This protocol follows any and all animal care and use guidelines and regulations set by IACUC at the University of Cincinnati. This work is funded by NIH/NINDS NS07722 and the Gardner Family Center for Parkinson&#8217;s Disease and Movement Disorders.

כל הצעדים של פרוטוקול מעקב הטיפול בבעלי החיים ולהשתמש בהנחיות והתקנות שנקבעו על ידי IACUC של אוניברסיטת סינסינטי. .1 שיקולים כלליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת האפשר, לבדוק עכברים במהלך השלב הפעיל שלהם במחזור הכהה. בדרך כלל, לבצע בדיקה תחת אור נמוך ושעה לפחות 1 למחזור הכהה. עם זאת, אם בדיקה במחזור הכהה היא לא ריאלי, לבצע את כל שלוש הבדיקות במהלך מחזור האור. זכור כי מרחרחים פעמים עלול לגרום לירידה כאשר עכברים שנבדקו במהלך מחזור השינה שלהם. הערה: בעוד שניתן לבצע הבדיקות במהלך מחזור שנת העכברים עשויים להראות פחות עניין בגלולה נקברה, בלוקים, או מחסנית ריחנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להקטין את ההשפעה של רמזי חוש הריח בחוץ, ללבוש זוג בסיס של כפפות בכל העת לאורך כל בדיקה ולאחר מכן למקם זוג נקי של כפפות על זוג הבסיס לכל עכבר וכל ניסוי. ככלל, במקרה של ספק, לשים על סט נקי של כפפות. האם קופסא של כפפות לקרואily זמין כיוון שהם יהיו שונה בתדירות גבוהה. הערה: אנו משתמשים בכפפות ניטריל לכל הטיפול בבעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומרי ניקוי בדיקה וכלובים בין נושאים עם חומר חיטוי / עיקור הסוכן הוא גם צעד חשוב בסוללה זו של בדיקות על מנת לצמצם את הפוטנציאל להפצת מחלה, כמו גם להסיר את רמזי חוש הריח לא רצויים. </li></ol> מבחן גלולה קבור .2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפחות יומיים לפני הבדיקה, להקליט את המשקל של כל עכבר ולאחר מכן מזון להגביל 90% ממשקל גוף. לפני הבדיקה ובמהלך הגבלת מזון, לתת לכל עכבר 1-2 חתיכות של כדורים לשימוש במהלך הבדיקה (למשל, פיסת דגנים ממותקים). לא לדלג על השלב הזה, כי עכברי neophobic עם אוכל ולא יכולים לחפש את הכדור במהלך הבדיקה אם הם לא אכלו את כדורים בעבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכל ימי המבחן, להרגיל עכברים עבור שעה 1 לפני בדיקה על ידי הצבת את הכלוב שלהם בחדר הבדיקות עם לא בקבוק מים או מזין בב. ביתם בכלוב בבית שלהם רק עם מכסה העליון של מסנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך התרגלות, למלא כלוב עכבר נקי ~ 3 סנטימטר גבוה עם מצעים נקיים ביצוע מסוימים המצעים מופץ באופן שווה לאורך כל הכלוב. להגדיר טיימר למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות שעה 1 של התרגלות, לקבור 1 גלולה דגני 0.5 סנטימטר ממותק מתחת למצעים, כך שהוא אינו נראה לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את עכבר המבחן מהכלוב בבית שלה, למקם אותו במרכז כלוב המבחן, למקם את המכסה העליון של מסנן בכלוב ולהתחיל את הטיימר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעצור את שעון העצר כאשר העכבר חושף את גלולה ומתחיל לאכול אותו. שים לב לזמן לחשוף את גלולה נקברה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם העכבר אינו מוצא את גלולה תוך 5 דקות, בסופו של המשפט ולציין ציון של 300 שניות לעכבר ש. הזז את הכדור לחלק העליון של המיטה ולכן יש עכבר גישה אליו, ולאפשר לעכבר לאכול את הכדור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות המשפט, להחזיר את העכבר לכלוב בבית שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוקן את המצעים מכלוב המבחן ולנקות את גגיל עם תמיסת ניקוי חדר בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על השלבים 2.4-2.9 לכל עכבר, ולשנות את הכפפות לפני ואחרי כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי כל העכברים נבדקו, לתת להם מספיק מזון כדי לשמור אותם ב90% במשקל גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תבצע את הבדיקות בימים 2-5 באותה צורה כמו היום מבחן 1 עם חריג אחד; לקבור את הכדור במקום אחר בכלוב לכל ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הבדיקה 6, לבצע את הניסוי גלולה משטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניסוי גלולה המשטח, לפי אותו הנוהל ליום מבחן 1 אבל במקום לקבור את הכדור מתחת למקום זה במצעים על גבי המצעים. רשום את הזמן לעכבר כדי למצוא ולהתחיל לאכול את הכדור. </li></ol> מבחן בלוק 3 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנפרד לשכן עכברים בכלובים נקיים ומניח 5 בלוקים בכלוב (שכותרתו AE), שינוי כפפות לפני הקמת כל כלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את שעה מבחן 24 מאוחר יותר. הזז עכברי מבחן לאזור הבדיקה, להסיר את סל בקבוק מים ומזין, ולמקם את אלl 5 בלוקים מהכלוב יחד עם קומץ של מצעים לתוך שקית פלסטיק שכותרתו עם זיהוי של בעל החיים. מניחים את שקית הפלסטיק האטום על גבי הכלוב בביתו של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיל את החיות בכלוב בבית שלהם בלי בקבוק המים, בן מזין, ובלוקים עבור שעה 1 לפני הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות כפפות בין כל כלוב, כך שהריחות אינם מוחלפים בין בעלי חיים / בלוקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשורה כלובי העכבר לצד זה על שולחן עם לפחות 10 סנטימטר בין כל כלוב. מקם מצלמת וידאו, כך שהחלק הקדמי של הכלוב (לא בצד של הכלוב הארוך) הוא בתצוגה ברורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיוונת את הטיימר ל30 שניות ותווית כרטיס עם הפרטים החשובים הניסוי (תאריך, מזהה עכבר, משפט, וכו &#39;). קלטת וידאו את התווית של 2-3 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר בלוקים לספירה משקית הניילון עם זיהוי של העכבר ושלמקם אותם באמצע הכלוב, כך שהם נראים בבירור במצלמת הווידאו. ודא שיש ~ 1 סנטימטר oחלל f בין כל אחד מהגושים. הנח את החלק העליון של המסנן חזרה על הכלוב. התחל את הטיימר וקלטת וידאו ל30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 30 שניות, לעצור את ההקלטה ולהסיר בלוקים מהכלוב ומניח בחזרה לשקית הניילון אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות כפפות ולאחר מכן לעבור לעכבר הבא, חוזר על אותו התהליך המשמש לניסוי הראשון. לעשות את זה עבור הסכום כולל של 6 ניסויים עבור כל עכבר כדי לוודא שיש מרווח בין משפט של ~ 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על המשפט ה -7, לפי אותו הנוהל לניסויים 1-6 למעט במקום הצבת הבלוק D מכלוב משלו של העכבר להוסיף E בלוק מהכלוב של עכבר אחר כך העכבר חשוף ללוקים, B, C ומשלה כלוב שלו בבית וE בלוק מהכלוב של עכבר אחר. שים לב בספר המעבדה הבלוק שE כל עכבר חשוף ולחלופי שבי E בלוק ממוקמת בכלוב של כל עכבר (למשל, ABCE או AEBC). קח E בלוק מעכבר מאותו המין, אך לא מcagemate מקורי. ויdeotape ל30 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות 7 הניסויים, לחזור בעלי חיים לכלוב נקי חדש עם cagemates המקורי שלהם. בלוקים נקיים המשמשים במבחן עם חומר ניקוי עדין ומים ולאפשר לאוויר יבש לשימוש בבדיקות מאוחרות יותר. </li></ol> .4 הרגלה / Dishabituation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את בדיקת ההתרגלות / dishabituation באופן דומה למבחן הבלוק אך במקום להשתמש בלוקים שיש לי הריח של עכבר, להשתמש במחסניות רקמה מחזיקות כותנה בניחוח זוגות שונים של תמציות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הפעולות 3.1-3.4 שימוש במחסנית אחת, ללא בישום רקמה במקום בלוקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיל עכברים בחדר הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מחסניות רקמה ריחנית בחדר נפרד. מניחים כדור צמר גפן קטן לתוך מחסנית נקייה ולאחר מכן להוסיף 5 μl של תמצית (למשל, תמצית שקדים) לכותנה. הצמד עליון מחסנית על הכותנה והמקום בתיבה ייעודית או בתיק שכותרתו עם ריח ש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות את אותו הדבר ו ההליךאו ריח שני (למשל, תמצית אניס). לשנות כפפות בין טיפול בריחות שונים. ודא כדור צמר גפן הוא עטוף לגמרי במחסנית הרקמה. הערה: חשוף סיבים מכדור צמר גפן עלולים לגרום לבעלי החיים יש עניין בכדור צמר גפן למטרות קינון ולא הריח עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, בצע את הפעולות 3.6-3.10 באמצעות מחסנית אחת ריחנית רקמה בששת הניסויים הראשונים, ואת מחסנית הרקמה הריחנית השנייה לניסוי השביעי. </li></ol> .5 ניתוח של סרטוני וידאו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבלוק ובדיקות ההתרגלות / dishabituation, יש לי עיוור מדרג לתנאי ניסוי למדוד את המשך הזמן מרחרח כל בלוק, עם מרחרח מוגדר כמגע האף עם בלוק ש. אם תרצה, למדוד התנהגויות אחרות כגון זמן להתקרב לבלוק הרומן (E) במהלך ניסיון 7 ופעילות כוללת (מספר התנועות שנעשו לאורכה ורוחבה של כלוב בבית) במהלך כל ניסוי. ציון המשך הזמן מרחרחזמן ד להתקרב מקלטת הווידאו באמצעות שעון עצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדומה לכך, לבדיקת ההתרגלות / dishabituation, יש לי עיוור מדרג לתנאי ניסוי למדוד את המשך הזמן מרחרח את המחסנית, הזמן להתקרב למחסנית, והפעילות של תנועה. </li></ol> .6 סטטיסטיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הבדיקה גלולה נקברה באמצעות סטטיסטיקה פרמטרית כי חביון למצוא גלולה ציונים נוטים להראות ההטרוגניות של שונות. ממוצע חביון לאתר את הכדור על פני ימים 3-5 ולאחר מכן להשוות בין קבוצות של עכברים באמצעות Mann-Whitney U-מבחן. באופן דומה, לחלק גלולה פני השטח של המבחן, לנתח חביון למצוא גלולה באמצעות Mann-Whitney U-מבחן כדי להשוות גנוטיפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקת הבלוק, לנתח את הנתונים מ7 משפט (הקדמה של הבלוק בניחוח הרומן). בדרך כלל, מעסיק ניתוחים פרמטרית לדין וחשבון על ההטרוגניות של שונות. על מנת לנתח את ההבדלים בזמן בילה מרחרח הבלוק רומן דואר כמו גם זמן לפנות ללוקים לקבוצות ניסוי שונים, להשתמש בMann-Whitney U-המבחן. השתמש בבדיקת דרגה חתומה Wilcoxon כדי להשוות את משך זמן מרחרח את בלוק הרומן לעת בילה מרחרח את הלוקים המוכרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למבחן ההתרגלות / dishabituation, פרמטרי התנהלות מנתח בניסויים 1, 6 ו -7, בדומה למחקרים קודמים 20. אם עכברים להפגין לא מעט על מנת מרחרח, להשתמש ניתוחים פרמטרית. </li></ol>

