פרויקט זה נתמך על ידי תרומות של מדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר של קנדה (355881) וקרן קנדי עבור חדשנות.

* Quick הצעדים החשובים ביותר. 1. מובילות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדרכה ובדיקה נעשית בתאי עכבר אופרנטית מצויד בשתי אולטרה לייט, מנופים נשלף 1 הממוקמים משני צדי קיבול המזון (ראה טבלה 1). אור גירוי ממוקם מעל ידית כל יש אור בבית בחלק העליון של הכלוב. מתקן גלולה ממוקם מחוץ לתא. כל תא שוכן בתוך תא קול ניחות עם מאוורר אוורור. צ&#39;יימברס מחוברים למחשב PC עם תוכנה IV MedPC דרך &quot;חכם שליטה&quot; הממשלה הממשק. </li></ol> הערה: כאשר אולטרה לייט מנופים אינם זמינים מומלץ האף דחיפה לשמש בתגובה אופרנטית ללימודי עכבר. עם זאת, בשתי האפשרויות אנו מציעים מבחר של אולטרה לייט מנופים כמדד אמין יותר מוטיבציה לאור העובדה האף דוחפים תגובות יכול בדואר מופעלות על ידי גישוש מרחרח. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התוכניות MedPC המשמשים להפעלת משימות אופרנטית כתובים קוד סימון Medstate שבו המשתמש יכול ללמוד בעזרתו של המדריך תכנות סיפק. תכנות מספק גמישות למשתמש לשנות קודים קיימים או ליצור פרמטרים ניסויים ייחודיים. קודים מסוימים ניתן לקבל בחינם מ מד Associates &quot;מאגר Medstate סימון&quot; <a href="http://www.mednr.com" target="_blank">http://www.mednr.com</a> . קודים נוספים ניתן לרכוש מד מן Associates. </li></ol> 2. עכבר מעגל והגבלת מזון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על עכברים ההגעה הם הקבוצה שוכנו במשך לפחות 10 ימים להתאקלם כדי מחזור הפוכה 12 אור / חושך H ובתנאי עם גישה כרצונך לרמת האוכל והמים. במקרה שלנו אנו משתמשים מבוגרים C57BL / 6 עכברים שנרכשו נהר צ&#39;רלס (סנט QC קונסטנט,). כל המניפולציות עכבר וניסויים התנהגותיים מבוצעות במהלך מחזור החושך. כל הפרוcedures של שימוש בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים CRCHUM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים הם ביחידות לאחר מכן, שכן מזון מוגבלת (70% מכלל צריכת המזון היומית שלהם) עד שהם מגיעים 90-95% חופשי האכלה משקל הגוף על מנת לאפשר רכישת המנוף, עיתונאים להגיב. עכברים נמסרו המכסה היומית שלהם של אוכל בכלוב הביתה לאחר סיום הפגישה. כאשר הגיע ההפסד 5-10% במשקל, מזון מדי יום המוקצב מותאם לייצב את משקלי הגוף התחתון עבור יתרת תקופת האימונים. פעם אחת עכברים השיגו קריטריון רכישה (ראה להלן) הם מחזירים את לוח הזמנים libitum מודעות האכלה. עכברים להחזיר את משקל הגוף איבד כ 3-4 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מטופלים בחדר הבדיקה במשך 3 ימים ברציפות לפני האימון הראשון. יום לפני תחילת האימון 10-15 עתירי שומן גבוהה סוכר (HFHS) כדורי ממוקמים לכלוב בבית כדי למנוע את ההשפעה הפוטנציאלית של neophobia אוכל על performan אופרנטיתלספירה. אנו משתמשים HFHS 20 מ&quot;ג, ללא אבק, מזון כדורי דיוק (14 מ&quot;ג גם זמין) המכיל קק&quot;ל 48.9% כשומן (Serv ביו, Frenchtown, NJ). </li></ol> 3. אופרנטית הדרכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מאומנים תחילה ללחוץ על הדוושה על יחס קבוע (FR) -1 לוח הזמנים חיזוק לפיה עיתונאים ידית אחת מעוררת את המסירה של גלולה מזון קיבול. רק המנוף הוא יועד &quot;פעילה&quot; (מפעילה מסירת הפרס מזון) והקצאת מנופים על ימין ועל שמאל הוא מתאזן בין עכברים. חשוב להוסיף לפחות פסק זמן 5 2 (אל) ללוח הזמנים FR1 (FR1/TO-5), שבמהלכה הידית, לחיצה נוספת לא תביא משלוח של גלולה מזון. תקופה זו מאפשרת זמן עכברים לצרוך גלולה מזון, פסקי זמן ארוכים יותר עם זאת ניתן להשתמש, אם הנסיין מרגיש שזה הכרחי במודל העכברים. כל אימון נמשך FR 1 שעה או כאשר 50 כדורי כבר נמסרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> * Quick רכישת קריטריונים: &lt;/ Strong&gt; הקריטריונים המשמשים לקביעת רכישת מזון לשמור אופרנטית להגיב כולל: (1) מספר מינימלי של תגובות והתגמולים שנצברו פעילים, (2) מידה של אפליה בין מנופים פעילים פעיל, ו (3) בין מפגשים ביצועים ויציבות. עכברים המציגים אפליה של ≥ 03:01 על המנוף פעיל מול לא פעיל וקבלת ≥ 20 פרסים בכל הפעלה על פני שלוש ישיבות רצופות נחשבות להשיג קריטריונים רכישת 10. ראינו כי רוב (~ 75%) של C57BL6 עכברים דורשים כ 7-10 ימים של אימונים כדי להשיג קריטריון רכישה. עכברים שאינם מגיעים קריטריונים רכישה בשלב זה לעבור הכשרה נוספת, לתקופה של 5-7 ימים נוספים. אנו לא כוללים עכברים של בדיקות (~ 5% מהמקרים) כאשר אין התקדמות של יום אימונים נוסף 5. חשוב לזכור כי רכישת אופרנטית לקוי עשוי להיות תוצאה של התערבויות פרמקולוגיות גנטיים מסוימים, ועל כן עליך להיות מתועד. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שלושה מפגשים רצופים של קבלת ≥ 20 כדורי, לוח הזמנים הוא עלה ל FR5/TO-5 שניות בו 5 בתי המנוף הפעילים לעורר את אספקת המזון גלולה. הדרכה על לוח הזמנים FR5 נמשך שלושה ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> * העכברים מאומנים אז ביחס ללוח הזמנים מתקדמת (PR) של חיזוק. יחס התגובה לוח הזמנים במהלך הבדיקה PR ניתן לחשב על פי ריצ&#39;רדסון רוברטס (1996) 11 באמצעות הנוסחה הבאה (מעוגל למספר השלם הקרוב ביותר): = [5 E (R * 0.2)] - 5 כאשר R שווה למספר פרסים המזון שנצברו כבר פלוס 1 (כלומר, חיזוק הבא). לכן, את מספר התגובות הדרושות כדי להרוויח שכר אוכל לעקוב אחר הסדר: 1, 2, 4, 6, 9, 12, 15, 20, 25, 32, 40, 50, 62, 77, 95 וכן הלאה. היחס הסופי הושלמה הוא נקודת עצירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מפגש הסברה נמשך לכל היותר שעה 1. אי ללחוץ על הדוושה בכל התקופה תוצאות 10 דקות לסיום הפגישה. הביצועיםmance על לוח הזמנים של חיזוק יחסי ציבור נחשבת יציבה כאשר מספר פרסים זכה בעוד כמה שעות 1 חורג הפעלה של 10% ≤ לפחות 3 ימים רצופים. </li></ol> 4. יחס בדיקות אימות מתקדמת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאמת את המזון נשמר אופרנטית להגיב במשימה יחסי ציבור, אפשר להעריך להגיב נקודת עצירה מניפולציות הבאים ידועים לווסת גמול מזון. מבחן קל יחסית לבצע היא מניעת מזון אשר יגביר את המוטיבציה של המדינה העכבר למזון ועל ידי כך להגדיל את נקודות עצירה. עכברים תחילה להיבדק במשימה יחסי ציבור במשך תקופה של האכלה libitum המודעה עד ביצועים יציבים, הבסיס מושגת. יום אחרי האוכל האחרון &quot;הבסיס&quot; יום יוסר כלוב הביתה עכברים נבדקים ואז 24 שעות לאחר תחילת הצום במשימה יחסי ציבור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חקרנו גם אם הממשל היקפי של ההורמון לפטין אנורקסית תהיה השפעה הפוכה על נקודת עצירהספי. לפטין (AF Parlow, הורמון הלאומי תוכנית פפטיד, NIDDK) פורקה ב PBS סטרילית. יחסי ציבור בדיקות בוצעה לאחר הזרקת ה-IP של PBS ביום אחד ולאחר מכן ביצוע הזרקה של לפטין ביום (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) הבאה. לפטין היה מוזרק שעה לפני המבחן יחסי ציבור. Breakpoints הושוו באמצעות מבחן t מזווג (פריזמה GraphPad). </li></ol> 5. נציג תוצאות כאשר בודקים את היכולת של מניעת מזון לווסת נקודת עצירה להגיב על לוח הזמנים של חיזוק יחסי ציבור, אנו מצפים להגדיל באופן משמעותי breakpoints כפי שמוצג באיור 1. בניסוי זה זמן של 24 שעות של מניעת מזון המיוצר על ~ 3.6 פי הגידול breakpoints בהשוואה לאלו שהושגו המדינה האכלה חופשית הבסיס ובכך טוען כי מניעת מזון מגביר את השפעת תגמול של מזון. במנהל, לעומת זאת, היקפי של ההורמון לפטין אנורקסית (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג, IP) 1 שעה לפני testing צריך להקטין נקודת עצירה להגיב כפי שמוצג באיור 2. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3754/3754fig1.jpg" /> באיור 1. צום מגביר את ההשפעות מתגמל של מזון. מהיר 24 שעות גדל באופן משמעותי breakpoints על יחס לוח זמנים מתקדמת (PR) של חיזוק בעכברים (n = 4). ממוצע ± SEM; * p &lt;0.05. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3754/3754fig2.jpg" /> איור 2. לפטין מפחית זכתה המזון בעכברים. הממשל לפטין היקפי (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ירד תגובה יחסי ציבור סף נקודת עצירה בעכברים (n = 4). ממוצע ± SEM; * p &lt;0.05.

