כדי להתחיל, מראש לחמם אינקובטור תרמי ב 42 מעלות צלזיוס. הוסף מיקרוליטר אחד של תערובת תמיסת מגנזיום אצטט ואשלגן אצטט לצד הצינור המכיל את גלולת RTRPA שעברה ליופיליזציה, מעורבבת מראש. להשעות את הגלולה ב 12.4 מיקרוליטר של דגימת RNA.
כדי להתחיל את תגובת RTRPA, סובב לזמן קצר את הפתרון הנוסף באמצעות מיני צנטריפוגה בטמפרטורת החדר למשך שלוש שניות. הקש בזהירות על הצינור כדי לערבב את התוכן ביסודיות ולסובב שוב. לדגור על התגובה ב 42 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות באינקובטור תרמי שחומם מראש.
לאחר סיום התגובה, הסר את צינורות התגובה והנח אותם על קרח לפני שתמשיך לזיהוי CRISPR-Cas. לזיהוי חומצות גרעין, הפעל קורא מיקרו-צלחות פלואורסצנטיות. הגדר וחמם מראש את קורא microplate ל 37 מעלות צלזיוס ובחר את התוכנית.
לאחר מכן מניחים צלחת באר 384 על קרח. כדי להשהות מחדש את תגובת הזיהוי המעורבבת מראש של CRISPR-Cas, הוסף 17 מיקרוליטר של תמיסת מגנזיום כלוריד של שמונה מילימולרי. מערבבים על ידי הקשה זהירה על הצינור.
סובבו לזמן קצר במשך שלוש שניות לפני שתניחו את הצינור על קרח. מעבירים 18 מיקרוליטר של תערובת התגובה המרחפת לכל באר של צלחת באר 384 מקוררת מראש על קרח. הוסף שני מיקרוליטרים של מוצר RPA מוכן לכל תגובה היטב.
מוציאים את הצלחת מהקרח. הכנס אותו במהירות לקורא מיקרו-צלחות פלואורסצנטי שחומם מראש ולחץ על התחל. עבור תגובות מבוססות Cas13a שעברו ליופיליזציה, 6% טרהלוז או 2% סוכרוז משמרים את יעילות התגובה זמן רב לאחר ליופיליזציה.
ריאגנטים מעורבים מראש lyophilized עבור תגובות מבוססות RTRPA ו- Cas13 יציבים ב 20 מעלות צלזיוס במשך שמונה חודשים לפחות.
