עבודה זו היה ממומן על ידי אוסטריה מחקר קידום הסוכנות (FFG; מספר הפרוייקט 850681), יוזמת האוניברסיטה של יישומי מדעי העליונה אוסטריה קרנות בסיסי (פרוייקט GlucoSTAR) ואל המרכז לחדשנות טכנולוגית בתחום הרפואה (מתוזמן במרכז) זה מקבל בסיסי מימון על ידי מחוז של אוסטריה עילית.

על פי הוראת 2010/63/האיחוד האירופי, ניסויים עם עוברי העופות שאינם סס במהלך הראשון לשני-שליש התפתחות לא צריך הרשאה על ידי ועדת האתיקה.
1. רבייה של ביצי ואחסון
<ol><li>השג ביצי תרנגולת מופרית (טבלה של חומרים) תרבית מקומית. הערה: ביצים ניתן לאחסן ב 14 מעלות צלזיוס באווירה humidified עד 10 ימים לאחר הנחת לפני השימוש לניסויים.</li>
	<li>דגירה הביצים ב 38 ° C עם לחות ממוצעת של 40-60% 10 או 11 ימים בתוך אינקובטור כל הזמן שהופך את הביצים.</li>
</ol>2. בחירה של ביצים
<ol><li>בדוק את הביצים לדישון לאחר דגירה של עד 11 ימים. השתמש אור candling בשלב זה. טבלו את השוליים של המנורה candling inkpad, נרות הצד המחודד של הביצה.</li>
	<li>כדי לזהות שלפוחית השתן אוויר, בדוק הבדלי בהירות על הביצה. הערה: שלפוחית השתן אוויר מופיעה כאזור עגול, שקופים יותר, בזמן אלבומין הוא כהה יותר, כאשר הביצה הוא candled.</li>
	<li>לאחר גילוי של שלפוחית השתן אוויר, סמן את המיקום על-ידי הקשה על המנורה מעט נגד הביצה עם הדיו שהוחלו בעבר.</li>
	<li>הכללת שאינה מופרית ביצים בשלב זה, אשר אינם מראים הבדל בהירות בין אלבומין שלפוחית אוויר.</li>
</ol>3. הזרקה של חומרים
<ol><li>הכן את החומר של הריבית (למשל, תמצית צמחים או אינסולין) על ידי דילול החומר בריכוז הרצוי במאגר מאוזנת תמיסת מלח (HBSS) של האנק. לדוגמה, 3.3 U/mL של אינסולין זמינים מסחרית אנלוגי ב- HBSS.</li>
	<li>עבור היישום של המתחם הנבחר, בזהירות פק קליפת עם זוג מלקחיים באזור המסומן של שלפוחית השתן אוויר המחודד. לא יוצרים חור גדול יותר מקוטר המחט של המזרק. להזריק את בופר (300 µL) המכילה את החומר עניין לאזור שמנוקרים באמצעות מזרק. הערה: השתמש מזרקים חד-פעמיים סטרילי, 1-ml, טיפים פיפטה וכלי הדם. ללבוש כפפות, חלוק מעבדה לניסויים.</li>
	<li>כדי לקבוע את האפקט להפחתת גלוקוז בדם של חומר, מקם את הביצים לתוך החממה 60, 120, 180 דקות, בהתאמה. כדי לקבוע את רמות הגלוקוז בדם הבזליים, כוללים לפחות 10-15 שליטה שאינם מטופלים ביצים.</li>
</ol>4. בדיקות רעילות
<ol><li>לאחר היישום של המתחם הנבחר במשך 24 שעות ביממה, equilibrate את קרום הדקה עם פוספט תמיסת מלח במאגר (PBS) מאגר (מספיק כדי לכסות את הקרום כל הדקה) לפחות ב-30 s.</li>
	<li>להסיר עודפי PBS מאגר על ידי למזוג משם.</li>
	<li>משוך את קרום הדקה בזהירות עם זוג פינצטה מחודדת.</li>
	<li>בדיקת כלי דם לחבלות ואשר חיוניות (למשל, תנועה) של העובר צ'יק. הערה: ראה איור 1 להשוואה של חיוני נגד עוברי שאינם חיוניים לאחר היישום של תמצית צמחים רעילים.</li>
</ol>5. מדידה של ערך הגלוקוז בדם
<ol><li>בנקודת הזמן המתאים, בזהירות להסיר את קליפת מעל שלפוחית השתן אוויר, equilibrate את קרום הדקה עם מאגר PBS (מספיק כדי לכסות את הקרום כל הדקה).</li>
	<li>להסיר עודפי PBS מאגר על ידי למזוג משם.</li>
	<li>משוך בזהירות את קרום הדקה עם זוג פינצטה מחודדת.</li>
	<li>לחתוך ולהסיר את הקרום chorioallantoic עם מיקרו-מספריים, כדי לאפשר גישה טובה לכלי הדם מתאים. לחתוך את הקרום לפחות 2-3 ס מ. Not גזור כל כלי גדול ממברנה עצמו כדי למנוע איבוד דם לא רצויים של העובר.</li>
	<li>אתר את קיבול גדול שמקורם הבטן של העובר. להרים את כלי השיט הזה מתחום אלבומין עם מיקרו-מספריים סגורה ומניחים אותו על pH-רצועת פלסטיק. להזיז את רצועת ה-pH מתחת הספינה, אשר מתקיים עם המיקרו-המספריים, ומשוך לאחור את המיקרו-המספריים משם בקפידה.</li>
	<li>הסר 1-2 מ"ל של הנוזל מתחת קרום chorioallantoic עם פיפטה כדי למנוע דילול הדם בשלב הבא. ייבש את הכלי ואת חשפנות-pH עם נייר סינון, לפני הספינה נחתך.</li>
	<li>חותכים את כלי הדם בזהירות עם מיקרו-מספריים בצד אחד. לא לחתוך כלי הקיבול לחלוטין. הערה: כלי הקיבול הוא בערך 1 מ מ עבה. Not גזור יותר ממחצית הספינה כדי למנוע חיתוך באמצעות הכלי לחלוטין, זה עלול להחליק מהרצועה, איסוף דם לא אפשרית.</li>
	<li>לאסוף את הדם דולף על רצועת ה-pH באמצעות פיפטה. Microliters עשר של דם נדרשים לקבוע רמות הגלוקוז באמצעות מד גלוקוז בדם.</li>
</ol>6. הערכות סטטיסטיות
<ol><li>לחשב את הערך הממוצע לפחות 10 ביצים בודדות לכל נקודת זמן, לנרמל את הערכים האלה כדי לאחד הביצים שליטה (ביצים שאינם או מאגר-מטופלים).</li>
	<li>לאחר מכן, לקבוע את אחוזי ירידה. בנוסף, משתמשים אינסולין כפקד חיובי. הערה: חזור על ניסוי לפחות שלוש פעמים.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Defronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Banting+Lecture.+From+the+triumvirate+to+the+ominous+octet:+a+new+paradigm+for+the+treatment+of+type+2+diabetes+mellitus.">Banting Lecture. From the triumvirate to the ominous octet: a new paradigm for the treatment of type 2 diabetes mellitus.</a> Diabetes. 58 (4), 773-795 (2009).</li><li>American_Diabetes_Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus.">Diagnosis and classification of diabetes mellitus.</a> Diabetes Care. 37, S81-S90 (2014).</li><li>Han Cho, N., Cavan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IDF Diabetes Atlas. 7, (2015).</li><li>Bailey, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individualized+glycaemic+targets+and+pharmacotherapy+in+type+2+diabetes.">Individualized glycaemic targets and pharmacotherapy in type 2 diabetes.