עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות בארה&quot;ב (NIH) AI091759 ו קרוהן קוליטיס קרן של ויליאם של אמריקה ואת שלבי Modell משפחה פרס קרן מחקר (ל MN). Schistosome נגועים עכברים סופקו על ידי מרכז המשאבים NIAID Schistosome (חוזה NIAID N01 A130026).

1. טיהור Schistosoma mansoni ביצים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדביק שוויצרי-Webster עכברים עם cercariae schistosome, המהווה את הבמה זיהומיות במחזור החיים Schistosoma 8. לחלופין, לקבל schistosome נגועים עכברים ממשאב NIAID Schistosomiasis מרכז ( <a href="http://www.schisto-resource.org/" target="_blank">http://www.schisto-resource.org/~~V</a> ). השאירו עכברים 6-7 שבועות לאחר ההדבקה, ועד אז נקודות, ביצים נמצאים בכבד ניתן לשחזר כמפורט להלן (ראו איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים עם CO 2, להרטיב עם אתנול 70%. מניחים על גבי העכבר. השתמש מלקחיים קהים ומספריים לחתוך העור הצפק הבסיסית. הכבד בלו, הממוקמת מתחת בית החזה והסרעפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשר טחון דק כבדי ולהוסיף 20 מ&quot;ל לכל הכבד של תערובת העיכול, המורכבת collagenase / dispase (0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל), פניצילין (100 U / ml) וסטרפטומיצין (100 מיקרוגרם / מ&quot;ל) ב PBS. שים mixtיור ב צינור פלקון 50 מ&quot;ל ו דגירה לילה 37 ° C שאכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרכזת התערובת ב 400 דקות XG / 3/20 ° C. בעדינות יוצקים את הנוזל העודף למלא צינורית עם PBS. סרכזת שוב לחזור לשטוף PBS. לאחר צנטריפוגה האחרון, resuspend גלולה ב 25 מ&quot;ל PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסננים את גלולה resuspended דרך המטבח הסטנדרטי מתכתי מסננת (שימוש 50 מ&quot;ל במזרק הבוכנה לכתוש את חתיכות כבד אל תוך כוס זכוכית), ולאחר מכן להעביר את התערובת דרך מסננת דקה (להשתמש במזרק 10 מ&quot;ל לדחוף את התערובת דרך מסננת את הקנס לתוך כוס זכוכית 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים תערובת מתוחה של צינור פלקון 50 מ&quot;ל. צנטריפוגה ב 400 XG / 5 דקות / 20 ° C. בזהירות לשפוך את supernatant מבלי לאבד גלולה. Resuspend גלולה ב 3 מ&quot;ל PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים בעדינות על שכבת Percoll 20%, 40 מ&quot;ל של צבע 8 מ&quot;ל Percoll ו 32 מ&quot;ל 0.25M סוכרוז (FW = 342.3 אז 8.56 גרם sucrose/100 מ&quot;ל H 2 0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרכזת 10 דקות / XG 800/20 ° C. פיפטה אתד לבטל את השכבה העליונה של דביקות בתאי הכבד. הסר ביצה גלולה בתחתית עם טפטפת העברת להכניס צינור פלקון 15 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף גלולה 3X ב 10 מ&quot;ל PBS / 1 mM EDTA / 1 מ&quot;מ EGTA הגדרות באמצעות צנטריפוגות: 3 דקות / 30 XG / 20 ° C. Resuspend ב 500 PBS μL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבת תערובת על Percoll 25% חדש, 10 מ&quot;ל שיפוע (2.5 מ&quot;ל Percoll ו -7.5 מ&quot;ל 0.25M סוכרוז) באמצעות הגדרות צנטריפוגות: 10 דק &#39;/ 800 XG / 20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 3X ב 10 מ&quot;ל PBS באמצעות הגדרות צנטריפוגות: 3 דקות / 30 XG / 20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשנת לשטוף האחרון 10 מ&quot;ל, 100 μL להסיר לספור ביצים. ביצים ליישב במהירות, כך צינור פלקון חייב להיות מעורב גם לפני הוצאת המדגם. לדלל את מדגם 100 μL עם 900 PBS μL. 100 μL של תערובת יש לספור טיפות על שקופיות מיקרוסקופ באמצעות מיקרוסקופ לנתח (01:10 דילול). רחב נשא טיפים פיפטה יש להשתמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend ביצים על 50,000 ביצים / מ&quot;ל ​​PBS. ביצים ניתן לאחסן במשך מספר חודשים ב -80 ° C, מופשר פעם או twicדואר לשימוש. לפני השימוש, לבדוק תחת מיקרוסקופ על מנת להבטיח כי ביצים הם עדיין שלם (ראה איור. 1). </li></ol> 2. רגישות Intraperitoneal עם ס &#39; mansoni ביצים: יום: 0 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין ביצים על 5000 eggs/100 PBS μL בצינור מ&quot;ל 5 snapcap. להזרקה, מעריכים ביצים 50% יותר ממה שנחוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען מחט מד 3/4inch 23 ו מזרק 1 מ&quot;ל עם μL 100 ההשעיה ביצה לכל עכבר. ביצים להתיישב, אז המחט עומס עם ביצים בסמוך לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוק מזרק הלוך ושוב לערבב ביצים לפני כל הזרקה, ולא להזריק 100 intraperitoneally μL של השעיה לכל עכבר. </li></ol> 3. רטרו מסלולית אתגר תוך ורידי עם ס &#39; mansoni ביצים: יום 14 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין ביצים לעיל על μL eggs/100 5000. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים בתא מיוחד עם isoflurane (4%), או intraperitoneally עם xylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) קטמין (120 מ&quot;ג / ק&quot;ג). עומק anesthesia נקבע על ידי צביטה של ​​שודד דרכים ולהבטיח שום תגובה פיזית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הטעינה של מזרק 1 מ&quot;ל ו - 23 מחט מד 3/4inch עם ביצים, להשתמש במלקחיים כדי לכופף את המחט בזווית של 90 ° עם שיפוע כלפי מטה לתוך זווית. להבטיח כי בועות לא נוכחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם העכבר בצד אחד. לחזור בו העור ולכן העין לא לבלוט, וכן להזרים 100 μL לתוך כלי מאחורי גלגל העין ב 45 מעלות זווית לאף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגת המחט להפעיל לחץ קל לשלוט בדימום. </li></ol> כל התהליכים האלה חייבת להיעשות בזהירות ועכברים חייב להיות במעקב עד שהם להתאושש מן ההרדמה. פרוטוקולים אלה אושרו על ידי האוניברסיטה של ​​פנסילבניה בעלי חיים טיפול מוסדי ועדת שימוש (IACUC). 