הפרוטוקול שלנו נועד לבצע בדיקה נאותה עבור זבוב הפירות, שהוא אורגניזם מודל רב עוצמה המאפשר לעצב עבור כל הגנים, הקולטנים, הנוירונים וראשי נוירו-פסיכיאטריה המעורבים בתחושת בדיקה וצריכת מזון. כמו בני אדם לטוס כמו מזון כי טעם:מתוק, מעט מלוח, מעט חמוץ או לדחות מזון כי טעם מריר, מלוח מדי או חמוץ מדי. העוצמה של טכניקה זו נובעת מהמהירות והנוחות.
באפשרותך לבדוק זבובים רבים ושונים בזמן קצר PRH ללא התקנה מורכבת. השיטה שלנו היא מעולה, מעולה assay להבנה אם זבובים כמו, בדיוק כמו מזון מסוים, כמו גם איך מוצרים גנים מסוימים משפיעים על העדפת הטעם. קביעה אם בעלי חיים לקבל או לדחות מזונות מסוימים יכול להיות מאתגר.
לכן חשוב לקבוע פרוטוקול סטנדרטי לבדיקת העדפת טעם של בעלי חיים. כדי להכין בקבוקונים רעבים לבדיקה, לדחוס באופן רופף חתיכת רקמה בתחתית כל בקבוקון זבוב פלסטיק ריק לכל סוג גן זבוב להיבדק. כך שהנייר ממלא את החלל הזה מבלי ליצור מסה צפופה, בערך שלושה מיליליטר של מים טהורים לכל בקבוקון כדי לרוויה מלאה של הרקמות ללא מים עומדים.
דואג כי אין טיפות גדולות של מים עודפים על הקירות של בקבוקונים. לחלופין, ניתן להחליף חמישה מיליליטרים של 1%אגרו ללא סוכרוז בנייר הספוג, 24 שעות לפני הניסוי שהרדים זבובים בני יומיים עד ארבעה ימים ומיין את הזבובים לקבוצות של כ-70. לאחר מכן הוסף כל קבוצה של זבובים לרעב נתעב ולתייג כל בקבוקון עם הגנוטיפ ואת הזמן של חניכה רעב.
לפני ביצוע ניסוי, להכין מגוון של דילול עבור כל צבע באמצעות אותו מזון עם כל צבע צבע שונה. בשילוב 0.5 גרם של אגרוס עם 50 מיליליטר של מים טהורים בכלי בטוח מיקרוגל לחמם את הפתרון אגרו עד שהוא מומס ערבוב לפי הצורך. ממיסים כל רכיב מזון, כולל סוכרוז וכל תרכובות ניסיוניות במים בריכוז של פי 100 ומעלה של הריכוז הסופי שנבדק.
ומערבבים את צבע האגרו ותרכובת ניסיונית רצויה בצינורות צנטריפוגה חרוטים ופוליפרופילן. לאחר ערבוב מניחים את הצינורות באמבט המים של 60 מעלות צלזיוס עד להפצה ומוסיפים מיליליטר אחד של צבע אחד של פתרונות המזון והצבע הניסיוניים לצד אחד של צלחת ההספד הראשונה. אפשר אגרוס להתקרר עד המשרד לפני הוספת מיליליטר אחד של פתרון מזון שליטה, שכותרתו עם צבע צבע השני לצד השני של המנה.
ואז לחזור על הכנת צלחת assay, עם שליטה הפוכה זוג פתרון צבע ניסיוני. השתמש בתוצאות כדי לזהות שני ריכוזי צבע המניבים מדד העדפה של אפס. כאשר לא מתווסף תרכובת ניסיונית.
כדי לבצע מבחני הזנה דו-כיווניים. הראשון שיתק זמנית זבוב ניסיוני אחד נתעב במשך שלוש עד חמש דקות על קרח עד שלא נצפו פעילויות מוטוריות ברורות כגון טיסה וטיפוס. לאחר הזבובים כבר משותק, בעדינות להפוך את הבקבוקון ואת הקש כדי להעביר את הזבובים לתוך תא התחת ולאחר מכן הניח במהירות את המכסה על התא.
כאשר כל הקבוצות הועברו להעביר את כל תאי ההסתערות לחלל חשוך וסגור במשך 90 דקות. בסוף התסדרית להפוך את התאים במינוס 20 מעלות צלזיוס מקפיא, במשך כשעה. לפני הצבת כל תא תחת מיקרוסקופ סטריאו כדי לבחון את צבע הבטן של הזבובים בכל קבוצת ניסוי.
לספור זבוב, אם הבטן היא יותר מ 50% צבעוני המציין האכלה חזקה, להשליך את כל הזבובים שבהם הבטן מכילה רק נקודת מזון זעירה, אשר מעיד על אכילה לקויה. כאשר כל הזבובים נספרו, השתמש במשוואה כדי לכמת את מדד העדפות המזון עבור כל קבוצה. במהלך המהלך, מנה של 35 מ"מ חולקה לשבועיים נאכל בתאים המכילים את מזונו של אגרו, יחד עם צבע אדום או כחול.
כדי לא לכלול הטיית צבע, ריכוזי הצבע הכחול והאדום שוכללו בקפידה כדי להניב העדפת אפס משוערת כאשר רק שני צבעים אלה נוספו, 90 דקות לאחר זבוב מבוגר מורעב רטוב טעינת צבעי בטן bly הופיע כחול או אדום. אם החיה צרכה בעיקר מזון כחול או אדום, בהתאמה, אם זבוב נצרך הן כחול ואדום, הבטן נראתה סגולה. רק זבובים שבלעו כמות ניכרת של מזון קיבלו ציון, בעוד זבובים עם צריכת מזון לא מספקת לא נספרו.
השוואת צלחת פטרי זו המבוססת על מבחנים לצלחת מרובת הבארות, גילתה ששתי שיטות ההאכלה העניקו למעשה את אותן תוצאות האכלה בתגובה למזון מתוק, מר ומלוח בזבובים מסוג בר. יש לציין, עם זאת זה הרבה יותר מהר להכין ולהפיץ מזון בצלחת פטרי מאשר בצלחת רב באר 60 היטב. הקפד לזהות איזה ריכוז צבע להשתמש במיוחד לאחר ביצוע אצווה דיאטה חדשה.
ריכוז זה יכול להיות שונה בין קווי זבוב. הזוג שלנו היום מבוסס על שתי אפשרויות מבחנים הוא חזק מאוד מדי. עבורך לשאול איך זבובים, לחוש הן מסגרת פנימית-חיצונית פגום למצב אמיתי האכלה והתנהגות מתאימה.