</a> Diabetes &amp; vascular disease research. 10 (5), 397-409 (2013).</li><li>Maruthur, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+Medications+as+Monotherapy+or+Metformin-Based+Combination+Therapy+for+Type+2+Diabetes:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Diabetes Medications as Monotherapy or Metformin-Based Combination Therapy for Type 2 Diabetes: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Annals of internal medicine. 164 (11), 740-751 (2016).</li><li>Aleman-Gonzalez-Duhart, D., Tamay-Cach, F., Alvarez-Almazan, S., Mendieta-Wejebe, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Advances+in+the+Biochemical+and+Physiological+Aspects+of+the+Treatment+of+Type+2+Diabetes+Mellitus+with+Thiazolidinediones.">Current Advances in the Biochemical and Physiological Aspects of the Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus with Thiazolidinediones.</a> PPAR research. , 7614270 (2016).</li><li>Cohen, F. J., Neslusan, C. A., Conklin, J. E., Song, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+antihyperglycemic+prescribing+trends+for+US+privately+insured+patients+with+type+2+diabetes.">Recent antihyperglycemic prescribing trends for US privately insured patients with type 2 diabetes.</a> Diabetes care. 26 (6), 1847-1851 (2003).</li><li>Desai, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+medication+initiation+in+newly+diagnosed+diabetes+mellitus:+quality+and+cost+implications.">Patterns of medication initiation in newly diagnosed diabetes mellitus: quality and cost implications.</a> The American journal of medicine. 125 (3), e301-e307 (2012).</li><li>Martel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-obesogenic+and+antidiabetic+effects+of+plants+and+mushrooms.">Anti-obesogenic and antidiabetic effects of plants and mushrooms.</a> Nature reviews. Endocrinology. , (2016).</li><li>Lanzerstorfer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+insulin+mimetic+drugs+by+quantitative+total+internal+reflection+fluorescence+(TIRF)+microscopy.">Identification of novel insulin mimetic drugs by quantitative total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.</a> British journal of pharmacology. 171 (23), 5237-5251 (2014).</li><li>Onur, S., St&#246;ckmann, H., Zenthoefer, M., Piker, L., D&#246;ring, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Extract+Collection+Kiel+in+Schleswig-Holstein+(PECKISH)+Is+an+Open+Access+Screening+Library.">The Plant Extract Collection Kiel in Schleswig-Holstein (PECKISH) Is an Open Access Screening Library.</a> Journal of Food Research. 2 (4), (2013).</li><li>Haselgrubler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluc-HET,+a+complementary+chick+embryo+model+for+the+characterization+of+antidiabetic+compounds.">Gluc-HET, a complementary chick embryo model for the characterization of antidiabetic compounds.</a> PloS one. 12 (8), e0182788 (2017).</li><li>Stadlbauer, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomolecular+Characterization+of+Putative+Antidiabetic+Herbal+Extracts.">Biomolecular Characterization of Putative Antidiabetic Herbal Extracts.</a> PloS one. 11 (1), e0148109 (2016).</li><li>Greywe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applicability+and+robustness+of+the+hen's+egg+test+for+analysis+of+micronucleus+induction+(HET-MN):+results+from+an+inter-laboratory+trial.">Applicability and robustness of the hen's egg test for analysis of micronucleus induction (HET-MN): results from an inter-laboratory trial.</a> Mutation research. 747 (1), 118-134 (2012).</li><li>Manakova, E., Hubickova, L., Kostalova, J., Zemanova, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryotoxicity+of+mirtazapine:+a+study+using+Chick+Embryotoxicity+Screening+Test.">Embryotoxicity of mirtazapine: a study using Chick Embryotoxicity Screening Test.</a> Neuro endocrinology letters. 31, 8-10 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis.">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> International review of cell and molecular biology. 270, 181-224 (2008).</li><li>Yoshiyama, Y., Sugiyama, T., Kanke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+diabetes+model+in+chick+embryos+treated+with+streptozotocin.">Experimental diabetes model in chick embryos treated with streptozotocin.</a> Biological &amp; pharmaceutical bulletin. 28 (10), 1986-1988 (2005).</li><li>Wolf, T., Niehaus-Rolf, C., Luepke, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+new+methodological+aspects+of+the+hen's+egg+test+for+micronucleus+induction+(HET-MN).">Some new methodological aspects of the hen's egg test for micronucleus induction (HET-MN).</a> Mutation research. 514 (1-2), 59-76 (2002).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

