המחברים מודים ליישובים במחוז יונאן, רפובליקה העממית של סין וAgboville, חוף שנהב, להשתתפותם במחקרים שתוארו לעיל. אנו חייבים תודה לצוותות השטח המקומיים שסייעו בבדיקה וביצוע של הפרוטוקולים. אנו רוצים להודות במיוחד לעמיתים הבאים מהבריאות השויצרית הטרופי ואישי מכון: איווט Endriss למתן את התמונות המיקרוסקופיות, Hanspeter מארטי וצוות שלו למעבדה ותמיכת סטפני Krauth על סיועה בעת צילומי וידאו. לבסוף, אנו מודים לשני השופטים האלמונים לסדרה של הערות מועילות.

1. טכניקת קאטו כץ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בתבנית סטנדרטית קאטו כץ עם חור להחזקת 41.7 מיליגרם (מ&quot;ג) של צואה בשקופית מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סקופ 2-3 גרם (ז) של דגימת צואה טרייה על גבי פיסת עיתון או נייר אלומיניום, ולחץ על חתיכת חוט או רשת פלסטיק על גבי מסננת לזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מרית פלסטיק קטנה, מגרד את החומר המנופה את הרשת ולמלא לגמרי את החור בתבנית קאטו כץ עם זה. כדי להסיר חומר צואתי עודף, רמת התוכן של החור בעזרת המרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנכי להסיר את התבנית ללא מפריע את החומר צואתי עכשיו דבקות שקופיות מיקרוסקופ. התבנית והמרית ניתן לנקות במים עם חומר ניקוי, ושימוש חוזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח חתיכת הנייר צלופן, מראש ספוג בפתרון ירוק גליצרין-מלכיט לפחות 24 שעות (שעות), על דגימת הצואה בשקופית מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפיץ את החומר צואתי למריחה עבה, לחץ בעדינות מייקר נקישקופית היקף נגד שקופיות המדגם, באופן שווה הפצת החומר בתוך המעגל בקוטר מעט קטן יותר מרוחבו של שקופיות מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר השקופית כדי לנקות למשך 30-60 דקות (דקות), שבמהלכו חייבות להרחיק את השקופיות מאור השמש ישיר. ואז, באופן שיטתי לבחון את המריחה העבה תחת מיקרוסקופ אור (גדלת 40-100x). לספור את מספר ביצי sth ורבד לפי מין (כלומר, A.lumbricoides, T.trichiura, ותולעי קרס). מן ראוי לציין כי ביצי helminth אחרות (למשל Schistosoma mansoni) יכולות גם להיות מזוהות על ידי שיטה זו ויש למנות והוקלטו בנפרד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבל אומדן סטנדרטי של עוצמת הזיהום, הביע באופן קונבנציונלי כמספר ביצים לגרם הצואה (EPG), להכפיל את מספר הביצים ב -24 (24 x 41.7 מ&quot;ג ≈ 1 ז). </li></ol> 2. טכניקת Baermann <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעמיד דוכן שיכול להכיל זכוכית משפך ולצרף צינור גומי, נסגר שנינותקליפ חה, לתחתית המשפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מסננת או חתיכת מסך חוט בצורה חרוטה, במשפך ושכבתה עם פיסת הגזה רפואית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את המשפך במים ברז ולהבטיח כי הגדרה שלמה לא ידלוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סקופ 20-30 גרם צואה טריה לאמצע הגזה הרפואית ולוודא שהוא שקוע לחלוטין במים. להוסיף עוד מים במידת צורך. מקפל את הבד הרפואי על המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלמטה, להאיר אור מלאכותי במשפך ל2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסנן 50 מ&quot;ל (מ&quot;ל) של החלק התחתון של המים במשפך לתוך צינור צנטריפוגות ידי שחרור קליפ על צינור הגומי בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה מים שנאספו ב 600 XG (כוח הצנטריפוגלי יחסי) למשך 5 דקות ויוצקים בזהירות את supernatant מבלי להפריע למשקעים. שמור את הטיפין האחרונות בצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re-להשעות את 2 טיפי המשקעים ופיפטה של ​​הפתרון לשקופית מיקרוסקופ ולבחון את השקופיתתחת מיקרוסקופ אור (גדלת 40X לאיתור והגדלה 100-400x אישור מינים). זחלים של השלב הראשון (L1) של ס &#39; stercoralis הם חיים ופעיל לעבור מתחת למיקרוסקופ. </li></ol> 3. מבחן הפעלת הסעות 20-מ &#39; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד מסלול שטוח וישר 20-מ &#39;ריצה ולסמן אותו עם גביעים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עזרת משתתף המבחן ללבוש לפקח על קצב לב על פרק כף היד והמשדר המקביל סביב החזה 18. ציוד זה מאפשר לקצב הלב של המשתתף שנמדד לפני ואחרי הבדיקה ובכך עוקב אחר אם המשתתף הפעיל מאמץ מקסימאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להורות למשתתף לרוץ הלוך ושוב על המסלול על ידי ביצוע הקצב של אותות קול מוקלטים מראש תוחמים הקפות 20-מ &#39;. החל ממהירות ריצה של 8.5 ק&quot;מ לשעה (ק&quot;מ / שעה), תדירות של תמרורי עליית מרווחים 20-מ &#39;על ידי מקבילה של 0.5 ק&quot;מ / שעה בכל דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא הבמשתתף מתחיל מרווח חדש 20-מ &#39;בכל פעם שנשמעה אות ומסיים אותו לפני האות הבאה מגיעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עצור את המשתתף אם הוא / היא לא פועלת בהתאם לקצב שני מרווחים רצופים 20-מ &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את מהירות ריצה הגבוהה ביותר שצוינה עבור המרווח האחרון שהמשתתף השלים באופן מלא, יחד עם הגיל והמין של המשתתף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שקצב הלב המושג בסוף הבדיקה הוא קצב הלב המקסימאלי של הילד 19. אם קצב לב זה לא הגיע, הילד עלול לא משקיעים מאמץ מקסימאלי, ולכן יש לחזור על הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את הקיבולת המרבית האירובית (VO 2 max) של המשתתף, תוך שימוש במשוואה שהציגה לז&#39;ה ועמיתים לעבודה: VO 2 max = 31.025 + 3.238 * מהירות (בק&quot;מ / שעה) - 3.248 * גיל (בשנים) + .1536 * מהירות (בק&quot;מ / שעה) * גיל (בשנים). </li></ol> 4. נציג תוצאות במונחים שלאבחון STH עם טכניקת קאטו כץ, מאפיינים ייחודיים של את ביצי helminth השונות מאפשר זיהוי של רוב המינים 20. את הביצים של A.lumbricoides (מיקרומטר כ 45-75 (מיקרומטר) ארוך ורחב 35-50 מיקרומטר, איור 1) יש קירות מעטפת עבים יותר מאשר את הביצים של T.trichiura (איור 2) ותולעי קרס (איור 3). ביצית מופרה של A.lumbricoides (איור 1) יש מעייל חלבי חיצוני, שגורם לזה להיראות חום זהוב, ואילו ביצה שאינן מופרה חסרת המעייל החיצוני הזה והוא מעט מוארך וגדול יותר באופן כללי. את הביצים של T.trichiura (כ 50 מיקרומטר ארוך ו22 מיקרומטר רחב, איור 2) הן מוארכות ויש לי תקעי קוטב מובחנים. תולעי קרס ביצים (כ 64-76 מיקרומטר ארוך ו36-40 מיקרומטר רחב, איור 3), מצד השני, יש קיר דק מאוד, ואחריו טבעת ברורה סביב אשכול צפוף של תאיםבמרכז הביצה. S.stercoralis זחלי L 1 (איור 4) הם ארוכים מיקרומטר כ 180-380 ויש חלל buccal קצר מאוד. Primordium איברי מין מובהק (מודגש בחץ כחול בתרשים 4) ניתן לראות והזנב של הזחלים (מסומן בחץ אדום באיור 4) יש קצה חד. כהשפעה האמיתית של זיהומי sth על הכושר הגופני של ילדים עדיין נדונה 13,14,15, אין תוצאת נציג להשפעתם בשלב זה. פרשנות של תוצאות בדיקת טיסת מעבורת 20-מ &#39;יכולה להתבצע בדרכים שונות. הכושר הגופני של ילדים ניתן להשוות בין נבדקים נגועים ולא נגועים, שאינם דומים במונחים של גיל ומין, מצבים אחרים שעשוי להיות רלוונטיים לבריאות, מצב סוציו אקונומי, הרגלים תרבותיים. ניתן לעשות זאת בסקר חתך 13,14,15 בימצב STH זיהום וכושר גופני של ילדים נגועים ולא נגועים מוערך בנקודת זמן מסוימת. עוצמת הראיות תהיה גבוהה יותר כאשר בעקבות עיצוב מחקר אקראי ומבוקר שבו הכושר הגופני של ילדים בגיל בית הספר הוא העריך לפני ואחרי טיפול anthelminthic / פלצבו, ומאפשרת גם להערכה קצרת טווח וארוך טווח. אחד נוסף, תוכל לנסות לזהות קשר מנת תגובה אפשרי בין עוצמת זיהומי sth וכושר גופני ולהשוות רמות שונות של multiparasitism 1 עם כושר גופני. בעבודה שהוצגה על ידי יאפ ועמיתים לעבודה 15, כושר גופני, כפי שהוא מתואר על ידי VO 2 max, נמצא להיות מופחת באופן משמעותי בילדים שנדבקו בT.trichiura בהשוואה לילדים שלא נדבקו בT.trichiura (איור 5) . <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3966/3966fig1.jpg" /> Figu<html> 1. מחדש תמונות מיקרוסקופיות של ביצי A.lumbricoides: מופרות () ושאינן מופרות-(ב &#39;) בהגדלת 500x. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3966/3966fig2.jpg" /> איור 2. תמונה מיקרוסקופית של ביצת T.trichiura בהגדלת 500x. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3966/3966fig3.jpg" /> איור 3. תמונה מיקרוסקופית של ביצי תולעי קרס בהגדלת 500x. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3966/3966fig4.jpg" /> איור 4. תמונה מיקרוסקופית של זחל 1 ליטר S.stercoralis בהגדלת 250x. חיצים מעידים זנב (אדום) וprimordium איברי המין (כחול). סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. d/3966/3966fig5.jpg &quot;/&gt; איור 5. גרף המראה את רמת הכושר הגופנית של ילדים שנדבקו בT.trichiura בהשוואה לרמת הכושר הגופנית של ילדים לא נגועה בט trichiura.

