עור עוף תרבות רקומבינציה אפיתל-מזנכימלי

כדי להתחיל, לדגור על ביצי תרנגולות מופרות באינקובטור לח. לאחר מכן, להכין פעמיים מלוחים CMF עם חיץ 0.25% EDTA. לאחר מכן קלפו את העור מעוברי התרנגולות בתמיסת HBSS, ודגרו עליהם פעמיים בתמיסת CMF-EDTA על קרח למשך 15 עד 20 דקות.

השתמש זוג שענים מלקחיים כדי להפריד בזהירות את האפיתל ואת mesenchyme. לאחר מכן מעבירים את האפיתל והמזנכימה המבודדים לצלחת נקייה אחת המכילה HBSS. לרקומבינציה, הניחו את המזנכימה על צלחת פטרי המכילה HBSS, ואז הניחו עליה את האפיתל ויישרו אותו לאורך הציר הקדמי/אחורי של המזנכימה.

לחלופין, סובבו את האפיתל ב-90 מעלות מהציר האחורי הקדמי המזנכימלי. לאחר מכן, מעבירים את הקליפות המשולבות מחדש לתוספות התרבות בשש מנות תרבית באר. הסירו עודפי HBSS סביב העור המשולב מחדש.

לאחר הוספת DMEM המכיל 10% FBS לבאר החיצונית של העלון, פיפטה שכבה דקה של DMEM לתוך תא ההחדרה, להבטיח את explant נשאר חצי hydrated. לבסוף, הניחו את הרקומביננטים של העור באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות בסביבה של 5% פחמן דו חמצני, ו-95% אוויר. עקוב אחר השינויים הפנוטיפיים בשלבי התפתחות העור הראשוניים באמצעות צילום בהילוך מהיר, עם מיקרוסקופ מנתח רכוב.

פלאקודים חדשים הופיעו זמן קצר לאחר הרקומבינציה, והתפתחו לניצני נוצות קצרים יומיים לאחר הרקומבינציה. ניצני נוצות ארוכים התפתחו תוך ארבעה ימים. כאשר האפיתל סובב ב -90 מעלות, הכיוון של הניצנים החדשים נקבע על ידי האפיתל.