<ol>
	<li>Fulton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetite+and+reward.">Appetite and reward.</a> Front. Neuroendocrinol. 31, 85-103 (2010).</li><li>Zheng, H., Lenard, N. R., Shin, A. C., Berthoud, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appetite+control+and+energy+balance+regulation+in+the+modern+world:+reward-driven+brain+overrides+repletion+signals.">Appetite control and energy balance regulation in the modern world: reward-driven brain overrides repletion signals.</a> International journal of Obesity. 33, S8-S13 (2009).</li><li>Skinner, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Behavior of Organisms: An Experimental Analysis. , (1938).</li><li>Hodos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+ratio+as+a+measure+of+reward+strength.">Progressive ratio as a measure of reward strength.</a> Science. 134, 943-944 (1961).</li><li>Hodos, W., Kalman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+increment+size+and+reinforcer+volume+on+progressive+ratio+performance.">Effects of increment size and reinforcer volume on progressive ratio performance.</a> J. Exp. Anal. Behav. 6, 387-392 (1963).</li><li>Stafford, D., LeSage, M. G., Glowa, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive-ratio+schedules+of+drug+delivery+in+the+analysis+of+drug+self-administration:+a+review.">Progressive-ratio schedules of drug delivery in the analysis of drug self-administration: a review.</a> Psychopharmacology. , 139-169 (1998).</li><li>Glass, M. J., O'Hare, E., Cleary, J. P., Billington, C. J., Levine, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+naloxone+on+food-motivated+behavior+in+the+obese+Zucker+rat.">The effect of naloxone on food-motivated behavior in the obese Zucker rat.</a> Psychopharmacology (Berl). 141, 378-384 (1999).</li><li>Brennan, K., Roberts, D. C., Anisman, H., Merali, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individual+differences+in+sucrose+consumption+in+the+rat:+motivational+and+neurochemical+correlates+of+hedonia.">Individual differences in sucrose consumption in the rat: motivational and neurochemical correlates of hedonia.</a> Psychopharmacology (Berl). 157, 269-276 (2001).</li><li>Vaughan, C., Moore, M., Haskell-Luevano, C., Rowland, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food+motivated+behavior+of+melanocortin-4+receptor+knockout+mice+under+a+progressive+ratio+schedule.">Food motivated behavior of melanocortin-4 receptor knockout mice under a progressive ratio schedule.</a> Peptides. 27, 2829-2835 (2006).</li><li>Haluk, D. M., Wickman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+study+design+variables+and+their+impact+on+food-maintained+operant+responding+in+mice.">Evaluation of study design variables and their impact on food-maintained operant responding in mice.</a> Behav. Brain Res. 207, 394-401 (2010).</li><li>Richardson, N. R., Roberts, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+ratio+schedules+in+drug+self-administration+studies+in+rats:+a+method+to+evaluate+reinforcing+efficacy.">Progressive ratio schedules in drug self-administration studies in rats: a method to evaluate reinforcing efficacy.</a> J. Neurosci. Methods. 66, 1-11 (1996).</li><li>Jewett, D. C., Cleary, J., Levine, A. S., Schaal, D. W., Thompson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+neuropeptide+Y,+insulin,+2-deoxyglucose,+and+food+deprivation+on+food-motivated+behavior.">Effects of neuropeptide Y, insulin, 2-deoxyglucose, and food deprivation on food-motivated behavior.</a> Psychopharmacology (Berl). 120, 267-271 (1995).</li><li>Fulton, S., Woodside, B., Shizgal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+brain+reward+circuitry+by+leptin.">Modulation of brain reward circuitry by leptin.</a> Science. 287, 125-128 (2000).</li><li>Figlewicz, D. P., Bennett, J. L., Naleid, A. M., Davis, C., Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraventricular+insulin+and+leptin+decrease+sucrose+self-administration+in+rats.">Intraventricular insulin and leptin decrease sucrose self-administration in rats.</a> Physiol. Behav. 89, 611-616 (2006).</li></ol>