<ol>
	<li>Steinmann, P., Utzinger, J., Du, Z. W., Zhou, X. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiparasitism:+a+neglected+reality+on+global,+regional+and+local+scale.">Multiparasitism: a neglected reality on global, regional and local scale.</a> Advances in Parasitology. 73, 21-50 (2010).</li><li>Bethony, J., Brooker, S., Albonico, M., Geiger, S., Loukas, A., Diemert, D., Hotez, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+soil-transmitted+helminth+infections:+ascariasis,+trichuriasis,+and+hookworm.">The soil-transmitted helminth infections: ascariasis, trichuriasis, and hookworm.</a> Lancet. 367, 1521-1532 (2006).</li><li>Hotez, P. J., Molyneux, D. H., Fenwick, A., Kumaresan, J., Ehrlich Sachs, S., Sachs, J. D., Savioli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+neglected+tropical+diseases.">Control of neglected tropical diseases.</a> New England Journal of Medicine. 357, 1018-1027 (2007).</li><li>Chan, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+intestinal+nematode+infections-fifty+years+on.">The global burden of intestinal nematode infections-fifty years on.</a> Parasitology Today. 13, 438-443 (1997).</li><li>Olsen, A., van Lieshout, L., Marti, H., Polderman, T., Polman, K., Steinmann, P., Stothard, R., Thybo, S., Verweij, J. J., Magnussen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strongyloidiases+-+the+most+neglected+of+the+neglected+tropical+diseases.">Strongyloidiases - the most neglected of the neglected tropical diseases.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 103, 967-972 (2009).</li><li>Becker, S. L., Sieto, B., Silue, K. D., Adjossan, L., Kone, S., Hatz, C., Kern, W. V., N'Goran, E. K., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis,+clinical+features,+and+self-reported+morbidity+of+Strongyloides+stercoralis+and+hookworm+infection+in+a+co-endemic+setting.">Diagnosis, clinical features, and self-reported morbidity of Strongyloides stercoralis and hookworm infection in a co-endemic setting.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1292 (2011).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+against+worms.">Action against worms.</a> WHO Newsletter. (11), (2008).</li><li>Montresor, A., Crompton, D. W. T., Hall, A., Bundy, D. A. P., Savioli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+evaluation+of+soil-transmitted+helminthiasis+and+schistosomiasis+at+community+level.">Guidelines for the evaluation of soil-transmitted helminthiasis and schistosomiasis at community level.</a> World Health Organization. , (1998).</li><li>Garc&#237;a, L. S., Bruckner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostic medical parasitology. , (2001).</li><li>Brooker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+global+distribution+and+disease+burden+of+intestinal+nematode+infection:+adding+up+the+numbers+-+a+review.">Estimating the global distribution and disease burden of intestinal nematode infection: adding up the numbers - a review.</a> International Journal for Parasitology. 40, 1137-1144 (2010).</li><li>Stephenson, L. S., Latham, M. C., Kinoti, S. N., Kurz, K. M., Brigham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+in+physical+fitness+of+Kenyan+schoolboys+infected+with+hookworm,+Trichuris+trichiura+and+Ascaris+lumbricoides+following+a+single+dose+of+albendazole.">Improvements in physical fitness of Kenyan schoolboys infected with hookworm, Trichuris trichiura and Ascaris lumbricoides following a single dose of albendazole.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 84, 277-282 (1990).</li><li>Stephenson, L. S., Latham, M. C., Adams, E. J., Kinoti, S. N., Pertet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+fitness,+growth+and+appetite+of+Kenyan+school+boys+with+hookworm,+Trichuris+trichiura+and+Ascaris+lumbricoides+infections+are+improved+four+months+after+a+single+dose+of+albendazole.">Physical fitness, growth and appetite of Kenyan school boys with hookworm, Trichuris trichiura and Ascaris lumbricoides infections are improved four months after a single dose of albendazole.</a> Journal of Nutrition. 123, 1036-1046 (1993).</li><li>Bustinduy, A. L., Thomas, C. L., Fiutem, J. J., Parraga, I. M., Mungai, P. L., Muchiri, E. M., Mutuku, F., Kitron, U., King, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fitness+of+Kenyan+children+with+polyparasitic+infections+using+the+20-meter+shuttle+run+test+as+a+morbidity+metric.">Measuring fitness of Kenyan children with polyparasitic infections using the 20-meter shuttle run test as a morbidity metric.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1213 (2011).</li><li>M&#252;ller, I., Coulibaly, J. T., F&#252;rst, T., Knopp, S., Hattendorf, J., Krauth, S. J., Stete, K., Righetti, A. A., Glinz, D., Yao, A. K., P&#252;hse, U., N'Goran, E. K., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+schistosomiasis+and+soil-transmitted+helminth+infections+on+physical+fitness+of+school+children+in+C&#244;te+d'Ivoire.">Effect of schistosomiasis and soil-transmitted helminth infections on physical fitness of school children in C&#244;te d'Ivoire.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1239 (2011).</li><li>Yap, P., Du, Z. W., Chen, R., Zhang, L. P., Wu, F. W., Wang, J., Wang, X. Z., Zhou, H., Zhou, X. N., Utzinger, J., Steinmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soil-transmitted+helminth+infections+and+physical+fitness+in+school-aged+Bulang+children+of+southwest+China:+results+from+a+cross-sectional+survey.">Soil-transmitted helminth infections and physical fitness in school-aged Bulang children of southwest China: results from a cross-sectional survey.</a> Parasites and Vectors. 5, 50 (2012).</li><li>L&#233;ger, L. A., Mercier, D., Gadoury, C., Lambert, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multistage+20+metre+shuttle+run+test+for+aerobic+fitness.">The multistage 20 metre shuttle run test for aerobic fitness.</a> Journal of Sports Sciences. 6, 93-101 (1988).</li><li>Tomkinson, G. R., L&#233;ger, L. A., Olds, T. S., Cazorla, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+the+performance+of+children+and+adolescents+(1980-2000):+an+analysis+of+55+studies+of+the+20+m+shuttle+run+test+in+11+countries.">Secular trends in the performance of children and adolescents (1980-2000): an analysis of 55 studies of the 20 m shuttle run test in 11 countries.</a> Sports Medicine. 33, 285-300 (2003).</li><li>Mahon, A. D., Marjerrison, A. D., Lee, J. D., Woodruff, M. E., Hanna, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+prediction+of+maximal+heart+rate+in+children+and+adolescents.">Evaluating the prediction of maximal heart rate in children and adolescents.</a> Research Quarterly for Exercise and Sport. 81, 466-471 (2010).</li><li>Bogitsh, B. J., Carter, C. E., Oeltmann, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Parasitology. , (2011).</li><li>Steinmann, P., Zhou, X. N., Du, Z. W., Jiang, J. Y., Wang, L. B., Wang, X. Z., Li, L. H., Marti, H., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurence+of+Strongyloides+stercoralis+in+Yunnan+province,+China,+and+comparison+of+diagnostic+methods.">Occurence of Strongyloides stercoralis in Yunnan province, China, and comparison of diagnostic methods.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 1, e75 (2007).</li><li>Martin, L. K., Beaver, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Kato+thick-smear+technique+for+quantitative+diagnosis+of+helminth+infections.">Evaluation of Kato thick-smear technique for quantitative diagnosis of helminth infections.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 17, 382-391 (1968).</li><li>Dacombe, R. J., Crampin, A. C., Floyd, S., Randall, A., Ndhlovu, R., Bickle, Q., Fine, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+delays+between+patient+and+laboratory+selectively+affect+accuracy+of+helminth+diagnosis.">Time delays between patient and laboratory selectively affect accuracy of helminth diagnosis.</a> Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 101, 140-145 (2007).</li><li>Knopp, S., Mgeni, A. F., Khamis, I. S., Steinmann, P., Stothard, J. R., Rollinson, D., Marti, H., Utzinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+soil-transmitted+helminths+in+the+era+of+preventive+chemotherapy:+effect+of+multiple+stool+sampling+and+use+of+different+diagnostic+techniques.">Diagnosis of soil-transmitted helminths in the era of preventive chemotherapy: effect of multiple stool sampling and use of different diagnostic techniques.</a> PloS Neglected Tropical Diseases. 2, e331 (2008).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

