עבודה זו נתמכה על ידי המוסד האמריקני הלאומי לבריאות NIH מענק / NICHD # HD051998 (עד רמ&quot;א).

1. קולגן הכנה ביד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני EVTs טעינת לתרבות 3-D התא, צריך להכין את Cytodex-3 חרוזים microcarrier: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשקלי את הכמות המתאימה של Cytodex-3 חרוזים הנדרש לצורך הניסוי. פרוטוקול זה מותאם עבור כלי 10ml RCCS, שבו 0.05g חרוזים נדרשים. עבור כלי RCCS 50 מ&quot;ל, בקנה מידה בהתאם. בתוך שפופרת 50 מ&quot;ל חרוטי autoclavable, לערבב 250 מ&quot;ג Cytodex-3 חרוזים עם פוספט Dulbecco 12mL שנאגרו פתרון (DPBS). סכום זה מספיק עבור 5 כלי RCCS. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא נפח הולם קיים צינור חרוטי, שכן תהליך החיטוי תגרום אידוי. Loosely כובע צינור החיטוי של 10 דקות ב 110 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את צינור חרוטי בסיום המחזור החיטוי ולאפשר פתרון Cytodex-3 חרוז להתקרר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי צינור חרוטי מתקרר לטמפרטורת החדר, השתמש בטכניקה סטרילית להביא את הנפח הכולל ל 12.5mL באמצעות 1X העקוריםBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שווי ולאחסן את מוכנה Cytodex-3 חרוזים בטמפרטורת החדר. אפשר להכין חרוזים להתנפח להתקרר לטמפרטורת החדר לפני השימוש. ההכנה של מעל Cytodex-3 חרוזים יספק במשך חמש ספינות 10ml RCCS. ראינו כי אחסון ממושך Cytodex-3 חרוזים בטמפרטורת החדר תגרום הביצועים יפגעו, כמו קולגן יערער לאחר כחודש אחד. Cytodex-3 חרוזים טווח בגודל 133-215 מיקרומטר. </li></ol> 2. מדיה הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 1 ליטר של RCCS אופטימיזציה GTSF-2 המדיה (מותאם מ 22), אשר מורכב של 40% ממ אלפא, בתוספת תוספי מזון ו -60% L-15 של התקשורת ליבוביץ (מותאם מ - 22). ראשית, להכין 400mL בנפח כולל של ממ אלפא בתוספת: סודיום ביקרבונט 21.2mM 0.06% Peptone 0.7mM פרוקטוז 1.4mM גלקטוז 5.6mM גלוקוז 1% HEPES 1% L-גלוטמין 0.5% ITS 10% FBS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין פתרון מלאי של ITS, מתמוססים 5 מ&quot;ל סטרילי acidified H 2 O שהוכן על ידי תוספת של חומצה אצטית קרחונית (כ 0.05mL). מערבולת לפזר, פעל עם מים סטריליים 45mL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספיק לשקול את L-15 אבקה של ליבוביץ עבור 600ml של המדיום על ידי המסת ברקמות תרבות כיתה H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביאו את הנפח הכולל של המדיום תרבות התא 1 ליטר עם בינוני L-15 של ליבוביץ. מסנן לעקר ולאחסן ב 4 ° C בחושך. הוסף 1% פניצילין, סטרפטומיצין בנפרד aliquot כל אחד בינוני בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רבים בתקשורת ניסוחים אחרים מאשר GTSF-2 התקשורת נבדקו בהצלחה RCCS. מעבדות הפרט להחליט עבור עצמם מה המדיום הוא אופטימלי עבור הניסוי מתבצע. </li></ol> 3. תאים דגירה ביד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפיץ את EVTs ל ~ 80% confluency, trypsinize ולספור באמצעות מקובל בתרבות פרקטיקות התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשעות 1x10 6 EVTs ב 4mL של חםעורך אמצעי התקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב בעדינות מוכן Cytodex-3 חרוזים. באמצעות שימוש בטכניקות סטריליות, להסיר 2.5mL חרוזים מוכן באמצעות קצה רחב, 10 מ&quot;ל פיפטה סרולוגיות ולהעביר צינור בשימוש חרוטי 15 מ&quot;ל. שים לב כי ייתכן שיש איבוד קטן של חרוזים כמו שהם מייחסים פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר-3 Cytodex חרוזים להתיישב על החלק התחתון של הצינור. אחרי שקיעה, השתמש pipettor כדי להסיר את השכבה העליונה של DPBS מבלי להפריע Cytodex-3 חרוזים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את 1x10 6 EVTs מוכן בתקשורת עם Cytodex-3 חרוזים מוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את תערובת תאים חרוז בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. מדי פעם מערבבים בעדינות. דגירה של 30 דקות נוסף ב 37 ° C ו 5% CO 2. מדי פעם מערבבים בעדינות. </li></ol> 4. טעינת RWV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בארון זרימה למינרית, להסיר RCCS 10 מ&quot;ל מן האריזה ולמקם אותו בצלחת סטרילית 6-היטב, התרבות ליציבות. עיין באיור 1 עבור תרשים שכותרתו של RCCS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את פקק גדול מהנמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביאו את הנפח הכולל של התערובת התא חרוז דוגרים על 10 מ&quot;ל עם התקשורת חיממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את תא / תערובת חרוז לתוך RCCS דרך נמל גדול. RCCS צריכה להיות מוטה ב -45 מעלות זווית (עד נמל גדול) בעת טעינת לסייע סילוק בועות אוויר פוטנציאליים. למנוע הצטברות של לחץ חיובי על ידי מילוי הכלי לאט ובהתמדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את הפקק בנמל גדול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים את הבוכנות מן 3-mL מזרקים במקום מזרקים ריקים על היציאות קטן. הוסף 1-3mL של התקשורת מזרק אחד. לאט לאט לפתוח את שני שסתומים. החלפת בוכנות מזרק על מזרקים