<ol>
	<li>Hawkes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+in+neurodegenerative+disorder.">Olfaction in neurodegenerative disorder.</a> Adv. Otorhinolaryngol. 63, 133-151 (2006).</li><li>Ward, C., Hess, W., Calne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+impairment+in+Parkinson's+disease.">Olfactory impairment in Parkinson's disease.</a> Neurology. 33, 943-946 (1983).</li><li>Doty, R., Stern, M., Pfeiffer, C., Gollomp, S., Hurtig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilateral+olfactory+dysfunction+in+early+stage+treated+and+untreated+idiopathic+Parkinson's+disease.">Bilateral olfactory dysfunction in early stage treated and untreated idiopathic Parkinson's disease.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 55, 138-142 (1992).</li><li>Doty, R., Deems, D., Stellar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+in+parkinsonism:+a+general+deficit+unrelated+to+neurologic+signs,+disease+stage,+or+disease+duration.">Olfactory dysfunction in parkinsonism: a general deficit unrelated to neurologic signs, disease stage, or disease duration.</a> Neurology. 38, 1237-1244 (1988).</li><li>Tissingh, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+olfaction+in+de+novo+and+treated+Parkinson's+disease:+possible+implications+for+early+diagnosis.">Loss of olfaction in de novo and treated Parkinson's disease: possible implications for early diagnosis.</a> Movement Disorders. 16 (1), 41-46 (2001).</li><li>Montgomery, E., Baker, K., Lyons, K., Koller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+performance+on+the+PD+test+battery+by+asymptomatic+first-degree+relatives.">Abnormal performance on the PD test battery by asymptomatic first-degree relatives.</a> Neurology. 52, 757-762 (1999).</li><li>Berendse, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclinical+dopaminergic+dysfunction+in+asymptomatic+Parkinson's+disease+patients'+relatives+with+a+decreased+sense+of+smell.">Subclinical dopaminergic dysfunction in asymptomatic Parkinson's disease patients' relatives with a decreased sense of smell.</a> Ann. Neurol. 50 (1), 34-41 (2001).</li><li>Ponsen, M., Stoffers, D., Booij, J., van Eck-Smit, B., Wolters, E., Berendse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+hyposmia+as+a+preclinical+sign+of+Parkinson's+disease.">Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 56, 173-181 (2004).</li><li>Langston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Parkinson's+complex:+parkinsonism+is+just+the+tip+of+the+iceberg.">The Parkinson's complex: parkinsonism is just the tip of the iceberg.</a> Ann. Neurol. 59 (4), 591-596 (2006).</li><li>Ross, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+olfactory+dysfunction+with+risk+for+future+Parkinson's+disease.">Association of olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 63, 167-173 (2008).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+alpha-synuclein.">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human alpha-synuclein.</a> J. Neurosci. 24, 9434-9440 (2004).</li><li>Fleming, S., Ekhator, O., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson's+disease.">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> J. Vis. Exp. , e50303 (2013).</li><li>Schallert, T., Tillerson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+degeneration+of+DA+neurons+in+parkinsonism:+Optimizing+behavioral+assessment+of+outcome.">Intervention strategies for degeneration of DA neurons in parkinsonism: Optimizing behavioral assessment of outcome.</a> Central Nervous System Diseases. , 131-151 (2000).</li><li>Whishaw, I., O'Connor, W., Dunnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contributions+of+motor+cortex,+nigrostriatal+dopamine+and+caudate-putamen+to+skilled+forelimb+use+in+the+rat.">The contributions of motor cortex, nigrostriatal dopamine and caudate-putamen to skilled forelimb use in the rat.</a> Brain. 109 (5), 805-843 (1986).</li><li>Schwarting, R., Huston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unilateral+6-hydroxydopamine+lesion+model+in+behavioral+brain+research.+Analysis+of+functional+deficits,+recovery+and+treatments.">The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments.</a> Prog Neurobiol. 49 (3), 215-266 (1996).</li><li>Glasl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pink1-deficiency+in+mice+impairs+gait,+olfaction+and+serotonergic+innervation+of+the+olfactory+bulb.">Pink1-deficiency in mice impairs gait, olfaction and serotonergic innervation of the olfactory bulb.</a> Experimental Neurology. 235, 214-227 (2012).</li><li>Kim, Y., Lussier, S., Rane, A., Choi, S., Andersen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+dopaminergic+glutathione+depletion+in+an+&#945;-synuclein+transgenic+mouse+model+results+in+age-related+olfactory+dysfunction.">Inducible dopaminergic glutathione depletion in an &#945;-synuclein transgenic mouse model results in age-related olfactory dysfunction.</a> Neuroscience. 172, 379-386 (2011).</li><li>Fleming, S., Tetreault, N., Mulligan, C., Huston, C., Masliah, E., Chesselet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+deficits+in+mice+overexpressing+human+wildtype+alpha-synuclein.">Olfactory deficits in mice overexpressing human wildtype alpha-synuclein.</a> The European Journal of Neuroscience. 28 (2), 247-256 (2008).</li><li>Nuber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+progressive+dopaminergic+phenotype+associated+with+neurotoxic+conversion+of+&#945;-synuclein+in+BAC-transgenic+rats.">A progressive dopaminergic phenotype associated with neurotoxic conversion of &#945;-synuclein in BAC-transgenic rats.</a> Brain. 136 (2), 412-432 (2013).</li><li>Macknin, J., Higuchi, M., Lee, V., Trojanowski, J., Doty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+occurs+in+transgenic+mice+overexpressing+human+tau+protein.">Olfactory dysfunction occurs in transgenic mice overexpressing human tau protein.</a> Brain Res. 1000, 174-178 (2004).</li><li>Lazic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+abnormalities+in+Huntington's+disease:+decreased+plasticity+in+the+primary+olfactory+cortex+of+R6/1+transgenic+mice+and+reduced+olfactory+discrimination+in+patients.">Olfactory abnormalities in Huntington's disease: decreased plasticity in the primary olfactory cortex of R6/1 transgenic mice and reduced olfactory discrimination in patients.</a> Brain Res. 1151, 219-226 (2007).</li><li>Wesson, D., Wilson, D., Nixon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+olfactory+dysfunction+be+used+as+a+biomarker+of+Alzheimer's+disease?.">Should olfactory dysfunction be used as a biomarker of Alzheimer's disease?.</a> Expert Review of Neurotherapeutics. 10 (5), 633-635 (2010).</li><li>Taylor, T., Caudle, W., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VMAT2-deficient+mice+display+nigral+and+extranigral+pathology+and+motor+and+nonmotor+symptoms+of+Parkinson's+disease.">VMAT2-deficient mice display nigral and extranigral pathology and motor and nonmotor symptoms of Parkinson's disease.</a> Parkinsons Dis. 2011, 124-165 (2011).</li><li>Tillerson, J., Caudle, W., Parent, J., Gong, C., Schallert, T., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+discrimination+deficits+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter+or+the+D2+dopamine+receptor.">Olfactory discrimination deficits in mice lacking the dopamine transporter or the D2 dopamine receptor.</a> Behav. Brain Res. 172, 97-105 (2006).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+trial+of+the+microtubule-interacting+peptide+(NAP)+in+mice+overexpressing+alpha-synuclein+shows+improvement+in+motor+function+and+reduction+of+alpha-synuclein+inclusions.">A pilot trial of the microtubule-interacting peptide (NAP) in mice overexpressing alpha-synuclein shows improvement in motor function and reduction of alpha-synuclein inclusions.</a> Mol. Cell. Neurosci. 4, 597-606 (2011).</li><li>Crawley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong with My Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice. , (2000).</li><li>Nathan, B., Yost, J., Litherland, M., Struble, R., Switzer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+function+in+apoE+knockout+mice.">Olfactory function in apoE knockout mice.</a> Behav. Brain Res. 150, 1-7 (2004).</li><li>Spinetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol-induced+retrograde+memory+impairment+in+rats:+prevention+by+caffeine.">Alcohol-induced retrograde memory impairment in rats: prevention by caffeine.</a> Psychopharmacology. 201 (3), 361-371 (2008).</li><li>Bielsky, I., Hu, S., Szegda, K., Westphal, H., Young, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+impairment+in+social+recognition+and+reduction+in+anxiety-like+behavior+in+vasopressin+V1a+receptor+knockout+mice.">Profound impairment in social recognition and reduction in anxiety-like behavior in vasopressin V1a receptor knockout mice.</a> Neuropsychopharmacology. 29, 483-493 (2004).</li></ol>

