איתור מיקרודומיינים Ca²⁺ ברמה תת-תאית בתאי T מורין ראשוניים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי

כדי להתחיל, הניחו 10 מיקרוליטר של תאי CD4+C הטעונים על השקופית המוכנה ותנו להם להתחבר במשך שלוש עד חמש דקות. הוסיפו בעדינות 80 מיקרוליטר של מאגר מדידת סידן לשקופית. בחר את עדשת טבילת השמן 100X.

מרחו טיפה קטנה של שמן טבילה והניחו את המגלשה על במת המיקרוסקופ. לאחר מכן כוונן את המיקוד במצב brightfield. בחר שדה ראייה עם עד 10 תאים שאינם באים במגע זה עם זה וקבל תמונה.

לאחר מכן, הוסף 10 מיקרוליטר של חרוזים מצופים נוגדנים או ממריץ לאחר דקה אחת, ולמדוד בסך הכל שלוש דקות באמצעות 40 מסגרות לשנייה או קצב המסגרות המרבי האפשרי. השתמש במחוון כדי לאתר את זמן המגע בין חרוז לתא מעניין. בתפריט אפשרויות בצד ימין, בחר איש קשר לחרוז: x, y, t.

בחרו בנקודה בצד שמאל של התמונה שבה התא והחרוז יוצרים קשר. בחר בחר תא על-ידי לחיצה על נקודה בפנים. לחץ על התא המגורה על ידי חרוז זה, רצוי במרכז.

לחץ על הוסף איש קשר חרוז. לאחר שכל מגעי החרוזים מוגדרים, לחץ על כפתור המשך והמשך עם קבצים נוספים תאים מסוג Wild הציגו היווצרות מיקרו-דומיין מהירה של סידן בשנייה הראשונה לאחר הגירוי, שהתפשטה ברחבי התא במהלך 15 השניות הבאות. לעומת זאת, תאים מוטנטיים P2x4 ו-P2x7 הראו ירידה בהיווצרות מיקרו-דומיין של סידן, כאשר תאים מוטנטיים P2x4 הציגו גם הם רמה בסיסית נמוכה יותר לפני הגירוי.

כמו תאי T מורין, מיקרודומיינים של סידן נצפו באתר מגע החרוזים בתאי CD4+T אנושיים.