פרויקט מחקר זה נתמך על ידי מספר פרס R21AA017735 (י&quot;ש) מהמכון הלאומי על אלכוהול התעללות ועל אלכוהוליזם. התוכן הוא באחריות בלעדית של המחבר ואינו מייצגים בהכרח את עמדתה הרשמית של המכון הלאומי על אלכוהול התעללות ועל אלכוהוליזם או המכונים הלאומי לבריאות. המחבר גם רוצה להודות לאריס מונטגומרי לעריכת כתב היד הזה.

1. גידול בעלי חיים וטיפול פפטיד trophic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> C57BL/mice גזע על ידי הצבת את נקבות העכברים (~ ישן, ממוצע במשקל 20 גרם בשבוע 6) לתוך כלובים בבית גברים במשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו אם תקע ו / או למרוח בנרתיק זרע מייד לאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם חיובי, לייעד נקודת זמן זו כיום עוברי 0 (E0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על E7, משקל להתאים נשים בהריון ולשליטת קבוצות טיפול (3 קבוצות) מוקצים כפי שתואר לאחרונה 4: 1) קבוצת אלכוהול (אתנול) נוזל דיאטה (ALC), 2) זוג האכיל את קבוצת ביקורת (PF); 3) קבוצת טיפול פפטיד, שאמור לקבל את הזריקה (IP) intraperitoneal של פפטיד ADNF-9 לצד תזונה נוזלי חשיפה לאלכוהול (ALC/ADNF-9). הפרטים של הכנת ALC ודיאטות PF ואת ההליך של זריקות ip ניתן למצוא ב4 העבודה האחרונה שלנו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד דיאטת נוזלי אלכוהול יומית שיכול להיות מסופקת כגישה חופשית כמקור הבלעדי של חומרים מזינים. דיאטת נוזלים לא PF yoked בנפרדo סכר ALC ניתן למדוד מדי יום גם כן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנפח של דיאטה הנוזלית נצרכת במהלך 24 שעות קודמות ניתן להקליט מ30 מ&quot;ל סיים צינורות בורג מכסה ודיאטה טריה צריכה להינתן מדי יום בין E7 לE13. </li></ol> 2. נתיחה של עוברים וMicrodissection של מוח העובר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב את העכברים בהריון על ידי E13 עמוק הרדמת חסד העכברים עם 2 CO הליך ואחריו נקע בצוואר רחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקות את האתר של בטן חתך עם 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושה חתך בבטן באמצעות מספריים ומלקחיים סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהבטן פתוחה, לנתח את הרחם על ידי מחזיק אותו עם מלקחיים ובאמצעות המלקחיים האחרים לקרוע mesometrium מהרחם. הקפד לעשות הליך זה באיטיות כדי למנוע ניקוב את העוברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העוברים מהרחם ולהעביר אותם לתוך צלחת תרבית תאים (מ&quot;מ 60 מ&quot;מ x 15) המכיל תמיסת מלח מאוזנת &quot;הנקס<html> (HBSS) במים קרים כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח מוח העובר מהעוברים השלמים תחת stereomicroscope לmicrodissection. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים Ultra-בסדר לmicrodissection, למשוך את העור של העוברים בחלקו העליון של הראש כדי לחשוף את הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהגולגולת חשופה ומדמיין בבירור תחת stereomicroscope microdissection, אז לקלף את הגולגולת החל מחלקו האחורי של המוח בחוט השדרה ובאזורי גזע מוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפד לקלף פיסה אחרת פיסה מהגולגולת אחורית לחלקים קדמיים של הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהמוח של העובר חשוף מבחינה ויזואלית, להמשיך בחילוצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את המוח של העובר מהבסיס של הנורה חוש הריח primordium לבסיס metencephalon. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Postfix כל גזור מוח העובר paraformaldehyde 4% במשך 2-3 ימים. גם אתה יכול להקפיא את המוח העובר אחר מסכר אם אתה בודק אותם עבור כתם מערבי או מבחני אנזימטיות. </li></ol>NT &quot;&gt; הערה: ההליכים לשימושים בבעלי החיים אושרו על ידי הטיפול בבעלי החיים מוסדיים הוועדה השתמשו באוניברסיטת טולדו אשר הנן בהתאם להנחיות של הטיפול בבעלי החיים מוסדיים הוועדה השתמשו במכון הלאומי לבריאות ומדריך ל טיפול ושימוש בחי מעבדה. 3. הטבעה של מוח עובר בטין עבור חתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 10% מכיתת א &#39;ג&#39;לטין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא עובש לקלף משם הטבעה באמצע הדרך ולהמתין עד שמבצר ג&#39;לטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שליטת מקום וטופל לפני לידת מוחות Side-by-צד עוברי על גבי ג&#39;לטין הגדילו. זאת על מנת לשמור על תנאים של immunodetection של מוות של תאים עקביים בין שניהם השליטה וקבוצות ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוזל הג&#39;לטין על גבי המוח העוברי כדי להכין תבנית שלמה (לוודא ג&#39;לטין לא חם מדי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכניס למקרר את תבנית ג&#39;לטין המוכנה שמחזיקה מוח העובר במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקלףפלסטיק עובש ההטבעה ולאחר מכן להעביר את המוחה המכיל ג&#39;לטין שהוכן מראש, לעובר paraformaldehyde 4% במשך יומיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום וסעיף קבוע במוח העובר ג&#39;לטין באמצעות חתך vibratome מכונה (לייקה VT 1000S) בעובי 50 מיקרומטר לחתך העטרה. עובי זה נבדק במחקרים שלנו משום שהוא מספק תכונות אנטומיות טובות יותר. בנוסף, עובי של 25 מיקרומטר וגם גבוהה יותר, ניתן לבדוק עם טכניקה זו כרוכה הגלומה של המוח של העובר