הפקה וגישה חופשית של מאמר, סרט הווידאו הזה ממומן על ידי מד Associates, Inc

משימות התנייה תפעולית לספק אמצעי יעיל כדי להעריך את השינויים במאפייני מוטיבציה של מזון. הפרוצדורות המפורטים בהיתר את המאמר הנוכחי עכברים הדרכה מנוף לחץ עבור תגמולים מזון ביציבות להגיב על לוח הזמנים של חיזוק יחסי ציבור. מדידת כמות המזון הנצרכת אינה מספקת את ההודעה כמו מאמץ מבוססי אמצעים תגובה מאז לא כל הגורמים המשפיעים על צריכת המזון לווסת את ההשפעות מתגמל של מזון. לדוגמה, ומכלה לניצול הגלוקוז על ידי מינהל 2-deoxyglucose היקפי בחולדות מגדיל את כמות המזון הנצרכת זמין בחינם, אבל לא מצליח לשנות את נקודות מעבר במשימה יחסי ציבור למזון 12. נקודת עצירה יחסי הציבור מגיב יכול גם לשקף את השינויים באיכות הפירות והמזון. לדוגמה, נקודות מעבר מתואמים חיובית עם ריכוז סוכרוז הוכחת כי המוטיבציה עולה סוכרוז באופן הבא טעם מתוק 8 </sאת&gt;. כאן אנו מראים כי מניעת מזון 24 שעות מגדילה באופן משמעותי breakpoints יחסי ציבור למזון HFHS בעכברים. לעומת זאת, מצאנו כי הממשל היקפי של ההורמון לפטין אנורקסית מקטין באופן משמעותי נקודות עצירה לאוכל HFHS בעכברים. ממצאים אלה עולים בקנה אחד עם פעולות שפורסמו בעבר על קיפוח מזון לפטין על סף שכר חולדות 12-14. בעת שימוש בפרוטוקול זה חשוב לזכור כי רכישת המזון נשמר אופרנטית להגיב משופרת באופן משמעותי על ידי אימון קבוע (כל 1-2 ימים) ועל ידי הגדלת מדינה מוטיבציה של העכבר על ידי יישום משטר הגבלת מזון. כמו כן, להבטיח כי עכברים להפגין יציבות יחסית להגיב על לוח הזמנים 1 חיזוק לפני שעבר לוחות זמנים יותר מורכבים (למשל, כדי FR1 FR5) היא המפתח לצמצום הביצועים משתנה במהלך הבדיקה. למרות היישום של הצעדים האלה, אין זה יוצא דופן לקבל כמה השתנותבמיוחד בין עכברים שונים. מסיבה זו, מומלץ מאוד להשתמש בתוך כל הנבדקים (צעדים חוזרים ונשנים) עיצוב כאשר ניתן להסיר על השתנות הנושא. למרות הנושא, תוך בדיקה לא ניתן לחקור שינויים גנטיים יציבים (כלומר, נוק אאוט לעומת עכברים שליטה) ניתן להשתמש בו כדי לבחון את השפעתם של סמים, פצעים או מניפולציות גנטיות (למשל, optogenetic) חריפה. מחלות השמנה והשמנת יתר הקשורה הן בעיה הולכת וגדלה, כי הגדילה את הדחיפות לזהות מולקולות מסלולים עצביים המעורבים. צבירת ראיות מדגיש את התפקיד החשוב של המערכת החשמלית במוח שכר תשוקה לאוכל, צריכת הקלוריות מוגברת ועלייה במשקל. המשימה יחסי ציבור הוא כלי בעל ערך למדידת ההשפעה של מניפולציות הנוירוביולוגי, גנטית או תרופתי על ההשפעות מתגמל של מזון.