השלושה הפרוטוקולים המתוארים במאמר זה נבדקו והוצא להורג בחלק הדרום המערבי של מחוז יונאן, הרפובליקה העממית של סין בין בני המיעוט האתני Bulang 21 ובחלקים שונים של אפריקה 6,13,14. ישנן מספר תבניות זמינות עבור טכניקת קאטו כץ. כל חור בגודל מובחן יהיה לספק כמות ניכרת של חומר צואתי. לחישוב EPGs, על כן יש צורך לדעת את היחידה של התבנית, כדי להכפיל את מספר המנה של ביצים עם הגורם הנכון כדי להגיע לאומדן EPG. יתר על כן, כאשר תולעי הקרס נמצאים בקהילה תחת חקירה, חיוני לקרוא את שקופיות זמן קצר לאחר הכנה (לאחר זמן פינוי של 30 דקות אבל תוך זמן סליקה מרבית של 60 דקות). הסיבה העיקרית היא כי בטמפרטורות גבוהות, ביצי תולעי מעיים במהירות להתפרק 22. הזמן בין ייצור הצואה ידי נקוב המחקרticipant והבדיקה של הדגימות חשוב גם כמרווח של 3 שעות או יותר יכול להביא לירידה של 50% ברגישות של טכניקת קאטו כץ לאבחון תולעי הקרס 23. לבסוף, כדי לשפר את רגישות האבחון של טכניקת קאטו כץ, במיוחד באזורים הסובלים מדלקות בעצמה נמוכה sth, דגימות צואה מרובות יש המתקבלת ממשתתף, ומריחות עבות כפולות או שלושה עותקים קאטו כץ צריך להיות מוכן מכל דגימת צואה 7,24. בכל קשור לטכניקת Baermann, יש להיזהר בעת ביצוע הניסוי כרימות של תולעת עשויות להיות נוכחות, ולכן, חובה ללבוש כפפות. למרות טכניקת Baermann מראה רגישות גבוהה בהרבה מטכניקות ריכוז אחרות ופחות מייגע מאשר שיטות תרבות, יש חסרונות חשובים. לדוגמה, כמות גדולה של חומר צואתי טרי נדרשה, אשר מהווה בעיה כאשר חולים לשלוח דגימות צואה קטנות.מצד השני, דגימת צואה גדולה עלולה להגביר את הסיכוי לגילוי רימות בזיהומים בעצמה נמוכה 9. בנוסף, קיים סיכון שהזחלים של נמטודות האחרת, כגון תולעי קרס או Trichostrongylus spp., עשויים להיות נוכחים, בדיקה מיקרוסקופית ובכך זהירה היא מוצדקת. ישנן דרכים ישירות ועקיפות של מדידת מקסימום 2 VO להערכות כושר אירוביות. פרוטוקולים ישירים הליכונים, אופני כושר דורשים מחזור, וציוד מיוחד ומגושם אחר, אשר יכול למדוד את ריכוזי גז והנפח של האוויר הננשף. גישה כזו אינה אפשרית בהגדרת משאבים מוגבלים כפרית בעולם המתפתח. להגדרות כאלה, דרכים עקיפות, כגון מבחן טיסת המעבורת 20-מ &#39;, הן השיטות המועדפות. למרות שיטות עקיפות הן לא מדויקות כמו שיטות ישירות, מבחן טיסת מעבורת 20-מ &#39;שהוקם על ידי לז&#39;ה ועמיתים לעבודה הוכיח שחזור גבוה (r = 0.89) וvalidity נגד ספיגת חמצן מרבית על הליכון 16. יתר על כן, יחס חוקר ומשתתף יכול להיות נמוך וכמה ממשתתפים יכולים לבצע את הבדיקה באותו הזמן, חוסכים משאבים וזמן אדם. שעוני דופק אינם משמשים בדרך כלל במבחנים כאלה 13,16. עם זאת, השימוש בם מאפשר לחוקר להשיג מידע נוסף על אם המשתתף הפעיל מאמץ מקסימאלי במבחן. לבסוף, מומלץ לתת למשתתפים לעשות הרצה של כמה מרווחים 1, כך שהם יכולים להכיר את המהירות וכמובן הריצה. לסיכום, אנו מאמינים כי שילוב של שיטות הנ&quot;ל, בעקבות פרוטוקולים סטנדרטיים, מאפשר להערכת השכיחות ועוצמת זיהומי sth וכושר גופני של ילדים בגיל בית הספר בצליל מדעי, אבל התנהגות ניהול והמחיר סביר.