בעדינות. הוסף מדיה מזרק אחד עד שכל הבועות יוסרו מן החדר הפנימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את RCCS ו לטפוח בעדינות את הצד תוך סיבובו מולך כדי לבדוק בועות. אם יש בועות כל, אתה חייב להוציא אותם לתא, כמו בועות אוויר יפריע היווצרות oו אגרגטים התא להציג כוחות גזירה. הסר בועות על ידי החלפה של RCCS עד הבועות נמצאים תחת נמל קטן. ואז בעדינות על המזרק בצד הנגדי לכוח בועות ליציאת ומחוץ לתא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור מיציאה אחת בצד. דחף בעדינות על הבוכנה במזרק אחרים להציג כמות קטנה של לחץ חיובי לתוך כלי השיט, אשר מונע בועות מ טביעה. סגור שסתום השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את RCCS על הרוטור. התחל את הסיבוב על 19rpm ב 37 ° C-CO 2 באינקובטור. </li></ol> 5. שינוי מדיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שנה את התקשורת בכל יום אחר במשך שלושת הימים הראשונים, ולאחר מכן בכל יום לאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את הרוטור ולהסיר את RCCS. משוך את הבוכנות עד ליצור כמה יניקה, להסיר את כל מזרקים מנמל קטן והמקום RCCS בזווית כך החרוזים להתיישב מול הנמל הגדול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי החרוזים התיישבו כל, לפתוח את אחד השסתומים קטניםלאפשר התקשורת לזרום מתוך RCCS לתוך מיכל פסולת. הסרה של 2 / 3 של התקשורת בדרך זו. הקפידו לא להפריע חרוזים לא לבטל כל אגרגטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שסתום קטן ולפתוח את נמל גדול. הוסף מדיה בחזרה RCCS דרך נמל גדול. החלף את הפקק בנמל גדול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 4.6-4.9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו אגרגטים הגידול בגודל, אתה צריך להגדיל את מהירות הסיבוב כדי לשמור אותם ההשעיה בכל עת, באופן אידיאלי דפוס הדם קטן במהירות האופטימלית. בדרך כלל, להגדיל את המהירות בין 0.3-0.7 סל&quot;ד לאחר כל האכלה פעם אגרגטים מתחילים לגדול בעליל. </li></ol> 6. איסוף מופצות תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את RCCS של הרוטור. הסר את כל מזרקים מנמל קטן והמקום RCCS בזווית כך חרוזים עשויים להתיישב מול הנמל הגדול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי החרוזים התיישבו כל, לפתוח את אחד השסתומים קטן ולאפשר התקשורת לזרום החוצהשל RCCS לתוך מיכל פסולת. הסר את 1 / 3 של התקשורת בדרך זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שסתום קטן ולפתוח את נמל גדול. בעדינות מערבולת כלי לפזר את אגרגטים בחזרה פתרון. תערובת נוזלית רוקן לתוך שפופרת 50 מ&quot;ל סטרילי חרוטי. אפשר המצרפים שנאספו להתיישב צינור חרוטי לפני השימוש supernatant ביסודיות לשטוף את כלי התרבות על מנת למקסם את ההתאוששות של אגרגטים. אגרגטים עשוי לשמש מבחני במורד מיד, כגון cytometry זרימה, מבחני הפלישה, immunofluorescence ואחרים. </li></ol> 7. נציג תוצאות דוגמה evt דמויי תאים (SGHPL-4 תא קו trophoblast) גדל ב RCCS על Cytodex-3 חרוזים מוצג באיור 2. השורה evt דמוי תא מציג תחזיות הארכת הרחק באשכול הראשי הצמדת אשכולות השכנות. רבים החרוזים מכוסים לחלוטין עם תאים ומתפשטים. הוסר לאחר מן RCCS ו PLAטד על מטריצה ​​תאית, evt כמו 3-D בתאי צמח באגרסיביות לפלוש ו / או להעביר (איור 3). RT-PCR נתונים מאשר ביטוי מוגבר של MMPs לראות 3-D אגרגטים בניגוד לתרבות המסורתית monolayers התא (איור 4). מעניין, לא גנים הקשורים הפלישה הם שהוגברו גם RCCS (לוח 1) עשויים לסייע המגדירה בתחומים כגון אינטראקציות עם מערכת החיסון פולשים לתאים trophoblasts. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3367/3367fig1.jpg" /> באיור 1. תיאור קריקטורה של מערכת סיבוב Cell תרבות (RCCS). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3367/3367fig2.jpg" /> באיור 2. בניגוד שלב מיקרוסקופ המצרפי של נציג לאחר צמיחה של 5 ימים RCCS. החצים מצביעים על התאים הפולשים * מציין את Cytodex-3 חרוזים microcarrier. <imgalt = &quot;איור 3&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/3367/3367fig3.jpg&quot; /&gt; באיור 3. אגרגטים RCCS מבוגרים היו משובצים ג&#39;לים הפיברין. הפלישה באמצעות הג&#39;ל הפיברין נצפתה מוקדם ככל הטבעה (א) שלאחר הפיברין 24 שעות (ב &#39;) נמשכו עד 48 שעות. החצים מצביעים על התאים הפולשים * מציין את Cytodex-3 חרוזים microcarrier (עיבוד, באישור, מתוך המשחק. 7). <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3367/3367fig4.jpg" /> איור 4. Zymogram ג&#39;לטין השוואתי של monolayer ו RCCS מופצות SGHPL-4 evt דמויי תאים. צורות Pro-ופעיל של MMP-2 ו - MMP-9 היו מופרשים על ידי התאים RCCS trophoblast גדל (עיבוד, באישור, מתוך המשחק. 7). <img alt="טבלה 1" src="/files/ftp_upload/3367/3367table1.jpg" /> טבלה 1. סיכום תוצאות מ microarray SGHPL-4 התאים הגדלים RCCS (עיבוד, באישור, מתוך המשחק. 7). <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li&gt; אינדוקציה מקפלים את 3-D אגרגטים היה מחושב באופן הבא: מנורמל 3-D ערך / גן ערך מנורמל monlayer גן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מציין גנים שהיו מתחת לגבול של גילוי monolayers. </li></ol>