וזמינותו הט-קאם היא מערכת חלופה מבחן בשימוש נרחב לניסויים בבעלי חיים התעשייה12. המערכת ב- ovo המתוארים כאן מייצג גירסה שונה של מצלמת הט וזמינותו. בעוד בצורתו המקורית, מצלמת הט ניסויים מבוצעים ללמוד את מאפייני מעצבן של תרכובות ניסוח או הניתוח של אנגיוגנזה14,15,16, לנו יש להתאים את הגישה כדי לבדוק תרכובות עם מאפיינים אינסולין-מימטי בשם12. על פי הוראת 2010/63/האיחוד האירופי, ניסויים עם עוברי העופות שאינם סס במהלך הראשון לשני-שליש התפתחות לא צריך הרשאה על ידי ועדת האתיקה מאז ניסויים אלו אינם נחשבים ניסויים בבעלי חיים. מחקרים אחרונים הוכיחו ההתאמה של המערכת ב- ovo לאפיין את היעילות של תמציות צמחים שנבחרו, אשר זוהו GLUT4 רוברטסונית מבוססת על המסך הראשי10, כדי להפחית את רמות הגלוקוז בדם, היעדרות של אינסולין12,13. נקודות קריטיות עבור הופעה ממש טובה של המערכת ב- ovo כוללים: הראשון, תרבית אמין אספקת הביצים. לומן. עוף חום קלאסי הוא בחירה טובה של הגזע. שנית, היישום של רעילות בדיקות כדי לא לכלול את ההשפעות הרעילות של הצרכים מתחם ובדוקים להיעשות. בנוסף, הכנת כלי דם מתאים עבור איסוף דם חשובה. חשוב למנוע את חיתוך כלי גדול ממברנה chorioallantoic עצמו, כמו זה יכול להוביל לאובדן שאינו עדיפה של דם. יתר על כן, לפני הספינה הוא נחתך על רצועת ה-pH, זה חייב להיות טפחו יבש באמצעות נייר סינון כדי למנוע דילול הדם שנאספו. בסופו של דבר, מספר מספיק של ניסויים נראה חשוב. מומלץ להשתמש לפחות 10 ביצים על כל נקודת זמן, וחזרה לתרגיל של הניסוי בהתאמה.
באופן טבעי, ישנן כמה מגבלות של גישה זו ב- ovo . מכיוון שצריך עד 30 דקות עד שהחומרים הם נספג דרך קרום הדקה באים במגע קרוב עם קרום chorioallantoic, זה אינה מאפשרת לכמת מענה מהיר של העובר למתחם יישומית. יתר על כן, תרכובות מסוימות עשויים להיות רעילים בריכוז יישומית, אשר לעתים קרובות התוצאות נגעים של כלי דם ברקמה chorioallantoic. לפיכך, cytotoxicity בדיקות בהתבסס על דגירה לטווח ארוך של תרכובות למשך 24 שעות מופיע סבירה. לבסוף, מצאנו כי מערכת מאגר המשמש עבור היישום של תרכובות יש השפעה משמעותית על הביצועים של וזמינותו. 12 . כעת, HBSS המאגר משמש כי התוצאה היא ההשפעה הקטן ביותר על רמות הגלוקוז בדם של העובר.
עבור יישומים עתידיים, המאגר הנוסף מערכות כחלופה HBSS עשוי להיבדק. יתר על כן, ההשפעה של תמציות צמחים על פרמטרים נוספים דם כגון כולסטרול, טריגליצרידים או lipoproteins יכול להיות שאלה אטרקטיבי.
המערכת החדשה שלנו ב- ovo הוא כלי מבטיח וחשוב לבחון חומרים עם מאפיינים אינסולין-מימטי של אורגניזם חי ללא הצורך של ניסוי בבעלי חיים. לכן, הוא ממלא את הפער בין הגישות הפריה , ב- vivo . לעומת הקיים ב- ovo דגם מערכות17 שאין צורך לזירוז סוכרת על ידי טיפול streptozotocin (STZ), כפי שאנו משתמשים עוברי ביום 10 או 11 של דגירה. בשלב זה, ייצור האינסולין לא התחיל, אך העוברים כבר רגישים לאינסולין. בנוסף, אישור על ידי ועדת האתיקה ייתכן שיהיה צורך אם העוברים בגילאי 14-17 ימים נמצאים בשימוש17. יתר על כן, בהשוואה לאסטרטגיות אלטרנטיביות18, מתחם היישום כפי שמתואר כאן הוא פחות מזיקים ולא מייגעת, הגדלת ניסיוני דרך. תוריד מחירים.
יחדיו, זה ב- ovo הגישה היא מערכת אטרקטיביים אם תופעת דם-הפחתת חומר אינסולין-מימטי צריך להיבחן. אורגניזם חי.

