כדי להתחיל, קבע את מחזיק הקנטיליבר של AFM על מעמד ההחלפה. השתמש במלקחיים של שען כדי להרכיב את המגן שנבחר על המחזיק. הדקו את הבורג על המחזיק כדי לאבטח את המזנון.
הניחו ונעלו את מחזיק המגן על ראש ה-AFM המונח על המעמד. השתמש בפונקציית מנוע השלבים בתוכנת AFM כדי למשוך את ראש ה-AFM לנקודה הגבוהה ביותר. והגדר מיקום זה כ- 0.0.
הרימו בזהירות את ראש ה-AFM ממעמדו, ולאחר מכן הרכיבו אותו על במת הדגימה על ידי הנחת הרגליים בחריצים המתאימים. כדי לכייל את הקנטיליבר, השתמש בפונקציית מנוע השלבים כדי לקרב אותו למשטח הדגימה. לאחר מכן לחץ על גישה בחלון מצב איש קשר עבור ספקטרוסקופיה.
הורידו את המזנון במרווחים קטנים של 15 מיקרומטר. לחץ על Acquisition כדי ללכוד עקומת כוח. לאחר מכן בחר את עקומת הכוח, פתח אותה בחלון מנהל הכיול ובחר מצב מבוסס מגע במקטע שיטה.
כעת השתמש בפונקציה Select Fit Range ובחר את עקומת הפסילה של cantilever להתאמת עקומה ליניארית. לאחר מכן, סמן את תיבת הסימון רגישות כדי להמיר את יחידת הכוח מוולט לניוטון. הרימו את המזנון ב-100 עד 200 מיקרומטר בנוזל ובחרו את פונקציית הרעש התרמי שוב, לחצו על Select Fit Range והתאימו את עקומת פעמון הרעש התרמי לעקומת לורנס.
לאחר התאמת העקומה, בחר בתיבה קבוע קפיץ K. ודא שקבוע הקפיץ קרוב לערך היצרן ורשום אותו להתייחסות עתידית. לאחר מכן הניחו את הדגימה המורכבת על שקופית של כלי דם ברשתית עין מכרסם או מטריצה תת-אנדותלית על שלב AFM ודמיינו את כלי הרשתית.
בחר מצב מגע עבור ספקטרוסקופיה במקטע ניסוי של התוכנה. לאחר מכן הגדר את כוח הנקודה המוגדרת ל- 0.5 ננו-ניוטון ולחץ על התקרבות. השתמש בברגי הבמה על במת AFM כדי למקם בזהירות את הגשושית במיקום הרצוי על הדגימה.
לחץ על Approach כדי למקם את הקנטיל קרוב יותר לדגימה, ולאחר מכן לחץ על Acquisition כדי ללכוד את עקומות הכוח. לבסוף, שמור את כל עקומות הכוח לניתוח. עקומות הגישה והפסילה שהתקבלו מנימי רשתית שבודדו מעכבר סוכרתי היו תלולות יותר מאלה שהתקבלו מעכבר שאינו סוכרתי.
