Application of Continuous Flow to Endothelial Cells: Aorta-on-a-Chip

התקן את ערכת הזלוף ביחידה בהתאם לפרוטוקול היצרן. בתוך מכסה מנוע, חברו אליו שבב נוזלי ריק והוסיפו ציטוקין בתוספת מדיום SFM-34 כדי למלא את שני המאגרים בתנאים סטריליים. מעבירים את היחידה הנוזלית לאינקובטור, מחברים אותה למשאבה לצורך הסרת בועות וכיול.

בזהירות להסיר את היחידה הנוזלית עם קבוצה מחובר מן האינקובטור ולהעביר אותו לתוך מכסה המנוע יחד עם השבבים המכילים את התאים. הדקו את הצינור משני צידי שבב הבדיקה. הסר את הצינורית המהודקת משבב הבדיקה וחבר את השבב המכיל את התאים לצינור.

לאחר הסרת או פתיחת המלחציים, העבירו את המערכת לאינקובטור וחברו את משאבת האוויר ליחידה הנוזלית. הסר את היחידה הנוזלית מהמשאבה והעבר אותה למכסה המנוע. הדקו את הצינור משני צידי השבב והוציאו את הצינור מהמאגרים שעל השבב.

לאחר הסרה עדינה של המדיום מהשבב, שטפו את התאים עם מלח חוצץ פוספט או DPBS של Dulbecco. מוסיפים 150 מיקרוליטר של חיץ דיסוציאציה ודגרים במשך שלוש דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס. כאשר התאים מנותקים, אספו את מאגר הדיסוציאציה ממאגר אחד ושטפו את התעלה פעם אחת עם DPBS.

שטפו את המאגר עם מאגר הכביסה כדי לאסוף את התאים הנותרים מהשבב. לבסוף, הוסף מיליליטר אחד של חיץ כביסה לתאים שנאספו לפני השימוש 10 מיקרוליטר ממנו כדי לספור את התאים. לפני הגירוי, התאים הראו אוריינטציה אקראית, אך עם הגירוי, הם כיוונו מחדש במקביל לכיוון הזרימה.

פרופיל ביטוי CD34 של תאים בתרבית תחת זרימה במשך חמישה ימים ואחוז התאים החיוביים CD34 שנלקחו מהתעלה הפלואידית, הראו את יעילות הפרוטוקול.