We have no conflicts of interest.

כל אחת מהבדיקות שתוארו במחקר זה למדוד היבטים שונים של תפקוד חוש הריח בעכברים. המבחן גלולה נקבר מודד את היבט המוטיבציה מזון של olfaction, בודק את היכולת של רעב (מזון המוגבל, לא נשללו מזון) עכברים כדי לזהות פיסת הדגנים ממותקים נקברו תחת מצעים טעימה. מבחן הבלוק מודד יותר של ההיבט החברתי של פונקצית חוש הריח, בדיקת היכולת של עכברים להבחין בין הריח שלהם וזה של conspecific. מבחן ההתרגלות / dishabituation מעריך את היכולת של העכבר כדי להפלות בין ריחות בלתי מזיקים מוכרים ורומן,. שימוש בבדיקות מרובות היא חשובה בעת אפיון מודל חדש, כי חריגות במוטיבציה מזון או פחד יכולות לתרום להבדלים שנצפו בעכברים שעברו מוטציה בהשוואה לקבוצת ביקורת. לדוגמא, אם רק מבחן הבלוק מתבצע וירידה ברחרוח של הבלוק שהריח של עכבר אחר הוא ציין, לא ברור אם יש olfactגירעון אורים או תגובת פחד משופרת לconspecific שעשויה להוביל להימנעות מבלוק ש. כאשר בדיקות מרובות מבוצעות וגירעונות הם נצפו בכל הבדיקות, זה מאוד תומך פרשנות של ירידת ערך חוש הריח. עם זאת, אם הבדלים הם נצפו במבחן אחד בלבד, אך לא לאחרים אז ייתכן שיש ירידת ערך חוש הריח עדינה יותר אבל זה יהיה חיוני כדי לשלול הסברים אחרים (כלומר, פחד משופר או מוטיבציה מזון מופחתת). גורמים חשובים נוספים שכדאי לזכור כאשר בודקים עכברי פונקצית חוש הריח כוללים מתח הרקע ומין של העכברים. זני רקע גנטי שונים (כלומר, C57BL / 6, DBA, וכו &#39;) יכולים להיות השפעה עמוקה על התנהגות עכבר ולכן, מומלץ להתאים את כל פרוטוקול בעכברי wildtype מאותו הרקע לפני ביצוע הניסוי כולו. מומלץ גם שזכר ונקבות עכברים להיבדק בנפרד זה מזה בגלל מערכת חוש הריח הגברית היא גבוההly רגיש לנקבות בזיהוי ייחום וחוש הריח של נשים בייחום יכול להפריע לביצועים בכל שלושת המבחנים. כמה צעדים קריטיים למעקב כאשר בודקים olfaction בעכברים. חשוב להיות מודע לריחות הנסיין מציג לבעלי החיים. לבישת כפפות לנהלים משתנה חיוני ותכוף של כפפות בין בעלי החיים נדרש. זה תמיד טוב להתאמן לניסוי לא ללבוש בושם או בושם בימי בדיקות olfaction. בעוד חלקים מסוימים של ההליך הם בלתי גמישים, יש חלקים אחרים שיכול להיות שונה ומותאמים, מבלי להקטין את תוקפו או רגישות של הבדיקה. לדוגמא, מספר מחקרי התרגלות ניתן להגדיל או להקטין בהתאם לזן של עכברים שנבדק וכמה מהר הם להרגיל לגירויים. המגבלה העיקרית של הבדיקות הללו היא שהם כולם מונעים על ידי צורה כלשהי של מוטיבציה, יהיה זה מזון או חברתי, מה שהופך אתזה קשה לשלוט לחלוטין את חריגות במוטיבציה כהסבר כאשר תגובה שינו נצפתה. זה יכול להיות ממוזער על ידי ניתוח פרמטרים נוספים, כגון פעילות במהלך בדיקה והזמן להתקרב גירויים. ברגע שמשתלט עליו, הבדיקות יכולות לשמש בקלות בבדיקת הפנוטיפ של דגמי עכבר רומן של מחלה ניוונית של מערכת עצבים. בנוסף, הבדיקות שיש בכח הגבוה ביותר ניתן לכלול במחקרים פרה בדיקת תרופות פוטנציאליות (לדוגמא ראה נ&quot;צ. 25).