ב10% ג&#39;לטין. שים לב שסעיפי עטרה נחתכו באמצעות vibratome ברמת רוממות גרעיני הבסיס במוח הקדמי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את החלקים במוח העובריים בפוספט שנאגרו תמיסת מלח (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר את החלקים במוח העובריים בשקופיות Superfrost PLUS במים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את החלקים רכובים במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השקופיות (רכוב עם את החלקים במוח העובריים) ב-PBS לבדיקה הבאה של יום תגובת Tunel. </li></ol> 4. תגובת Tunel לדהtection של מוות של תאים או אפופטוזיס (Tunel: תיוג TdT בתיווך dUTP ניק הסוף; TdT: המסוף deoxynucleotidyl transferase). assay זה נועד כדי לקבוע מוות של תאים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את החלקים במוח העובר רכובים בSuperfrost פלוס שקופיות עם proteinase K (20 מיקרוגרם / מ&quot;ל) במשך 5 דקות על 37 מעלות צלזיוס (300 μl של proteinase K המעורב ב20 מ&quot;ל PBS). הם התאספו בשקופיות של 5 Plend הפתוח Maile). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את חלקים במוח עובריים (רכוב בשקופיות) עם PBS שלוש פעמים במשך 5 דקות תחת אורביטל שייקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים עם 3% H 2 O 2 במתנול למשך 10 דקות בטמפרטורת חדר (3% 100 מיליליטר מתנול 30% H 2 O 2 ב27 מ&quot;ל) (שקופיות לא צריכה להיות בייקר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף חלקים עם PBS שלוש פעמים במשך 5 דקות בהקפה שייקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפים בפתרון permeabilization (0.1% TritonX-100 ב 0.1% נתרן ציטרט) למשך 2 דקות על קרח (4 מעלות צלזיוס) (TritonX μl 100 + 0.1 גרם נתרן ציטראט + 99.9 מ&quot;ל distilleמים ד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את החלקים בשתי פעמים PBS במשך 5 דקות בהקפה שייקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזור יבש סביב סעיפים בשקופיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר מכשול בשקופיות Superfrost Plus באמצעות עט PAP. זה נועד כדי למנוע כל דליפה של תמיסה המשמשת לטיפול בסעיפים לזיהוי של תאי Tunel-חיוביים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה חלקים עם תערובת Tunel תגובה (50 μl מבקבוק 1 ו450 μl מבקבוק 2) עבור שעה 1 ב 37 ° C, השליטה תהיה בשימוש על ידי דגירה בתמיסה מבקבוק 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם דקות PBS שלוש פעמים 5 תחת אורביט ייקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזור יבש סביב רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה סעיפים עם ממיר-POD למשך 30 דקות ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את החלקים שלוש פעמים במשך 5 דקות עם טריס HCl (pH 7.5, 0.05 מ &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה המקטעים עבור 7 דקות ב0.05% tetrahydrochloride 3&#39;-3&#39;-diaminobenzidine (DAB) ו0.003% H 2 O 2 (25 מ&quot;ל טריס HCl, pH7.5, 0.05 מ &#39;+ 25 3% μl H 2 0 2 + 500 DAB μl) תחת Oribtal ייקר על 4 מעלות צלזיוס (בקרח) וכהה (הקפד לעשות את ההליך הזה בניו של 5 Plend הפתוח מיילר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את החלקים עם PBS דקות שלוש פעמים 5 תחת אורביטל שייקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את סעיפי מגלשות PBS במשך לא יותר מ 24 שעות ב-PBS, ולאחר מכן לעבד אותם לצביעת Nissl כמפורט בפרוטוקול הסעיף הבא. </li></ol> הערה: DAB הוא חומר מסרטן. השתמש בכפפות ולנקות את כל הכלים המשמשים עם אקונומיקה פעם אחת סיימה עם כל הניסויים. 5. מכתים Nissl להכנת חלקים במוח העוברי להסתכלות מיקרוסקופית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך מכתים Nissl צריך להיעשות במכסת מנוע בטיחות ביולוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את חלקי השקופית עם מים deionized למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים באתנול 70% למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים באתנול 95% במשך 6 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים באתנול 70% למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את החלקים בואט deionizedאה למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים בסגול cresyl כתם במשך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את החלקים במים מזוקקים למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים באתנול 70% למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים באתנול 95% + חומצה אצטית קרחונית מ&quot;ל 3 דקות 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים באתנול 95% עבור 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים ב100% אתנול למשך 2 דקות שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הסעיפים בקסילן לשלוש פעמים 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יכולות להיות מותקנים שקופיות המחזיקות את החלקים במוח העובריים באמצעות Permount ושקופיות זכוכית להחליק את המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את רכוב שקופיות הלילה לפני התבוננות וניתוח מיקרוסקופי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התבוננות וPhotomicrographs מיקרוסקופי יכולים להתבצע תחת מיקרוסקופ הזקוף לייקה. </li></ol>

