmission. By combining this technique with the powerful array of molecular and genetic tools available to manipulate synaptic proteins in C. elegans, we can analyze the resulting functional changes in synaptic transmission. 
The C. elegans NMJs formed between motor neurons and body wall muscles control locomotion, therefore, mutants with uncoordinated locomotory phenotypes (known as unc s) often perturb synaptic transmission at these synapses 1. Since unc mutants are maintained on a rich supply of a bacterial food source, they remain viable as long as they retain some pharyngeal pumping ability to ingest food. This, together with the fact that C. elegans exist as hermaphrodites, allows them to pass on mutant progeny without the need for elaborate mating behaviors. These attributes, coupled with our recent ability to record from the worms NMJs 2,3,7 make this an excellent model organism in which to address precisely how unc mutants impact neurotransmission. 
The dissection method involves immobilizing adult worms using a cyanoacrylic glue in order to make an incision in the worm cuticle exposing the NMJs. Since C. elegans adults are only 1 mm in length the dissection is performed with the use of a dissecting microscope and requires excellent hand-eye coordination. NMJ recordings are made by whole-cell voltage clamping individual body wall muscle cells and neurotransmitter release can be evoked using a variety of stimulation protocols including electrical stimulation, light-activated channel-rhodopsin-mediated depolarization 4 and hyperosmotic saline, all of which will be briefly described.

Application of electrophysiology to accessible synapses provides a quantifiable measure of synaptic activity, useful in analyzing synaptic mutants. This article describes a dissection method used to expose the neuromuscular junctions (NMJ) of Caenorhabditis elegans (C. elegans) and briefly discusses some of the uses to which this preparation can be applied.

הביתור, הקלטה מ צומת C. elegans Neuromuscular

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development can be addressed. The zebrafish is useful for genetic studies due to several advantageous characteristics, including small size, high fecundity, short lifecycle, and ease of care. Lens development occurs rapidly in zebrafish. By 72 hpf, the zebrafish lens is functionally mature [3]. Abundant genetic and molecular resources are available to support research in zebrafish. In addition, the similarity of the zebrafish eye to those of other vertebrates provides basis for its use as an excellent animal model of human defects[4-7]. Several zebrafish mutants exhibit lens abnormalities, including high levels of cell death, which in some cases leads to a complete degeneration of lens tissues [8]. To determine whether lens abnormalities are due to intrinsic causes or to defective interactions with the surrounding tissues, transplantation of a mutant lens into a wild-type eye is performed. Using fire-polished metal needles, mutant or wild-type lenses are carefully dissected from the donor animal, and transferred into the host. To distinguish wild-type and mutant tissues, a transgenic line is used as the donor. This line expresses membrane-bound GFP in all tissues, including the lens. This transplantation technique is an essential tool in the studies of zebrafish lens mutants.

Lens development involves interactions with other tissues. Several zebrafish eye mutants are characterized by an abnormally small lens size. Here we demonstrate a lens transplantation experiment to determine whether this phenotype is due to intrinsic causes or defective interactions with tissues that surround the lens.

השתלת עדשה של דג הזברה Application שלה ניתוח של מוטאנטים העין

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In addition, the use of non-human primates has recently afforded the opportunity to naturally model complex psychiatric disorders such as alcohol abuse7. Here we describe a technique for blocking the brain in the coronal plane of the vervet monkey (Chlorocebus aethiops sabeus) in the intact skull in stereotaxic space. The method described here provides a standard plane of section between blocks and subjects and minimizes partial sections between blocks. Sectioning a block of tissue in the coronal plane also facilitates the delineation of an area of interest. This method provides manageable sized blocks since a single hemisphere of the vervet monkey yields more than 1200 sections when slicing at 50&mu;m. Furthermore by blocking the brain into 1cm blocks, it facilitates penetration of sucrose for cyroprotection and allows the block to be sliced on a standard cryostat.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of the normal processing of the brain. The anatomical organization of the primate brain can provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

בניתוח מוח בלתי אנושי הפרימאטים בחלל Stereotaxic

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In ...

Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

The non-human primate is an important translational species for understanding the normal function and disease processes of the human brain. Unbiased stereology, the method accepted as state-of-the-art for quantification of biological objects in tissue sections2, generates reliable structural data for biological features in the mammalian brain3. The key components of the approach are unbiased (systematic-random) sampling of anatomically defined structures (reference spaces), combined with quantification of cell numbers and size, fiber and capillary lengths, surface areas, regional volumes and spatial distributions of biological objects within the reference space4. Among the advantages of these stereological approaches over previous methods is the avoidance of all known sources of systematic (non-random) error arising from faulty assumptions and non-verifiable models. This study documents a biological application of computerized stereology to estimate the total neuronal population in the frontal cortex of the vervet monkey brain (Chlorocebus aethiops sabeus), with assistance from two commercially available stereology programs, BioQuant Life Sciences and Stereologer (Figure 1). In addition to contrast and comparison of results from both the BioQuant and Stereologer systems, this study provides a detailed protocol for the Stereologer system.

The anatomical organization of the primate brain can provide important insights into normal and pathological conditions in humans. Unbiased stereology is a method for accurately and efficiently estimating the total neuron number (or other cell type) in a given reference space1.

מה שחשוב לדעת: Stereology משוחדת במוח שאינם האדם הפרימאטים

The non-human primate is an important translational species for understanding the normal function and disease processes of the human brain. Unbiased ...

A Novel RFP Reporter to Aid in the Visualization of the Eye Imaginal Disc in Drosophila

The Drosophila eye is a powerful model system for studying areas such as neurogenesis, signal transduction and neurodegeneration. Many of the discoveries made using this system have taken advantage of the spatiotemporal nature of photoreceptor differentiation in the developing eye imaginal disc. To use this system it is first necessary for the researcher to learn to identify and dissect the eye disc. We describe a novel RFP reporter to aid in the identification of the eye disc and the visualization of specific cell types in the developing eye. We detail a methodology for dissection of the eye imaginal disc from third instar larvae and describe how the eye-RFP reporter can aid in this dissection. This eye-RFP reporter is only expressed in the eye and can be visualized using fluorescence microscopy either in live tissue or after fixation without the need for signal amplification. We also show how this reporter can be used to identify specific cells types within the eye disc. This protocol and the use of the eye-RFP reporter will aid researchers using the Drosophila eye to address fundamentally important biological questions.

A Novel RFP Reporter to Aid in the Visualization of the Eye Imaginal Disc in Drosophila

We describe a novel red fluorescent protein (RFP) reporter that is expressed specifically in the Drosophila eye. We detail a methodology for dissection of the eye imaginal disc and how this reporter can be used to aid in the dissection and identification of specific cell types in the developing eye.

RFP כתב רומן על סיוע ויזואליזציה של דיסק העין דמותי ב תסיסנית</em

The Drosophila eye is a powerful model system for studying areas such as neurogenesis, signal transduction and neurodegeneration. Many of the discoveries ...

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.

Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

דגימת דם מוריד הזנב לרוחב של העכברוש

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte precursors, immune cells, fibroblasts, blood vessels, and nerve projections. Although the molecular control of cell type specification and how these cells interact have been increasingly delineated, a more comprehensive understanding of these adipose-resident cells can be achieved by visualizing their distribution and architecture throughout the whole tissue. Existing immunohistochemistry and immunofluorescence approaches to analyze adipose histology rely on thin paraffin-embedded sections. However, thin sections capture only a small portion of tissue; as a result, the conclusions can be biased by what portion of tissue is analyzed. We have therefore developed an adipose tissue clearing technique, Adipo-Clear, to permit comprehensive three-dimensional visualization of molecular and cellular patterns in whole adipose tissues. Adipo-Clear was adapted from iDISCO/iDISCO+, with specific modifications made to completely remove the lipid stored in the tissue while preserving native tissue morphology. In combination with light-sheet fluorescence microscopy, we demonstrate here the use of the Adipo-Clear method to obtain high-resolution volumetric images&#160;of an entire adipose tissue.

Due to the high lipid content, adipose tissue has been challenging to visualize using traditional histological methods. Adipo-Clear is a tissue clearing technique that allows robust labeling and high-resolution volumetric fluorescent imaging of adipose tissue. Here, we describe the methods for sample preparation, pretreatment, staining, clearing, and mounting for imaging.