הערה: חומרים ברשימה זו הם כלליים וניתן להשיג ממקורות שונים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> קאטו כץ ערכה [400 תבניות פלסטיק עם חור של 6 מילימטר (מ&quot;מ) (קוטר) בתבנית בעובי 1.5 מ&quot;מ; 400 מרית פלסטיק; חיקוי 20-מ &#39;ממסך ניילון של גודל רשת 80; חיקוי 20-מ&#39; של צלופן הידרופילי, 34 מיקרומטר העבה.] </td><td> Vestergaard פרנדסן </td><td></td><td> שים לב שהפתרון הירוק גליצרין-מלכיט אינו כלול בערכה זו, אך ניתן לקנות מכל ספק כימי. </td></tr><tr><td> משפך זכוכית [על סנטימטר 8 (סנטימטר) רחב ועמוק 6 סנטימטר] </td><td></td><td></td><td> משפך הזכוכית לטכניקת Baermann צריך להיות מסוגל להחזיק כ 60 מיליליטר המים. הגודל דואר של צינור הגומי והגזה תלוי בסוג של משפך זכוכית בשימוש. </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ הביולוגי </td><td> אולימפוס </td><td> CX21LED/CX21 </td><td></td></tr><tr><td> סרכזת </td><td> שנחאי מכשירים רפואיים קבוצה </td><td> 80 - 2T </td><td></td></tr><tr><td> אותות מוקלטים מראש </td><td> Bitworks עיצוב </td><td> גרסת מבחן ליפ צוות 1.3.1 </td><td> יישומי iPhone </td></tr><tr><td> לפקח על קצב לב </td><td> POLAR </td><td> FT1 </td><td> שעון ומשדר </td></tr></tbody></table>