4. קציר הניסוי: 22 יום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים עם CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר רטוב עם אתנול 70%, ואת המקום על הגב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בוטה forcEPS, לתפוס את הבטן העכבר ולעשות חתך קטן בעור. מוציאים בזהירות את העור עם מספריים ולחשוף את בית החזה ואת הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים לפתוח את הצפק. חותכים את אבי העורקים בבטן לשחזר את הדם עם פיפטה פסטר. אחסן על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הכבד עד לחשוף את הסרעפת. שימוש במספריים עדינים לחתוך את הסרעפת. בזהירות לחתוך את בית החזה כדי לחשוף את רקמת הריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחזור בלוטות הלימפה parathymic המנקזים ריאות עם מלקחיים עדינים. אלה תחוב תחת כלוב הצלעות, משני צדי התימוס 9. חנות על הקרח בתקשורת סטריליים 1mL (DMEM השלימו עם 10% חום מומת סרום עגלים עוברית, 100 U / mL פניצילין, 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין, 2 מ&quot;מ L-גלוטמין, 50 מיקרומטר 2-mercaptoethanol, כולם זמינים Invitrogen). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשחזר את BAL, ו לנפח את הריאות לניתוח היסטולוגית, אינטובציה intratracheal יש לבצע. לחשוף את קנה הנשימה על ידי העברת בלוטות הרוק בצד, ואת placiמלקחיים עדינים נג תחת קנה הנשימה. שימוש במספריים עדינים, לחתוך חור באמצע קנה הנשימה, והכנס צינור לריאות. לאבטח את צינורות על ידי קשירת חוט כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף PBS-מלא 1 מ&quot;ל במזרק כדי צינורות ו לנפח את הריאות עם 1 מ&quot;ל PBS. בזהירות לאחזר לשטוף BAL עם מזרק. אחסן על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף paraformaldehyde 4% (PFA) ב-PBS מזרק 1 מ&quot;ל כדי למלא צינורות ו לנפח את הריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את צינורות, ולהדק את החוט כירורגית, כדי למנוע דליפה של PFA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לנתח את רקמת הריאות ומכניסים 50 מ&quot;ל פלקון צינורית עם 5 מ&quot;ל PFA 4%. </li></ol> 5. אופן ההכנה של רקמות ששוחזרו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרום: אחסון הבאה על קרח שעות 30 דקות ל 2 עבור לקרישת הדם, סרום הוא התאושש מן הדם על ידי צנטריפוגה (13,000 XG / 10 דקות / 4 ° C). סרום מאוחסן ב -20 מעלות צלזיוס, ניתן להשתמש ELISAs ציטוקינים או ס mansoni ביצה אנטיגן ספציפי IgG isotype ELISAs <sup&gt; 6, 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלוטות הלימפה: המתלים תא בודד מוכנים וספירת התאים השתמשו כדי להעריך את עוצמת התגובה החיסונית. כדי לבחון את הקיטוב תא Th2, התאים מחדש מגורה עם ס &#39; mansoni אנטיגן הביצה במשך 72 שעות. מכתים ציטוקינים Intracellar ניתן לבדוק על ידי cytometry הזרימה, supernatants ניתן לשחזר ומאוחסנים ב -20 מעלות צלזיוס במשך ELISA של ציטוקינים Th2 (IL-4, IL-5, IL-13) 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BAL: תאים הם pelleted (400 XG / 5 דקות / 4 ° C). נוזל BAL הוא התאושש ומאוחסנים ב -20 ° C לניתוח של ציטוקינים Th2 ידי ELISA. של באל ספירת תאים משמשים readout לדלקת דרכי הנשימה. ההכנות Cytocentrifuge של 10,000-100,000 תאים (500 סל&quot;ד / 5 דקות / 4 ° C), ואחריו מכתים Diffquik תאפשר ספירה של דלקת לחדור 4, 6. לחילופין, תאים של באל ניתן לבדוק על ידי cytometry זרימה 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמת הריאה: רקמת הריאה היא storאד בן לילה ב 4 ° C. רקמות קבוע הוא פרפין, מוטבע, מחולק רכוב על שקופיות לניתוח היסטולוגית ו immunofluorescence. </li></ol> 6. נציג תוצאות בפרוטוקול זה פרטים את כל הצעדים הדרושים כדי (א) להכין מטוהרים Schistosoma ביצים mansoni בשימוש עבור vivo (איור 1), (ii) לרגש ולאתגר עכברים עם ביצים אלה (iii) לשחזר איברים לבדיקה של תגובה דלקתית ריאות. זה במודל vivo reproducibly מניע תגובה דלקתית חזקה ריאות Th2. זה מוצג על ידי דלקת דרכי הנשימה ואת eosinophilia כמו דמיינו ידי ספירת תאים של באל ותכשירים cytocentrifuge (איור 2). H &amp; E-מוכתמים סעיפים הריאות ניתן לבדוק את הביצה הנגרמת גרנולומות (איור 3 א), וכן צביעה של חלקים immunofluorescent ריאה מאפשר הדמיה של מקרופאגים מופעל לחילופין ו Th2 ציטוקינים המושרה גנים כגון Resisכמו פח (RELM) מולקולה α (איור 3 ב). אנטיגן ספציפי CD4 בתגובה ציטוקינים Th2 נבדק על ידי ELISAs של IL-5, IL-4 ו IL-13 של אנטיגן, גירוי התאים הצומת parathymic הלימפה (איור 4). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig1.jpg" /> איור 1 Schistosoma mansoni מודל הביצה הזרקת נציג תמונות של כבדי granulomatous, האופייניים S.mansoni, ביצה הנטל גבוהות, של ביצים S.mansoni מוצגים -.. הגודל הממוצע (L) 120 מיקרומטר ידי (W) 50 מיקרומטר. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig2.jpg" /> איור 2. ס הזרקת mansoni ביצה מניע דלקת דרכי הנשימה. א מספרים סלולריים של באל (X10 5) מתוך נאיביות (N) או S.mansoni (SM) ביצה הזריק לעכברים. * P &lt;0.05. ב &#39;הכנה Cytocentrifuge של תאים ראש. מק, מקרופגים, איוs, eosinophil; הלימפה, הלימפוציטים. בר, 10 מיקרומטר. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig3.jpg" /> איור 3. ויזואליזציה של גרנולומות ריאתי ומקרופגים מופעל לחילופין המקיפים את הביצה S.mansoni. א גרנולומה ריאתי סביב הביצה Sm (שחור חץ) היה דמיינו H &amp; E-מוכתמים סעיפים ריאה. ב &#39;מכתים immunofluorescence עבור RELMα (ירוק), הקולטן מנוז (אדום) DAPI (כחול) מגלה לחילופין מקרופאגים משופעלים (חץ לבן) גרנולומה סביב autofluorescent Sm ביצה (חץ שחור). בר, 50 מיקרומטר. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3905/3905fig4.jpg" /> איור 4. S.mansoni אנטיגן ספציפי ביצה ציטוקינים בתגובה Th2. ניקוז parathymic קשרי הלימפה תאים בעכברים תמימים (N) או SM ביצים מוזרק היו מגורה עם Sm &lt;/ Em&gt; אנטיגן הביצה במשך 72 שעות, ואחריו ELISA של supernatants של IL-4, IL-5 ו-IL-13. קנה מידה, ng / mL. * P &lt;0.05.