<ol>
	<li>Sari, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neuroprotective+protein-derived+peptide,+NAP,+preventing+alcohol-induced+apoptosis+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mouse.">Activity-dependent neuroprotective protein-derived peptide, NAP, preventing alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mouse.</a> Neuroscience. 158 (4), 1426-1435 (2009).</li><li>Sari, Y., Chiba, T., Yamada, M., Rebec, G. V., Aiso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+peptide,+colivelin,+prevents+alcohol-induced+apoptosis+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mice:+signaling+pathway+investigations.">A novel peptide, colivelin, prevents alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mice: signaling pathway investigations.</a> Neuroscience. 164 (4), 1653-1664 (2009).</li><li>Sari, Y., Hammad, L. A., Saleh, M. M., Rebec, G. V., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+selective+neurotransmitters+in+fetal+brains+of+prenatally+alcohol-treated+C57BL/6+mice:+quantitative+analysis+using+liquid+chromatography/tandem+mass+spectrometry.">Alteration of selective neurotransmitters in fetal brains of prenatally alcohol-treated C57BL/6 mice: quantitative analysis using liquid chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 28 (3), 263-269 (2010).</li><li>Sari, Y., Weedman, J. M., Ge, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neurotrophic+factor-derived+peptide+prevents+alcohol-induced+apoptosis,+in+part,+through+Bcl2+and+c-Jun+N-terminal+kinase+signaling+pathways+in+fetal+brain+of+C57BL/6+mouse.">Activity-dependent neurotrophic factor-derived peptide prevents alcohol-induced apoptosis, in part, through Bcl2 and c-Jun N-terminal kinase signaling pathways in fetal brain of C57BL/6 mouse.</a> Neuroscience. 202, 465-473 (2012).</li><li>Sari, Y., Zhang, M., Mechref, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+proteins+in+fetal+brains+of+alcohol-treated+prenatally+C57BL/6+mice:+a+proteomic+investigation.">Differential expression of proteins in fetal brains of alcohol-treated prenatally C57BL/6 mice: a proteomic investigation.</a> Electrophoresis. 31, 1-14 (2010).</li><li>Bassan, M., Zamostiano, R., Davidson, A., Pinhasov, A., Giladi, E., Perl, O., Bassan, H., Blat, C., Gibney, G., Glazner, G., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+sequence+of+a+novel+protein+containing+a+femtomolar-activity-dependent+neuroprotective+peptide.">Complete sequence of a novel protein containing a femtomolar-activity-dependent neuroprotective peptide.</a> J. Neurochem. 72 (3), 1283-1293 (1999).</li><li>Brenneman, D. E., Hauser, J., Neale, E., Rubinraut, S., Fridkin, M., Davidson, A., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+neurotrophic+factor:+structure-activity+relationships+of+femtomolar-acting+peptides.">Activity-dependent neurotrophic factor: structure-activity relationships of femtomolar-acting peptides.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 285 (2), 619-627 (1998).</li><li>Spong, C. Y., Abebe, D. T., Gozes, I., Brenneman, D. E., Hill, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+fetal+demise+and+growth+restriction+in+a+mouse+model+of+fetal+alcohol+syndrome.">Prevention of fetal demise and growth restriction in a mouse model of fetal alcohol syndrome.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 297 (2), 774-779 (2001).</li><li>Sari, Y., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+deficits+associated+with+fetal+alcohol+exposure+may+be+protected,+in+part,+by+peptides+derived+from+activity-dependent+neurotrophic+factor+and+activity-dependent+neuroprotective+protein.">Brain deficits associated with fetal alcohol exposure may be protected, in part, by peptides derived from activity-dependent neurotrophic factor and activity-dependent neuroprotective protein.</a> Brain Res. Brain Res. Rev. 52 (1), 107-118 (2006).</li><li>Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+femtomolar-acting+neuroprotective+peptide.">A femtomolar-acting neuroprotective peptide.</a> J. Clin. Invest. 97 (10), 2299-2307 (1996).</li><li>Zamostiano, R., Pinhasov, A., Gelber, E., Steingart, R. A., Seroussi, E., Giladi, E., Bassan, M., Wollman, Y., Eyre, H. J., Mulley, J. C., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+the+human+activity-dependent+neuroprotective+protein.">Cloning and characterization of the human activity-dependent neuroprotective protein.</a> J. Biol. Chem. 276 (1), 708-714 (2001).</li><li>Offen, D., Sherki, Y., Melamed, E., Fridkin, M., Brenneman, D. E., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasoactive+intestinal+peptide+(VIP)+prevents+neurotoxicity+in+neuronal+cultures:+relevance+to+neuroprotection+in+Parkinson's+disease.">Vasoactive intestinal peptide (VIP) prevents neurotoxicity in neuronal cultures: relevance to neuroprotection in Parkinson's disease.</a> Brain Res. 854 (1-2), 257-262 (2000).</li><li>Steingart, R. A., Solomon, B., Brenneman, D. E., Fridkin, M., Gozes, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VIP+and+peptides+related+to+activity-dependent+neurotrophic+factor+protect+PC12+cells+against+oxidative+stress.">VIP and peptides related to activity-dependent neurotrophic factor protect PC12 cells against oxidative stress.</a> J. Mol. Neurosci. 15 (3), 137-145 (2000).</li></ol>

אין גילויים שיש לתת.