determining soil-transmitted helminth infection status and physical fitness of school-aged children

helminth זיהומי קרקע, משודר (STH) הם נפוצים. ואכן, יותר מ 1 מליארד בני אדם מושפעים, בעיקר בעולם המתפתח שבו שורר עוני והתנהגות היגיינה, אספקת מים, ותברואה היא לעתים קרובות 1,2 הלקוי. Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, ושני מיני תולעי הקרס, Ancylostoma duodenale וNecator americanus, הוא STHs הנפוץ ביותר 3. הניטל העולמי המוערך בשל תולעי קרס מחלה, כרצה, וtrichuriasis הוא 22.1, 10.5, ו -6.4 מ&#39;שנתי נכות מותאמות חיים (DALYs), בהתאמה 4. יתר על כן, כ 30-100000000 אנשים מוערכים שהם נגועים בStrongyloides stercoralis, מין sth המוזנח ביותר של משמעות העולמית שללא ספק גם גורם להשפעה על בריאות ציבור ניכרת 5,6. דלקות מרובות מינים (כלומר, STHs השונה טפח באדם יחיד) הם נפוצים, והזיהומים היו לין<html> ked ליעילים ירוד והשקפה בכך כלכלית של מדינות מתפתחות 1,3. לאבחון של STHs המשותף, ארגון הבריאות העולמית (WHO) ממליץ קאטו כץ טכניקת 7,8, אשר היא שיטה פשוטה יחסית לקביעת השכיחות והעצמה של זיהומים כאלה. זה מאפשר זיהוי של ביצי הטפיל שנושאים עוברים נגועים בצואה שלהם. בנוגע לאבחנה של S.stercoralis, אין כיום כלי פשוט ומדויק זמין. טכניקת Baermann היא השיטה הנפוצה ביותר למועסקת האבחנה שלו. העיקרון שעומד מאחורי טכניקת Baermann הוא שזחלי S.stercoralis הפעילים להגר אל מחוץ לדגימת צואה טרייה מוארת כזחלים הם phototactic 9. זה דורש חומרי מעבדה מתוחכמים פחות ופחות זמן רב יותר מאשר שיטות תרבות וחיסונית 5. t &quot;&gt; morbidities קשורים למגוון זיהומים STH מתסמינים חריפים אך נפוצים, כגון כאבי בטן, שלשולים, וגרד, לסימפטומים כרוניים, כגון אנמיה, תחת ותת תזונה, ופגיעה קוגניטיבית 10. מאז הסימפטומים הם בדרך כלל אינם נוקבים ו עדין, הם לעתים קרובות נעלמו מעיניו, נחשבים למצב רגיל על ידי אנשים מושפעים, או כאל תסמינים של מחלות אחרות שעשויה להיות נפוצים יותר בהגדרת נתונה. לפיכך, ניתן לשער כי בניטל האמיתי של זיהומי sth אינו מוערך כראוי על ידי הערכה כלים להסתמך על סימנים עצמיים שהוכרזו ותסמינים כמו שקורה בדרך כלל בסקרי אוכלוסייה מבוססת. בשנתי ה -1980 המאוחרות ותחילת 1990, סטיבנסון ועמיתים הדגישו את האפשרות של זיהומי sth הפחתת הכושר הגופני של בנים בגילאי 6-12 שנים 11,12. קו זה של חקירה מדעית צבר תנופה חדשה לאחרונה 13,14,15. מבחן 20-המטר (מ &#39;) מעבורת הריצה פותחאומת על ידי ד ז&#39;ה ואח&#39;. 16 ומשמש בעולם למדידת הכושר האירובי של 17 ילדים. המבחן הוא קל לתקנן וניתן לבצעו בכל המקום כמובן 20-מ &#39;ארוך ושטוח ריצה ומקור שמע זמינים, מה שהופך את השימוש בו אטרקטיבי בהגדרות של משאבים מוגבלים 13. כדי להקל ולתקנן בניסיונות להעריך אם זיהומי sth יש השפעה על הכושר הגופני של ילדים בגיל בית הספר, אנו מציגים מתודולוגיות שלאבחן זיהומי sth או כושר אמצעים פיסיים, כי הם פשוט לביצוע ובכל זאת, מספק תוצאות מדויקות ושחזור. זה יעזור ליצור ראיות חדשות בנוגע להשפעה הבריאותית של זיהומי STH.

