עבודה זו נתמכה על ידי טרשת נפוצה האגודה הלאומית (ת&quot;א 3021-A1 / T ל AEC) של אוניברסיטת טקסס בסן אנטוניו.

הכנה של ריאגנטים הכינו מלאי איזוטוני percoll (SIP), 4 מ&quot;ל לכל המוח, על ידי ערבוב 9 חלקים percoll עם חלק אחד של 10X HBSS ללא Ca + + ו - Mg + +. הכן SIP ב 70% 1X HBSS ללא Ca + + ו - Mg + +, 2 מ&quot;ל לכל המוח לוותר לתוך צינור פוליפרופילן 15 מ&quot;ל חרוטי. הערה: מומלץ percoll יש להשתמש בטמפרטורת החדר, אם משתמשים בו קר, תאים נוטים גוש והפרדה התא הוא פחות יעיל. רקמות איסוף homogenization הרדימי עכברים perfuse דרך החדר השמאלי עם קרים כקרח HBSS 1X. לנתח את המוח ואת חוט השדרה ולשמור על RPMI ללא פנול אדום עד שכל העכברים מוקרבים. רקמות מקום 7 או 15 מ&quot;ל dounce homogenizer המכיל 3 מ&quot;ל של RPMI, בעדינות לעשות השעיה תא עם העלי רפויים (גודל) ואחריו העלי Tigh צמודה (גודל ב &#39;) כדי להמשיך לנתק את הרקמות. השלם את נפח של המתלים התא מ&quot;ל 7 עם RPMI. צבע להגדיר הוסף 3 מ&quot;ל של SIP כדי השעיית התא לבצע SIP 30% הסופי לאט לאט שכבת ההשעיה תא 10 מ&quot;ל על גבי SIP 70%. זהו השלב הקריטי ביותר של ההליך, השתמש פיפטה, סיוע להגדיר במצב כבידה למנוע ערבוב של 70% ו 30% פתרונות. קו שטוח מאוד ברור צריך להיות גלוי בצומת 70% -30%. צנטריפוגה 30 דקות ב 500 גרם 18 ° C. ודא צנטריפוגות יפסיקו עם בלם מינימלית או לא, כך שלבי הביניים אינה מופרעת. שימוש pipet העברה, בעדינות להסיר את השכבה של פסולת מהחלק העליון של הצינור ולאסוף 2.0-3.0 מ&quot;ל של שלבי הביניים 70% -30% לתוך צינור חרוטי נקי המכיל 8 מ&quot;ל של 1X HBSS. ודא percoll המכיל את שלבי הביניים הוא מדולל על פי שלוש, לערבב כמה פעמים על ידי היפוך centrifugre ו 7 דקות ב 500 גרם ב 18 ° C. Resuspend גלולה ב 1 מ&quot;ל של חיץ מכתים תא ולהעביר אותו צינור 1.5 מ&quot;ל לשטוף עוד פעם אחת באמצעות צנטריפוגות מיקרו ב 10,000 G 1 דקות ב 4 ° C. נוגדן מכתים כדורי Resuspend ב 50 μl של מטוהרים antimouse CD16/CD32 מדולל 1:200 במאגר מכתים התא כדי לחסום את אתרי הקישור Fc. לדגור על קרח למשך 10 דקות. ספירת תאים באמצעות hemocytometer. הוסף 50 μl של שילוב נוגדן קוקטייל לדגור על קרח למשך 30 דקות. נוגדן כל חייב להיות טיטרציה הראשון להעריך דילול אופטימלי. השתמש שילובים fluorochrome המתאים נבחר על פי היכולות של לייזר הגדרות המסנן של cytometer תזרים הספציפית שלך. שטפו תאים חיץ תא מכתים, כדורי resuspend ב μl 100-200 של חיץ מכתים תא ולנתח מיד cytometer, או לחילופין תאים ניתן resuspended paraformaldehyde ב 2% (PFA) שהוכנו PBS ומאוחסנים יתר בלילה 4 ° C . נציג תוצאות: אחרי סיבוב הדרגתיים, את שלבי הביניים 70% -30% צריך הילה לבנה מוגדר, quantitation של תאים התאושש עכבר תמים צריך להניב 3-5 x10 5 תאים לכל עכבר (המוח וחוט השדרה ועוד). דלקת המוח אולי החל מספרים של תאים דלקתיים בהתאם העלבון CNS או מודל המחלה (איור 1). <img src="/files/ftp_upload/2348/2348fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. בידוד של תאים mononuclear, מן תמים EAE מוח על המחלה שיא. תאים השעיות המוח הופרדו על רציפות 70% / 30% percoll הדרגתיים. מוכתם תאים הודגרו עם FC-לחסום ואחריו אנטי CD45 נוגדנים למשך 30 דקות על הקרח. תאים שהיו שטופים במאגר מכתים התא קבוע ברכישת PFA 2% מוקדם LSR-II. CD45 העוצמה נמדדת על ציר Y, ​​כאשר שלוש האוכלוסיות ברורים הם דמיינו. אפיון נוסף של פנוטיפ החיסונית של CD45 בתאי היי חדירה מיושמת באמצעות נוגדנים נוספים ונותחו לאחר מכן על ידי cytometry הזרימה.