<html><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> מספר קטלוגי </td><td> חברה </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> עכבר לתאי אופרנטית </td><td> ENV-009A </td><td> <a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank">מד Associates, Inc</a> </td><td> מד ושות&#39; בע&quot;מ ת.ד. 319 סנט אלבנס, ורמונט 05478, ארצות הברית טלפון: (802) 527-2343 </td></tr><tr><td> 8 inputs/16 תשומות חכם חיבור לוח בקרה </td><td> SG-716B </td><td> <a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank">מד Associates, Inc</a> </td><td></td></tr><tr><td> אולטרה לייט נשלף עכבר מנוף </td><td> ENV-312 </td><td> <a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank">מד Associates, Inc</a> </td><td></td></tr><tr><td> גלולה Dispenser </td><td> ENV-203 </td><td>. MED-associates.com / &quot;היעד =&quot; _blank &quot;&gt; מד Associates, Inc </td><td></td></tr><tr><td> בית אור </td><td> ENV-215 </td><td> <a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank">מד Associates, Inc</a> </td><td></td></tr><tr><td> גירוי אור </td><td> ENV-221 </td><td> <a href="http://www.med-associates.com/" target="_blank">מד Associates, Inc</a> </td><td></td></tr><tr><td> אבק ללא Precision 20 מ&quot;ג עתירת שומן &amp; סוכר גבוהה כדורי </td><td> F-06649 </td><td> Bio-Serv </td><td> Bio-Serv אחד 8 רחוב, סוויטה 1 Frenchtown, NJ 08825, ארה&quot;ב טלפון: (800) -996-9908 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. ציוד החומר ספציפיים.

progressive-ratio responding for palatable high-fat and high-sugar food in mice

מזונות עשירים בשומן וסוכר לתרום באופן משמעותי לשיעור יתר אכילה הסלמה של השמנת יתר. צריכה של מזון טעים יכול לייצר השפעה מתגמל המחזק פעולה התוצאה עמותות ומחזק התנהגות בעתיד כלפי קבלת מזונות אלו. ראיות הגדלת כי ההשפעות מתגמל של אנרגיה מזונות צפופים תפקיד עמוק אכילת יתר לבין התפתחות של השמנת יתר יש עניין מוגבר ללמוד את הגנים, מולקולות ואת המעגלים העצביים כי לווסת זכתה 1,2 מזון. ההשפעה של גירויים שונים מתגמלת ניתן ללמוד על ידי מדידת נכונות לעבוד כדי להשיג אותם, כמו משימות אוויר אופרנטית 3. מודלים אופרנטית מידה זכתה המזון הנרכש תגובות התנהגותיות מרצון כי מכוונות להשגת מזון. מדד נפוץ של כוח פרס הוא הליך אופרנטית המכונה יחס מתקדמת (PR) לוח זמנים של חיזוקים. 4,5 ב t PRלשאול, בכפוף נדרש לבצע מספר גדל והולך של תגובות אופרנטית תמורה כל ברציפות. המחקר החלוצי של Hodos (1961) הראו כי מספר התגובות שנעשו כדי לקבל את הפרס האחרון, כינה נקודת עצירה, משמש כמדד של כוח זכתה 4. בעוד הליכי אופרנטית כי שינויים מודדים שיעור התגובה לבדו לא יכול להפריד שינויים כוח זכתה מן שינויים קיבולת וביצועים, נקודת עצירה נגזר לוח הזמנים PR הוא מדד היטב תוקף של השפעות תגמול של מזון. פעילות יחסי הציבור נעשה שימוש נרחב על מנת להעריך את ההשפעה של תרופות מתגמלת של התעללות ומזון בחולדות (למשל, 6-8), אבל במידה פחותה יותר בעכברים 9. שימוש מוגבר של עכברים מהונדסים גנטית ותזונה המושרה במודלים של עכברים שמנים כבר הגבירו את הדרישה לנקיטת אמצעים התנהגותיים של גמול המזון בעכברים. במאמר הנוכחי, אנחנו פירוט החומרים והנהלים המשמשים להכשיר עכברים להגיב (מנוף, בעיתונות) על עתירת שומןגבוהה סוכר כדורי המזון על לוח הזמנים של חיזוק יחסי ציבור. אנו מראים כי התגובה סף נקודת עצירה להגדיל בעקבות מניעת מזון חריף עם הממשל להקטין את היקפי של ההורמון לפטין אנורקסית, ובכך לאמת את השימוש של הפרדיגמה מזון אופרנטית זה בעכברים.