המתודולוגיה והטכנולוגיה שהוצגה במחקר זה מדגימים את ההשפעות של חשיפה טרום לידתי לאלכוהול במוח העובר ואת התפקיד של פפטידים trophic במניעת תופעות אלה. אלה עשויים לספק מידע על איך ללמוד תרופות אחרות של התעללות או כימיקלים רעילים אחרים במוח העובר בשלבי הריון שונים. <p class="j...

המטרה של השיטות הניסיוניות שתוארו כאן היא להעריך את ההשפעות של פפטידים neuroprotective trophic במודל חשיפת אלכוהול עוברי באמצעות מספר טכניקות מעורבות רבייה, האכלה, microdissecting, וגילוי מוות של תאים. לעבוד מהמעבדה שלנו הייתה כרוך בדיאטה נוזלית מעורבבת עם אלכוהול כמודל של שתיית אלכוהול מתונה, אשר עשוי להיות דומה לפרדיגמה שתיית אדם בטווח של כמות האלכוהול נצרך 1-5. אנו ואחרים זיהו שלושה נגזרי פפטיד שneuroprotective מפני ההשפעות המזיקות של חשיפה לאלכוהול עוברי. מחקרים חוקרים חשיפה לאלכוהול במהלך שלבים עובריים תוך שימוש במודלים של בעלי חיים עלולים להוביל לזיהוי של מנגנונים אפשריים של neuroprotection ולאפשר פיתוח של הליכי התערבות. זה עשוי לספק מידע נרחב על השפעות neuroprotective וההנחתה של ההשפעות המזיקות של חשיפה לאלכוהול במהלך הריון. מניעה אפשרית של ההשפעות של חשיפת אלכוהול טרום לידתי עשויה להיות כרוכה בטיפול בעכברים בהריון עם פפטידים אשר הוכחו להיות מעורבות בneuroprotection במבחנה 6,7 ו in vivo 1,2,4,8,9. בין פפטידים אלה, SALLRSIPA, המכונה ADNF-9 או סל, נגזר מהפעילות תלוי גורם נוירוטרופי (ADNF) 7,10. פפטיד נוסף עם רצף NAPVSIPQ פפטיד, NAP כינה, הנגזר מחלבון neuroprotective פעילות תלויה (ADNP) 6,11, הפגין אפקט מגן מפני סטרס חמצונים חזק הקשורים לחשיפת אלכוהול 12,13. בנוסף, לאחרונה זיהו פפטיד, colivelin חדש מסונתז שמופיע לשחק תפקיד מפתח בneuroprotective מודל חשיפת האלכוהול העוברי 2. Colivelin מורכב מADNF-9 ו-AGA (C8R) HNG17 (PAGASRLLLLTGEIDLP). את החשיבות של השימוש בפפטידים אלה היא שיש להם את היכולתלחצות את מחסום דם המוח כדי למנוע את ההשפעות של אפופטוזיס אלכוהול וגירעונות גדילת מוח. השיטות הניסיוניות השתמשו בעכברי C57BL / 6 לבדיקת השפעות neuroprotective נגד אפופטוזיס המושרה באלכוהול. אנחנו אימצו חלון 2-HR במקום רבייה הלילה על מנת להעריך במדויק את היום העוברי 0 (E0), כפי שיכול להתגלות על ידי זיהוי של התוספת זרע ולמרוח בנרתיק 1-5 זה. אנחנו השתמשנו בדיאטת נוזלים עם צינורות האכלה, כמו זה נחשב גישה החופשית במקום משלוח של אלכוהול דרך מסלול gavage, אשר עשוי לגרום ללחץ לעכברים בהריון. מצד השני, יכול להיות מאתגר microdissection בשל הרכות של רקמת המוח העוברית, אשר עשוי להיות נתקלו כאשר לנתח מוח עוברי בשלבים עובריים מוקדמים. כאן, אנו מציגים טכניקות דמיינו כדי להתמודד עם כל האתגרים הכרוכים בmicrodissection. יתר על כן, מאחר שחתך המוח העוברי גם יכול להיות מאתגר, אימצנוטכניקה שכרוכה בהטבעת המוח העוברי בתבניות באמצעות קליפה משם הטבעת ג&#39;לטין. יש לנו כבר בהצלחה בחיתוך המוח העוברי בסעיפים חופשיים שצפו בעובי 50 מיקרומטר. זה מאפשר לנו לחקור את כל שינויים של חלבון תוכן בחלקים במוח עוברי, כולל זיהוי של מוות של תאים.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent/equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Superfrost Plus Slides</td>
 <td>VWR</td>
 <td>48311-703</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PAP PEN</td>
 <td>Research Products Int. Corp.</td>
 <td>195506</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5-Plend Open Mailer </td>
 <td>Heathrow Scientific, LLC</td>
 <td>HS 15983G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Peel away embedding molds</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>70182</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>In situ cell death detection kit, POD</td>
 <td>Roche Diagnostics, Inc</td>
 <td>11684817910</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hanks' Balanced Salt Solution</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>14170-120 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gelatin Type A</td>
 <td>FisherScientific</td>
 <td>G8-500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Stereomicroscope</td>
 <td>W. NUHSBAUM, Inc </td>
 <td>Leica M60, KL 200 LED</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Vibratome</td>
 <td>Leica, Inc </td>
 <td>Leica VT 1000S</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Moria Ultra Fine Forceps </td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11370-40</td>
 <td>2 pairs</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graduate 30 ml feeding tubes</td>
 <td>Dyets, Inc </td>
 <td>900012 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vitamin Mix </td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>F8031 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mineral Mix</td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>F8598 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Maltose Dextrin</td>
 <td>Bio-Serv. Inc. </td>
 <td>3650 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethyl alcohol 190 Proof, 5 gallons</td>
 <td>111000190-SS05 </td>
 <td>Pharmco-AAPER</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Upright microscope</td>
 <td>W. NUHSBAUM, Inc</td>
 <td>LEICA DM 4000 </td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