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+control+of+schistosomiasis+and+soil-transmitted+helminthiasis:+report+of+a+WHO+expert+committee.">Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee.</a> WHO Technical Report Series 912. , (2002).</li><li>Pearce, E. J., MacDonald, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunobiology+of+schistosomiasis.">The immunobiology of schistosomiasis.</a> Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).</li><li>Sandler, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+profiles+during+acute+pathogen-induced+pulmonary+inflammation+reveal+divergent+roles+for+Th1+and+th2+responses+in+tissue+repair.">Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair.</a> J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).</li><li>Perrigoue, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-31-IL-31R+interactions+negatively+regulate+type+2+inflammation+in+the+lung.">IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung.</a> J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).</li><li>Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulomas+in+schistosome+and+mycobacterial+infections:+a+model+of+local+immune+responses.">Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses.</a> Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).</li><li>Nair, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophage-derived+RELM-{alpha}+is+a+negative+regulator+of+type+2+inflammation+in+the+lung.">Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung.</a> J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).</li><li>Dalton, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+of+schistosome+eggs+and+miracidia+free+of+contaminating+host+tissues.">A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues.</a> Parasitology. 115, 29-32 (1997).</li><li>Lewis, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+laboratory+maintenance+of+Schistosoma+mansoni,+with+observations+on+three+schistosome/snail+host+combinations.">Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations.</a> J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).</li><li>Tilney, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+lymphatic+drainage+in+the+adult+laboratory+rat.">Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat.</a> J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).</li><li>Lewis, F., Coligan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schistosomiasis.">Schistosomiasis.</a> Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).</li><li>Kaplan, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+cells+are+required+for+the+Schistosoma+mansoni+egg-induced+granulomatous+response.">Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response.</a> J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).</li><li>Cheever, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+of+hepatic+fibrosis+and+granuloma+size+among+mouse+strains+infected+with+Schistosoma+mansoni.">Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).</li></ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