Watch this Scientific Journal Video about Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice at JoVE.com

Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

את פרטי הדו&quot;ח הנוכחי פרוטוקול מועסק על מנת למדוד את השפעת תגמול של מזון עתירת שומן אצל עכברים באמצעות יחס מתקדמת אופרנטית המשימה אוויר.

יחס מתקדמת, בתגובה על מזון עתיר שומן ו סוכר גבוהה ב טעים עכברים

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can ...

progressive-ratio-responding-for-palatable-high-fat-high-sugar-food

Research

JoVE Journal

Neuroscience

21.9K Views.  University of Montreal. את פרטי הדו"ח הנוכחי פרוטוקול מועסק על מנת למדוד את השפעת תגמול של מזון עתירת שומן אצל עכברים באמצעות יחס מתקדמת אופרנטית המשימה אוויר.

Video: Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

מדידה אוראלי חומצת שומן ספים, תפיסת שומן, שומן מזון טעם, וצפיפות אדומות בבני אדם

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

את assay נימי מזין מודד צריכת המזון ב<em&gt; תסיסנית</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and &#946;-cell failure. Various strategies, including the injection of insulin or the usage of insulin-sensitizing drugs, were pursued to treat T2DM or at least reduce the symptoms. In addition, the application of herbal compounds has attracted increasing attention. Thus, it is necessary to find efficient test systems to identify and characterize insulin-mimetic compounds. Here we developed a modified chick embryo model, which enables testing of synthetic compounds and herbal extracts with insulin-mimetic properties. Using a fluorescence microscopy-based primary screen, which quantifies the translocation of Glucose transporter 4 (Glut4) to the plasma membrane, we were able to identify compounds, mainly herbal extracts, which lead to an increase of intracellular glucose concentrations in adipocytes. However, the efficacy of these substances requires further verification in a living organism. Thus, we used an in-ovo approach to identify their blood glucose-reducing properties. The approval by an ethics committee is not needed since the use of chicken embryos during the first two-thirds of embryonic development is not considered an animal experiment. Here, the application of this model is described in detail.

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

In this study, we describe an in-ovo system as a promising tool to test insulin-mimetic compounds in a living organism. The main advantages include adequate throughput rates and acceptable costs, which enable the identification of phytochemicals with insulin-mimetic properties.

מודל ב Ovo לבדיקת תרכובות מימטי-אינסולין

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

Data Acquisition and Analysis In Brainstem Evoked Response Audiometry In Mice

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as visually evoked potentials (VEPs) or somatosensory evoked potentials (SEPs), the auditory evoked potentials (AEPs) are triggered by the repetitive presentation of identical stimuli, the electroencephalographic (EEG) response of which is subsequently averaged resulting in distinct positive (p) and negative (n) deflections. In humans, both the amplitude and the latency of individual peaks can be used to characterize alterations in synchronization and conduction velocity in the underlying neuronal circuitries. Importantly, AEPs are also applied in basic and preclinical science to identify and characterize the auditory function in pharmacological and genetic animal models. Even more, animal models in combination with pharmacological testing are utilized to investigate for potential benefits in the treatment of sensorineural hearing loss (e.g., age- or noise-induced hearing deficits). Here we provide a detailed and integrative description of how to record auditory brainstem-evoked responses (ABRs) in mice using click and tone-burst application. A specific focus of this protocol is on pre-experimental animal housing, anesthesia, ABR recording, ABR filtering processes, automated wavelet-based amplitude growth function analysis, and latency detection.

