עבודה זו נתמכה על ידי Forschungsgemeinschaft דויטשה (656 SFB, מינסטר, גרמניה, פרויקטים וC7 C6) ומינסטר IZKF (Core היחידה SMAP). המחברים מודים לTruc ואן לה, אן Kanzog, אוטה Neugebauer, יבקה Gottschlich וPriebe הרומי לקבלת סיוע טכני ומצוין לדניאל Burkert וסוון Fatum לייצור radiotracers.

1. שחזור איברים תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר את המיקרוסקופ stereotactic, שיא המשקל של העכברוש הזקן 8-10 השבוע (תורם ומשקל גוף נמען צריך להתאים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברוש התורם (לואיס בראון נורבגיה F1, LBN F1) תוך שימוש בחמצן / שאיפת isoflurane (4% / / חמצן isoflurane 2 ליטר דקות). לשמור על הרדמה על ידי הורדת isoflurane ל2-2.5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה מורדמת על כרית הניתוח. תקן את הגפיים של העכברוש עם דבק על הכרית ולהחיל משחת עיניים (Bepanthen, באייר) לעיניו של העכברוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח ולחטא את הבטן של החולדה ולבצע חתך קו האמצע הגחון מהחיק לגבול הזנב של הכבד. לחשוף את הכליה השמאלית וכליו על ידי העברת המעי בזהירות לצד ימין. מניחים יריעה דקה של גזה על הכליה השמאלית וללחלח אותו עם תמיסת מלח איזוטוני חימם כדי למנוע התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לנתח את רקמת השומן עם מלקחיים קצה בזווית דומון (SS-דומוןמלקחיים 45 Inox רפואי, כלים מדע פיין, cat.no. 11,203-25) העוטף את השופכן השמאלי. הימנע מכל מגע ישיר עם שופכן, במקום זאת, לגייס אותו עם רקמת שומן סביב מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את וריד הכליה השמאלי מעורק הכליה באמצעות מלקחיים עצה בזווית דומונט. הסר את כל רקמות שומן וחיבור משני כלי ולצרוב את כלי יותרת הכליה ואשכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח אב העורקים ווריד נבוב נחות (IVC) מעל ומתחת לצומת עם עורק הכליה השמאלי ווריד, בהתאמה, ולצרוב את כל העורקים היוצאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצמד את אב העורקים suprarenal עם מהדק microsurgical (המייקר Serrefines, כלים מדע פיין, cat.no. 18,055-04) מעל לעורק הכליה השמאלי, קרוב ככל האפשר לעורק mesenteric מעולה. ולקשור את אב העורקים באמצעות infrarenal משי כירורגית (5-0, Vömel, לא אמנות. 14739) כ 5 מ&quot;מ מתחת לעורק הכליה השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור IVC infrarenal עם משי כירורגית (5-0, Vömel), ומהדק את IVC suprarenalעם מהדק microsurgical (Serrefines מיקרו, כלים מדע פיין, cat.no. 18,055-03). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את וריד הכליה קרוב ככל האפשר לIVC באמצעות מספריים עדינים (איריס מספריים - 11.5 ס&quot;מ ToughCut סטרייט, כלים מדע פיין, cat.no. 14,058-11). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט perfuse הכליות באתרו עם פתרון 2 מ&quot;ל קר כקרח HTK זלוף (CUSTODIOL HTK, ד&quot;ר פרנץ קוהלר Chemie) על ידי החדרת canula (Microlance 3 27G ¾, BD, cat.no. 302,200) באב עורקי infrarenal. ודא ששינויי צבע הכליות (עכשיו שחמחם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, transect אב העורקים suprarenal, ולאחר מכן אב העורקים infrarenal ולבסוף שופכן הקרוב ככל האפשר לשלפוחית ​​השתן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכליות ואספקת הדם שלו, יחד עם השופכן והחנות בפתרון זלוף HTK על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את עכברוש התורם על ידי הסרת את מהדק של כלי הדם והכריתה ברציפות של הלב תחת הרדמה. </li></ol> 2. נמען הכנה וTransplantation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר את המיקרוסקופ stereotactic, שיא המשקל של החולדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברוש הנמען (לואיס) באמצעות 4% isoflurane. לשמור על הרדמה על ידי הורדת isoflurane ל2-2.5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה מורדמת על כרית הניתוח. תקן את הגפיים של העכברוש עם דבק על הכרית ולהחיל משחת עיניים לעיני עכברוש `s. טמפרטורת גוף ליבה לפקח ולשלוט באמצעות חיישן טמפרטורה רקטלית וכרית חימום. במהלך ניתוח שוב ושוב לשלוט בטמפרטורה, נשימה וקצב לבו של בעל החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח ולחטא את הבטן ולבצע חתך קו האמצע הגחון מהחיק לגבול הזנב של הכבד. השתמש forcutting אזמל העור