סוכרת היא מחלה מטבולית מאופיינת היפרגליקמיה והיא נגרמת על ידי ליקויים-הפרשה של אינסולין או פעולה אינסולין1. תשעים אחוז מכל מקרי הסוכרת הם קטגוריה סוכרת סוג 2 (T2DM), שבו אנשים להדגים תנגודת לאינסולין בעיקר אינסולין מחסור2. מספר גורמים ידועים כדי להגביר את השכיחות העולמית של T2DM, כולל שינויים באורח החיים, במיוחד אלה הקשורים overnutrition, הזדקנות, חוסר פעילות גופנית. כ- 400 מיליון אנשים יש סוכרת ברחבי העולם על פי הבינלאומי לסוכרת הפדרציה (צה ל). מספר זה צפוי להגיע 600 מיליון בתוך 20 שנה הבאה3.
סיבוכים סוכרת הנגרמת על ידי היפרגליקמיה ותנגודת לאינסולין, כגון יתר לחץ דם, dyslipidemia, אי סבילות גלוקוז, מחלת לב כלילית, מחלת כלי דם מוחי, להוביל תוחלת החיים מופחתת באופן משמעותי באיכות4. אנשים מושפעים דורשים להורדת גלוקוז pharmacotherapy; עם זאת, השימוש של תרופות, כגון מטפורמין5 קשורה לעיתים קרובות עם תופעות לוואי דרמטי-6,-7,-8. לכן, נוסף גישות antidiabetic בטוח, זמינה וזולה נרחב נחוצים.
יש כבר ייחסה תרכובות צמחים שונות, תמציות, צמחייה בריאותיים למאפיינים אינסולין-מימטי תכונה על-ידי להתכוונן תאיים שונים. תכונה חשובה היא גירוי של רוברטסונית של נשא גלוקוז 4 (GLUT4) קרום פלזמה מעל תאי אחסון תאיים, וכתוצאה מכך ספיגה מוגברת של גלוקוז בשריר, רקמת שומן, בהעדר אינסולין, המכונה מאפייני אינסולין-מימטי9. בעבר, אנחנו מיושמת גישה מבוסס מיקרוסקופיה של קרינה פלואורסצנטית לכמת את התהליך טרנסלוקציה של GLUT410. ניתוח של תמציות צמחים רבים מן הספרייה תמצית11 שימוש assay הזה הביא הזיהוי של מועמדים מבטיחים. עם זאת, בדיקות נוספות היצורים החיים נדרשים. הגישה המתוארת בפירוט רב את הנייר הזה, מודל העובר אפרוח שונה, הוכיחה להיות דוגמנית מבטיח לזיהוי חומרים עם אינסולין-מימטי מאפיינים. הוא מייצג כלי אטרקטיבי מילוי הפער רחב בין הפריה מחקרים ב- vivo ומציע מספר יתרונות בהשוואה למערכות קיימות כגון עלויות מקובלת, נהלי הטיפול הפשוט תפוקה הולמת. בנוסף, אישור על ידי ועדת האתיקה אינה נדרשת.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="621">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:279px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:140px;">Biochrom</td>
			<td style="width:123px;">L1825</td>
			<td style="width:80px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hank&#8217;s balanced salt solution (HBSS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30268.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NovoRapid</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>8-0905-82-304-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hens eggs (Lohmann classic brown chicken)</td>
			<td>Local Breeder</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accu-check performa</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6454011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accu-check Inform II Teststreifen</td>
			<td>Roche&#160;</td>
			<td>5942861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Incubator&#160; HEKA- Turbo 288</td>
			<td>HEKA Brutger&#228;te</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe Omnican F 1 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td>09161502S&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Extracts</td>
			<td>PEKISH extract library</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lamp Tempo Nr. 119</td>
			<td>ORBAN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in ovo model for testing insulin-mimetic compounds