כאן, מודל העסקת Schistosoma ביצים mansoni לגרום לדלקת ריאות מסוג 2 מתואר. התכונות האופייניות של הדגם הזה כוללות את התגובה החיסונית חזקה Th2, דלקת דרכי הנשימה היווצרות גרנולומה ריאתי. מאז פרמטרים אלה נשענים על תגובות מסוג CD4 סלולריים Th2 11, זהו מודל שימושי כדי לחקור ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> גודל / תיאור </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td></tr><tr><td> Collagenase / Dispase </td><td> 500 מ&quot;ג </td><td> רוש ומדע יישומי </td><td> 11 097 113 001 </td></tr><tr><td> הבדל במרכול המה 3 כתמים </td><td> לארוז </td><td> פישר סיינטיפיק ושות LLC </td><td> 122-911 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> נוזל </td><td> Gibco </td><td> 11965 </td></tr><tr><td> פלקון 50 מ&quot;ל </td><td> לארוז </td><td> בז </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> Intramedic Tubing PE </td><td> 0.58 מ&quot;מ </td><td> בקטון דיקינסון ושות&#39; </td><td> 427410 </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> 250 מ&quot;ל </td><td> אבוט לבריאות בעלי חיים </td><td> 52600405 </td></tr><tr><td> קטמין </td><td> 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> Fort Dodge, לבריאות בעלי חיים </TD&gt; <td> N / A </td></tr><tr><td> הקולטן נוגדנים מנוז </td><td> ביוטין </td><td> עבד Serotec </td><td> MCA2235B </td></tr><tr><td> מסננת מתכת </td><td> מטבח רגיל מסננת </td><td> יעד </td><td> לורנטיס </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> 16% </td><td> אלקטרונים Microsc. מדעי </td><td> 15710 </td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> 100x </td><td> Gibco </td><td> 15070 </td></tr><tr><td> Percoll </td><td> 1 ליטר </td><td> GE Healthcare Biosciences </td><td> 0891 17 01 </td></tr><tr><td> RELMα נוגדן </td><td> 50 מיקרוגרם </td><td> Peprotech </td><td> 500-P214 </td></tr><tr><td> כירורגי נושא </td><td> 2.0 USP 100 yds </td><td> כירורגי Specialties קורפ </td><td> SP118 </td></tr><tr><td> מחט המזרק </td><td> 23g, 3/4 אינץ&#39; </td><td> BD Vacutainer מעבדה. מד. </td><td>305143 </td></tr><tr><td> ארה&quot;ב תקני בדיקה Sieve </td><td> 150 מיקרומטר, 0.0059 &quot; </td><td> WS טיילר, Inc </td><td> ASTME-11, Spec. מס &#39;100 </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> שר המשקים </td><td> N / A </td></tr></tbody></table>