<ol>
	<li>Knofler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+growth+factors+and+signalling+pathways+controlling+human+trophoblast+invasion.">Critical growth factors and signalling pathways controlling human trophoblast invasion.</a> Int. J. Dev. Biol. 54, 269-269 (2010).</li><li>Cartwright, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodelling+at+the+maternal-fetal+interface:+relevance+to+human+pregnancy+disorders.">Remodelling at the maternal-fetal interface: relevance to human pregnancy disorders.</a> Reproduction. 140, 803-803 (2010).</li><li>Harris, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFPA+Gabor+Than+Award+lecture:+Transformation+of+the+spiral+arteries+in+human+pregnancy:+key+events+in+the+remodelling+timeline.">IFPA Gabor Than Award lecture: Transformation of the spiral arteries in human pregnancy: key events in the remodelling timeline.</a> Placenta. 32, S154-S154 (2011).</li><li>Whitley, G. S., Cartwright, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trophoblast-mediated+spiral+artery+remodelling:+a+role+for+apoptosis.">Trophoblast-mediated spiral artery remodelling: a role for apoptosis.</a> J. Anat. 215, 21-21 (2009).</li><li>Apps, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+expression+profile+of+first+trimester+villous+and+extravillous+human+trophoblast+cells.">Genome-wide expression profile of first trimester villous and extravillous human trophoblast cells.</a> Placenta. 32, 33-33 (2011).</li><li>Bilban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trophoblast+invasion:+assessment+of+cellular+models+using+gene+expression+signatures.">Trophoblast invasion: assessment of cellular models using gene expression signatures.</a> Placenta. 31, 989-989 (2010).</li><li>LaMarca, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+growth+of+extravillous+cytotrophoblasts+promotes+differentiation+and+invasion.">Three-dimensional growth of extravillous cytotrophoblasts promotes differentiation and invasion.</a> Placenta. 26, 709-709 (2005).</li><li>Jovanovic, M., Stefanoska, I., Radojcic, L., Vicovac, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-8+(CXCL8)+stimulates+trophoblast+cell+migration+and+invasion+by+increasing+levels+of+matrix+metalloproteinase+(MMP)2+and+MMP9+and+integrins+alpha5+and+beta1.">Interleukin-8 (CXCL8) stimulates trophoblast cell migration and invasion by increasing levels of matrix metalloproteinase (MMP)2 and MMP9 and integrins alpha5 and beta1.</a> Reproduction. 139, 789-789 (2010).</li><li>Husslein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression,+regulation+and+functional+characterization+of+matrix+metalloproteinase-3+of+human+trophoblast.">Expression, regulation and functional characterization of matrix metalloproteinase-3 of human trophoblast.</a> Placenta. 30, 284-284 (2009).</li><li>Barrila, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+3D+cell+culture+models:+using+the+rotating+wall+vessel+to+study+host-pathogen+interactions.">Organotypic 3D cell culture models: using the rotating wall vessel to study host-pathogen interactions.</a> Nat. Rev. Microbiol. 8, 791-791 (2010).</li><li>Hammond, T. G., Hammond, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+suspension+culture:+the+rotating-wall+vessel.">Optimized suspension culture: the rotating-wall vessel.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 281, 12-12 (2001).</li><li>Unsworth, B. R., Lelkes, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+tissues+in+microgravity.">Growing tissues in microgravity.</a> Nat. Med. 4, 901-901 (1998).</li><li>Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+tissue-specific+signaling+and+organ+function+in+three+dimensions.">Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.</a> J. Cell. Sci. 116, 2377-2377 (2003).</li><li>Bentrup, H. ?. ?. n. e. r. z. u., K, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+organotypic+models+of+human+colonic+epithelium+to+study+the+early+stages+of+enteric+salmonellosis.">Three-dimensional organotypic models of human colonic epithelium to study the early stages of enteric salmonellosis.</a> Microbes. Infect. 8, 1813-1813 (2006).</li><li>Carterson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A549+lung+epithelial+cells+grown+as+three-dimensional+aggregates:+alternative+tissue+culture+model+for+Pseudomonas+aeruginosa+pathogenesis.">A549 lung epithelial cells grown as three-dimensional aggregates: alternative tissue culture model for Pseudomonas aeruginosa pathogenesis.</a> Infect. Immun. 73, 1129-1129 (2005).</li><li>Myers, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closing+the+phenotypic+gap+between+transformed+neuronal+cell+lines+in+culture+and+untransformed+neurons.">Closing the phenotypic gap between transformed neuronal cell lines in culture and untransformed neurons.</a> J. Neurosci. Methods. 174, 31-31 (2008).</li><li>Hjelm, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+three-dimensional+organotypic+human+vaginal+epithelial+cell+model.">Development and characterization of a three-dimensional organotypic human vaginal epithelial cell model.</a> Biol. Reprod. 82, 617-617 (2010).</li><li>Straub, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+culture+infectivity+assay+for+human+noroviruses.">In vitro cell culture infectivity assay for human noroviruses.</a> Emerg. Infect. Dis. 13, 396-396 (2007).</li><li>Nickerson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+tissue+assemblies:+novel+models+for+the+study+of+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+pathogenesis.">Three-dimensional tissue assemblies: novel models for the study of Salmonella enterica serovar Typhimurium pathogenesis.</a> Infect. Immun. 69, 7106-7106 (2001).</li><li>Carvalho, H. M., Teel, L. D., Goping, G., O'Brien, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+three-dimensional+tissue+culture+model+for+the+study+of+attach+and+efface+lesion+formation+by+enteropathogenic+and+enterohaemorrhagic+Escherichia+coli.">A three-dimensional tissue culture model for the study of attach and efface lesion formation by enteropathogenic and enterohaemorrhagic Escherichia coli.</a> Cell. Microbiol. 7, 1771-1771 (2005).</li><li>Sainz, B., TenCate, V., Uprichard, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+Huh7+cell+culture+system+for+the+study+of+Hepatitis+C+virus+infection.">Three-dimensional Huh7 cell culture system for the study of Hepatitis C virus infection.</a> Virol. J. 6, 103-103 (2009).</li><li>Lelkes, P. I., Ramos, E., Nikolaychik, V. V., Wankowski, D. M., Unsworth, B. R., Goodwin, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GTSF-2:+a+new,+versatile+cell+culture+medium+for+diverse+normal+and+transformed+mammalian+cells.">GTSF-2: a new, versatile cell culture medium for diverse normal and transformed mammalian cells.</a> In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 33, 344-344 (1997).</li><li>Lelkes, P. I., Ramos, E., Nikolaychik, V. V., Wankowski, D. M., Unsworth, B. R., Goodwin, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GTSF-2:+a+new,+versatile+cell+culture+medium+for+diverse+normal+and+transformed+mammalian+cells.">GTSF-2: a new, versatile cell culture medium for diverse normal and transformed mammalian cells.</a> In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 33, 344-344 (1997).</li><li>GE Healthcare. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcarrier+Cell+Culture+-+Principles+and+Methods.">Microcarrier Cell Culture - Principles and Methods.</a> Handbooks. , (2005).</li></ol>