experimental methods for testing the effects of neurotrophic peptide, adnf-9, against alcohol-induced apoptosis during pregnancy in c57bl/6 mice

עיצובים ניסיוניים לחוקרים את ההשפעות של חשיפת אלכוהול טרום לידתי בשלבים עובריים מוקדמים בצמיחת המוח העוברית מאתגרים. זה בעיקר בשל הקושי של microdissection של מוח העובר וחתכם להגדרה של תאים אפופטוטיים הנגרמים על ידי חשיפה טרום לידתי לאלכוהול. הניסויים שתוארו כאן לספק טכניקות דמיינו מעכברי רבייה לזיהוי של מוות של תאים ברקמת המוח עוברי. מחקר זה משמש C57BL / 6 עכברים כמודל חיה ללימוד חשיפת אלכוהול עוברית ותפקידיו של פפטיד trophic נגד אפופטוזיס המושרה באלכוהול. הרבייה מורכבת מחלון מחצלת 2-HR כדי לקבוע את השלב של גיל עוברי המדויק. מודל חשיפת אלכוהול עוברי שהוקם כבר בשימוש במחקר זה כדי לקבוע את ההשפעות של חשיפת אלכוהול טרום לידתי במוח העובר. זה כולל גישה החופשית לדיאטות נוזליות אלכוהול או זוג שייזון כמקור הבלעדי של חומרים מזינים לעכברים בהריון. S = &quot;jove_content&quot;&gt; הטכניקות מעורבות נתיחה של עוברים וMicrodissection של מוח העובר מתוארות בזהירות, שכן זו האחרונה יכולה להיות מאתגרת. Microdissection דורש stereomicroscope ומלקחי Ultra-בסדר. הליכי שלב אחר שלב ללנתח את המוח העובר מסופקים מבחינה ויזואלית. המוח העוברי הם גזורים מהבסיס של הנורה חוש הריח primordium לבסיס metencephalon. על חקירת אפופטוזיס, מוח עוברי מוטבע ראשון בג&#39;לטין באמצעות קליפת עובש משם כדי להקל על חתך שלהם עם מנגנון vibratome. המוח עוברי המשובצים והקבועים paraformaldehyde בקלות מחולק, ויכולים להיות מותקנים בסעיפים הצפים חינם בשקופיות בתוספת SuperFrost לנחישות של אפופטוזיס או מוות של תאים. Tunel (תיוג TdT בתיווך dUTP ניק הסוף; TdT: מסוף deoxynucleotidyl transferase) assay כבר משמש לזיהוי מות תא או תאים אפופטוטיים. ראוי לציין כי apoptosis וcytotoxicity בתיווך התא מאופיין בפיצול ה-DNA. לכן, התאים Tunel החיוביים דמיינו מעידים על מות תא או תאים אפופטוטיים. את העיצובים הניסיוניים כאן לספק מידע על השימוש בדיאטת נוזלים שהוקמו לחקר ההשפעות של אלכוהול ואת התפקיד של פפטידים neurotrophic במהלך ההריון במוח העובר. זה כרוך בגידול והאכלת עכברים בהריון, microdissecting מוח העובר, וקביעת אפופטוזיס. יחד, טכניקות חזותיות והטקסטואלי אלה עשויות להיות מקור לחקירת חשיפה טרום לידתי של גורמים מזיקים במוח העובר.

השיטות הניסיוניות מתוארות כאן מראים כי חלון רבייה 2-HR הוא חיוני כדי להעריך בשלב הריון מדויק. אנחנו הוכחנו נתיחה של העוברים בגיל E13. אנחנו גם הוכיחו microdissection של מוח העובר בE13. ההליך כרוך בכמה שלבים (AC), כפי שמתוארים באיור 1. מוח עוברי הם גזורים מהבסיס של הנורה חוש ?...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

את העיצובים הניסיוניים מוצעים כאן מתמקד בחקר ההשפעות של חשיפה לאלכוהול באפופטוזיס והיישום של פפטיד neurotrophic במהלך ההריון במוח של העובר. תיאור מפורט מהרבייה לאוסף של מוח העובר מתואר. טכניקות לקביעת אפופטוזיס גם מתוארות בפירוט.