<ol>
	<li>Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+direct+characterization+of+resident+microglial+cells+from+the+normal+and+inflamed+central+nervous+system.">Isolation and direct characterization of resident microglial cells from the normal and inflamed central nervous system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, 7438-7442 (1991).</li><li>Ponomarev, E. D., Shriver, L. P., Maresz, K., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+cell+activation+and+proliferation+precedes+the+onset+of+CNS+autoimmunity.">Microglial cell activation and proliferation precedes the onset of CNS autoimmunity.</a> J. Neurosci. Res. 81, 374-389 (2005).</li><li>Ford, A. L., Goodsall, A. L., Hickey, W. F., Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+adult+ramified+microglia+separated+from+other+central+nervous+system+macrophages+by+flow+cytometric+sorting.+Phenotypic+differences+defined+and+direct+ex+vivo+antigen+presentation+to+myelin+basic+protein-reactive+CD4++T+cells+compared.">Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting. Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein-reactive CD4+ T cells compared.</a> J Immunol. 154, 4309-4321 (1995).</li><li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry.">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat. Protoc. 1, 1947-1951 (2006).</li><li>Juedes, A. E., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+and+infiltrating+central+nervous+system+APCs+regulate+the+emergence+and+resolution+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Resident and infiltrating central nervous system APCs regulate the emergence and resolution of experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J. Immunol. 166, 5168-5175 (2001).</li><li>Prinz, M., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tickets+to+the+brain:+Role+of+CCR2+and+CX(3)CR1+in+myeloid+cell+entry+in+the+CNS.">Tickets to the brain: Role of CCR2 and CX(3)CR1 in myeloid cell entry in the CNS.</a> J Neuroimmunol. , (2010).</li><li>Mildner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6ChiCCR2++monocytes+only+under+defined+host+conditions.">Microglia in the adult brain arise from Ly-6ChiCCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nat. Neurosci. 10, 1544-1553 (2007).</li><li>Djukic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+monocytes+engraft+in+the+brain,+differentiate+into+microglia+and+contribute+to+the+pathology+following+meningitis+in+mice.">Circulating monocytes engraft in the brain, differentiate into microglia and contribute to the pathology following meningitis in mice.</a> Brain. 129, 2394-2403 (2006).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

ניתוח של השטח סמנים תא leukocytes CNS מרקמות עכבר רגיל מודלק נוצל במשך כמה עשורים 1-3. פרוטוקולים בידוד מבוססים הפרדת microglia ו leukocytes ידי 4 צנטריפוגה צפיפות. כאן אנו מתארים שיטה מהירה ויעילה של בידוד CNS leukocytes באמצעות רציפה הדרגתיים percoll. אחרי בידוד של תאים, צביעה עם נו...

רקמות homogenization והדרגות <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Percoll (Amersham) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנקס 10X &quot;פתרון מאוזן מלח, בלי סידן ומגנזיום (Gibco) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RPMI בינוני 1640, ללא אדום פנול (Gibco) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7-מ&quot;ל או 15 מ&quot;ל רקמות Dounce Grinders (VWR) </li></ul> תזרים cytometry <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכתים Cell Buffer (Biolegend) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברוש מטוהרים אנטי עכבר CD16/CD32 (עכבר BD Fc בלוק), BD Pharmingen </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemacytometer (פישר) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Anti-CD45 העכבר (שיבוט 30-F11), CD4 (שיבוט RM4-5), CD19 (שיבוט 6D5), BioLegend </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוספט 10X שנאגרו מלוחים, ללא סידן ומגנזיום (Thermo Scientific) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Paraformaldehyde (Sigma Aldrich) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cytometry ניתוח תזרים ביצע עם השנייה LSR (BD Biosciences) </li></ul>

isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients

בידוד של תאים חיסוניים כי לחדור למערכת העצבים המרכזית (CNS) במהלך, אוטואימוניות זיהום, טראומה או ניוון מוחיים, נדרש לעתים קרובות להגדיר את הפנוטיפ שלהם פונקציות מפעיל. גישות Histochemical הם סייעה לקבוע את המיקום של התאים שחדרו ולנתח את מערכת העצבים המרכזית קשורה לפתולוגיה. עם זאת, ב-situ histochemistry וטכניקות צביעה immunofluorescent מוגבלים במספר נוגדנים, שניתן להשתמש בהם בכל פעם בודד כדי לאפיין תת תא החיסון ברקמה מסוימת. לכן, גישות היסטולוגית יחד עם החיסון phenotyping ידי cytometry זרימה הם קריטיים לחלוטין לאפיין את ההרכב של חדירה למערכת העצבים המרכזית המקומית. פרוטוקול זה מבוסס על הפרדה של מערכת העצבים המרכזית השעיות הסלולר על discontinous percoll הדרגתיים. המאמר הנוכחי מתאר פרוטוקול מהיר יעיל לבודד תאים mononuclear מרקמות המוח ואת חוט השדרה אשר יכול להיות מנוצל באופן יעיל לזיהוי אוכלוסיות תאים שונות של החיסון יחיד מדגם ידי cytometry הזרימה.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients at JoVE.com

Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

המאמר הנוכחי מתאר פרוטוקול מהיר יעיל לבודד תאים mononuclear מרקמות המוח ואת חוט השדרה אשר יכול להיות מנוצל ביעילות עבור ניתוחים תזרים cytometric.

בידוד של המוח ותאי חוט השדרה mononuclear שימוש Percoll Gradients

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required ...

isolation-brain-spinal-cord-mononuclear-cells-using-percoll

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

40.6K Views.  University of Texas at San Antonio - UTSA. המאמר הנוכחי מתאר פרוטוקול מהיר יעיל לבודד תאים mononuclear מרקמות המוח ואת חוט השדרה אשר יכול להיות מנוצל ביעילות עבור ניתוחים תזרים cytometric.

Video: Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes

We describe a method for preparing brain infiltrating leukocytes (BILs) from mice. We demonstrate how to infect mice with Theiler's murine encephalomyelitis virus (TMEV) via a rapid intracranial injection technique and how to purify a leukocyte-enriched population of infiltrating cells from whole brain. Briefly, mice are anesthetized with isoflurane in a closed chamber and are free-hand injected with a Hamilton syringe into the frontal cortex. Mice are then killed at various times after infection by isoflurane overdose and whole brains are extracted and homogenized in RPMI with a Tenbroeck tissue grinder. Brain homogenates are centrifuged through a continuous 30% Percoll gradient to remove the myelin and other cell debris. The cell suspension is then strained at 40 &mu;m, washed and centrifuged on a discontinuous Ficoll-Paque Plus gradient to select and purify the leukocytes. The leukocytes are then washed and resuspended in appropriate buffers for immunophenotyping by flow cytometry. Flow cytometry reveals a population of innate immune cells at the early stages of infection in C57BL/6 mice. At 24 hours post infection, multiple subsets of immune cells are present in the BILs, with an enriched population of Gr1+, CD11b+ and F4/80+cells. Therefore, this method is useful in characterizing the immune response to acute infection in the brain.

A rapid method to obtain infiltrating leukocytes from the murine brain is described. This method utilizes a continuous Percoll gradient and discontinuous Ficoll gradient to select and purify the leukocyte-enriched layer. Isolated leukocytes may then be characterized by flow cytometric measurements.

בידוד של המוח, שחדר Leukocytes

We describe a method for preparing brain infiltrating leukocytes (BILs) from mice. We demonstrate how to infect mice with Theiler's murine ...

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the immune response to an infection of the CNS, such as poliomyelitis, Lyme neuroborreliosis, or neurosyphilis, it is often necessary to isolate the CNS-infiltrating immune cells.
In this video-protocol we demonstrate how to isolate mononuclear cells (MNCs) from the CNS of a rat with EAE. The first step of this procedure requires a cardiac perfusion of the rodent with a saline solution to ensure that no blood remains in the blood vessels irrigating the CNS. Any blood contamination will artificially increase the number of apparent CNS-infiltrating MNCs and may alter the apparent composition of the immune infiltrate. We then demonstrate how to remove the brain and spinal cord of the rat for subsequent dilaceration to prepare a single-cell suspension. This suspension is separated on a two-layer Percoll gradient to isolate the MNCs. After washing, these cells are then ready to undergo any required procedure. 
Mononuclear cells isolated using this procedure are viable and can be used for electrophysiology, flow cytometry (FACS), or biochemistry. If the technique is performed under sterile conditions (using sterile instruments in a tissue culture hood) the cells can also be grown in tissue culture medium. A given cell population can be further purified using either magnetic separation procedures or a FACS.