אין לנו שום דבר לגלות.

הטכניקה המוצגת כאן תרבות מספק החוקרים עם evt דמויי תאים פולשני מאוד. זה עתה הכיר בכך הפסד של בידול מתרחשת monolayers בשל עיכוב של תגובות כימיות הסלולר אותות מולקולריים בשלושה ממדים (משטחים התא apical, הבסיסיים, לרוחב) 10,13. טכניקה זו משקפת מאפיינים ציין ברחם על הפולשי?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Cytodex microcarrier חרוזים </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3275 </td><td></td></tr><tr><td> סיבוב תרבית תאים מערכת (RCCS) </td><td> Synthecon </td><td> RCCS-D </td><td> כולל בסיס הרוטור, אספקת החשמל, 4 יחידות RCCS הפנויה </td></tr><tr><td> RCCS יחידות פנויה </td><td> Synthecon </td><td> צור Synthecon </td><td></td></tr><tr><td> 3ml Luer-Lock קצה המזרק </td><td> BD </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr><td> 10 מ&quot;ל רחב טיפ סרולוגיות פיפטה </td><td> BD </td><td> 357504 </td><td></td></tr><tr><td> ממ אלפא </td><td> Invitrogen </td><td> 12561-072 </td><td></td></tr><tr><td> L-15 של ליבוביץ בינוני, אבקת </td><td> Invitrogen </td><td> 41300-039 </td><td></td></tr><tr><td> H 2 O, רעלן פנימי חינם </td><td> דיג </td><td> MT-25-055-CM </td><td></td></tr><tr><td> סודיום ביקרבונט </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S-7795 </td><td></td></tr><tr><td> Peptone </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> BP1420-100 </td><td></td></tr><tr><td> פרוקטוז </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F3510-100 </td><td></td></tr><tr><td> גלקטוז </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G5388-100 </td><td></td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7528-250 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Invitrogen </td><td> 15630-080 </td><td></td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Invitrogen </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> אינסולין transferrin-Sodium סלניום (ITS) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> I1884 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10437 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין, סטרפטומיצין </td><td> Invitrogen </td><td> 15140 </td><td></td></tr></tbody></table>

rotating cell culture systems for human cell culture: human trophoblast cells as a model