על מנת למזער טראומת עור. לחשוף את הכליה השמאלית וכליו על ידי הזזת המעי לצד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר את הקפסולה הכליות באמצעות מלקחיים עצה בזווית דומון וצמר גפן בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את עורק הכליה השמאלי, ושופכן וריד בסמוך לכליותhilum עם שתי ligations באמצעות חוט כירורגית (Mersilene 4-0, Ethicon, חתול. לא. EH6732H). בלו חלק גדול יותר של הכליות, ומשאיר רק את hilum הכליות. נקה את פני השטח החתך עם צמר גפן ולבדוק לדימום. הוסף מייתר אחר במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לנתח בוטות דרך רקמת חיבור המכסה את אב העורקים ווריד הנבוב infrarenal באתר הזנב עם צמר גפן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד כל עצבים גלויים מאב העורקים ווריד הנבוב infrarenal באמצעות מלקחיים עצה בזווית דומונט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח בזהירות מבעד לסדין רקמת חיבור בין אב העורקים ווריד הנבוב infrarenal, ויצר שני פתחים באורך 2-4 מ&quot;מ: הראשונה מתחת להסתעפות של כלי האשכים, והשני מעל ההסתעפות של כלי הכסל המשותפים. לצרוב את העורקים וורידי iliolumbar שביניהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר חוט כירורגית אחת (Mersilene 0;. Ethicon, חתול no.EH6665E) דרך כל אחד משני הפתחים. שימוש בנושאים אלה למשוך infrarenalאב העורקים ווריד נבוב בעדינות לצד ימינו של בעל החיים כדי לקבל גישה לכלי ההסתעפות באתר הגבי. לצרוב כל אחד מהכלים האלה בין שני הפתחים ולהסיר את החוטים כירורגית לאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב בא, אב העורקים ולחסום IVC על ידי יישום השעון של ארבעה מלחציים microsurgical (המייקר Serrefines, כלים מדע פיין, cat.no. 18,055-04) מתחילים בפתיחה העליונה עם אב העורקים וכלה בווריד הנבוב העליונה בפתיחה (המייקר Serrefines , כלי מדע פיין, cat.no. 18,055-03). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן בזהירות פירס הסוף העליון של חלק המבודד של אב העורקים עם מחט (Microlance 3 27G ¾, BD, cat.no. 302,200), להכניס את הלהב התחתון של מספריים אביב נאה (מספריים אביב Vannas - 3 להבי מ&quot;מ, פיין מדע כלים, cat.no 15,000-00) דרך הפתח לנקב ולבצע חתך אורכי קצר. לשטוף את אב העורקים מבודדים עם פתרון זלוף HTK קר כקרח כדי להסיר כל דם שנותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו כן, בזהירות פירסהסוף התחתון של חלק המבודד של הווריד נבוב עם מחט, הכנס את הלהב התחתון של מספריים אביב נאה דרך הפתח לנקב ולבצע חתך אורכי שהסתיימו זמן קצר מתחת לחתך אב העורקים. שוב, שטוף את הכלי כדי להסיר כל דם שנותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את שתל הכליה מפתרון האחסון. הנח אותו מתחת לעמדה לשעבר של הכליה השמאלית, ולוודא שהיא מונחת בכיוון נכון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הכיוון של עורק הכליה השתלים ולהבטיח שאין פיתולים. לאחר מכן הנח שכבה דקה של גזה על השתל וללחלח אותו עם פתרון זלוף HTK קר כקרח כדי לקרר אותו, ועל מנת למנוע התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבע את פתיחת חלק suprarenal של יצירת אב העורקים שבעורק הכליה של השתל פותח לעם חוט כירורגית (Ethilon 9-0, Ethicon, חתול לא 2809G..) - הראשונה בבית העליון, ולאחר מכן בקצה התחתון של חתך אב העורקים. סגירה החתך בכיוון השעון עם תפר מתמשך באמצעות חוט כירורגית(Ethilon 9-0), מלקחיים דומון בזווית עצה ובעל מחט Castroviejo מעוגל (כלים מדע פיין, חתול. לא. 12,061-01). לאחר מכן, לכסות את התפר הראשון עם רקמת חיבור דרך תפר מתמשך שני נגד כיוון השעון. עכשיו, רק את החלק התחתון של פיסת אב העורקים של השתל נותר סגור. באופן קבוע לקרר את השתל עם קר כקרח פתרון זלוף HTK. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perfuse השתל עם 1 מ&quot;ל של קר כקרח פתרון זלוף HTK באמצעות מחט בוטה מוכנסת לתוך הקצה הפתוח של אב העורקים שתלי חתיכת אימות אטימות והיושרה של התפר, כמו גם הסרת דם שנותר בשתל. לאחר מכן, לקשור את הקצה הפתוח של אב העורקים עם חתיכת משי כירורגית (5-0, Vömel). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הכיוון של עורק הכליה שתלים ולהבטיח שאין פיתולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבע את פתיחת הווריד של השתל עם חוט כירורגית (Ethilon 9-0) - ראשון בבית העליון, ולאחר מכן בקצה התחתון של החתך בווריד הנבוב. סגירה החתךבכיוון השעון עם תפר מתמשך באמצעות חוט כירורגית (Ethilon 9-0), מלקחיים עצה בזווית דומון ובעל מחט Castroviejo מעוקל. באופן קבוע לקרר את השתל עם קר כקרח פתרון זלוף HTK. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגד כיוון השעון להסיר את מהדק microsurgical, החל במהדק הווריד הנבוב העליון. לאחר הסרת מהדק אב העורקים שעבר, לעצור בזהירות סופו של דבר דימום קל עם צמר גפן. לאחר מספר שניות את השתל יהפוך ורודה כהה, והתכווצויות uretric אמורות להופיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחדרה שתלי של השופכן לתוך שלפוחית ​​השתן של נמען ג `להסיר תיקון קטן של השרירים בזהירות בחלק העליון של שלפוחית ​​השתן באמצעות מספריים אביב Vannas (כלים מדע פיין סטודנטים מספריים אביב Vannas ישר,, cat.no. 91,500-09 ). לאחר מכן, להסיר רקמות (בעיקר שומן) משופך השתל באמצעות מלקחיים עצה בזווית דומונט. לכן, בזהירות לתפוס את הקצה של השופכן ובעדינות להפריד את רקמת השומן, חיבור המקיף הלוך ושוב את כלי המשובציםמ &#39;אותו על ידי משייכתם בכיוון ההפוך. לקבע את קצה uretric בסוף חוט כירורגית (Prolene 6-0, Ethicon, חתול. לא. 8697H) ולנקב העליון הכין בעבר של שלפוחית ​​השתן עם המחט המצורפת. משוך את השופכן דרך שלפוחית ​​השתן ולצאת אותו בבסיס דרך נקב שני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבע בעבר מהשופכן מופרד רקמה בחלק העליון של שלפוחית ​​השתן עם חוט כירורגית (Ethilon 9-0). חותכים את הקצה של השופכן עם החוט כירורגית המצורף ולמשוך בחזרה השופכן לתוך שלפוחית ​​השתן על ידי בעדינות דוחף מלמטה. לאחר מכן, סגור את ניקור שלפוחית ​​השתן השני עם חוט כירורגית (Ethilon 9-0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הקיר ועור הבטן על ידי שני תפרים רצופים אך נפרדים באמצעות חוט תפירה כירורגית (Mersilene 0). לחטא את הפצע בעזרת יוד Pividon ולנהל עצירות (0.1 מ&quot;ג לכל ק&quot;ג / BW / הצעה) SC במשך שלושה ימים לאחר ניתוח כדי לשלוט בכאב פצע. </li></ol> 3. דחיית שתל הדמיה<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברוש ללא צום באמצעות 2-2.5% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 30 MBq FDG (30 MBq FDG ב0.1 מ&quot;ל של 0.9% NaCl) מנוהל IV דרך catheterizing וריד זנב לרוחב באמצעות 24 G קטטר (בראון, Introcan, 4,252,500-01). לאחר מכן, לטהר את הקטטר עם פתרון NaCl 0.9% 0.9 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את העכברוש בעוצר ללא הרדמה עד תחילת הסריקה ומימה בעלי החיים על ידי הזרקת IV של 1 מ&quot;ל של 0.9% NaCl פתרון לפי שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברוש מחדש הרדם באמצעות 2% isoflurane מייד לפני הסריקה מתחילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עכברוש הרדים ברזולוציה גבוהה המבוסס על תא מרובה חוט חי המחמד המצלמה quadHIDAC (אוקספורד פוזיטרונים מערכות בע&quot;מ, אוקספורד, אנגליה). הרזולוציה מרחבית של סורק PET היא 1.0 מ&quot;מ, והוא קבוע לאורך כל FOV (קוטר, 165 מ&quot;מ, אורך צירי, 280 מ&quot;מ). טמפרטורת גוף לפקח ולשלוט במהלך הסריקה באמצעות חיישן טמפרטורה רקטלית והרדמת שליטה עם oxymeter דופק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל רכישה דינמית עבור 60 מ &#39;בהתחלת 180 דקות לאחר הזרקת FDG-להפחית הצטברות נותב בכליות שנגרמו על ידי הפרשת כליות של FDG. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 5 MBq של 18-F-IV פלואוריד ולבצע סריקת PET אחרת מייד לאחר הזרקת ה-F-18 פלואוריד למשך 60 דקות מבלי להזיז את מיקומו של העכברוש בסורק לזיהוי הכליות parenchyma ולחישוב ה-F-18 אישור 5. לשחזר תמונות משני הסריקות. מעקב באופן ידני נפח של עניין (VOI) על תמונות משוחזרות 2 דקות לאחר הזרקת ה-F-18 פלואוריד (זלוף שלב) סביב קליפת כליה ולהעביר את התמונות לVOI FDG. להוציא את אגן הכליה מVOI בזהירות. לשחזר תמונות משני הסריקות ולאתר באופן ידני נפח של עניין (VOI) סביב קליפת כליה. נתונים רשימה של מצב שוחזרו לתוך תמונות עם גודל voxel של 0.4 × 0.4 × 0.4 מ&quot;מ 3. להוציא את אגן הכליה מVOI בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב ספיגת FDG לפי היחס Of ספירה כלל ונפח ולחשב את אחוז החומר מוזרק (% ID). אנחנו השתמשנו MATLAB (גרסת R2011b, MathWorks, Natick, מסצ&#39;וסטס, ארה&quot;ב) והדמיה טומוגרפית גרסה (TIM) 2.8 לניתוח תמונה. </li></ol>