תפקוד לקוי של חוש הריח קשור למספר ההפרעות ניווניות כוללים מחלת פרקינסון (PD), מחלת אלצהיימר, ומחלת הנטינגטון 1. בפ&quot;ד, ליקויי חוש הריח כוללים גירעונות בזיהוי ריח, זיהוי, ואפליה ונמצאים בעד 70-95% מחולי 2-5. גירעונות אלה יכולים להקדים את הסימפטומים מוטורי קרדינל של PD בשיעור של עד 4 שנים, מצביעים על כך שתפקוד לקוי של חוש הריח עשוי לאותת המוקדמים של PD 6-10 השלבים. ההתרחשות המוקדמת של גירעונות חוש הריח בפ&quot;ד הובילה לעניין רב בתפקוד הלקוי של חוש הריח והמנגנונים הבסיסיים מעורבים ב. במחקרים פרה במכרסמים, בעיות בתפקוד חוש הריח יכול להיות מדד תוצאה רגיש לחזות את הפוטנציאל הטיפולי של אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. בדיקות רבות תוכננו ושימוש נרחב לאפיין ליקויים הסנסורית במודלים של מכרסמים של PD ולtest את הפוטנציאל הטיפולי של טיפולים חדשניים 11-15. למרות גירעונות חוש הריח מתועדים היטב בPD, פונקצית חוש הריח לא נמדדת באופן שגרתי בדגמים רבים. השקפה זו משתנה אם כי עם הגילוי של צורות גנטיות של מחלת הפרקינסון והרעיון מקובל יותר שפ&quot;ד הוא הפרעה מערכתית המשפיעה על יותר מאשר רק פונקציה הסנסורית. נכון לעכשיו, יש מספר רב של מחקרים בעכברי מודל גנטיים של מחלת הפרקינסון והפרעות ניווניות אחרות שכוללים כעת ניתוח של olfaction באפיון 16-24. לאור ההתעניינות הגובר של בעיות בתפקוד חוש הריח בהפרעות ניווניות, ביקשתי להרכיב סוללה של בדיקות חוש הריח, שניתן להשתמש כדי לאפיין מודלים רומן של ניוון מוחיים, כמו גם טיפולי שינוי מחלה פוטנציאל מבחן במחקרים פרה. הבדיקות שתוארו במחקר הנוכחי נעשו שימוש בשני אפיון ומחקרים פרה 18,25. בדיקות highlighted במחקר זה הוכח להיות רגיש באיתור בעיות בתפקוד חוש הריח במודל של עכברי overexpressing אלפא סינוקלאין לעתים קרובות מנוצל למחלת פרקינסון 18. הם כוללים את המבחן נקבר גלולה 26,27, גרסה מותאמת של מבחן הבלוק 23,24,28,29, ומבחן ההתרגלות / dishabituation 30. חשוב לציין כי יש מספר עיבודים של הבדיקות שתוארו במחקר זה, כי הם אמצעים רגישים של תפקוד חוש הריח בעכברים, אלה מודגשים במחקר זה הם בדיקות המעבדה שלנו יש הכי הרבה הניסיון עם ומשתמשת באופן שיגרתי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="352">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Cap&#39;n Crunch</td>
			<td style="width:88px;">Quaker Oats</td>
			<td align="right" style="width:88px;">3E+10</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Wooden Blocks</td>
			<td style="width:88px;">Lara&#8217;s Crafts</td>
			<td align="right" style="width:88px;">10144</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="379" rowspan="6" style="height:379px;width:88px;">Flavor Extracts</td>
			<td rowspan="6" style="width:88px;">Kroger</td>
			<td style="width:88px;">Almond: 011110664716</td>
			<td rowspan="6" style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Anise: 011110615619</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Banana: 011110669919</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Coconut: 011110669889</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:88px;">Lemon: 011110669957</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:88px;">Orange: 0011110669964</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="59" rowspan="2" style="height:59px;width:88px;">Tissue Cartridges</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Z672122-500EA</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Manufactured by Simport no: M490-2</td>
		</tr>
		<tr height="18">
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Cotton Balls</td>
			<td style="width:88px;">Kroger</td>
			<td align="right" style="width:88px;">1.1111E+10</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">Mouse Cages</td>
			<td style="width:88px;">Ancare</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:88px;">19 x 29 x 12.7 cm</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Camcorder</td>
			<td style="width:88px;">Sony</td>
			<td style="width:88px;">&#160;HDR-HC9</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:88px;">MiniDV Tapes</td>
			<td style="width:88px;">Sony DVC premium</td>
			<td align="right" style="width:88px;">2.7243E+10</td>
			<td style="width:88px;">60 minute long play&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process and may be a useful behavioral marker for early detection. Earlier detection in neurodegenerative disease is a major goal in the field because this is when neuroprotective therapies have the best potential to be effective. Therefore, in preclinical studies testing novel neuroprotective strategies in rodent models of neurodegenerative disease, olfactory assessment could be highly useful in determining therapeutic potential of compounds and translation to the clinic. In the present study we describe a battery of olfactory assays that are useful in measuring olfactory function in mice. The tests presented in this study were chosen because they measure olfaction abilities in mice related to food odors, social odors, and non-social odors. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of Parkinson&#8217;s disease as well as in testing potential disease-modifying therapies.