using eggs from schistosoma mansoni as an in vivo model of helminth-induced lung inflammation

טפילים Schistosoma הם תולעים דם להדביק כ 200 מיליון אנשים ברחבי העולם 1. זיהום כרוני עם Schistosoma, פתולוגיה חמורה, לרבות סיסטיק הכבד splenomegaly, נגרמת על ידי התגובה החיסונית את הביצים טפיל ולא הטפיל עצמו 2. ביצי הטפיל לגרום תגובה Th2 מאופיינת בייצור IL-4, IL-5 ו-IL-13, הפעלה חלופית של מקרופאגים ועל גיוס של אאוזינופילים. כאן אנו מתארים זריקת ביצים Schistosoma mansoni כמודל לבחון טפיל ספציפיים תגובות ציטוקינים Th2 בריאה ובלוטות לימפה וניקוז, היווצרות של גרנולומות ריאתי המקיפים את הביצה, ודלקות בדרכי הנשימה. בעקבות רגישות intraperitoneal ואתגר תוך ורידי, ש &#39; ביצים mansoni מועברים אל הריאות באמצעות עורקי הריאה שם הם כלואים בתוך parenchyma ריאותגרנולומות על ידי המורכבות של לימפוציטים, אאוזינופילים ומקרופגים מופעל לחילופין 3-6. קשורה להיווצרות דלקת, גרנולומה של broncho-מכתשיים מקומות, הרחבת קשרי הלימפה מסוג CD4 ו מרוקנים הפעלת תא T ניתן לצפות. כאן בפירוט את הפרוטוקול לבידוד Schistosoma ביצים mansoni מ כבדי נגועים (שונה מ 7), רגישות ומאתגרת עכברים, לשחזר את אברי (broncho-מכתשיים שטיפה (BAL), ריאות ובלוטות לימפה וניקוז) לניתוח. אנו גם נציג היסטולוגית ונתונים חיסוניות והצעות חיסוניות ניתוח נוסף. באופן כללי, שיטה זו מספקת במודל vivo לחקור helminth המושרה תגובות חיסוניות בריאה, שהוא החלים רחב המחקר של מחלות דלקתיות, כולל דלקת Th2 helminth, מחלות fibrotic, דלקת אלרגית ואסטמה. היתרונות של מודל זה לחקר typה 2 דלקת ריאות כוללים שחזור של תגובה דלקתית חזקה Th2 בריאה ובלוטות לימפה וניקוז, להקל על הערכה של דלקת בבדיקה היסטולוגית של גרנולומות המקיפים את הביצה, והוא חסר יכולת אחסון לטווח ארוך של הטפיל ביצים.

Watch this Scientific Journal Video about Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation at JoVE.com

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma ביצים mansoni הם לגירוי חזק מסוג T helper 2 (Th2) בתגובה החיסונית, מאפיין של דלקת טפיל, אסטמה ודלקת אלרגית. פרוטוקול זה מנצל ס mansoni ביצה הזרקת ליצור CD4 תגובה ציטוקינים Th2-Induced דלקת בריאה, המאופיינת היווצרות גרנולומה ריאות סביב הביצה, eosinophilia והפעלה מקרופאג חלופי.