Brainstem evoked response audiometry is an important tool in clinical neurophysiology. Nowadays, brainstem evoked response audiometry is also applied in the basic science and preclinical studies involving both pharmacological and genetic animal models. Here we provide a detailed description of how auditory brainstem responses can be successfully recorded and analyzed in mice.

רכישת נתונים וניתוח בברטומטריה תגובה מעורר בעכברים

Brainstem evoked response audiometry (BERA) is of central relevance in the clinical neurophysiology. As other evoked potential (EP) techniques, such as ...

Electrocorticographic Recording of Cerebral Cortex Areas Manipulated Using an Adeno-Associated Virus Targeting Cofilin in Mice

The use of electrocorticographic (ECoG) recordings in rodents is relevant to sleep research and to the study of a wide range of neurological conditions. Adeno-associated viruses (AAVs) are increasingly used to improve understanding of brain circuits and their functions. The AAV-mediated manipulation of specific cell populations and/or of precise molecular components has been tremendously useful to identify new sleep regulatory circuits/molecules and key proteins contributing to the adverse effects of sleep loss. For instance, inhibiting activity of the filamentous actin-severing protein&#160;cofilin&#160;using AAV prevents sleep deprivation-induced memory impairment. Here, a protocol is&#160;described that combines the manipulation of cofilin function in a cerebral cortex area with the recording of ECoG activity to examine whether cortical cofilin modulates the wakefulness and sleep ECoG signals. AAV injection is performed during the same surgical procedure as the implantation of ECoG and electromyographic (EMG) electrodes in adult male and female mice. Mice are anesthetized, and their heads are shaved. After skin cleaning and incision, stereotaxic coordinates of the motor cortex are determined, and the skull is pierced at this location. A cannula prefilled with an AAV expressing cofilinS3D, an inactive form of cofilin, is slowly positioned in the cortical tissue. After AAV infusion, gold-covered screws (ECoG electrodes) are screwed through the skull and cemented to the skull with gold wires inserted in the neck muscles (EMG electrodes). The animals are allowed three weeks to recover and to ensure sufficient expression of cofilinS3D. The infected area and cell type are verified using immunohistochemistry, and the ECoG is analyzed using visual identification of vigilance states and spectral analysis. In summary, this combined methodological approach allows the investigation of the precise contribution of molecular components regulating neuronal morphology and connectivity to the regulation of synchronized cerebral cortex activity during wakefulness and sleep.

This article describes a protocol for the manipulation of molecular targets in the cerebral cortex using adeno-associated viruses and for monitoring the effects of this manipulation during wakefulness and sleep using electrocorticographic recordings.

הקלטה אלקטרוקורטיקוגרפית של אזורי קליפת המוח מניפולציה באמצעות וירוס הקשור אדנו מיקוד Cofilin בעכברים

The use of electrocorticographic (ECoG) recordings in rodents is relevant to sleep research and to the study of a wide range of neurological conditions. ...

A Rapid Food-Preference Assay in Drosophila

To select food with nutritional value while avoiding the consumption of harmful agents, animals need a sophisticated and robust taste system to evaluate their food environment. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a genetically tractable model organism that is widely used to decipher the molecular, cellular, and neural underpinnings of food preference. To analyze fly food preference, a robust feeding method is needed. Described here is a two-choice feeding assay, which is rigorous, cost-saving, and fast. The assay is Petri-dish-based and involves the addition of two different foods supplemented with blue or red dye to the two halves of the dish. Then, ~70 prestarved, 2-4-day-old flies are placed in the dish and&#160;allowed to choose between blue and red foods in the dark for about 90 min. Examination of the abdomen of each fly is followed by the calculation of the preference index. In contrast to multiwell plates, each Petri dish takes only ~20 s to fill and saves time and effort. This feeding assay can be employed to quickly determine whether flies like or dislike a particular food.

A Rapid Food-Preference Assay in Drosophila

We present a protocol for a two-choice feeding assay for flies. This feeding assay is fast and easy to run and is suitable not only for small-scale laboratory research, but also for high-throughput behavioral screens in flies.