גלולה, בלוק, ובדיקות ההתרגלות / dishabituation נקברו כל הערכות יתרון מאוד של olfaction בעכברים. באמצעות בדיקות אלה, מצאנו שינויים משמעותיים בolfaction במודלים מרובים עכבר הגנטי של מחלת פרקינסון, כוללים overexpressing אלפא סינוקלאין (Thy1-aSyn) 18 ועכברים נוקאאוט Atp13a2. שני עכברי נוקאאוט Thy1-aSyn וAtp13a2 להימשך זמן רב יותר כדי למצוא את גלולה נקברה בהשוואה לביקורות 18. איורים 1-3 נתונים להראות שנאספו מעכברי wildtype ונוקאאוט Atp13a2. במבחן גלולה נקבר, עכברי נוקאאוט Atp13a2 להראות מוגברים חביון למצוא גלולה נקברה בהשוואה לעכברי wildtype שליטה (איור 1). בבדיקת בלוק שני wildtype והעכברים נוקאאוט Atp13a2 לרחרח בלוק הרומן מהכלוב של עכבר אחר בהשוואה לרחובות מהכלוב בבית שלהם (איור 2). בעכברי wildtype מבחן ההתרגלות / dishabituation להראות התרגלות לריח אחד ו<html> לאחר מכן עלה מרחרחים כאשר ריח רומן הוא הציג (איור 3). <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1 קבור גלולה מבחן. חביון למצוא גלולה בwildtype (n = 10) וAtp13a2 KO (n = 14) בשעה 20-27 מ &#39;של גיל. * P &lt;0.05, Mann-Whitney U. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig2highres.jpg" width="500" /> מבחן בלוק איור 2 זמן מרחרח את בלוק הרומן (E) במבחן הבלוק בwildtype (n = 10) וAtp13a2 KO (n = 12) נקבות עכברים ב20 -. 27m של גיל. ΔΔ מייצג p &lt;0.01 לעומת בלוקים, B, C ומאותו גנוטיפ. Mann-Whitney U. &quot;Src =&quot; / קבצים / ftp_upload / 51,804 / &quot;width =&quot; 51804fig3highres.jpg 500 &quot;/&gt; איור מבחן .3 הרגלה / dishabituation. זמן ממוצע מרחרח מחסנית ריחנית בעכברי wildtype (גיל 9 מ &#39;, n = 7) על פני 6 ניסויים וכניסתה של מחסנית עם ניחוח רומן לדין 7.

Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease at JoVE.com

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

olfactory-assays-for-mouse-models-of-neurodegenerative-disease

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Special Senses

SCIENTISTS IN ACTION

21.8K Views.  University of Cincinnati. Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Video: Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature infants and the most common antecedent of cerebral palsy. PVL is characterized by periventricular white matter damage with prominent oligodendroglial injury. Hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation are the primary causes of PVL. We use P6 mice to create models of neonatal brain injury by the induction of hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation with unilateral carotid ligation followed by exposure to hypoxia with or without injection of the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Immunohistochemistry of myelin basic protein (MBP) or O1 and electron microscopic examination show prominent myelin loss in cerebral white matter with additional damage to the hippocampus and thalamus. Establishment of mouse models of PVL will greatly facilitate the study of disease pathogenesis using available transgenic mouse strains, conduction of drug trials in a relatively high throughput manner to identify candidate therapeutic agents, and testing of stem cell transplantation using immunodeficiency mouse strains.

We established mouse models of periventricular leukomalacia (PVL), the predominant brain injury in premature infants characterized by periventricular white matter lesions. Hypoxia/ischemia with/without systemic infection are the primary causes of PVL. Unilateral carotid ligation and hypoxia exposure with/without lipopolysaccharide injection creates PVL-like lesions in P6 mice.

עכבר מודלים של לויקומלציה periventricular

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature ...