<ol>
	<li>Wu, O., Levy, A. R., Briggs, A., Lewis, G., Jardine, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+rejection+and+chronic+nephropathy:+a+systematic+review+of+the+literature.">Acute rejection and chronic nephropathy: a systematic review of the literature.</a> Transplantation. 87, 1330-1339 (2009).</li><li>Miller, B. F., Gonzales, E., Wilchins, L. J., Nathan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplantation+in+the+rat.">Kidney transplantation in the rat.</a> Nature. 194, 309-310 (1962).</li><li>Reuter, S., Schn&#246;ckel, U., Schr&#246;ter, R., Schober, O., Pavenst&#228;dt, H., Sch&#228;fers, M., Gabri&#235;ls, G., Schlatter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+imaging+of+acute+renal+allograft+rejection+in+rats+using+small+animal+F-FDG-PET.">Non-invasive imaging of acute renal allograft rejection in rats using small animal F-FDG-PET.</a> PLoS. One. 4, e5296 (2009).</li><li>Reuter, S., Schn&#246;ckel, U., Edemir, B., Schr&#246;ter, R., Kentrup, D., Pavenst&#228;dt, H., Schober, O., Schlatter, E., Gabri&#235;ls, G., Sch&#228;fers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+of+noninvasive+serial+assessment+of+acute+renal+allograft+rejection+by+18F-FDG+PET+to+monitor+treatment+efficiency.">Potential of noninvasive serial assessment of acute renal allograft rejection by 18F-FDG PET to monitor treatment efficiency.</a> J. Nucl. Med. 51, 1644-1652 (2010).</li><li>Schn&#246;ckel, U., Reuter, S., Stegger, L., Schlatter, E., Sch&#228;fers, K. P., Hermann, S., Schober, O., Gabri&#235;ls, G., Sch&#228;fers, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+18F-fluoride+small+animal+PET+to+noninvasively+assess+renal+function+in+rats.">Dynamic 18F-fluoride small animal PET to noninvasively assess renal function in rats.</a> Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 35, 2267-2274 (2008).</li><li>Grabner, A., Schn&#246;ckel, U., Kentrup, D., Sch&#228;fers, M., Reuter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+Non-Invasive+Molecular+Imaging+of+Acute+Allograft+Rejection+by+Gamma+Scintigraphy+and+Positron+Emission+Tomography.">Strategies for Non-Invasive Molecular Imaging of Acute Allograft Rejection by Gamma Scintigraphy and Positron Emission Tomography.</a> Curr. Radiopharm. 4, 10-23 (2011).</li><li>Racusen, L. C., Solez, K., Colvin, R. B., Bonsib, S. M., Castro, M. C., Cavallo, T., Croker, B. P., Demetris, A. J., Drachenberg, C. B., Fogo, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Banff+97+working+classification+of+renal+allograft+pathology.">The Banff 97 working classification of renal allograft pathology.</a> Kidney Int. 55, 713-723 (1999).</li><li>Edemir, B., Reuter, S., Borgulya, R., Schr&#246;ter, R., Neugebauer, U., Gabri&#235;ls, G., Schlatter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+rejection+modulates+gene+expression+in+the+collecting+duct.">Acute rejection modulates gene expression in the collecting duct.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 19, 538-546 (2008).</li><li>Velic, A., Gabri&#235;ls, G., Hirsch, J. R., Schr&#246;ter, R., Edemir, B., Paasche, S., Schlatter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+rejection+after+rat+renal+transplantation+leads+to+downregulation+of+Na++and+water+channels+in+the+collecting+duct.">Acute rejection after rat renal transplantation leads to downregulation of Na+ and water channels in the collecting duct.</a> Am. J. Transplant. 5, 1276-1285 (2005).</li><li>Reuter, S., Velic, A., Edemir, B., Schr&#246;ter, R., Pavenst&#228;dt, H., Gabri&#235;ls, G., Bleich, M., Schlatter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+NHE-3+inhibition+in+rat+renal+transplantation+undergoing+acute+rejection.">Protective role of NHE-3 inhibition in rat renal transplantation undergoing acute rejection.</a> Pflugers Arch. 456, 1075-1084 (2008).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