In this video we demonstrate how to isolate mononuclear cells from the central nervous system of rats with experimental autoimmune encephalomyelitis.

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the ...

Biology

Isolation and Culture of Post-Natal Mouse Cerebellar Granule Neuron Progenitor Cells and Neurons 

The cerebellar cortex is a well described structure that provides unique opportunities for studying neuronal properties and development1,2. Of the cerebellar neuronal types (granule cells, Purkinje cells and inhibitory interneurons), granule neurons are by far the most numerous and are the most abundant type of neurons in the mammalian brain. In rodents, cerebellar granule neurons are generated during the first two post-natal weeks from progenitor cells in the outermost layer of the cerebellar cortex, the external granule layer (EGL). The protocol presented here describes techniques to enrich and culture granule neurons and their progenitor cells from post-natal mouse cerebellum. We will describe procedures to obtain cultures of increasing purity3,4, which can be used to study the differentiation of proliferating progenitor cells into granule neurons5,6. Once the progenitor cells differentiate, the cultures also provide a homogenous population of granule neurons for experimental manipulation and characterization of phenomena such as synaptogenesis, glutamate receptor function7, interaction with other purified cerebellar cells8,9 or cell death7.

Isolation and Culture of Post-Natal Mouse Cerebellar Granule Neuron Progenitor Cells and Neurons

Here we present a method to isolate and culture cerebellar granule neuron progenitor cells and cerebellar granule neurons from postnatal mouse.

בידוד תרבות שלאחר הלידה cerebellar עכבר גרגיר Neuron ובתאים ונוירונים

The cerebellar cortex is a well described structure that provides unique opportunities for studying neuronal properties and development1,2. Of the ...

Isolating Central Nervous System Tissues and Associated Meninges for the Downstream Analysis of Immune cells

The central nervous system (CNS) is comprised of the brain and spinal cord and is enveloped by the meninges, membranous layers serving as a barrier between the periphery and the CNS. The CNS is an immunologically specialized site, and in steady state conditions, immune privilege is most evident in the CNS parenchyma. In contrast, the meninges harbor a diverse array of resident cells, including innate and adaptive immune cells. During inflammatory conditions triggered by CNS injury, autoimmunity, infection, or even neurodegeneration, peripherally derived immune cells may enter the parenchyma and take up residence within the meninges. These cells are thought to perform both beneficial and detrimental actions during CNS disease pathogenesis. Despite this knowledge, the meninges are often overlooked when analyzing the CNS compartment, because conventional CNS tissue extraction methods omit the meningeal layers. This protocol presents two distinct methods for the rapid isolation of murine CNS tissues (i.e., brain, spinal cord, and meninges) that are suitable for downstream analysis via single-cell techniques, immunohistochemistry, and in situ hybridization methods. The described methods provide a comprehensive analysis of CNS tissues, ideal for assessing the phenotype, function, and localization of cells occupying the CNS compartment under homeostatic conditions and during disease pathogenesis.

This paper presents two optimized protocols for examining resident and peripherally derived immune cells within the central nervous system, including the brain, spinal cord, and meninges. Each of these protocols helps to ascertain the function and composition of the cells occupying these compartments under steady state and inflammatory conditions.

בידוד רקמות מערכת העצבים המרכזית וקרומי המוח הקשורים לניתוח במורד הזרם של תאי מערכת החיסון

The central nervous system (CNS) is comprised of the brain and spinal cord and is enveloped by the meninges, membranous layers serving as a barrier ...

בידוד כל סוגי התאים תושבי מערכת העצבים המרכזית בו זמנית מעכברים אוטואימוניים

Simultaneous Isolation of Principal Central Nervous System-Resident Cell Types from Adult Autoimmune Encephalomyelitis Mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common murine model for multiple sclerosis (MS) and is frequently used to further elucidate the still unknown etiology of MS in order to develop new treatment strategies. The myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55) EAE model reproduces a self-limiting monophasic disease course with ascending paralysis within 10 days after immunization. The mice are examined daily using a clinical scoring system. MS is driven by different pathomechanisms with a specific temporal pattern, thus the investigation of the role of central nervous system (CNS)-resident cell types during disease progression is of great interest. The unique feature of this protocol is the simultaneous isolation of all principal CNS-resident cell types (microglia, oligodendrocytes, astrocytes, and neurons) applicable in adult EAE and healthy mice. The dissociation of the brain and the spinal cord from adult mice is followed by magnetic-activated cell sorting (MACS) to isolate microglia, oligodendrocytes, astrocytes, and neurons. Flow cytometry was used to perform quality analyses of the purified single-cell suspensions confirming viability after cell isolation and indicating the purity of each cell type of approximately 90%. In conclusion, this protocol offers a precise and comprehensive way to analyze complex cellular networks in healthy and EAE mice. Moreover, required mice numbers can be substantially reduced as all four cell types are isolated from the same mice.