Adipo-ברור: רקמה ניקוי שיטה עבור הדמיה תלת-ממדית של רקמת שומן

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Reverse Dissection and DiceCT Reveal Otherwise Hidden Data in the Evolution of the Primate Face

Facial expressions, or facial displays, of social or emotional intent are produced by many mammalian taxa as a means of visually communicating with conspecifics at a close range. These displays are achieved by contraction of the mimetic muscles, which are skeletal muscle attached to the dermis of the face. Reverse dissection, removing the full facial mask from the skull and approaching mimetic muscles in reverse, is an effective but destructive way of revealing the morphology of mimetic muscles but it is destructive. DiceCT is a novel mechanism for visualizing skeletal muscles, including mimetic muscles, and isolating individual muscle fascicles for quantitative measurement. Additionally, DiceCT provides a non-destructive mechanism for visualizing muscles. The combined techniques of reverse dissection and DiceCT can be used to assess the evolutionary morphology of mimetic musculature as well as potential contraction strength and velocity in these muscles. This study further demonstrates that DiceCT can be used to accurately and reliably visualize mimetic muscles as well as reverse dissection and provide a non-destructive method for sampling mimetic muscles.

Facial expressions are a mode of visual communication produced by mimetic muscles. Here, we present protocols for the novel techniques of reverse dissection and DiceCT to fully visualize and assess mimetic muscles. These combined techniques can examine both morphological and physiological aspects of mimetic musculature to determine functional aspects.

הפוך לנתיחה ונתונים DiceCT לחשוף אחרת מוסתרים באבולוציה של הפנים הפרימטים

Facial expressions, or facial displays, of social or emotional intent are produced by many mammalian taxa as a means of visually communicating with ...

A High Output Method to Isolate Cerebral Pericytes from Mouse

In recent years, cerebral pericytes have become the focus of extensive research in vascular biology and pathology. The importance of pericytes in blood brain barrier formation and physiology is now demonstrated but its molecular basis remains largely unknown. As the pathophysiological role of cerebral pericytes in neurological disorders is intriguing and of great importance, the in vitro models are not only sufficiently appropriate but also able to incorporate different techniques for these studies. Several methods have been proposed as in vitro models for the extraction of cerebral pericytes, although an antibiotic-free protocol with high output is desirable. Most importantly, a method that has increased output per extraction reduces the usage of more animals.
Here, we propose a simple and efficient method for extracting cerebral pericytes with sufficiently high output. The mouse brain tissue homogenate is mixed with a BSA-dextran solution for the separation of the tissue debris and microvascular pellet. We propose a three-step separation followed by filtration to obtain a microvessel rich filtrate. With this method, the quantity of microvascular fragments obtained from 10 mice is sufficient to seed 9 wells (9.6 cm2 each) of a 6-well plate. Most interestingly with this protocol, the user can obtain 27 pericyte rich wells (9.6 cm2 each) in passage 2. The purity of the pericyte cultures are confirmed with the expression of classical pericyte markers: NG2, PDGFR-&#946; and CD146. This method demonstrates an efficient and feasible in vitro tool for physiological and pathophysiological studies on pericytes.

We present a protocol for the extraction of murine cerebral pericytes. Based on an antibiotic-free enrichment oriented pericyte extraction, this protocol is a valuable tool for in vitro studies providing high purity and high yield, thus decreasing the number of experimental animals used.

שיטת פלט גבוהה כדי לבודד קרום הלב של מוחין מהעכבר

In recent years, cerebral pericytes have become the focus of extensive research in vascular biology and pathology. The importance of pericytes in blood ...

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when acquiring a blood-meal. To locate a host to feed on, mosquitoes rely on a wide range of sensory cues, including visual, mechanical, thermal, and olfactory. The study details a technique, electroantennography (EAG), that allows researchers to assess whether the mosquitoes can detect individual chemicals and blends of chemicals in a concentration-dependent manner. When coupled with gas-chromatography (GC-EAG), this technique allows to expose the antennae to a full headspace/complex mixture and determines which chemicals present in the sample of interest, the mosquito can detect. This is applicable to host body odors as well as plant floral bouquets or other ecologically relevant odors (e.g., oviposition sites odorants). Here, we described a protocol that permits long durations of preparation responsiveness time and is applicable to both female and male mosquitoes from multiple genera, including Aedes, Culex, Anopheles, and Toxorhynchites mosquitoes. As olfaction plays a major part in mosquito-host interactions and mosquito biology in general, EAGs and GC-EAG can reveal compounds of interest for the development of new disease vector control strategies (e.g., baits). Complemented with behavioral assays, the valence (e.g., attractant, repellent) of each chemical can be determined.

The present article details a step-by-step protocol for successful and low noise electroantennograms in several genera of mosquitoes, including both females and males.

מדריך שלב אחר שלב לאלקטרואנטנוגרפיה של יתושים

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...