FDG-PET הדמיה היא אופציה חדשה לאבחון של דחייה חריפה. בגלל האופי פולשני וספציפי שלה, FDG-PET הוא יתרונות בהשוואה לאבחון על ידי הקלסיים ליבת מחט ביופסיה. בניגוד לגודל המדגם המצומצם של ביופסיה, ניתוח FDG-PET כל השתל. יתר על כן, ניתן להחיל אותו על מטופלים בתרופה נוגדת קרישה, ואחד יכו...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mathieu Needle Holder - 14 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12010-14</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Castroviejo Micro Needle Holder - 9 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12061-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Surgical Scissors - Sharp_Blunt</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14001-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iris Scissors - ToughCut Straight 11.5 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14058-11</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Student Vannas Spring Scissors </td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>91500-09</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vannas Spring Scissors - 3 mm Blades</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>15000-00</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>91121-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont SS-45 Forceps - Inox Medical</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11203-25</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Serrefine Clip Applicator with Lock</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>18056-14</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Serrefine 6 mm x 1 mm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>18055-03</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Serrefine 4 mm x 0.75 mm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>18055-04</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Isoflurane (e.g. Forene 100% v/v)</td>
 <td>Abott</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>cutane antiseptic (e.g. Octeniderm) </td>
 <td>Sch&uuml;lke</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Povidone Iodine (e.g. Betaisodona)</td>
 <td>Mundipharma</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ophthalmic ointment (e.g. Bepanthen)</td>
 <td>Bayer</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Buprenorphin (e.g. Temgesic)</td>
 <td>RB Pharmaceuticals</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HTK perfusion solution (e.g. CUSTODIOL HTK)</td>
 <td>Dr. Franz K&ouml;hler Chemie</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>surgical thread Mersilene 0</td>
 <td>Ethicon</td>
 <td>EH6665E</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>surgical thread Mersilene 4-0</td>
 <td>Ethicon</td>
 <td>EH6732H</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>surgical thread Prolene 6-0</td>
 <td>Ethicon</td>
 <td>8697H</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>surgical thread Ethilon 9-0</td>
 <td>Ethicon</td>
 <td>2809G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>surgical silk 5-0</td>
 <td>V&ouml;mel</td>
 <td>14739</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Canula (e.g. Microlance 3, 27G &frac34;)</td>
 <td>BD</td>
 <td>302200</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