מחבר זרקור: חקר מסלולים נוירו-דלקתיים באמצעות בידוד סימולטני של כל סוגי התאים העיקריים תושבי CNS 

To date, protocols for the simultaneous isolation of all principal central nervous system-resident cell types from the same mouse are an unmet demand. The protocol shows a procedure applicable in na&#239;ve and experimental autoimmune encephalomyelitis mice to investigate complex cellular networks during neuroinflammation and simultaneously reduce the required mice numbers.

בידוד סימולטני של סוגי תאים עיקריים תושבי מערכת העצבים המרכזית מעכברים אוטואימוניים בוגרים

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common murine model for multiple sclerosis (MS) and is frequently used to further elucidate ...

Neuroscience

Mononuclear Cell Isolation from Mouse Brain: A Density Gradient Centrifugation Technique to Isolate Brain Resident Mononuclear Cells

Source: Ji, Z. et al. <a href="https://www.jove.com/v/61050/flow-cytometric-analysis-lymphocyte-infiltration-central-nervous">Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.</a> J. Vis. Exp. (2020)
In this video, we perform the isolation of mononuclear cells from a mouse&#8217;s brain using density gradient centrifugation. The isolated mononuclear cell suspension can be used for further downstream analysis.

בידוד תאים חד-גרעיניים ממוח עכבר: טכניקת צנטריפוגה של שיפוע צפיפות לבידוד תאים חד-גרעיניים שוכני מוח

Source: Ji, Z. et al. Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

Cancers of the Nervous System

Ex vivo studies

Isolating Tumor-Infiltrating Immune Cells from a Murine Brain

Source: Baker, G. J., et al., Lowenstein, P. R. <a href="https://app.jove.com/v/53676">Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells.</a> J. Vis. Exp. (2015)
The video demonstrates the isolation of tumor-infiltrating peripheral blood mononuclear cells from a mouse brain using mechanical dissociation and enzymatic digestion. This is followed by density gradient centrifugation to collect the immune cells for further analysis.

בידוד תאי חיסון חודרי גידול ממוח מוריני

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
Prepare density centrifugation media ...

Neuronal Culture Techniques

Co-culture and Interaction Studies

Isolation of Neural Stem Progenitor Cells from the Spinal Cord Periventricular Region of an Adult Rat

Source: Mothe, A., et al., <a href="https://app.jove.com/v/52732">Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video presents a method for isolating neural stem/progenitor cells from the periventricular tissue of the spinal cord in adult rats. The technique includes incubating the tissue fragments in a solution containing proteolytic enzymes to disrupt the extracellular matrix and release the cells. Subsequently, the released cells are plated in a medium containing specific growth factors that enhance neural stem/progenitor proliferation and promote aggregation into three-dimensional neurospheres.

בידוד תאי אב עצביים מאזור חוט השדרה הפריוונטריקולרי של חולדה בוגרת

All procedures involving animal samples have been reviewed and approved by the appropriate animal ethical review committee. 
1. Preparation of Dissection ...

בידוד של המוח ותאי חוט השדרה mononuclear שימוש Percoll Gradients

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בידוד של המוח, שחדר Leukocytes

בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE

בידוד תרבות שלאחר הלידה cerebellar עכבר גרגיר Neuron ובתאים ונוירונים

בידוד רקמות מערכת העצבים המרכזית וקרומי המוח הקשורים לניתוח במורד הזרם של תאי מערכת החיסון

בידוד סימולטני של סוגי תאים עיקריים תושבי מערכת העצבים המרכזית מעכברים אוטואימוניים בוגרים

בידוד סימולטני של סוגי תאים עיקריים תושבי מערכת העצבים המרכזית מעכברים אוטואימוניים בוגרים

בידוד סימולטני של סוגי תאים עיקריים תושבי מערכת העצבים המרכזית מעכברים אוטואימוניים בוגרים

בידוד תאים חד-גרעיניים ממוח עכבר: טכניקת צנטריפוגה של שיפוע צפיפות לבידוד תאים חד-גרעיניים שוכני מוח

בידוד תאי חיסון חודרי גידול ממוח מוריני

בידוד תאי אב עצביים מאזור חוט השדרה הפריוונטריקולרי של חולדה בוגרת