Watch this Scientific Journal Video about Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children at JoVE.com

Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children

זיהום כרוני עם helminths אדמה משודרת-(STHs) גורם לחוסר ספיגה, stunting, ומבזבז בילד שגדל. לפיכך, ניתן להניח כי זיהומים אלה גם להפחית את הכושר הגופני של ילדים. כאן, אנו לדמיין שתי טכניקות לאבחנה של STHs ומבחן טיסת המעבורת 20-המטר להערכת כושר הגופני של הילדים.

מצב קביעת קרקע-מועבר helminth זיהום וכושר גופני של ילדים בגיל בית הספר

Soil-transmitted helminth (STH) infections are common. Indeed, more than 1 billion people are affected, mainly in the developing world where poverty ...

determining-soil-transmitted-helminth-infection-status-physical

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.3K Views.  Swiss Tropical and Public Health Institute, Basel, Switzerland. זיהום כרוני עם helminths אדמה משודרת-(STHs) גורם לחוסר ספיגה, stunting, ומבזבז בילד שגדל. לפיכך, ניתן להניח כי זיהומים אלה גם להפחית את הכושר הגופני של ילדים. כאן, אנו לדמיין שתי טכניקות לאבחנה של STHs ומבחן טיסת המעבורת 20-המטר להערכת כושר הגופני של הילדים.

Video: Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children

Determining the Reactivity and Titre of Serum using a Haemagglutination Assay

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood cells are particularly useful targets as they are readily available and agglutination is observable using the naked eye. This technique is commonly used to determine the titre of an antibody (Ab), for blood grouping and viral quantification. In this video, the steps involved in preparing and performing a haemagglutination assay is demonstrated using antibodies specific to blood group A-antigens added to red blood cells (Revercells). The antiserum is serially diluted in a 96 well U-bottom microtitre tray, to which is added a suspension of Revercells. The samples are mixed and then incubated at 37&deg;C for 60 minutes. After this time, the samples can then be easily scored for  ve, +ve and intermediate (-/+) haemagglutination reactions. This approach allows for the reactivity and titre of a serum sample to be assessed using a rapid and simple technique. The video will cover the theory behind the assay, how the results are read and interpreted, how the titre is determined, how the assay can be modified and any issues associated with the use of this technique.

Haemagglutination is a form of agglutination where antibodies bind to red blood cells. Red blood cells are both readily available and the results are readily observable using the naked eye. This video demonstrates the steps involved in a haemagglutination assay, interpreting the results and determining the titre.

קביעת ריאקטיביות Titre של סרום באמצעות Assay Haemagglutination

Haemagglutination is a specific form of agglutination and is used when antibodies bind to red blood cells, which act as a particulate antigen. Red blood ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as pathology of disease. While the properties of the variable domains of antibodies have long been considered critical to in vivo function, the ability of antibodies to recruit innate immune cells via their Fc domains has become increasingly appreciated as a major factor in their efficacy, both in the setting of recombinant monoclonal antibody therapy, as well as in the course of natural infection or vaccination1-3.
Importantly, despite its nomenclature as a constant domain, the antibody Fc domain does not have constant function, and is strongly modulated by IgG subclass (IgG1-4) and glycosylation at Asparagine 2974-6. Thus, this method to study functional differences of antigen-specific antibodies in clinical samples will facilitate correlation of the phagocytic potential of antibodies to disease state, susceptibility to infection, progression, or clinical outcome.
Furthermore, this effector function is particularly important in light of the documented ability of antibodies to enhance infection by providing pathogens access into host cells via Fc receptor-driven phagocytosis7. Additionally, there is some evidence that phagocytic uptake of immune complexes can impact the Th1/Th2 polarization of the immune response8.
Here, we describe an assay designed to detect differences in antibody-induced phagocytosis, which may be caused by differential IgG subclass, glycan structure at Asn297, as well as the ability to form immune complexes of antigen-specific antibodies in a high-throughput fashion. To this end, 1 &mu;m fluorescent beads are coated with antigen, then incubated with clinical antibody samples, generating fluorescent antigen specific immune complexes. These antibody-opsonized beads are then incubated with a monocytic cell line expressing multiple Fc&gamma;Rs, including both inhibitory and activating. Assay output can include phagocytic activity, cytokine secretion, and patterns of Fc&gamma;Rs usage, and are determined in a standardized manner, making this a highly useful system for parsing differences in this antibody-dependent effector function in both infection and vaccine-mediated protection9.

We present a high-throughput flow cytometric assay to determine the phagocytic activity of antigen-specific antibodies from clinical samples, utilizing fluorescent antigen-coated beads and a monocytic cell line expressing multiple Fc receptors&#x2014;providing receptor usage and phagocytic activity determinations in a standardized and reproducible fashion for any antigen of interest.

קביעת פעילות Phagocytic דוגמאות של נוגדן קלינית

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe pathology, including liver fibrosis and splenomegaly, is caused by the immune response to the parasite eggs rather than the parasite itself 2. Parasite eggs induce a Th2 response characterized by the production of IL-4, IL-5 and IL-13, the alternative activation of macrophages and the recruitment of eosinophils. Here, we describe injection of Schistosoma mansoni eggs as a model to examine parasite-specific Th2 cytokine responses in the lung and draining lymph nodes, the formation of pulmonary granulomas surrounding the egg, and airway inflammation. 
Following intraperitoneal sensitization and intravenous challenge, S. mansoni eggs are transported to the lung via the pulmonary arteries where they are trapped within the lung parenchyma by granulomas composed of lymphocytes, eosinophils and alternatively activated macrophages 3-6. Associated with granuloma formation, inflammation in the broncho-alveolar spaces, expansion of the draining lymph nodes and CD4 T cell activation can be observed. Here we detail the protocol for isolating Schistosoma mansoni eggs from infected livers (modified from 7), sensitizing and challenging mice, and recovering the organs (broncho-alveolar lavage (BAL), lung and draining lymph nodes) for analysis. We also include representative histologic and immunologic data and suggestions for additional immunologic analysis. 
Overall, this method provides an in vivo model to investigate helminth-induced immunologic responses in the lung, which is broadly applicable to the study of Th2 inflammatory diseases including helminth infection, fibrotic diseases, allergic inflammation and asthma. Advantages of this model for the study of type 2 inflammation in the lung include the reproducibility of a potent Th2 inflammatory response in the lung and draining lymph nodes, the ease of assessment of inflammation by histologic examination of the granulomas surrounding the egg, and the potential for long-term storage of the parasite eggs.