Detection of Microregional Hypoxia in Mouse Cerebral Cortex by Two-photon Imaging of Endogenous NADH Fluorescence

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. Here we present a visualized experimental and methodological protocol to directly visualize microregional tissue hypoxia and to infer perivascular oxygen gradients in the mouse cortex. It is based on the non-linear relationship between nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) endogenous fluorescence intensity and oxygen partial pressure in the tissue, where observed tissue NADH fluorescence abruptly increases at tissue oxygen levels below 10 mmHg1. We use two-photon excitation at 740 nm which allows for concurrent excitation of intrinsic NADH tissue fluorescence and blood plasma contrasted with Texas-Red dextran. The advantages of this method over existing approaches include the following: it takes advantage of an intrinsic tissue signal and can be performed using standard two-photon in vivo imaging equipment; it permits continuous monitoring in the whole field of view with a depth resolution of ~50 &mu;m. We demonstrate that brain tissue areas furthest from cerebral blood vessels correspond to vulnerable watershed areas which are the first to become functionally hypoxic following a decline in vascular oxygen supply. This method allows one to image microregional cortical oxygenation and is therefore useful for examining the role of inadequate or restricted tissue oxygen supply in neurovascular diseases and stroke.

Here we describe a method to directly visualize microregional tissue hypoxia in the mouse cortex in vivo. It is based on concurrent two-photon imaging of nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and the cortical microcirculation. This method is useful for high resolution analysis of tissue oxygen supply.

זיהוי של היפוקסיה Microregional בקליפת עכבר מוחין על ידי הדמיה של שני הפוטונים אנדוגני NADH Fluorescence

The brain's ability to function at high levels of metabolic demand depends on continuous oxygen supply through blood flow and tissue oxygen diffusion. ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the fly as an experimental system include its genetic tractability, short life span and the possibility to observe and quantitatively analyze complex behaviors. The expression of disease-linked genes in specific neuronal populations of the Drosophila brain, can be used to model human neurodegenerative diseases such as Parkinson's and Alzheimer's 5.
Dopaminergic (DA) neurons are among the most vulnerable neuronal populations in the aging human brain. In Parkinson's disease (PD), the most common neurodegenerative movement disorder, the accelerated loss of DA neurons leads to a progressive and irreversible decline in locomotor function. In addition to age and exposure to environmental toxins, loss of DA neurons is exacerbated by specific mutations in the coding or promoter regions of several genes. The identification of such PD-associated alleles provides the experimental basis for the use of Drosophila as a model to study neurodegeneration of DA neurons in vivo. For example, the expression of the PD-linked human &alpha;-synuclein gene in Drosophila DA neurons recapitulates some features of the human disease, e.g. progressive loss of DA neurons and declining locomotor function 2. Accordingly, this model has been successfully used to identify potential therapeutic targets in PD 8.
Here we describe two assays that have commonly been used to study age-dependent neurodegeneration of DA neurons in Drosophila: a climbing assay based on the startle-induced negative geotaxis response and tyrosine hydroxylase immunostaining of whole adult brain mounts to monitor the number of DA neurons at different ages. In both cases, in vivo expression of UAS transgenes specifically in DA neurons can be achieved by using a tyrosine hydroxylase (TH) promoter-Gal4 driver line 3, 10.

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Here we describe two assays that have been established to study age-dependent neurodegeneration of dopaminergic (DA) neurons in Drosophila: the climbing/startle-induced negative geotaxis assay which allows to study the functional effects of DA neurons degeneration and the tyrosine hydroxylase immunostaining which is used to identify and count DA neurons in whole brain mounts.

הערכת פנוטיפים ניווניות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; נוירונים דופאמין על ידי מבחני לאז וimmunostaining מוח כל

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult neural stem cells in vitro. These assays can be used to compare the precursor potential of cells isolated from genetically different or differentially treated animals&#160;to determine the effects of exogenous factors on neural precursor cell proliferation and differentiation and to generate neural precursor cell lines that can be assayed over continuous passages. The neurosphere assay is traditionally used for the post-hoc identification of stem cells, primarily due to the lack of definitive markers with which they can be isolated from primary tissue&#160;and has the major advantage of giving a quick estimate of precursor cell numbers in brain tissue derived from individual animals. Adherent monolayer cultures, in contrast, are not traditionally used to compare proliferation between individual animals, as each culture is generally initiated from the combined tissue of between 5-8 animals. However, they have the major advantage that, unlike neurospheres, they consist of a mostly homogeneous population of precursor cells and are useful for following the differentiation process in single cells. Here, we describe, in detail, the generation of neurosphere cultures and, for the first time, adherent cultures from individual animals. This has many important implications including paired analysis of proliferation and/or differentiation potential in both the subventricular zone (SVZ) and dentate gyrus (DG) of treated or genetically different mouse lines, as well as a significant reduction in animal usage.

Here we describe a detailed protocol for the simultaneous generation of neural precursor cell cultures, as either adherent monolayers or neurospheres, from the subventricular zone and dentate gyrus of individual adult mice.

עכבר אחד, שתי תרבויות: בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים למבוגרים משני האזורים העצביים של עכברים בודדים

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

הר immunolabeling השלם של חוש הריח קולטן נוירונים<em&gt; דרוזופילה</em&gt; אנטנה

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene expression in the mouse brain. Here we describe a technique first introduced by Passini and Wolfe for direct intracranial delivery of virally-encoded transgenes into the neonatal mouse brain. In its most basic form, the procedure requires only an ice bucket and a microliter syringe. However, the protocol can also be adapted for use with stereotaxic frames to improve consistency for researchers new to the technique. The method relies on the ability of adeno-associated virus (AAV) to move freely from the cerebral ventricles into the brain parenchyma while the ependymal lining is still immature during the first 12-24 hr after birth. Intraventricular injection of AAV at this age results in widespread transduction of neurons throughout the brain. Expression begins within days of injection and persists for the lifetime of the animal. Viral titer can be adjusted to control the density of transduced neurons, while co-expression of a fluorescent protein provides a vital label of transduced cells. With the rising availability of viral core facilities to provide both off-the-shelf, pre-packaged reagents and custom viral preparation, this approach offers a timely method for manipulating gene expression in the mouse brain that is fast, easy, and far less expensive than traditional germline engineering.