תחום המחקר trophoblast אדם מסייע בהבנת סביבה מורכבת הוקמה במהלך placentation. בשל אופיו של מחקרים אלה, האדם ניסויים vivo הוא בלתי אפשרי. שילוב של תרבויות העיקרי, תרבויות explant ואת שורות תאים trophoblast 1 תמיכה הבנתנו הפלישה של קיר הרחם 2 שיפוץ של עורקי הרחם ספירלה 3,4 על ידי תאים trophoblast extravillous (EVTs), אשר נדרש להקמת מוצלח של ההריון. למרות עושר של ידע שלוקטו מודלים כאלה, מקובל כי בתרבות במבחנה מודלים התא באמצעות evt כמו שורות תאים להציג שינו תכונות הסלולר בהשוואה 5,6 ב עמיתיהם vivo שלהם. תאים בתרבית תאים של מערכת מסתובבת תרבות (RCCS) ולהציג מאפיינים מורפולוגיים, פנוטיפי, ופונקציונלי של evt כמו שורות תאים אשר באופן הדוק יותר לחקות הבחנה ב uטרו EVTs, עם ביטוי מוגבר של גנים המתווך הפלישה (למשל metalloproteinases מטריצה ​​(MMPs)) והבחנה trophoblast 7,8,9. ג&#39;ורג&#39; הקדוש תא החולים שליה קו-4 (SGHPL-4) (תרם בעין יפה על ידי ד&quot;ר גיא ויטלי וד&quot;ר יהודית קרטרייט) הוא קו evt דמוי תא ששימש לבדיקות ב RCCS. העיצוב של כלי השיט תרבות RCCS מבוסס על העיקרון כי איברים ורקמות לתפקד בסביבה (3-D) תלת מימדי. בשל תנאי התרבות דינמי הספינה, כולל תנאי גזירה רלוונטי מבחינה פיזיולוגית, התאים גדלו בשלושה ממדים בצורת אגרגטים מבוסס על זיקות הסלולר טבעי להתמיין לרקמות כמו אסיפות organotypic 10,11,12. תחזוקה של מסלול נוזל מספק נמוכה גזירה, מערבולת נמוכה בסביבה דומה לתנאים מצאו in vivo. שקיעה של תאים בתרבית הוא השיב על ידי התאמת סיבובמהירות RCCS כדי להבטיח נפילה חופשית מתמדת של תאים. גז חילופי מתרחשת דרך קרום חדיר הידרופובי הממוקם בצד האחורי של bioreactor. כמו ההורים שלהם רקמות in vivo, RCCS מבוגר תאים מסוגלים להגיב כימית והדרגות מולקולרית בשלושה ממדים (כלומר על משטחים apical, הבסיסיים, שלהם לרוחב) כי הם תרבותי על פני השטח של חרוזים microcarrier נקבובי. כאשר גדל כמו דו מימדי monolayers על משטחים בלתי חדיר כמו פלסטיק, תאים נשללת של תקשורת חשוב זה על פני השטח הבסיסי שלהם. כתוצאה מכך, המגבלות שהוטלו על ידי מרחבית בסביבה מאוד להשפיע על האופן שבו תאים תחושת אותות לפענח מתוך microenvironment שמסביב, ובכך רומז תפקיד חשוב עבור המילייה 3-D 13. השתמשנו RCCS מהנדס משמעות ביולוגית 3-D מודלים שונים של רקמות אפיתל האנושי 7,14,15,16. ואכן, דוחות קודמים רבים demonstrated כי תאים בתרבית RCCS יכול להניח פנוטיפים רלוונטי מבחינה פיזיולוגית זה לא היה אפשרי עם דגמים אחרים 10,17-21. לסיכום, תרבות RCCS מייצגת קל, לשחזור, תפוקה גבוהה פלטפורמה המספקת כמויות גדולות של תאים מובחנים זה ניתנים מגוון רחב של מניפולציות ניסיוני. בפרוטוקול הבא, באמצעות EVTs כדוגמה, אנו בבירור לתאר את הצעדים הנדרשים כדי בתלת ממד תאים תרבות חסיד ב RCCS.

Watch this Scientific Journal Video about Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model at JoVE.com

Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model

מסורתית, שני ממדי התרבות טכניקות תא לעיתים לגרום מאפיינים שינו לגבי סמנים בידול, ציטוקינים וגורמי גדילה. תלת ממדי התרבות תאים במערכת מסתובבת תרבית תאים (RCCS) reestablishes הביטוי של רבים מהגורמים הללו כפי שמוצג כאן עם קו trophoblast extravillous התא.

סיבוב תרבית תאים מערכות התרבות תאים אנושיים: תאים Trophoblast האדם כמודל

The field of human trophoblast research aids in  understanding the complex environment established during placentation. Due to the  nature of these ...

rotating-cell-culture-systems-for-human-cell-culture-human

Research

JoVE Journal

Bioengineering

16.4K Views.  Tulane University Medical School. מסורתית, שני ממדי התרבות טכניקות תא לעיתים לגרום מאפיינים שינו לגבי סמנים בידול, ציטוקינים וגורמי גדילה. תלת ממדי התרבות תאים במערכת מסתובבת תרבית תאים (RCCS) reestablishes הביטוי של רבים מהגורמים הללו כפי שמוצג כאן עם קו trophoblast extravillous התא.

Video: Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model

Microfabricated Platforms for Mechanically Dynamic Cell Culture

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or fundamental cell biology studies is limited by current bioreactor technologies, which cannot simultaneously apply a variety of mechanical stimuli to cultured cells. In order to address this issue, we have developed a series of microfabricated platforms designed to screen for the effects of mechanical stimuli in a high-throughput format. In this protocol, we demonstrate the fabrication of a microactuator array of vertically displaced posts on which the technology is based, and further demonstrate how this base technology can be modified to conduct high-throughput mechanically dynamic cell culture in both two-dimensional and three-dimensional culture paradigms.