שימוש ביצים מ<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; כמו<em&gt; ב-vivo</em&gt; דגם של דלקת ריאות הנגרמת helminth

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

using-eggs-from-schistosoma-mansoni-as-an-vivo-model-helminth-induced

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

13.7K Views.  University of Pennsylvania. Schistosoma ביצים mansoni הם לגירוי חזק מסוג T helper 2 (Th2) בתגובה החיסונית, מאפיין של דלקת טפיל, אסטמה ודלקת אלרגית. פרוטוקול זה מנצל ס mansoni ביצה הזרקת ליצור CD4 תגובה ציטוקינים Th2-Induced דלקת בריאה, המאופיינת היווצרות גרנולומה ריאות סביב הביצה, eosinophilia והפעלה מקרופא...

Video: Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ranks second to malaria among parasitic diseases in terms of public health and socio-economic impact (1-4). Schistosome parasites are trematode worms with a complex life cycle interchanging between a parasitic life in molluscan and mammalian hosts with intervening free-swimming stages. Briefly, free-swimming cercariae infect a mammalian host by penetrating the skin with the aid of secreted proteases, during which time the cercariae lose their tails, transforming into schistosomules. The schistosomules must now evade the host immune system, develop a gut for digestion of red blood cells, and migrate though the lungs and portal circulation en route to their final destination in the hepatic portal system and eventually the mesenteric veins (for S. mansoni) where male and female worms pair and mate, producing hundreds of eggs daily. Some of the eggs are excreted from the body into fresh water, where the eggs hatch into free-swimming miracidia (5-10). The miracidia infect specific snail species and transform into mother and daughter sporocysts, which in turn, produce infective cercariae, completing the life cycle. Unfortunately, the entire schistosome life cycle cannot be cultured in vitro, but infective cercariae can be transformed into schistosomules, and the schistosomules can be cultured for weeks for the analysis of schistosome development in vitro or microarray analysis. In this protocol, we provide a visual description of cercarial transformation and in vitro culturing of schistosomules. We shed infectious cercariae from the snail host Biomphalaria glabrata and manually transform them into schistosomules by detaching their tails using an emulsifying double-ended needle. The in vitro cercarial transformation and schistosomules culture techniques described avoid the use of a mammalian host, which simplifies visualization of schistosomes and facilitates the collection of the parasite for experimental analysis. in vitro transformation and culturing techniques of schistosomes have been done for years (11, 12), but no visual protocols have been developed that are available to the entire community.

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

We describe an in vitro method for culturing schistosomula of the flatworm parasite Schistosoma mansoni, via the harvesting and transformation of infective cercariae from the fresh water snail intermediate host Biomphalaria glabrata.

טרנספורמציה Cercarial ו במבחנה טיפוח Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that distinguish acute and chronic inflammation in mouse models. With tissue damage or pathogen invasion, neutrophils are the first line of defense, playing a major role in mediating the acute inflammatory response. As the inflammatory reaction progresses, circulating monocytes gradually migrate into the site of injury and differentiate into mature macrophages, which mediate chronic inflammation and promote tissue repair by removing tissue debris and producing anti-inflammatory cytokines. Intraperitoneal injection of luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt) enables detection of acute inflammation largely mediated by tissue-infiltrating neutrophils. Luminol specifically reacts with the superoxide generated within the phagosomes of neutrophils since bioluminescence results from a myeloperoxidase (MPO) mediated reaction. Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate) also reacts with superoxide in order to generate bioluminescence. However, lucigenin bioluminescence is independent of MPO and it solely relies on phagocyte NADPH oxidase (Phox) in macrophages during chronic inflammation. Together, luminol and lucigenin allow non-invasive visualization and longitudinal assessment of different phagocyte populations across both acute and chronic inflammatory phases. Given the important role of inflammation in a variety of human diseases, we believe this non-invasive imaging method can help investigate the differential roles of neutrophils and macrophages in a variety of pathological conditions.

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

We describe a non-invasive imaging method for distinguishing inflammatory stages. Systemic delivery of luminol reveals areas of acute inflammation dependent upon MPO activity in neutrophils. In contrast, injection of lucigenin allows for visualization of chronic inflammation dependent upon Phox activity in macrophages.

