SW1222 ייצור אורגנואידים של סרטן המעי הגס הנגזר מקו תאים במטריצת פפטיד בהרכבה עצמית קצרה במיוחד

כדי להתחיל, פיפטה 10 טיפות מיקרוליטר של תמיסת פפטיד 2X לתוך מרכזי הבארות בצלחת 24 בארות. לאחר הדגירה, פיפטה 10 מיקרוליטר של 2X PBS לתוך כל באר. השתמשו בקצה פיפטה כדי לערבב את התמיסה בעדינות, אפשרו לטיפות הג'ל להתייצב למשך 20 דקות לפחות, וודאו שהטיפות שלמות.

לאחר מכן, פיפטה 2.5 מיליליטר של 0.0125% טריפסין EDTA לתוך בקבוק המכיל 2 מיליון SW1222 תאי אדנוקרצינומה המעי הגס האנושי. לדגור על התאים עם טריפסין ב 37 מעלות צלזיוס במשך חמש עד 10 דקות עד שהם מתנתקים מן הצלוחית. הוסף חמישה מיליליטר של מדיום מלא כדי להשבית את הטריפסין.

לאחר מכן סנן את תרחיף התא באמצעות מסננת תאים של 30 מיקרומטר. עם 10 מיקרוליטר מיקרו פיפטה, להזריק שני מיקרוליטר של תרחיף התא בכל טיפת פפטידים. זרעו 800 תאים מקו התאים SW1222 לכל באר במשך ארבעה ימים.

לדגור על הטיפות במשך 30 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% פחמן דו חמצני. לאחר מכן להוסיף 0.5 מיליליטר של מדיום בתוספת לכל באר. כדי להכין את הבקרה, לדלל את המלאי של בקרת מטריצת קרום המרתף עם מדיום נוסף.

טען את מתלה התא לתמיסת מרתף הממברנה המדוללת. פיפטה 20 מיקרוליטר של מטריצת קרום מרתף מדוללת לכל באר עם התאים. לדגור על התאים במשך 20 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.

לאחר טיפות להתמצק, להוסיף 0.5 מיליליטר של מדיום מלא. דמיינו את התאים באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר בימים הראשון, הרביעי והשביעי כדי להעריך את צמיחת האורגנואידים. שבוע אחד של הדמיית שדה בהיר של התאים הראה כי צבירי התאים הקטנים התאספו לאורגנואידים.

האורגנואידים שמקורם ב-SW1222 שגודלו בהידרוג'לים פפטידים היו בעלי מורפולוגיה עגולה עם מראה קל. מראה כהה יותר הצביע על צפיפות גבוהה יותר לא רצויה כפי שנראה במושבות בפפטיד P ביום השביעי.