רמות גלוקוז גבוהות בדם, סוכרת סוג 2 (T2DM), מחלה מטבולית multifactorial ומורכבת, נגרמות על ידי אינסולין ההתנגדות ו β-cell כשל. אסטרטגיות שונות, כולל ההזרקה של אינסולין או השימוש של תרופות sensitizing אינסולין, נרדפים כדי לטפל T2DM או לפחות להפחית את הסימפטומים. בנוסף, היישום של תרכובות צמחיות משכה תשומת לב גדלה והולכת. לכן, זה הכרחי למצוא מערכות הבדיקה יעילה כדי לזהות ולאפיין אינסולין-מימטי תרכובות. כאן פיתחנו מודל העובר אפרוח שונה, אשר מאפשרת בדיקה של תרכובות סינתטי ותמציות צמחי מרפא עם אינסולין-מימטי מאפיינים. באמצעות קרינה פלואורסצנטית מבוסס מיקרוסקופיה הראשי מסך, אשר מכמת את טרנסלוקציה של נשא גלוקוז 4 (Glut4) כדי קרום פלזמה, הצלחנו לזהות תרכובות, בעיקר תמציות צמחים, אשר יוביל לעליה של גלוקוז תאיים ריכוזים ב adipocytes. עם זאת, יעילותם של חומרים אלה דורש אימות של אורגניזם חי. לפיכך, השתמשנו ב- ovo גישה לזהות את תכונותיהם בהפחתת גלוקוז בדם. באישור ועדת אתיקה אינה דרושה מאז השימוש של עוף העוברים במהלך הראשון לשני-שליש התפתחות אינו נחשב ניסוי בבעלי חיים. . הנה, היישום של מודל זה מתואר בפירוט.

