התחילו בליטוש אש של שלוש פיפטות מרעה באמצעות מבער בונזן, ליצירת קטרים הולכים ופוחתים. לאחר מכן, לעקר את הבטן של סכר עכבר בהריון המתת חסד עם 70% אתנול. פתח את חלל הבטן מסינתזה הערווה לתהליך הקסיפואיד של כלוב הצלעות.
כעת, הוציאו את קרן הרחם מחלל הבטן והניחו אותה בצלחת 100 מ"מ מלאה בתמיסת HBSS קרה כקרח. לחלץ ולהפריד את כל העוברים מהרחם השטוף באמצעות מלקחיים עדינים. ערפו במהירות את ראשיהם של עוברי העכברים שחולצו והניחו את הראשים בצלוחית פטרי בקוטר 60 מ"מ מלאה ב-HBSS.
הניחו זוג מלקחיים עדינים בחלל העין כדי להחזיק את המוח. עם זוג נוסף, לקלף את העור ואת הגולגולת עד המוח גלוי. הוציאו את המוח מנורות הריח מהגולגולת והפכו אותו.
שימו לב לקליפת המוח בצד הגחוני ולהיפותלמוס בצד הגבי. השתמשו במלקחיים מעוקלים כדי להסיר את שכבת קרומי המוח וכלי הדם עד שהמוח נראה לבן וצלול, ולהפריד את אזור ההיפותלמוס משאר המוח. חותכים את ההיפותלמוס לשלוש עד ארבע חתיכות קטנות ועדינות, ומשתמשים בפיפט כדי להעביר את החתיכות לצינור של 15 מיליליטר.
לאחר מכן, למלא את הצינור עם שישה מיליליטר של HBSS. לאחר מכן מוסיפים אנזים מיקס 1 לאחר שהרקמה התיישבה והסופרנאטנט הוסר. לדגור על הצינור באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, ולהתסיס כל חמש דקות כדי להשעות מחדש את הרקמה.
עכשיו, להוסיף 30 מיקרוליטר של אנזים Mix 2 ולנתק את הרקמה על ידי pipeting למעלה ולמטה 10 פעמים עם פיפטה מרעה בקוטר גדול. לאחר דגירה נוספת של 10 דקות, הוסיפו את 15 המיקרוליטרים הנותרים של Enzyme Mix 2. באמצעות שתי פיפטות מלוטשות אש בקוטר יורד, פיפטה הרקמה 10 פעמים.
הוסף מיד 10 מיליליטר של HBSS עם 0.5% BSA לצינור. לאחר מכן צנטריפוגה את הצינור ב 300 G במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. שאפו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את כדורית התא במיליליטר אחד של HBSS עם 0.5% BSA.