non-invasive imaging of acute allograft rejection after rat renal transplantation using 18f-fdg pet

מספר החולים עם מחלת הכליה סופנית, ומספר מקבלי שתל בכליות מגדילים ברציפות. פרקים של דחיית שתל תאית חריפה (AR) הם גורם מנבא שלילי להישרדות שתל לטווח ארוך, ובמועד האבחנה שלו היא קריטית לתפקוד שתל 1. נכון לעכשיו, AR ניתן בהחלט מאובחן רק על ידי ליבת מחט ביופסיה, שכשיטה פולשנית, חושפת סיכון משמעותי של פגיעת שתל או אפילו הפסד. יתר על כן, ביופסיות הן לא ריאלי בחולי נוטלי תרופות נוגדות קרישה ואתר הדגימה המוגבלת של טכניקה זו עלולה לגרום לתוצאות שליליות שגויות אם AR הוא מוקד או בלתי סדיר. כתוצאה מכך, זה שהוליד את חיפוש מתמשך לשיטות זיהוי AR החדשים, אשר לעתים קרובות צריכה להיעשות בבעלי חיים, כולל שימוש במודלים שונים להשתלה. מאז תחילת שנות ה -60 עכברוש השתלת הכליה היא שיטה ניסיונית מבוססת היטב לexamination וניתוח של AR 2. אנו מציגים בזאת בנוסף פליטת פוזיטרונים חיה קטנה פוזיטרונים (PET) באמצעות 18-F-fluorodeoxyglucose (FDG) כדי להעריך את AR במודל השתלה אלוגנאית uninephrectomized חולדת כליות ולהציע הדמיה FDG-PET שתל כאפשרות חדשה עבור לא פולשנית, ספציפית והאבחון המוקדם של א.ר. גם למצב האנושי 3. יתר על כן, בשיטה זו ניתן ליישם לצורך המעקב כדי לשפר את הניטור של דחיית השתלת 4.

היסטולוגיה במהלך לויקוציטים AR, כלומר בעיקר לימפוציטים מגויסים להשתלה, ואילו את חומרת הדחייה מתבטאת במידה המסוימת של דלקת. בצביעה (PAS) תקופתית, חומצה שיף המתוארת כאן (איור 1), שתל הכליה מראה סימנים היסטולוגית משמעותיים ?...

Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET at JoVE.com

הדמיה לא פולשנית של דחייה חריפה של אלוגרנט לאחר השתלת כליה של חולדה באמצעות 18F-FDG PET | רפואה | וִידֵאוֹ

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

אנחנו בזאת להציג מודל חולדה להשתלת כליה הלא פולשני להעריך דחיית שתל אקוטית באמצעות טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים עם 18F-fluorodeoxyglucose.

הדמיה לא פולשנית של דחיית שתל חריפה לאחר השתלת כליה באמצעות חולדה<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal  disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases.  Episodes of acute cellular ...

non-invasive-imaging-acute-allograft-rejection-after-rat-renal

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Medicine

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

Human Biology

Osmoregulation and Excretion

SCIENTISTS IN ACTION

16.9K Views.  University of Münster. אנחנו בזאת להציג מודל חולדה להשתלת כליה הלא פולשני להעריך דחיית שתל אקוטית באמצעות טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים עם 18F-fluorodeoxyglucose.