תיאור/הוראות: הגישה Gluc-הט
לאחר דגירה עם חומרים מעניינים, הביצים נפתח, שהוכן עבור איסוף דם על-ידי הסרה של קליפת (איור 2). הכנה נוספת כולל equilibration והסרה של קרום קליפת הביצה כדי לקבל גישה קרום chorioallantoic. זה קרום ואז נחתך בקפידה כדי לספק גישה לכלי דם מתאים עבור איסוף דם. רצוי, כלי גדול שמקורם הבטן של העובר מושם על pH-רצועת פלסטיק. כדי למנוע דילול הדם בזמן האיסוף, כלי השיט ורצועת pH מלוטף יבש עם נייר סינון. כלי הדם ואז נחתך, נוזלת על רצועת ה-pH הדם נאסף עבור ניתוח באמצעות פיפטה.
ההשפעות של תמציות צמחים שנבחרו על רמות הגלוקוז בדם:
עם הוקמה לאחרונה GLUT4-רוברטסונית המבוסס על כימות הראשי מסך, אנו מסוגלים לזהות חומרים האופייניים אינסולין-מימטי10. הקרנה של מאות תמציות צמחים מסיסים במים גרמו הזיהוי של מספר להיטים. תמציות אלו נבדקו במודל שלנו ב-ovo. ניסויים אלה שימשו תמציות מקריסטלים של Combretum indicum (רנגון מטפס), תמצית שאינו גלוי (הנקרא תמצית 0845). שאנחנו התפזרנו תמציות במאגר HBSS-300 mg/L, ריכוז זה התברר המתאים מחקרים קודמים12,13. חומרים הוחלו על העוברים הדגירה למשך 11 ימים. כמצוין באיור3, החילוץ מ מטפס רנגון לא לגרום הפחתה גלוקוז הדם משמעותי ב- ovo. עם זאת, ריכוז הגלוקוז בדם בהצלחה צומצם עם תמצית 0845, עם ירידה קטנה לאחר 60 דקות, אשר דומה לאפקט שנמדדו באמצעות זמינים מסחרית אינסולין אנלוגי. אפקט משמעותי נצפתה כאשר תקופת דגירה הביצים הייתה ממושכת.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig1.jpg"> איור 1: השפעתה של תרכובות רעילים על חיוניות העובר. הביצים מודגרות למשך 11 ימים (A ו- C) או מטופלים עם תמצית צמחים רעילים ביום 10 עבור עוד 24 שעות (B ו- D). היישום של התמצית הובילה חמור נגעים של כלי דם קרום chorioallantoic (ד) , העובר (B).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig2.jpg"> איור 2: תיאור של הדגם ב- ovo . משמאל לימין: פתיחת והסרה של קליפת (1 - 2); equilibration והסרה של קרום הדקה עם קרום chorioallantoic חשוף (3); כלי השיט מוכן חשפנות-pH (4); האוסף של דם ומדידה של ריכוז הגלוקוז באמצעות גלוקוז מטר (5). מ Haselgruebler et al., 201712. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig3.jpg"> איור 3: ההשפעה של תמציות צמחים על רמות הגלוקוז בדם בהשוואה ביצים אינו מטופל או שטופלו אינסולין. הביצים היו הדגירה למשך 11 ימים ו שטופלו החומרים המצוין (זמינים מסחרית אינסולין אנאלוגי: 3.3 U/mL; תמציות: 300 מ ג/ליטר) מומס HBSS מאגר (300 µL נפח) עבור עד 3 ה דם רמות הגלוקוז נקבעו באמצעות מד גלוקוז בדם. התוצאות מוצגות ללא ההשפעה של המאגר. קווי שגיאה מבוססים על שגיאת התקן של הממוצע. * P < 0.05 ו * * * P < 0.0001, משמעותית ירידה ביחס שטופלו HBSS ביצים באותו זמן הדגירה. מ Haselgruebler et al., 201712. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds at JoVE.com

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

במחקר זה, אנו מתארים מערכת ב- ovo ככלי מבטיח לבדוק אינסולין-מימטי תרכובות אורגניזם חי. היתרונות העיקריים כוללים תפוקה הולמת ועלויות מקובל, המאפשרים הזיהוי של פיטוכימיקלים עם אינסולין-מימטי מאפיינים.

מודל ב Ovo לבדיקת תרכובות מימטי-אינסולין

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

an-in-ovo-model-for-testing-insulin-mimetic-compounds

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Insulin and Hypoglycemic Drugs

SCIENTISTS IN ACTION

9.5K Views.  University of Applied Sciences Upper Austria. במחקר זה, אנו מתארים מערכת ב- ovo ככלי מבטיח לבדוק אינסולין-מימטי תרכובות אורגניזם חי. היתרונות העיקריים כוללים תפוקה הולמת ועלויות מקובל, המאפשרים הזיהוי של פיטוכימיקלים עם אינסולין-מימטי מאפיינים.