In this protocol, we demonstrate the fabrication of a microactuator array of vertically displaced posts on which the technology is based, and how this base technology can be modified to conduct high-throughput mechanically dynamic cell culture in both two-dimensional and three-dimensional culture paradigms.

פלטפורמות microfabricated לתרבות Cell דינמי מכאני

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or ...

Shape Memory Polymers for Active Cell Culture

Shape memory polymers (SMPs) are a class of "smart" materials that have the ability to change from a fixed, temporary shape to a pre-determined permanent shape upon the application of a stimulus such as heat1-5. In a typical shape memory cycle, the SMP is first deformed at an elevated temperature that is higher than its transition temperature, Ttrans [either the melting temperature (Tm) or the glass transition temperature (Tg)]. The deformation is elastic in nature and mainly leads to a reduction in conformational entropy of the constituent network chains (following the rubber elasticity theory). The deformed SMP is then cooled to a temperature below its Ttrans while maintaining the external strain or stress constant. During cooling, the material transitions to a more rigid state (semi-crystalline or glassy), which kinetically traps or "freezes" the material in this low-entropy state leading to macroscopic shape fixing. Shape recovery is triggered by continuously heating the material through Ttrans under a stress-free (unconstrained) condition. By allowing the network chains (with regained mobility) to relax to their thermodynamically favored, maximal-entropy state, the material changes from the temporary shape to the permanent shape.
Cells are capable of surveying the mechanical properties of their surrounding environment6. The mechanisms through which mechanical interactions between cells and their physical environment control cell behavior are areas of active research. Substrates of defined topography have emerged as powerful tools in the investigation of these mechanisms. Mesoscale, microscale, and nanoscale patterns of substrate topography have been shown to direct cell alignment, cell adhesion, and cell traction forces7-14. These findings have underscored the potential for substrate topography to control and assay the mechanical interactions between cells and their physical environment during cell culture, but the substrates used to date have generally been passive and could not be programmed to change significantly during culture. This physical stasis has limited the potential of topographic substrates to control cells in culture.
Here, active cell culture (ACC) SMP substrates are introduced that employ surface shape memory to provide programmed control of substrate topography and deformation. These substrates demonstrate the ability to transition from a temporary grooved topography to a second, nearly flat memorized topography. This change in topography can be used to control cell behavior under standard cell culture conditions.

A method for developing cell culture substrates with the ability to change topography during culture is described. The method makes use of smart materials known as shape memory polymers that have the ability to memorize a permanent shape. This concept is adaptable to a wide range of materials and applications.

זיכרון צורה פולימרים לתרבות התא הפעיל

Shape memory polymers (SMPs) are a class of "smart" materials that have the ability to change from a fixed, temporary shape to a pre-determined permanent ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture indefinitely and differentiated to any cell types in the body. Various types of biomaterials have also been used in stem cell cultures to provide a microenvironment mimicking the stem cell niche1-3. The latter is important for promoting cell-to-cell interaction, cell proliferation, and differentiation into specific lineages as well as tissue organization by providing a three-dimensional (3D) environment4 such as encapsulation. The principle of cell encapsulation involves entrapment of living cells within the confines of semi-permeable membranes in 3D cultures2. These membranes allow for the exchange of nutrients, oxygen and stimuli across the membranes, whereas antibodies and immune cells from the host that are larger than the capsule pore size are excluded5. Here, we present an approach to culture and differentiate hESC DA neurons in a 3D microenvironment using alginate microcapsules. We have modified the culture conditions2 to enhance the viability of encapsulated hESC. We have previously shown that the addition of p160-Rho-associated coiled-coil kinase (ROCK) inhibitor, Y-27632 and human fetal fibroblast-conditioned serum replacement medium (hFF-CM) to the 3D platform significantly enhanced the viability of encapsulated hESC in which the cells expressed definitive endoderm marker genes1. We have now used this 3D platform for the propagation of hESC and efficient differentiation to DA neurons. Protein and gene expression analyses after the final stage of DA neuronal differentiation showed an increased expression of tyrosine hydroxylase (TH), a marker for DA neurons, &gt;100 folds after 2 weeks. We hypothesized that our 3D platform using alginate microcapsules may be useful to study the proliferation and directed differentiation of hESC to various lineages. This 3D system also allows the separation of feeder cells from hESC during the process of differentiation and also has potential for immune-isolation during transplantation in the future.

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

We have optimized a microencapsulation technique as an effective 3D platform for propagation and differentiation of embryonic stem cells to endoderm and dopaminergic (DA) neurons. It also provides an opportunity for immune-isolation of cells from the host during transplantation. This platform can be adapted for other cell types.

אלגינט microcapsule כפלטפורמה 3D עבור ריבוי והתמיינות של בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) כדי שושלות שונות

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Three-dimensional Cell Culture Model for Measuring the Effects of Interstitial Fluid Flow on Tumor Cell Invasion