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma mansoni eggs are potent stimulators of the T helper type 2 (Th2) immune response, characteristic of parasite infection, asthma and allergic inflammation. This protocol utilizes S. mansoni egg injection to generate a CD4 Th2 cytokine-induced inflammatory response in the lung, characterized by lung granuloma formation around the egg, eosinophilia and macrophage alternative activation.

שימוש ביצים מ<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; כמו<em&gt; ב-vivo</em&gt; דגם של דלקת ריאות הנגרמת helminth

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in peripheral tissues in steady state; however in response to antigen stimulation, DCs take up the antigen and rapidly migrate to the draining lymph nodes where they initiate T cell response against the antigen1,2. Additionally, DCs also play a key role in initiating autoimmune as well as allergic immune response3.
DCs play an essential role in both initiation of immune response and induction of tolerance in the setting of lung environment4. Lung environment is largely tolerogenic, owing to the exposure to vast array of environmental antigens5. However, in some individuals there is a break in tolerance, which leads to induction of allergy and asthma. In this study, we describe a strategy, which can be used to monitor airway DC maturation and migration in response to the antigen used for sensitization. The measurement of airway DC maturation and migration allows for assessment of the kinetics of immune response during airway allergic inflammation and also assists in understanding the magnitude of the subsequent immune response along with the underlying mechanisms.
Our strategy is based on the use of ovalbumin as a sensitizing agent. Ovalbumin-induced allergic asthma is a widely used model to reproduce the airway eosinophilia, pulmonary inflammation and elevated IgE levels found during asthma6,7. After sensitization, mice are challenged by intranasal delivery of FITC labeled ovalbumin, which allows for specific labeling of airway DCs which uptake ovalbumin. Next, using several DC specific markers, we can assess the maturation of these DCs and can also assess their migration to the draining lymph nodes by employing flow cytometry.

We describe a strategy to monitor maturation and migration of pulmonary dendritic cells in response to ovalbumin in the setting of ovalbumin induced allergic airway inflammation. This strategy can be modified to assess migration of pulmonary dendritic cells in settings of infection.

ניתוח של התבגרות ריאתי Cell Migration הדנדריטים ובמהלך דלקת אלרגית Airway

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

The investigation of the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to understanding the pathogenic mechanisms of diseases caused by these organisms. Here we describe a procedure for protein extraction from Burkholderia species based on mechanical lysis using glass beads in the presence of ethylenediamine tetraacetic acid and phenylmethylsulfonyl fluoride in phosphate buffered saline. This method can be used for different Burkholderia species, for different growth conditions, and it is likely suitable for the use in proteomic studies of other bacteria. Following protein extraction, a two-dimensional (2-D) gel electrophoresis proteomic technique is described to study global changes in the proteomes of these organisms. This method consists of the separation of proteins according to their isoelectric point by isoelectric focusing in the first dimension, followed by separation on the basis of molecular weight by acrylamide gel electrophoresis in the second dimension. Visualization of separated proteins is carried out by silver staining.

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Members of the Burkholderia genus are pathogens of clinical importance. We describe a method for total bacterial protein extraction, using mechanical disruption, and 2-D gel electrophoresis for subsequent proteomic analysis.

הפקת חלבון סה&quot;כ ו2-D שיטות ג&#39;ל אלקטרופורזה עבור<em&gt; Burkholderia</em&gt; מינים

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to the infiltration of tissues with migrating inflammatory cells, primarily neutrophils.&#160;This process has the potential to be destructive to tissues if excessive or held in an unresolved state.&#160; Cocultured in vitro models can be utilized to study the unique molecular mechanisms involved in pathogen induced neutrophil trans-epithelial migration.&#160;This type of model provides versatility in experimental design with opportunity for controlled manipulation of the pathogen, epithelial barrier, or neutrophil.&#160;Pathogenic infection of the apical surface of polarized epithelial monolayers grown on permeable transwell filters instigates physiologically relevant basolateral to apical trans-epithelial migration of neutrophils applied to the basolateral surface.&#160;The in vitro model described herein demonstrates the multiple steps necessary for demonstrating neutrophil migration across a polarized lung epithelial monolayer that has been infected with pathogenic P. aeruginosa (PAO1).&#160;Seeding and culturing of permeable transwells with human derived lung epithelial cells is described, along with isolation of neutrophils from whole human blood and culturing of PAO1 and nonpathogenic K12 E. coli (MC1000).&#160; The emigrational process and quantitative analysis of successfully migrated neutrophils that have been mobilized in response to pathogenic infection is shown with representative data, including positive and negative controls.&#160;This in vitro model system can be manipulated and applied to other mucosal surfaces.&#160;Inflammatory responses that involve excessive neutrophil infiltration can be destructive to host tissues and can occur in the absence of pathogenic infections.&#160;A better understanding of the molecular mechanisms that promote neutrophil trans-epithelial migration through experimental manipulation of the in vitro coculture assay system described herein has significant potential to identify novel therapeutic targets for a range of mucosal infectious as well as inflammatory diseases.