Video: An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. Caged compounds are molecules made physiologically inactive by a chemical cage that can be broken by a flash of ultraviolet light. Here, we show how to obtain patch-clamp recordings combined with photolysis of caged compounds for the study of olfactory transduction in dissociated mouse olfactory sensory neurons. The process of olfactory transduction (Figure 1) takes place in the cilia of olfactory sensory neurons, where odorant binding to receptors leads to the increase of cAMP that opens cyclic nucleotide-gated (CNG) channels2. Ca entry through CNG channels activates Ca-activated Cl channels. We show how to dissociate neurons from the mouse olfactory epithelium3 and how to activate CNG channels or Ca-activated Cl channels by photolysis of caged cAMP4 or caged Ca5. We use a flash lamp6,7 to apply ultraviolet flashes to the ciliary region to uncage cAMP or Ca while patch-clamp recordings are taken to measure the current in the whole-cell voltage-clamp configuration8-11.

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds. Here, we show how to obtain patch-clamp recordings combined with photolysis of caged cAMP or caged Ca for the study of olfactory transduction in dissociated mouse olfactory sensory neurons.

פלאש Photolysis של תרכובות כלואה צילה של עצב סנסורי חוש הריח

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain dopaminergic neurons is implicated in Parkinson's disease, Schizophrenia, depression, and dementia1-5. Thus, studying the regulation of midbrain dopaminergic neuron differentiation could not only provide important insight into mechanisms regulating midbrain development and neural progenitor fate specification, but also help develop new therapeutic strategies for treating a variety of human neurological disorders.
Dopaminergic neurons differentiate from neural progenitors lining the ventricular zone of embryonic ventral midbrain. The development of neural progenitors is controlled by gene expression programs6,7. Here we report techniques utilizing electroporation to express genes specifically in the midbrain of Hamburger Hamilton (HH) stage 11 (thirteen somites, 42 hours) chick embryos8,9. The external development of chick embryos allows for convenient experimental manipulations at specific embryonic stages, with the effects determined at later developmental time points10-13. Chick embryonic neural tubes earlier than HH stage 13 (nineteen somites, 48 hours) consist of multipotent neural progenitors that are capable of differentiating into distinct cell types of the nervous system. The pCAG vector, which contains both a CMV promoter and a chick &beta;-actin enhancer, allows for robust expression of Flag or other epitope-tagged constructs in embryonic chick neural tubes14. In this report, we emphasize special measures to achieve regionally restricted gene expression in embryonic midbrain dopaminergic neuron progenitors, including how to inject DNA constructs specifically into the embryonic midbrain region and how to pinpoint electroporation with small custom-made electrodes. Analyzing chick midbrain at later stages provides an excellent in vivo system for plasmid vector-mediated gain-of-function and loss-of-function studies of midbrain development. Modification of the experimental system may extend the assay to other parts of the nervous system for performing fate mapping analysis and for investigating the regulation of gene expression.

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

To assess the function and the regulation of genes during the development of midbrain dopaminergic neurons, we describe a method that involves in ovo electroporation of plasmid DNA constructs into embryonic chick ventral midbrain dopaminergic neuron progenitors. This technique can be used to achieve efficient expression of genes of interest to study different aspects of midbrain development and dopaminergic neuron differentiation.

ב electroporation לג&#39;ימי של המוח התיכון צ&#39;יק לחקר תפקוד הגן בהתפתחות Neuron דופאמין

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial and temporal control of ectopic microRNA expression. However, ventral brain structures like ventral midbrain are rather difficult to reach for any manipulations. Here, we demonstrate an efficient way to electroporate miRNA into ventral midbrain using thin platinum electrodes. This method offers a reliable way to transfect specific areas of the midbrain and a useful tool for in vivo studies.

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

Ectopic expression is one technique to elucidate the microRNAs role in brain development. However, targeting specific areas using in ovo electroporation is challenging. Here, we show an efficient way to selectively electroporate ventral and dorsal midbrain regions.

בביטוי אוב של microRNA בגחון צ&#39;יק מוח התיכון

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial ...

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response is a vision-based, reflexive behavior that has been observed in all vertebrates tested. Tadpole eyes are small so the tail flip response was used as alternative measure, which requires a trained technician to record the subtle response. We developed an alternative behavior assay based on the fact that tadpoles prefer to swim on the white side of a tank when placed in a tank with both black and white sides. The assay presented here is an inexpensive, simple alternative that creates a response that is easily measured. The setup consists of a tripod, webcam and nested testing tanks, readily available in most Xenopus laboratories. This article includes a movie showing the behavior of tadpoles, before and after severing the optic nerve. In order to test the function of one eye, we also include representative results of a tadpole in which each eye underwent retinal axotomy on consecutive days. Future studies could develop an automated version of this assay for testing the vision of many tadpoles at once.