מבחני העדפת מזון מהירה בדרוסופילה

To select food with nutritional value while avoiding the consumption of harmful agents, animals need a sophisticated and robust taste system to evaluate ...

Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, there remain limited therapeutic options for stroke patients. Therefore, more research is needed for pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Given the inability of in vitro models to reproduce the complexity of the brain, experimental stroke models are essential for the analysis and subsequent evaluation of novel drug targets for these mechanisms. In addition, detailed standardized models for all procedures are urgently needed to overcome the so-called replication crisis. As an effort within the ImmunoStroke research consortium, a standardized photothrombotic mouse model using an intraperitoneal injection of Rose Bengal and the illumination of the intact skull with a 561 nm laser is described. This model allows the performance of stroke in mice with allocation to any cortical region of the brain without invasive surgery; thus, enabling the study of stroke in various areas of the brain. In this video, the surgical methods of stroke induction in the photothrombotic model along with&#160;histological analysis are demonstrated.

Described here is the photothrombotic stroke model, where a stroke is produced through the intact skull by inducing permanent microvascular occlusion using laser illumination after administration of a photosensitive dye.

שבץ דוגמנות בעכברים: נגעים קליפת המוח מוקד על ידי פוטוטרומבוזיס

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, ...

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s disease (HD) is principally driven by a CAG nucleotide repeat that encodes an expanded glutamine tract in huntingtin protein. Thus, the inhibition of polyglutamine (polyQ) aggregation and, in particular, aggregation-associated neurotoxicity is a useful strategy for the prevention of HD and other polyQ-associated conditions. This paper introduces generalized experimental protocols to assess the neuroprotective capacity of test compounds against HD using established polyQ transgenic Caenorhabditis elegans models. The AM141 strain is chosen for the polyQ aggregation assay as an age-associated phenotype of discrete fluorescent aggregates can be easily observed in its body wall at the adult stage due to muscle-specific expression of polyQ::YFP fusion proteins. In contrast, the HA759 model with strong expression of polyQ-expanded tracts in ASH neurons is used to examine neuronal death and chemoavoidance behavior. To comprehensively evaluate the neuroprotective capacity of target compounds, the above test results are ultimately presented as a radar chart with profiling of multiple phenotypes in a manner of direct comparison and direct viewing.

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Here, we present a protocol to assess the neuroprotective activities of test compounds in Caenorhabditis elegans, including polyglutamine aggregation, neuronal death, and chemoavoidance behavior, as well as an exemplary integration of multiple phenotypes.

Caenorhabditis elegans כמערכת מודל לגילוי תרכובות ביו-אקטיביות נגד רעילות עצבית בתיווך פוליגלוטמין

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s ...

Constipation Assays in &lt;em&gt;Drosophila&lt;/em&gt; Flies

Measuring Constipation in a Drosophila Model of Parkinson's Disease

Non-motor symptoms in Parkinson's disease (PD) are common, difficult to treat, and significantly impair quality of life. One prevalent non-motor symptom is constipation, which can precede the diagnosis of PD by years or even decades. Constipation has been underexplored in animal models of PD and lacks specific therapies. This assay utilizes a Drosophila model of PD in which human alpha-synuclein is expressed under a pan-neuronal driver. Flies expressing alpha-synuclein develop the hallmark features of PD: the loss of dopaminergic neurons, motor impairment, and alpha-synuclein inclusions.
This protocol outlines a method for studying constipation in these flies. Flies are placed on fly food with a blue color additive overnight and then transferred to standard food the following day. They are subsequently moved to new vials with standard fly food every hour for 8 h. Before each transfer, the percentage of blue-colored fecal spots compared to the total fecal spots on the vial wall is calculated. Control flies that lack alpha-synuclein expel all the blue dye hours before flies expressing alpha-synuclein. Additionally, the passage of blue-colored food from the gut can be monitored with simple photography. The simplicity of this assay enables its use in forward genetic or chemical screens to identify modifiers of constipation in Drosophila.

Author Spotlight: Exploring Non-Motor Symptoms in Parkinson&#039;s Disease 

This protocol presents an assay for modeling constipation in an alpha-synuclein based Drosophila model of Parkinson's disease.

מדידת עצירות במודל דרוזופילה של מחלת פרקינסון

Non-motor symptoms in Parkinson's disease (PD) are common, difficult to treat, and significantly impair quality of life. One prevalent non-motor symptom ...