בשיטת ההדמיה vivo להבחין דלקת אקוטית וכרונית

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter lesions in inflammatory demyelinating disorders like multiple sclerosis (MS). In these disorders, mainly CD8+ T-cells of putative specificity for myelin- and oligodendrocyte-related antigens are found, so that neuronal apoptosis in grey matter lesions may be a collateral effect of these cells. Different types of animal models are established to study the underlying mechanisms of the mentioned pathophysiological processes. However, although they mimic some aspects of MS, it is impossible to dissect the exact mechanism and time course of &#8216;&#8216;collateral&#8217;&#8217; neuronal cell death. To address this course, here we show a protocol to study the mechanisms and time response of neuronal damage following an oligodendrocyte-directed CD8+ T cell attack. To target only the myelin sheath and the oligodendrocytes, in vitro activated oligodendrocyte-specific CD8+ T-cells are transferred into acutely isolated brain slices. After a defined incubation period, myelin and neuronal damage can be analysed in different regions of interest. Potential applications and limitations of this model will be discussed.

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

To address mechanisms of demyelination and neuronal apoptosis in cortical lesions of inflammatory demyelinating disorders, different animal models are used. We here describe an ex vivo approach by using oligodendrocyte-specific CD8+ T-cells on brain slices, resulting in oligodendroglial and neuronal death. Potential applications and limitations of the model are discussed.

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם של התקפת T-Cell-מכוון oligodendrocyte בפרוסות המוח חריף

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous emergence of new influenza virus strains due to mutation and re-assortment complicates the control of the virus and necessitates the permanent development of novel drugs and vaccines. The laboratory-based study of influenza requires a reliable and cost-effective method for the propagation of the virus. Here, a comprehensive protocol is provided for influenza A virus propagation in fertile chicken eggs, which consistently yields high titer viral stocks. In brief, serum pathogen-free (SPF) fertilized chicken eggs are incubated at 37 &#176;C and 55-60% humidity for 10 &#8211; 11 days. Over this period, embryo development can be easily monitored using an egg candler. Virus inoculation is carried out by injection of virus stock into the allantoic cavity using a needle. After 2 days of incubation at 37 &#176;C, the eggs are chilled for at least 4 hr at 4 &#176;C. The eggshell above the air sac and the chorioallantoic membrane are then carefully opened, and the allantoic fluid containing the virus is harvested. The fluid is cleared from debris by centrifugation, aliquoted and transferred to -80 &#176;C for long-term storage. The large amount (5-10 ml of virus-containing fluid per egg) and high virus titer which is usually achieved with this protocol has made the usage of eggs for virus preparation our favorable method, in particular for in vitro studies which require large quantities of virus in which high dosages of the same virus stock are needed.

Fertile chicken eggs are widely used to produce large amounts of human influenza A virus as they provide a convenient and cost-effective system to prove high yields of virus.

רביה וירוס השפעת בembryonated עוף ביצים

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells are therefore characterized as an innate T cell population capable of activating and steering adaptive immune responses. The development of improved techniques for the culture and expansion of murine iNKT cells facilitates the study of iNKT cell biology in in vitro and in vivo model systems. Here we describe an optimized procedure for the isolation and expansion of murine splenic iNKT cells.
Spleens from C57Bl/6 mice are removed, dissected and strained and the resulting cellular suspension is layered over density gradient media. Following centrifugation, splenic mononuclear cells (MNCs) are collected and CD5-positive (CD5+) lymphocytes are enriched for using magnetic beads. iNKT cells within the CD5+ fraction are subsequently stained with &#945;GalCer-loaded CD1d tetramer and purified by fluorescence activated cell sorting (FACS). FACS sorted iNKT cells are then initially cultured in vitro using a combination of recombinant murine cytokines and plate-bound T cell receptor (TCR) stimuli before being expanded in the presence of murine recombinant IL-7. Using this technique, approximately 108 iNKT cells can be generated within 18-20 days of culture, after which they can be used for functional assays in vitro, or for in vivo transfer experiments in mice.

Here we present an adapted protocol that can be used to generate a large number of murine invariant natural killer T cells from mouse spleen. The protocol outlines an approach by which splenic iNKT cells can be enriched for, isolated and expanded in vitro using a limited number of animals and reagents.