שיטות ניסיוניות לבדיקת ההשפעות של הפפטיד neurotrophic, ADNF-9, נגד אפופטוזיס מושרה אלכוהול במהלך הריון בעכברי C57BL / 6

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

experimental-methods-for-testing-effects-neurotrophic-peptide-adnf-9

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.6K Views.  University of Toledo. את העיצובים הניסיוניים מוצעים כאן מתמקד בחקר ההשפעות של חשיפה לאלכוהול באפופטוזיס והיישום של פפטיד neurotrophic במהלך ההריון במוח של העובר. תיאור מפורט מהרבייה לאוסף של מוח העובר מתואר. טכניקות לקביעת אפופטוזיס גם מתוארות בפירוט.

Video: Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be accessed within the orbit of the eye and completely transected (axotomized), cutting the axons of the entire RGC population. Optic nerve transection is a reproducible model of apoptotic neuronal cell death in the adult CNS 1-4. This model is particularly attractive because the vitreous chamber of the eye acts as a capsule for drug delivery to the retina, permitting experimental manipulations via intraocular injections. The diffusion of chemicals through the vitreous fluid ensures that they act upon the entire RGC population. Viral vectors, plasmids or short interfering RNAs (siRNAs) can also be delivered to the vitreous chamber in order to infect or transfect retinal cells 5-12. The high tropism of Adeno-Associated Virus (AAV) vectors is beneficial to target RGCs, with an infection rate approaching 90% of cells near the injection site 6, 7, 13-15. Moreover, RGCs can be selectively transfected by applying siRNAs, plasmids, or viral vectors to the cut end of the optic nerve 16-19 or injecting vectors into their target the superior colliculus 10. This allows researchers to study apoptotic mechanisms in the injured neuronal population without confounding effects on other bystander neurons or surrounding glia. RGC apoptosis has a characteristic time-course whereby cell death is delayed 3-4 days postaxotomy, after which the cells rapidly degenerate. This provides a window for experimental manipulations directed against pathways involved in apoptosis. Manipulations that directly target RGCs from the transected optic nerve stump are performed at the time of axotomy, immediately after cutting the nerve. In contrast, when substances are delivered via an intraocular route, they can be injected prior to surgery or within the first 3 days after surgery, preceding the initiation of apoptosis in axotomized RGCs. In the present article, we demonstrate several methods for experimental manipulations after optic nerve transection.

Optic Nerve transection is a widely used model of adult CNS injury. This model is ideal for performing a number of experimental manipulations that target the retina globally or directly target the injured neuronal population of retinal ganglion cells.

שיטות מניפולציות ניסויית, לאחר חיתוך רוחב עצב הראייה של מערכת העצבים המרכזית היונקים

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Organotypic Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. Since then, the technique was developed further and currently there are many different ways to prepare organotypic cultures. The method presented here was adapted from the one described by Stoppini et al. for the preparation of the slices and from Gogolla et al. for the staining procedure 3,4.
A unique feature of this technique is that it allows you to study different parts of the brain such as hippocampus or cerebellum in their original structure, providing a big advantage over dissociated cultures in which all the cellular organization and neuronal networks are disrupted. In the case of the cerebellum it is even more advantageous because it allows the study of Purkinje cells, extremely difficult to obtain as dissociated primary culture. This method can be used to study certain developmental features of the cerebellum in vitro, as well as for electrophysiological and pharmacological experiments in both wild type and mutant mice.
The method described here was designed to study the effect of apoptotic stimuli such as Fas ligand in the developing cerebellum, using TUNEL staining to measure apoptotic cell death. If TUNEL staining is combined with cell type specific markers, such as Calbindin for Purkinje cells, it is possible to evaluate cell death in a cell population specific manner. The Calbindin staining also serves the purpose of evaluating the quality of the cerebellar cultures.

This method describes the generation of organotypic cerebellar cultures and the effect of certain apoptotic stimuli on the viability of different cerebellar cell types.

תרבויות cerebellar Organotypic: אתגרים אפופטוטיים וזיהוי

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous system. Overexpression of desired genes is just as possible as shRNA mediated loss-of-function studies. Therefore it offers a wide range of applications. The feasibility to target particular cells in a distinct area further increases the range of potential applications of this very useful method. For efficiently targeting specific regions knowledge about the subtleties, such as the embryonic stage, the voltage to apply and most importantly the position of the electrodes, is indispensable.
Here, we provide a detailed protocol that allows for specific and efficient in utero electroporation of several regions of the C57BL/6 mouse central nervous system. In particular it is shown how to transfect regions the develop into the retrosplenial cortex, the motor cortex, the somatosensory cortex, the piriform cortex, the cornu ammonis 1-3, the dentate gyrus, the striatum, the lateral septal nucleus, the thalamus and the hypothalamus. For this information about the appropriate embryonic stage, the appropriate voltage for the corresponding embryonic stage is provided. Most importantly an angle-map, which indicates the appropriate position of the positive pole, is depicted. This standardized protocol helps to facilitate efficient in utero electroporation, which might also lead to a reduced number of animals.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

This protocol describes in detail how to specifically transfect different regions in the C57BL/6 central nervous system via in utero electroporation. Included in this protocol are detailed instructions for transfections of regions that develop into the cortex, hippocampus, thalamus, hypothalamus, lateral septal nucleus and striatum.