Video: Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

מדידה אופטית לא פולשנית של מטבוליזם ופרמטרים המודינמיים במוח אצל תינוקות

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research. In the process, many imaging techniques have been developed to study different biological processes in animals non-invasively. However, a major technical limitation in existing intravital imaging modalities is the inability to combine non-invasive, longitudinal imaging with single-cell resolution capabilities. We show here how transplantation into the anterior chamber of the eye circumvents such significant limitation offering a versatile experimental platform that enables non-invasive, longitudinal imaging with cellular resolution in vivo. We demonstrate the transplantation procedure in the mouse and provide representative results using a model with clinical relevance, namely pancreatic islet transplantation. In addition to enabling direct visualization in a variety of tissues transplanted into the anterior chamber of the eye, this approach provides a platform to screen drugs by performing long-term follow up and monitoring in target tissues. Because of its versatility, tissue/cell transplantation into the anterior chamber of the eye not only benefits transplantation therapies, it extends to other in vivo applications to study physiological and pathophysiological processes such as signal transduction and cancer or autoimmune disease development.

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

A new approach combining intraocular transplantation and confocal microscopy enables longitudinal, non-invasive real-time imaging with single-cell resolution within grafted tissues in vivo. We demonstrate how to transplant pancreatic islets into the anterior chamber of the mouse eye.

השתלה ללשכה הקדמית של העין לאורך, לא פולשני<em&gt; בחי</em&gt; הדמיה ברזולוצית תא בודד בזמן אמת

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

הדמיה לא פולשנית וניתוח של מוחין איסכמיה בחולדות Living שימוש Positron פליטת טומוגרפיה עם<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

דגם Murine הדמיה בלתי פולשנית לזיהוי ומעקב סרטן השחלות הישנות

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT

This paper describes the use of 18F-FDG and micro-PET/CT imaging to determine in vivo glucose metabolism kinetics in mice (and is transferable to rats). Impaired uptake and metabolism of glucose in multiple organ systems due to insulin resistance is a hallmark of type 2 diabetes. The ability of this technique to extract an image-derived input function from the vena cava using an iterative deconvolution method eliminates the requirement of the collection of arterial blood samples. Fitting of tissue and vena cava time activity curves to a two-tissue, three compartment model permits the estimation of kinetic micro-parameters related to the 18F-FDG uptake from the plasma to the intracellular space, the rate of transport from intracellular space to plasma and the rate of 18F-FDG phosphorylation. This methodology allows for multiple measures of glucose uptake and metabolism kinetics in the context of longitudinal studies and also provides insights into the efficacy of therapeutic interventions.

Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT

This study describes a protocol that uses 18F-FDG and positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) imaging, together with kinetic modelling, to quantify the in vivo, real-time uptake of 18F-FDG into tissues.

קביעת קינטיקס והגלוקוז שימוש<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG מיקרו-PET / CT

This paper describes the use of 18F-FDG and micro-PET/CT imaging to determine in vivo glucose metabolism kinetics in mice (and is transferable to rats). ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of clinical efficacy, they are until now imperfect solutions. Stem cell therapy using ASC sheets could provide a solution to this problem. ASCs are considered as promising candidates for promoting tissue healing because of their trophic and immunomodulatory properties. Here, we provide methods to produce high-density ASC sheets, that are transplanted onto a colorectal anastomosis in a rat model to reduce the leakage. ASCs formed cell sheets in thermo-responsive culture dishes that could be easily detached. On the day of the transplantation, a partial colectomy with a 5-suture colorectal anastomosis was performed. Animals were immediately transplanted with 1 ASC sheet per rat. ASC sheets adhered spontaneously to the anastomosis without any glue, suture, or any biomaterial. Animal groups were sacrificed 3 and 7 days postoperatively. Compared to transplanted animals, the incidence of anastomotic abscesses and leakage was higher in control animals. In our model, the transplantation of ASC sheets after colorectal anastomosis was successful and associated with a lower leakage rate.

The preparation and transplantation of adipose tissue derived stem cell (ASC) sheets onto insufficiently sutured colorectal anastomoses in a rat model is presented. This novel application shows that ASC sheets can reduce colorectal anastomosis leakage.

השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to expend energy has made it a potential target for novel therapies to ameliorate obesity and associated metabolic disorders in humans. Though this tissue has been well studied in small animals, BAT&#39;s thermogenic capacity in humans remains largely unknown due to the difficulties of measuring its volume, activity, and distribution. Identifying and quantifying active human BAT is commonly performed using 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography and computed tomography (PET/CT) scans following cold-exposure or pharmacological activation. Here we describe a detailed image-analysis approach to quantify total-body human BAT from 18F-FDG PET/CT scans using an open-source software. We demonstrate the drawing of user-specified regions of interest to identify metabolically active adipose tissue while avoiding common non-BAT tissues, to measure BAT volume and activity, and to further characterize its anatomical distribution. Although this rigorous approach is time-consuming, we believe it will ultimately provide a foundation to develop future automated BAT quantification algorithms.

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Using free, open-source software, we have developed an analytical approach to quantify total and regional brown adipose tissue (BAT) volume and metabolic activity of BAT using 18F-FDG PET/CT.

כל הגוף ואת אזורי כימות של האדם פעיל חום רקמת שומן באמצעות 18F-FDG PET/CT...

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of disorders of consciousness, disrupted higher brain function, and verbal disturbances. As a consequence of an insufficient ability to communicate, objective evaluations are needed from family members, medical staff, and caregivers. One such evaluation is the assessment of functioning brain areas. Recently, multimodal brain imaging has been used to explore the function of damaged brain areas. [18F]-fluorodeoxyglucose positron emission tomography-computed tomography ([18F]FDG-PET/CT) is a successful tool for examining brain function. However, the assessment of brain glucose metabolism based on [18F]FDG-PET/CT is not standardized and depends on several varying parameters, as well as the patient&#39;s condition. Here, we describe a series of semiquantitative assessment protocols for a region-of-interest (ROI) image analysis using self-produced [18F]FDG tracers in patients with sTBI. The protocol focuses on screening the participants, preparing the [18F]FDG tracer in the hot lab, scheduling the acquisition of [18F]FDG-PET/CT brain images, and measuring glucose metabolism using the ROI analysis from a targeted brain area.

Semi-quantitative Assessment Using [18F]FDG Tracer in Patients with Severe Brain Injury

[18F]-fluorodeoxyglucose (FDG) positron emission tomography-computed tomography is useful for studying glucose metabolism related to brain function. Here, we present a protocol for an [18F]FDG tracer set-up and semiquantitative assessment of the region-of-interest analysis for targeted brain areas associated with clinical manifestations in patients with severe traumatic brain injury.

הערכה כמותית למחצה באמצעות מעקב FDG [18F] בחולים עם פגיעה מוחית חמורה

Patients with severe traumatic brain injury (sTBI) have difficulty knowing whether they are accurately expressing their thoughts and emotions because of ...

Optical Clearing and Imaging of Immunolabeled Kidney Tissue

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) imaging. They have received great attention in all research areas for the potential to analyze microscopic multicellular structures that extend over macroscopic distances. Given that kidney tubules, vasculature, nerves, and glomeruli extend in many directions, which have been only partially captured by traditional two-dimensional techniques so far, tissue clearing also opened up many new areas of kidney research. The list of optical clearing methods is rapidly growing, but it remains difficult for beginners in this field to choose the best method for a given research question. Provided here is a simple method that combines antibody labeling of thick mouse kidney slices; optical clearing with cheap, non-toxic and ready-to-use chemical ethyl cinnamate; and confocal imaging. This protocol describes how to perfuse kidneys and use an antigen-retrieval step to increase antibody- binding without requiring specialized equipment. Its application is presented in imaging different multicellular structures within the kidney, and how to troubleshoot poor antibody penetration into tissue is addressed. We also discuss the potential difficulties of imaging endogenous fluorophores and acquiring very large samples and how to overcome them. This simple protocol provides an easy-to-setup and comprehensive tool to study tissue in three dimensions.

The combination of antibody labeling, optical clearing, and advanced light microscopy allows three-dimensional analysis of complete structures or organs. Described here is a simple method to combine immunolabeling of thick kidney slices, optical clearing with ethyl cinnamate, and confocal imaging that enables visualization and quantification of three-dimensional kidney structures.

ניקוי אופטי ודימות רקמות כליות של אימונוולילד

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) ...