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling in the tumor microenvironment 1. Previously, research on the tumor microenvironment has focused primarily on tumor-stromal interactions 1-2. However, the tumor microenvironment also includes a variety of biophysical forces, whose effects remain poorly understood. These forces are biomechanical consequences of tumor growth that lead to changes in gene expression, cell division, differentiation and invasion3. Matrix density 4, stiffness 5-6, and structure 6-7, interstitial fluid pressure 8, and interstitial fluid flow 8 are all altered during cancer progression.
Interstitial fluid flow in particular is higher in tumors compared to normal tissues 8-10. The estimated interstitial fluid flow velocities were measured and found to be in the range of 0.1-3 &mu;m s-1, depending on tumor size and differentiation 9, 11. This is due to elevated interstitial fluid pressure caused by tumor-induced angiogenesis and increased vascular permeability 12. Interstitial fluid flow has been shown to increase invasion of cancer cells 13-14, vascular fibroblasts and smooth muscle cells 15. This invasion may be due to autologous chemotactic gradients created around cells in 3-D 16 or increased matrix metalloproteinase (MMP) expression 15, chemokine secretion and cell adhesion molecule expression 17. However, the mechanism by which cells sense fluid flow is not well understood. In addition to altering tumor cell behavior, interstitial fluid flow modulates the activity of other cells in the tumor microenvironment. It is associated with (a) driving differentiation of fibroblasts into tumor-promoting myofibroblasts 18, (b) transporting of antigens and other soluble factors to lymph nodes 19, and (c) modulating lymphatic endothelial cell morphogenesis 20.
The technique presented here imposes interstitial fluid flow on cells in vitro and quantifies its effects on invasion (Figure 1). This method has been published in multiple studies to measure the effects of fluid flow on stromal and cancer cell invasion 13-15, 17. By changing the matrix composition, cell type, and cell concentration, this method can be applied to other diseases and physiological systems to study the effects of interstitial flow on cellular processes such as invasion, differentiation, proliferation, and gene expression.

Interstitial fluid flow is elevated in solid tumors and can modulate tumor cell invasion. Here we describe a technique to apply interstitial fluid flow to cells embedded in a matrix and then measure its effects on cell invasion. This technique can be easily adapted to study other systems.

תלת מימדי תרבית תאים מודל למדידת השפעת זרימת הנוזל ביניים על הפלישה תאים סרטניים

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling ...

Cell Co-culture Patterning Using Aqueous Two-phase Systems

Cell patterning technologies that are fast, easy to use and affordable will be required for the future development of high throughput cell assays, platforms for studying cell-cell interactions and tissue engineered systems. This detailed protocol describes a method for generating co-cultures of cells using biocompatible solutions of dextran (DEX) and polyethylene glycol (PEG) that phase-separate when combined above threshold concentrations. Cells can be patterned in a variety of configurations using this method. Cell exclusion patterning can be performed by printing droplets of DEX on a substrate and covering them with a solution of PEG containing cells. The interfacial tension formed between the two polymer solutions causes cells to fall around the outside of the DEX droplet and form a circular clearing that can be used for migration assays. Cell islands can be patterned by dispensing a cell-rich DEX phase into a PEG solution or by covering the DEX droplet with a solution of PEG. Co-cultures can be formed directly by combining cell exclusion with DEX island patterning. These methods are compatible with a variety of liquid handling approaches, including manual micropipetting, and can be used with virtually any adherent cell type.

Aqueous two-phase systems were used to simultaneously pattern multiple populations of cells. This fast and easy method for cell patterning takes advantage of the phase separation of aqueous solutions of dextran and polyethylene glycol and the interfacial tension that exists between the two polymer solutions.

דפוסי שיתוף תרבות נייד באמצעות מערכות מימיות שני שלבים

Cell patterning  technologies that are fast, easy to use and affordable will be required for the  future development of high throughput cell assays, ...

In vitro Cell Culture Model for Toxic Inhaled Chemical Testing

Cell cultures are indispensable to develop and study efficacy of therapeutic agents, prior to their use in animal models. We have the unique ability to model well differentiated human airway epithelium and heart muscle cells. This could be an invaluable tool to study the deleterious effects of toxic inhaled chemicals, such as chlorine, that can normally interact with the cell surfaces, and form various byproducts upon reacting with water, and limiting their effects in submerged cultures. Our model using well differentiated human airway epithelial cell cultures at air-liqiuid interface circumvents this limitation as well as provides an opportunity to evaluate critical mechanisms of toxicity of potential poisonous inhaled chemicals. We describe enhanced loss of membrane integrity, caspase release and death upon toxic inhaled chemical such as chlorine exposure. In this article, we propose methods to model chlorine exposure in mammalian heart and airway epithelial cells in culture and simple tests to evaluate its effect on these cell types.

In vitro Cell Culture Model for Toxic Inhaled Chemical Testing

This protocol is designed to demonstrate exposure method of cell cultures to inhaled toxic chemicals. Exposure of differentiated air-liquid&#160;interface (ALI) cultures of airway epithelial cells provides a unique model of airway exposure to toxic gases such as chlorine. In this manuscript we describe effect of chlorine exposure on air-liquid&#160;interface cultures of epithelial cells and submerged culture of cardiomyocytes. In vitro exposure systems allow important mechanistic studies to evaluate pathways that could then be utilized to develop novel therapeutic agents.

בדגם תרבית תאים במבחנה לרעילה בשאיפת בדיקות כימיות

Cell cultures are indispensable to develop and study efficacy of therapeutic agents, prior to their use in animal models. We have the unique ability to ...

Ultrathin Porated Elastic Hydrogels As a Biomimetic Basement Membrane for Dual Cell Culture

The basement membrane is a critical component of cellular bilayers that can vary in stiffness, composition, architecture, and porosity. In vitro studies of endothelial-epithelial bilayers have traditionally relied on permeable support models that enable bilayer culture, but permeable supports are limited in their ability to replicate the diversity of human basement membranes. In contrast, hydrogel models that require chemical synthesis are highly tunable and allow for modifications of both the material stiffness and the biochemical composition via incorporation of biomimetic peptides or proteins. However, traditional hydrogel models are limited in functionality because they lack pores for cell-cell contacts and functional in vitro migration studies. Additionally, due to the thickness of traditional hydrogels, incorporation of pores that span the entire thickness of hydrogels has been challenging. In the present study, we use poly-(ethylene-glycol) (PEG) hydrogels and a novel zinc oxide templating method to address the previous shortcomings of biomimetic hydrogels. As a result, we present an ultrathin, basement membrane-like hydrogel that permits the culture of confluent cellular bilayers on a customizable scaffold with variable pore architectures, mechanical properties, and biochemical composition.