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation בC57BL / 6 העכבר

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for neuroprotection, postconditioning treatments have proven to be promising therapies against cerebral ischemia. However, complicated procedures and potential safety issues limit their clinical application. To overcome these disadvantages, we have developed acidic postconditioning (APC) as a therapy for experimental focal cerebral ischemia. APC refers to the mild acidosis treatment by inhaling CO2 during reperfusion following ischemia. Here we present two models to execute APC in vitro and in vivo, respectively. The oxygen-glucose deprivation (OGD) treatment of mice and the corticostriatal occlusion and middle cerebral artery occlusion (MCAO) of mice were employed to mimic cerebral ischemia. APC can be simply achieved by transferring brain slices to acidic buffer bubbled with 20% CO2, or by mice inhaling 20% CO2. APC showed significant protective effects against cerebral ischemia, as reflected by tissue viability and brain infarct volume.

Acidic postconditioning protects against cerebral ischemia. Here we present two models to execute APC. They are achieved respectively by transferring corticostriatal slices to acidic buffer after oxygen-glucose deprivation in vitro and by inhaling 20% CO2 after middle cerebral artery occlusion in vivo.

מודלים ניסיוניים לחקר הנוירו-פרוטקציה של התסמינים החומציים נגד איסכמיה מוחית

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...

Sagittal Plane Kinematic Gait Analysis in C57BL/6 Mice Subjected to MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the application of these techniques to identify gait deficits in a mouse model of MS, known as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Paralysis and motor deficits in mice subjected to EAE are typically assessed using a clinical scoring scale. However, this scale yields only ordinal data that provides little information about the precise nature of the motor deficits. EAE disease severity has also been assessed by rotarod performance, which provides a measure of general motor coordination. By contrast, kinematic gait analysis of the hind limb in the sagittal plane generates highly precise information about how movement is impaired. To perform this procedure, reflective markers are placed on a hind limb to detect joint movement while a mouse is walking on a treadmill. Motion analysis software is used to measure movement of the markers during walking. Kinematic gait parameters are then derived from the resultant data. We show how these gait parameters can be used to quantify impaired movements of the hip, knee, and ankle joints in EAE. These techniques may be used to better understand disease mechanisms and identify potential treatments for MS and other neurodegenerative disorders that impair mobility.

Kinematic gait analysis in the sagittal plane yields highly precise information about how movement is executed. We describe the application of these techniques to identify gait deficits for mice subjected to autoimmune-mediated demyelination. These methods may also be used to characterize gait deficits for other mouse models featuring impaired locomotion.

המטוס Sagittal קנטית והרצתי ניתוח בעכברים C57BL/6 נתון MOG35-55 המושרה חיסון ניסיוני של דלקת המוח וחוט השדרה

Kinematic gait analysis in the sagittal plane has frequently been used to characterize motor deficits in multiple sclerosis (MS). We describe the ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by immunizing mice with neurogenic peptides to direct an inflammatory attack toward components of the peripheral nervous system (PNS). Recent advances have enabled the induction of EAN in the relatively resistant C57BL/6 mouse line using myelin protein zero (P0)106-125 or P0180-199 peptides delivered in adjuvant combined with the injection of pertussis toxin. The ability to induce EAN in the C57BL/6 strain allows for the use of the numerous genetic tools that exist on this mouse background, and thus allows the sophisticated study of disease pathogenesis and interrogation of the mechanistic action of novel therapeutics in combination with transgenic approaches. In this study, we demonstrate a simple approach to successfully induce EAN using the P0180-199 peptide in C57BL/6 mice. We also outline a protocol for the assessment of functional deficits that occur in this model, accompanied by an array of neuropathological features. Thus, this model is a powerful experimental model to study the pathogenesis of human peripheral demyelinating neuropathies, and to determine the efficacy of potential therapies that aim to promote myelin repair and protect against nerve damage in autoimmune neuritis.

This report outlines a simple approach to successfully induce experimental autoimmune neuritis (EAN) using the myelin protein zero (P0)180-199 peptide in combination with Freund&#39;s complete adjuvant and pertussis toxin. We present a sophisticated paradigm capable of accurately assessing the extent of functional deficits and neuropathology that occur in this EAN.

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of hearing. Improvement of the implant technology is needed if CI users are to perceive music and perform in more natural environments, such as hearing out a voice with competing talkers, reflections, and other sounds. Such improvement requires experimental animals to better understand the mechanisms of electric stimulation in the cochlea and its responses in the whole auditory system. The mouse is an increasingly attractive model due to the many genetic models available. However, the limited use of this species as a CI model is mainly due to the difficulty of implanting small electrode arrays. More details about the surgical procedure are therefore of great interest to expand the use of mice in CI research.
In this report, we describe in detail the protocol for acute deafening and cochlear implantation of an electrode array in the C57BL/6 mouse strain. We demonstrate the functional efficacy of this procedure with electrically-evoked auditory brainstem response (eABR) and show examples of facial nerve stimulation. Finally, we also discuss the importance of including a deafening procedure when using a normally hearing animal. This mouse model provides a powerful opportunity to study genetic and neurobiological mechanisms that would be of relevance for CI users.