Here we demonstrate a technique for widespread neuronal transduction by intraventricular injection of adeno-associated virus into the neonatal mouse brain. This method provides a rapid and easy way to attain lifelong expression of virally-delivered transgenes.

הזרקת נגיפי Intracerebroventricular של ילודים עכבר המוח לתמרה עצבית מתמשכת ונרחבת

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at the synaptic level. The Active Zone (AZ) is the region at the presynaptic membrane that mediates neurotransmitter release and is composed of a dense collection of scaffold proteins. AZs of Drosophila melanogaster (Drosophila) photoreceptors undergo molecular remodeling after prolonged exposure to natural ambient light. Thus the level of neuronal activity can rearrange the molecular composition of the AZ and contribute to the regulation of the functional output.
Starting from the light exposure set-up preparation to the immunohistochemistry, this protocol details how to quantify the number, the spatial distribution, and the delocalization level of synaptic molecules at AZs in Drosophila photoreceptors. Using image analysis software, clusters of the GFP-fused AZ component Bruchpilot were identified for each R8 photoreceptor (R8) axon terminal. Detected Bruchpilot spots were automatically assigned to individual R8 axons. To calculate the distribution of spot frequency along the axon, we implemented a customized software plugin. Each axon&#39;s start-point and end-point were manually defined and the position of each Bruchpilot spot was projected onto the connecting line between start and end-point. Besides the number of Bruchpilot clusters, we also quantified the delocalization level of Bruchpilot-GFP within the clusters. These measurements reflect in detail the spatially resolved synaptic dynamics in a single neuron under different environmental conditions to stimuli.

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Here we show how to quantify the number and spatial distribution of synaptic active zones in Drosophila melanogaster&#160;photoreceptors, highlighted with a genetically encoded molecular marker, and their modulation after prolonged exposure to light.

ניתוח Synaptic אפנון של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור לאחר חשיפה לאור ממושך

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory Sensory Neuron (OSN) is a bipolar cell with a single dendrite and a single unbranched axon. An OSN expresses only one Olfactory Receptor (OR) gene, OSNs expressing a given type of OR converge their axons to a few sets of invariant glomeruli in the Olfactory Bulb (OB). A remarkable feature of OSN projection is that the expressed ORs play instructive roles in axonal projection. ORs regulate the expression of multiple axon-sorting molecules and generate the combinatorial molecular code of axon-sorting molecules at the OSN axon termini. Thus, to understand the molecular mechanisms of OR-specific axon guidance mechanisms, it is vital to characterize their expression profiles at the OSN axon termini within the same glomerulus. The aim of this article was to introduce methods for collecting as many glomeruli as possible on a single OB section and for performing immunostaining using multiple antibodies. This would allow the comparison and analysis of the expression patterns of axon-sorting molecules without staining variation between OB sections.

Olfactory sensory neurons express a wide variety of axon-sorting molecules to establish proper neural circuitry. This protocol describes an immunohistochemical staining method to visualize combinatorial expressions of axon-sorting molecules at the axon termini of olfactory sensory neurons.

Quadunple Immunostaining של הנורה חוש הריח עבור ויזואליזציה של חוש הריח חושפת אקסון מולקולרית קודי זהות

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory ...

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay between perturbed BBB homeostasis and the pathogenesis of brain disorders needs further investigation, the development and validation of a reliable procedure to accurately detect BBB alterations may be crucial and represent a useful tool for potentially predicting disease progression and developing targeted therapeutic strategies.
Here, we present an easy and efficient procedure for evaluating BBB leakage in a neurodegenerative condition like that occurring in a preclinical mouse model of Huntington disease, in which defects in the permeability of BBB are clearly detectable precociously in the disease. Specifically, the high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin, which is able to cross the BBB only when the latter is impaired, is acutely infused into a mouse jugular vein and its distribution in the vascular or parenchymal districts is then determined by fluorescence microscopy.
Accumulation of green fluorescent-albumin in the brain parenchyma functions as an index of aberrant BBB permeability and, when quantitated by using Image J processing software, is reported as Green Fluorescence Intensity.

In this study, we present an easy and efficient procedure for evaluating the disruption of the blood-brain barrier under neurodegenerative conditions. To achieve our objective, we infused high molecular weight fluorescein isothiocyanate labelled (FITC)-albumin into mouse jugular vein and evaluated its leakage into the brain parenchyma by fluorescence microscopy.

הערכה של חדירות מחסום הדם - מוח על ידי עירוי תוך ורידי של התווית על-ידי FITC אלבומין במודל של עכברים של מחלות ניווניות

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. Single-molecule imaging is gaining momentum as it provides exceptional access to the visualization of individual molecules in living cells. Here, we describe a technique that we developed to perform single-particle tracking photo-activated localization microscopy (sptPALM) in Drosophila larvae. Synaptic communication relies on key presynaptic proteins that act by docking, priming, and promoting the fusion of neurotransmitter-containing vesicles with the plasma membrane. A range of protein-protein and protein-lipid interactions tightly regulates these processes and the presynaptic proteins therefore exhibit changes in mobility associated with each of these key events. Investigating how mobility of these proteins correlates with their physiological function in an intact live animal is essential to understanding their precise mechanism of action. Extracting protein mobility with high resolution in vivo requires overcoming limitations such as optical transparency, accessibility, and penetration depth. We describe how photoconvertible fluorescent proteins tagged to the presynaptic protein Syntaxin-1A can be visualized via slight oblique illumination and tracked at the motor nerve terminal or along the motor neuron axon of the third instar Drosophila larva.

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

Here we illustrate how single molecule photo-activated localization microscopy can be carried out on the motor nerve terminal of a live Drosophila melanogaster third instar larva.