שיטה אופטימלית עבור בידוד והרחבת תאי Invariant הטבעי רוצח T מטחול העכבר

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

Improving the speed and accuracy of bacterial detection is important for patient stratification and to ensure the appropriate use of antimicrobials. To achieve this goal, the development of diagnostic techniques to recognize bacterial presence in real-time at the point-of-care is required. Optical imaging for direct identification of bacteria within the host is an attractive approach. Several attempts at chemical probe design and validation have been investigated, however none have yet been successfully translated into the clinic. Here we describe a method for ex vivo validation of bacteria-specific probes for identification of bacteria within the distal lung, imaged by fibered confocal fluorescence microscopy (FCFM). Our model used ex vivo human lung tissue and a clinically approved confocal laser endomicroscopy (CLE) platform to screen novel bacteria-specific imaging compounds, closely mimicking imaging conditions expected to be encountered with patients. Therefore, screening compounds by this technique provides confidence of potential clinical tractability.

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

This technique describes an efficient screening process for evaluating bacteria-specific optical imaging agents within ex vivo human lung tissue, by fibered confocal fluorescence microscopy for the rapid identification of small molecule chemical probe-candidates with translatable potential.

הקרנת אופטי של הרומן חיידקים ספציפיים רגשים על לשעבר Vivo רקמת הריאה האנושית על ידי לייזר קונפוקלי Endomicroscopy

Improving the speed and accuracy of bacterial detection is important for patient stratification and to ensure the appropriate use of antimicrobials. To ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new therapeutics. Additionally, registration of new substances requires appropriate risk assessment with adequate testing systems to avoid the risk of individuals being harmed, for example, in the working environment. Such risk assessments are usually conducted in animal studies. In view of the 3Rs principle and public skepticism against animal experiments, human alternative methods, such as precision-cut lung slices (PCLS), have been evolving. The present paper describes the ex vivo technique of human PCLS to study the immunomodulatory potential of low-molecular-weight substances, such as ammonium hexachloroplatinate (HClPt). Measured endpoints include viability and local respiratory inflammation, marked by altered secretion of cytokines and chemokines. Pro-inflammatory cytokines, tumor necrosis factor alpha (TNF-&#945;), and interleukin 1 alpha (IL-1&#945;) were significantly increased in human PCLS after exposure to a sub-toxic concentration of HClPt. Even though the technique of PCLS has been substantially optimized over the past decades, its applicability for the testing of immunomodulation is still in development. Therefore, the results presented here are preliminary, even though they show the potential of human PCLS as a valuable tool in respiratory research.

In view of the 3Rs principle, respiratory models as alternatives to animal studies are evolving. Especially for risk assessment of respiratory substances, there is a lack of appropriate assays. Here, we describe the use of human precision-cut lung slices for the assessment of airborne substances.

הערכת ציטוטוקסיות ואפקטים Immunomodulatory של חומרים אמבריולוגיה דיוק-לחתוך פרוסות

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Extracellular vesicles (EVs) are membranous vesicles released by a variety of cells into the extracellular microenvironment. EVs represent a population of heterogeneous vesicles, whose size range between 40 and 1,000 nm. Accumulated evidence indicated that EVs play important regulatory roles in pathogen-host interactions. A deep understanding of schistosome EVs should provide insights into the mechanisms underlying schistosome-host interactions, enabling development of novel strategies against schistosomiasis. Here, we aim to further study EVs functions in schistosomes by presenting a protocol for the isolation and characterization of EVs from adult Schistosoma japonicum (S. japonicum). EVs were isolated from in vitro culture medium using centrifugation combined with a commercial exosome isolation kit. The isolated S. japonicum EVs (SjEVs) typically possess a diameter of 100 - 400 nm, and are characterized by transmission electronic microscopy and western blotting. The usage of PKH67 dye-labeled SjEVs has demonstrated that SjEVs are internalized by the recipient cells. Overall, our protocol provides an alternative method for isolating EVs from adult schistosomes; the isolated SjEVs may be suitable for functional analysis.

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Here, we present a protocol to describe extracellular vesicles (EVs) isolation in in vitro cultured medium from adult Schistosoma japonicum.

בידוד ושלפוחיות אפיון של חוץ-תאית מן הבוגרים עלקת הבילהרציה japonicum

Extracellular vesicles (EVs) are membranous vesicles released by a variety of cells into the extracellular microenvironment. EVs represent a population of ...