Animal models of cochlear implants can advance knowledge of the technological bases of treating permanent sensorineural hearing loss with electrical stimulation. This study presents a surgical protocol for acute deafening and cochlear implantation of an electrode array in mice as well as the functional assessment with auditory brainstem response.

ניתוח שתל שבלולי והקלטות תגובה חשמלית עורר גזע המוח בעכברים C57BL/6

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of ...

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the CSF protein composition delivers crucial information in basic neuroscience research as well as neurological diseases. One caveat is that proteins measured in CSF may derive from both intrathecal synthesis and transudation from serum, and protein analysis of CSF can only determine the sum of these two components. To discriminate between protein transudation from the blood and intrathecally produced proteins in animal models as well as in humans, CSF protein profiling measurements using conventional protein analysis tools must include the calculation of the albumin CSF/serum quotient (Qalbumin), a marker of the integrity of the blood-brain interface (BBI), and the protein index (Qprotein/Qalbumin), an estimate of intrathecal protein synthesis. This protocol illustrates the entire procedure, from CSF and blood collection to quotients and indices calculations, for the quantitative measurement of intrathecal protein synthesis and BBI impairment in mouse models of neurological disorders.

Elevated spinal fluid protein levels can either be the result of diffusion of plasma protein across an altered blood-brain barrier or intrathecal synthesis. An optimized testing protocol is presented in this article that helps to discriminate both cases and provides quantitative measurements of intrathecally synthesized proteins.

מדידה כמותית של מתוך מסונתז חלבונים בעכברים

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Murine Corneal Nerve Abrasion for the Induction of Neurotrophic Keratitis

To begin corneal abrasion, place an anesthetized mouse on a table. Apply a drop of artificial tear on the eye undergoing the surgery. Apply a drop of ocular gel on the contralateral eye.Next, position the mouse on its side on a heated plate. Gently use a cotton swab to absorb the artificial tear, and brush aside the mouse's eyelashes without making contact with the eye. Turn on the ocular burr, and carefully open the mouse's eyelid with two fingers.Simultaneously shield the vibrancy to prevent them from entangling in the burr. Locate the pupil or the eye center and gently apply the ocular burr to the eye's surface in circular motions until the epithelium is removed. Alternatively, perform about 20 circular movements on the cornea.Now apply a drop of fluorescent staining solution on the abraided eye. After 20 seconds, dab the eye with a tissue to absorb the solution. Then rinse it with a drop of artificial tear.Finally, absorb the artificial tear with a tissue, and illuminate the eye using a blue cobalt lamp. Prior to the surgery, the basal epithelium was intact and the nerve fibers in the sub basal plexus formed a vortex. The burr tip removed the outer corneal layer, leaving the stroma and endothelium intact with a visible gap at the basal epithelium and sub basal plexus.Regeneration of the epithelium occurred over a week post-surgery. However, the vortex remained absent from the corneal center.

שחיקת עצב הקרנית להשראת קראטיטיס נוירוטרופית

פרדיגמת לחץ חברתי בגיל ההתבגרות בעכברי C57BL/6 למחקר התנהגותי

Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL&#47;6 Male and Female Mice

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female rodents is needed to understand its effects on ongoing brain development and behavioral outcomes. The chronic social defeat stress paradigm (CSDS) has been widely used to model social stress in adult C57BL/6 male mice by leveraging on the aggressive behavior displayed by an adult male rodent to an intruder invading its territory. An advantage of this paradigm is that it allows to categorize defeated mice into resilient and susceptible groups based on their individual differences in social behavior 24 h after the last defeat session. Implementing this model in adolescent C57BL/6 mice has been challenging because adult or adolescent mice do not typically attack early adolescent male or female mice and because adolescence is a short period of life, encompassing discreet temporal windows of vulnerability. This limitation was overcome by adapting an accelerated version of the CSDS to be used for adolescent male and female mice. This 4-day stress paradigm with 2 physical attack sessions per day uses a C57BL/6 male adult to prime the CD-1 mouse for aggressiveness such that it readily attacks the male or female adolescent mouse. This model was termed accelerated social defeat stress (AcSD) for adolescent mice. Adolescent exposure to AcSD induces social avoidance 24 h later in both males and females, but only in a subset of defeated mice. This vulnerability occurs despite the number of attacks being consistent across sessions between resilient and susceptible groups. The AcSD model is short enough to allow exposure during discrete periods within adolescence, allows the segregation of mice according to the presence or absence of social avoidance behavior, and is the first model available to study social defeat stress in adolescent C57BL/6 female mice.

מחבר זרקור: הבנת השפעות מצוקה חברתית בגיל ההתבגרות על התפתחות עצבית בעכברים

We developed an accelerated social defeat stress model for adolescent C57BL/6 mice, which works in both males and females and allows exposure during discrete adolescent periods. Exposure to this model induces social avoidance, but only in a subset of defeated male and female mice.

מודל לחץ תבוסה חברתית עבור עכברים מתבגרים C57BL/6 זכרים ונקבות

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female ...