לאחר ביצוע רכישת נקודות PLA ללוקליזציה של אינטראקציית חלבון, פתח תמונות מתנאים שונים כדי להתאים את הפרמטרים לניתוח ב- ImageJ. קבע וציין פרמטרים אלה יחד עם הנתונים בתוכנית המאקרו. כדי להסיר את הרקע, לחץ על עבד והחסר רקע.
השתמש בפונקציית התצוגה המקדימה כדי לבדוק רדיוסים שונים של כדור מתגלגל. להסרת רעשים, לחץ על תהליך, רעש והסרת כתמים. לאחר מכן לחץ על תהליך והחלקה בתפריט הגרעין כדי להחיל את הפונקציה חלקה ולשפר את המילוי.
כעת, לחץ על תמונה, לאחר מכן הקלד ובחר 8 סיביות כדי להמיר לתמונה של 8 סיביות. לאחר מכן, התאם את הסף על ידי מעבר אל תמונה, התאמה, ולבסוף, סף. התאימו את הסף כדי להציג באופן חזותי את כל הגרעינים או הנקודות בתמונה, תוך הימנעות מרוויה יתר וקריסת מבנים.
כמו כן, שימו לב לערכים ובדקו בתמונות שונות. להמרה למסיכה, לחצו על 'תהליך', 'בינארי' ו'המר למסיכה'. עבור הגרעין, לחץ על תהליך, בינארי ומילוי חורים, ולאחר מכן על תהליך, בינארי וקו פרשת מים.
עבור נקודות PLA, לחץ על תהליך, בינארי וקו פרשת מים. לספירת גרעינים, מדדו את השטח או האורך של הגרעינים השונים כדי להעריך את הגודל הממוצע. השתמש בערך משוער כדי לנתח חלקיקים על-ידי לחיצה על נתח ונתח חלקיקים.
הגדר את הגודל ל- 15 אינסוף ובדוק את האפשרויות. הצג מסיכה, הצג תוצאות, נקה תוצאות, הוסף למנהל ואל תכלול בקצוות. כדי לספור נקודות PLA, מדוד את השטח או הרדיוס שלהן כדי להעריך את גודלן הממוצע.
עבור כל החזר השקעה במנהל החזר ההשקעה, לחץ על נתח ונתח חלקיקים. הגדר את הגודל ל- 0.02 ל- 3. סמן את האפשרויות, הצג מסיכה, הצג תוצאות, נקה תוצאות, סכם ואל תכלול בקצוות.
שמרו את התוצאות המציגות את מספר הנקודות לכל גרעין בכל גרעין שנמצא בתמונה. האינטראקציה של Nek4 Ku70 גדלה בגרעין בעקבות נזק לדנ"א לאחר 20 דקות, שעה ושלוש שעות של טיפול באטופוסיד בהשוואה לתאי ביקורת ו-DMSO. טיפול Etoposide הגדיל באופן משמעותי את האינטראקציה Nek5 topoisomerase 2-beta בהשוואה לבקרת DMSO.
צביעת גמא-H2AX עלתה לאחר 20 דקות של טיפול באטופוסיד ונשארה גבוהה עד שלוש שעות, מה שמצביע על תגובה מתמשכת לנזק לדנ"א.