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

Neutrophil trans-epithelial migration in response to mucosal bacterial infection contributes to epithelial injury and clinical disease.&#160;An in vitro model has been developed that combines pathogen, human neutrophils, and polarized human epithelial cell layers grown on transwell filters to facilitate investigations towards unraveling the molecular mechanisms orchestrating this phenomenon.

במבחנה Coculture Assay כדי להעריך פתוגן המושרה נדידת נויטרופילים טרנס אפיתל

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to extrapolate viral replication fitness, ranging from the number of viral particles per infectious unit, growth rate in cell culture, and relative fitness derived from multiple-cycle growth competition assays. Growth competition assays provide a particularly sensitive measurement of fitness since the viruses are competing for cellular targets under identical growth conditions. There are several experimental factors to consider when conducting growth competition assays, including the multiplicity of infection (MOI), sampling times, and viral detection and fitness calculation methods. Each factor can affect the end result and hence must be considered carefully during the experimental design. The protocol presented here includes steps from constructing a new recombinant HIV-1 clone to performing growth competition assays and analyzing the experimental results. This protocol utilizes experimental parameter values previously shown to yield consistent and robust results. Alternatives are discussed, as some parameters need to be adjusted according to the cell type and viruses being studied. The protocol contains two alternative viral detection methods to provide flexibility as the availability of instruments, reagents and expertise varies between laboratories.

Growth competition between nearly isogenic viruses provides a sensitive measurement for determining relative replication fitness. The protocols described here include the construction of recombinant HIV-1 clones, virus propagation and growth competition and analysis methods optimized to yield sensitive and consistent results.

Pairwise צמיחת התחרות Assay לקביעת כושר השכפול של וירוסי כשל חיסוני אנושיים

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to ...

Determining Immune System Suppression versus CNS Protection for Pharmacological Interventions in Autoimmune Demyelination

A major hallmark of the autoimmune demyelinating disease multiple sclerosis (MS) is immune cell infiltration into the brain and spinal cord resulting in myelin destruction, which not only slows conduction of nerve impulses, but causes axonal injury resulting in motor and cognitive decline. Current treatments for MS focus on attenuating immune cell infiltration into the central nervous system (CNS). These treatments decrease the number of relapses, improving quality of life, but do not completely eliminate relapses so long-term disability is not improved. Therefore, therapeutic agents that protect the CNS are warranted. In both animal models as well as human patients with MS, T cell entry into the CNS is generally considered the initiating inflammatory event. In order to assess if a drug protects the CNS, any potential effects on immune cell infiltration or proliferation in the periphery must be ruled out. This protocol describes how to determine whether CNS protection observed after drug intervention is a consequence of attenuating CNS-infiltrating immune cells or blocking death of CNS cells during inflammatory insults. The ability to examine MS treatments that are protective to the CNS during inflammatory insults is highly critical for the advancement of therapeutic strategies since current treatments reduce, but do not completely eliminate, relapses (i.e., immune cell infiltration), leaving the CNS vulnerable to degeneration.

This protocol describes how to determine whether pharmacological treatments for experimental autoimmune encephalomyelitis show CNS protection as a consequence of suppressing immune cell infiltration or are neuroprotective during the onslaught of immune cell infiltration.

דיכוי מערכת החיסון קביעת לעומת להגנת CNS להתערבויות פרמקולוגיים demyelination אוטואימוניות

A major hallmark of the autoimmune demyelinating disease multiple sclerosis (MS) is immune cell infiltration into the brain and spinal cord resulting in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the development and persistence of many health related infections. One of the most well described and studied biofilms in human disease occurs in chronic pulmonary infection of cystic fibrosis patients. When studying biofilms in the context of the host, many factors can impact biofilm formation and development. In order to identify how host factors may affect biofilm formation and development, we used a static chambered coverglass method to grow biofilms in the presence of host-derived factors in the form of sputum supernatants. Bacteria are seeded into chambers and exposed to sputum filtrates. Following 48 hr of growth, biofilms are stained with a commercial biofilm viability kit prior to confocal microscopy and analysis. Following image acquisition, biofilm properties can be assessed using different software platforms. This method allows us to visualize key properties of biofilm growth in presence of different substances including antibiotics.

This protocol describes the visualization of biofilm development following exposure to host-factors using a slide chamber model. This model allows for direct visualization of biofilm development as well as analysis of biofilm parameters using computer software programs.

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

High-throughput Parallel Sequencing to Measure Fitness of Leptospira interrogans Transposon Insertion Mutants During Golden Syrian Hamster Infection

In this manuscript, we describe a transposon sequencing (Tn-Seq) technique to identify and quantify Leptospira interrogans mutants altered in fitness during infection of Golden Syrian hamsters. Tn-Seq combines random transposon mutagenesis with the power of high-throughput sequencing technology. Animals are challenged with a pool of transposon mutants (input pool), followed by harvesting of blood and tissues a few days later to identify and quantify the number of mutants in each organ (output pools). The output pools are compared to the input pool to evaluate the in vivo fitness of each mutant. This approach enables screening of a large pool of mutants in a limited number of animals. With minor modifications, this protocol can be performed with any animal model of leptospirosis, reservoir host models such as rats and acute infection models such as hamsters, as well as in vitro studies. Tn-Seq provides a powerful tool to screen for mutants with in vivo and in vitro fitness defects.

High-throughput Parallel Sequencing to Measure Fitness of Leptospira interrogans Transposon Insertion Mutants During Golden Syrian Hamster Infection

We describe here a technique that combines transposon mutagenesis with high-throughput sequencing to identify and quantify transposon leptospiral mutants in tissues after a challenge of hamsters. This protocol can be used to screen mutants for survival and dissemination in animals and can also be applied to in vitro studies.

רצף מקביל בתפוקה גבוהה כדי כושר מדד לזיהום Leptospira interrogans Transposon ההכנסה מוטציות במהלך הזהב הסורי אוגר

In this manuscript, we describe a transposon sequencing (Tn-Seq) technique to identify and quantify Leptospira interrogans mutants altered in fitness ...