Current bilayer culture models do not allow for functional in vitro studies that mimic in vivo microenvironments. Using polyethylene glycol and a zinc oxide templating method, this protocol describes the development of an ultrathin biomimetic basement membrane with tunable stiffness, porosity, and biochemical composition that closely mimics in vivo extracellular matrices.

תרבית תאים זגוגית אלסטי Porated Hydrogels כמו קרום המרתף ביונים עבור כפול

The basement membrane is a critical component of cellular bilayers that can vary in stiffness, composition, architecture, and porosity. In vitro studies ...

Human Pluripotent Stem Cell Culture on Polyvinyl Alcohol-Co-Itaconic Acid Hydrogels with Varying Stiffness Under Xeno-Free Conditions

The effect of physical cues, such as the stiffness of biomaterials on the proliferation and differentiation of stem cells, has been investigated by several researchers. However, most of these investigators have used polyacrylamide hydrogels for stem cell culture in their studies. Therefore, their results are controversial because those results might originate from the specific characteristics of the polyacrylamide and not from the physical cue (stiffness) of the biomaterials. Here, we describe a protocol for preparing hydrogels, which are not based on polyacrylamide, where various stem, cells including human embryonic stem (ES) cells and human induced pluripotent stem (iPS) cells, can be cultured. Hydrogels with varying stiffness were prepared from bioinert polyvinyl alcohol-co-itaconic acid (P-IA), with stiffness controlled by crosslinking degree by changing crosslinking time. The P-IA hydrogels grafted with and without oligopeptides derived from extracellular matrix were investigated as a future platform for stem cell culture and differentiation. The culture and passage of amniotic fluid stem cells, adipose-derived stem cells, human ES cells, and human iPS cells is described in detail here. The oligopeptide P-IA hydrogels showed superior performances, which were induced by their stiffness properties. This protocol reports the synthesis of the biomaterial, their surface manipulation, along with controlling the stiffness properties and finally, their impact on stem cell fate using xeno-free culture conditions. Based on recent studies, such modified substrates can act as future platforms to support and direct the fate of various stem cells line to different linkages; and further, regenerate and restore the functions of the lost organ or tissue.

A protocol is presented to prepare polyvinyl alcohol-co-itaconic acid hydrogels with varying stiffness, which were grafted with and without oligopeptides, to investigate the effect of the stiffness of biomaterials on the differentiation and proliferation of stem cells. The stiffness of the hydrogels was controlled by the crosslinking time.

התרבות תאי גזע Pluripotent אנושי על פוליויניל אלכוהול-Co-Itaconic Hydrogels חומצה עם קשיות שונות בתנאים קסנו-חופשית

The effect of physical cues, such as the stiffness of biomaterials on the proliferation and differentiation of stem cells, has been investigated by ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of cellular function. The ECM plays a particularly important role in adipose tissue function in obesity, and alterations in adipose tissue ECM deposition and composition are associated with metabolic disease in mice and humans. Tractable in vitro models that permit dissection of the roles of the ECM and cells in contributing to global tissue phenotype are sparse. We describe a novel 3D in vitro model of human ECM-adipocyte culture that permits study of the specific roles of the ECM and adipocytes in regulating adipose tissue metabolic phenotype. Human adipose tissue is decellularized to isolate ECM, which is subsequently repopulated with preadipocytes that are then differentiated within the ECM into mature adipocytes. This method creates ECM-adipocyte constructs that are metabolically active and retain characteristics of the tissues and patients from which they are derived. We have used this system to demonstrate disease-specific ECM-adipocyte crosstalk in human adipose tissue. This culture model provides a tool for dissecting the roles of the ECM and adipocytes in contributing to global adipose tissue metabolic phenotype and permits study of the role of the ECM in regulating adipose tissue homeostasis.

We describe a 3D human extracellular matrix-adipocyte in vitro culture system that permits dissection of the roles of the matrix and adipocytes in contributing to adipose tissue metabolic phenotype.

שלושה תלת-ממד של מטריקס-Adipocyte מודל תרבות המודל ללימוד תא מטריקס-מטבולית הסלולר

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically carried out in low throughput. Rapid and ongoing expansion of induced pluripotent stem cell (iPSC) technology presents a new standard in cardiovascular research and alternate methods are now necessary to increase throughput of electrophysiological data at a single cell level. VF2.1Cl is a recently derived voltage sensitive dye which provides a rapid single channel, high magnitude response to fluctuations in membrane potential. It possesses kinetics superior to those of other existing voltage indicators and makes available functional data equivalent to that of traditional microelectrode techniques. Here, we demonstrate simplified, non-invasive action potential characterization in externally paced human iPSC derived cardiomyocytes using a modular and highly affordable photometry system.

Here we describe optical acquisition and characterization of action potentials from induced pluripotent stem cell derived cardiomyocytes using a high-speed modular photometry system.

מדידה פוטנציאלית לפעולה אופטית חד-תאית בקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע מושרים על ידי תאי גזע אנושיים

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...