פעילות פוספטאז אלקליין, שקיעת סידן ומדידות מודולוס של יאנג בפיגומים שמקורם בתפוח

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

107 Views

•

02:32 min

•

February 23rd, 2024

DOI :

10.3791/200425-v

February 23rd, 2024

•

Maxime Leblanc Latour¹, Maryam Tarar², Ryan J. Hickey¹, Charles M. Cuerrier¹, Isabelle Catelas³^,⁴^,⁵, Andrew E. Pelling¹^,²^,⁶^,⁷

¹Department of Physics, University of Ottawa, ²Department of Biology, University of Ottawa, ³Department of Mechanical Engineering, University of Ottawa, ⁴Department of Surgery, University of Ottawa, ⁵Department of Biochemistry, Microbiology and Immunology, University of Ottawa, ⁶Institute for Science, Society and Policy, University of Ottawa, ⁷SymbioticA, School of Human Sciences, University of Western Australia

Transcript

עבור בדיקת phosphatase אלקליין ובדיקות שקיעת סידן, התחל על ידי שטיפת פיגומים זרע התא, תפוח נגזר בתרבית המדיום המתאים שלוש פעמים עם PBS. תקנו את הפיגומים עם פורמלין חוצץ 10% ניטרלי למשך 30 דקות. לבדיקת פוספטאז אלקליין, הכינו תמיסת צביעה BCIP/NBT על ידי המסת טבלית BCIP/NBT אחת ב-10 מיליליטר מים שעברו דה-יוניזציה.

לאחר מכן, שטפו את הפיגומים הקבועים בתמיסת TWEEN 0.05% והכתימו בתמיסת BCIP/NBT למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. שטפו את פיגומי הכתם בתמיסת TWEEN 0.05% ואחסנו אותם ב-PBS. לאחר מכן, צלם את הפיגומים המוכתמים עם מצלמה דיגיטלית של 12 מגה פיקסל.

לבדיקת שקיעת סידן, יש להכין תמיסת צביעה מסוג Alizarin Red S במשקל 2% לפי נפח. לאחר מכן, שטפו את הפיגומים הקבועים במים נטולי יונים, והכתימו אותם בתמיסת Alizarin Red S למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. שטפו את הפיגומים המוכתמים במים שעברו דה-יוניזציה ואחסנו אותם ב-PBS לפני ההדמיה.

תמונה עם מצלמה דיגיטלית של 12 מגה פיקסל. כדי לבצע את מדידות המודולוס של יאנג, הסר את הפיגומים מזרע התא ממדיום הדגירה המתאים שלהם ובדוק מיד את הדגימות באמצעות מנגנון דחיסה חד-צירי שנבנה במיוחד ומצויד בתא עומס של 1.5 ניוטון. דחסו את הפיגומים בקצב קבוע של שלושה מילימטרים לדקה למאמץ דחיסה מרבי של 10% מגובה הפיגומים.

לקבוע את המודולוס של יאנג מהשיפוע של החלק הליניארי של עקומות המתח/מתח. צביעת BCIP/NBT חשפה עלייה משמעותית בפעילות פוספטאז אלקליין בפיגומים מזרעי תאים שגודלו בתרבית בתווך ההתמיינות בהשוואה לפיגומי תרבית תאים בתרבית ריקה או ללא התמיינות בינונית. תוצאות דומות התקבלו עבור צביעת Alizarin Red S, המצביעות על מינרליזציה גדולה יותר של סידן בפיגומים מזרעי תאים שגודלו במדיום ההתמיינות.

המודולוס של יאנג של פיגומים מזרעי תאים שגודלו בתרבית בתווך התמיינות היה בסביבות 192.0 קילופסקל, שהיה גבוה משמעותית מהפיגומים הריקים או הלא-מתמיינים של גרעיני תאים בתרבית בינונית, מה שמצביע על קשיחות גבוהה יותר.

Explore More Videos

From the series

ניתוח פיגומים תפוחים שמקורם בזרעים של תאים עבור הנדסת רקמות עצם