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

Xenopus laevis tadpoles prefer swimming on the white side of a black/white tank. This behavior is guided by their vision. Based on this behavior, we present a simple assay to test the visual function of tadpoles.

Assay התנהגות פשוט לפונקציה של Visual בדיקה ב<em&gt; Laevis Xenopus</em

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response ...

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

The precise function of multi-nucleated microglia, called globoid cells, that are uniquely abundant in the central nervous system of globoid cell leukodystrophy (GLD) is unclear. This gap in knowledge has been hindered by the lack of an appropriate in vitro model for study. Herein, we describe a primary murine glial culture system in which treatment with psychosine results in multinucleation of microglia resembling the characteristic globoid cells found in GLD. Using this novel system, we defined the conditions and modes of analysis for study of globoid cells. The potential use of this model system was validated in our previous study, which identified a potential role for matrix metalloproteinase (MMP)-3 in GLD. This novel in vitro system may be a useful model in which to study the formation and function, but also the potential therapeutic manipulation, of these unique cells.

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

Globoid cells are a defining pathological feature of Krabbe disease, a leukodystrophy currently lacking an effective long-term therapy. We have developed a cell culture model to study the innate biology and pathogenic potential of activated microglia and their transformation into globoid cells.

<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם לחקר נייד פתופיזיולוגיה בLeukodystrophy הסלולרי Globoid

The precise function of multi-nucleated microglia, called globoid cells, that are uniquely abundant in the central nervous system of globoid cell ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

בו זמנית<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; בדיקות פונקציונליות של שתי הרשתיות על ידי<em&gt; In vivo</emמערכת electroretinogram&gt;

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

שיטת אלקטרו עבור תגובות מתח תאיים הקלטה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור ו interneurons יאירו גירויים<em&gt; In vivo</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier (BBB). Rats with induced ischemic stroke were established and used as in vivo models to investigate the functional integrity of the BBB. Spectrophotometric detection of Evans blue (EB) in the brain samples with ischemic injury could provide reliable justification for the research and development of novel therapeutic modalities. This method generates reproducible results, and is applicable in any laboratory without a need for special equipment. Here, we present a visualized and technical guideline on the detection of the extravasation of EB following induction of ischemic stroke in rats.

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

The overall goal of this procedure is to provide a highly reproducible technique for in vivo assessment of the blood-brain barrier disruption in rat models of ischemic stroke.

הערכה In Vivo של מחסום הדם - מוח שיבוש במודל של עכברים של שבץ איסכמי

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

מודל טרום קליני להעריך את ההתאוששות המוח לאחר שבץ חריף בחולדות

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system. For example, they protect the brain from the skull and anchor/organize the vascular and neuronal supply of the cortex. However, the meninges are also implicated in nervous system disorders such as migraine, where the pain experienced during a migraine is attributed to local sterile inflammation and subsequent activation of local nociceptive afferents. Of the layers in the meninges, the dura mater is of particular interest in the pathophysiology of migraines. It is highly vascularized, harbors local nociceptive neurons, and is home to a diverse array of resident cells such as immune cells. Subtle changes in the local meningeal microenvironment may lead to activation and sensitization of dural perivascular nociceptors, thus leading to migraine pain. Studies have sought to address how dural afferents become activated/sensitized by using either in vivo electrophysiology, imaging techniques, or behavioral models, but these commonly require very invasive surgeries. This protocol presents a method for comparatively non-invasive application of compounds on the dura mater in mice and a suitable method for measuring headache-like tactile sensitivity using periorbital von Frey testing following dural stimulation. This method maintains the integrity of the dura and skull and reduces confounding effects from invasive techniques by injecting substances through a 0.65 mm modified cannula at the junction of unfused sagittal and lambdoid sutures. This preclinical model will allow researchers to investigate a wide range of dural stimuli and their role in the pathological progression of migraine, such as nociceptor activation, immune cell activation, vascular changes, and pain behaviors, all while maintaining injury-free conditions to the skull and meninges.

The most notable symptom of migraine is severe head pain, and it is hypothesized that this is mediated by sensory neurons innervating the meninges. Here, we present a method to locally apply substances to the dura in a minimally invasive manner while using facial hypersensitivity as an output.

גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...