עבודה זו נתמכה על ידי תכנית המחקר העירונית של המכון הלאומי לסרטן, המרכז לחקר הסרטן.

הפרוטוקול הבא מתאר שיטה לא פולשנית, פשוטה, ומהירה כדי לספק חומרים המעניינים את ריאות עכבר. נוהל זה אושר על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים ושימוש במכון הלאומי לסרטן. 1. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, להרדים את העכבר באמצעות תערובת של קטמין ו xylazine (100 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף ו10 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף, בהתאמה). זהו ACUC מומלץ הרדמה ומינון. עם סכום זה, עכברים הם מודעים לפחות ל~ 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה וטרינר לעיניים של העכבר על מנת למנוע התייבשות של העיניים במהלך הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כמה דקות, לצבוט רגל של העכבר כדי לבדוק את הכרתו. ברגע שאשר את ההכרה, הנח את העכבר על דוכן אינטובציה זווית ב ~ 60 ° ולהחזיקו במקום ידי משדלת החותכות העליונות שלה מעל גומייה קטנה הממוקמת בחלק העליון של המעמד. </li></ol> 2. אינטובציה Intratracheal </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לחזור בו לשונו של העכבר לצד אחד באמצעות Q-קצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת השימוש במערכת תאורת אינטובציה BioLITE, הכנס בזהירות את מערכת אינטובציה עד הגרון הוא מדמיין בעזרת מדריך אור בסיבים אופטיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמכסה הקנה וסחוסי arytenoid הם דמיינו, הכניסו את הסיבים על מכסה הקנה ובין סחוסי arytenoid, ומראש, עד שהאורך הנכון של קטטר הוכנס. </li></ol> הערה: על מנת לקבל את האורך הנכון של קטטר כדי להיות מוכנסים, בתחילה למדוד את האורך בין הפה ונקודת הסתעפות הסימפונות באמצעות עכבר בפועל בגודל דומה מראש (איור 1). האורך תלוי במידה רבה בגודל של העכבר. החדרת קטטר צריכה להפסיק מעל לנקודת הסתעפות (~ 1.5 סנטימטר לעכבר עם ~ 25 גרם של משקל גוף). הדבר זה מבטיח שהחומר מחובר לצינורות ילך לכל האונות. לפחות 50 מיקרופון בפועלדואר עשוי להידרש לאדם ביצוע אינטובציה כדי להיות בקיא בטכניקה (בקיאים אומר כי שיעור ההצלחה של אינטובציה הוא יותר מ 95%). <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהצנתר מוחדר, להסיר במהירות את ספר אור בסיבים אופטיים מקטטר כדי לאפשר לבעלי החיים לנשום כרגיל. כאשר מערכת אינטובציה תאורה אינה משמשת, במישרין להכניס קטטר כפי שתואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת תמיסה המכילה חומרים המעניינים את הקטטר. ודא כי הפתרון הוא נשאב לתוך הריאות מייד לאחר בנוסף. חמישים מיקרוליטר ל~ משמש 25 משקל גוף עכבר גרם באופן שיגרתי. </li></ol> 3. שחזור בעלי החיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהפתרון נשאב לתוך הריאות, לקחת את העכבר מהדוכן, והחזרת אותו לכלוב המקורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעכבר עד שהוא מתחיל לזוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שאשר שהעכבר הוא במצב טוב, להחזיר את הכלוב למדף. </li></ol>

<ol>
	<li>Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">A simple method of mouse lung intubation.</a> J. Vis. Exp. (73), e50318 (2013).</li><li>Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+murine+intranasal+dosing+efficiency+using+luminescent+Francisella+tularensis:+effect+of+instillation+volume+and+form+of+anesthesia.">Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis: effect of instillation volume and form of anesthesia.</a> PLoS One. 7, e31359 (2012).</li><li>Rayamajhi, M., Redente, E. F., Condon, T. V., Gonzalez-Juarrero, M., Riches, D. W., Lenz, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry.">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> J. Vis. Exp. (51), e2702 (2011).</li><li>Riesenfeld, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhaled+salmeterol+and/or+fluticasone+alters+structure/function+in+a+murine+model+of+allergic+airways+disease.">Inhaled salmeterol and/or fluticasone alters structure/function in a murine model of allergic airways disease.</a> Respir. Res. 11, 22 (2010).</li><li>Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+endotracheal+intubation+of+mice+and+rats+used+in+imaging+studies.">A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies.</a> Contemp. Top. Lab Anim. Sci. 44, 52-55 (2005).</li><li>Bonniaud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+transforming+growth+factor+beta1-induced+lung+fibrosis+is+blocked+by+an+orally+active+ALK5+kinase+inhibitor.">Progressive transforming growth factor beta1-induced lung fibrosis is blocked by an orally active ALK5 kinase inhibitor.</a> Am. J. Res. Crit. Care Med. 171, 889-898 (2005).</li><li>Bivas-Benita, M., Zwier, R., Junginger, H. E., Borchard, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+pulmonary+aerosol+delivery+in+mice+by+the+endotracheal+route.">Non-invasive pulmonary aerosol delivery in mice by the endotracheal route.</a> Eur. J. Pharm. Biopharm. 61, 214-218 (2005).</li><li>Haegens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase+deficiency+attenuates+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+inflammation+and+subsequent+cytokine+and+chemokine+production.">Myeloperoxidase deficiency attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung inflammation and subsequent cytokine and chemokine production.</a> J. Immunol. 182, 7990-7996 (2009).</li><li>Jackson, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+of+pregnant+mice+to+carbon+black+by+intratracheal+instillation:+toxicogenomic+effects+in+dams+and+offspring.">Exposure of pregnant mice to carbon black by intratracheal instillation: toxicogenomic effects in dams and offspring.</a> Mutat. Res. 745, 73-83 (2012).</li><li>Bodewes, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Influenza+A/H5N1+virus+infection+in+ferrets+differs+between+intranasal+and+intratracheal+routes+of+inoculation.">Pathogenesis of Influenza A/H5N1 virus infection in ferrets differs between intranasal and intratracheal routes of inoculation.</a> Am. J. Pathol. 179, 30-36 (2011).</li><li>Winslow, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+lung+adenocarcinoma+progression+by+Nkx2-1.">Suppression of lung adenocarcinoma progression by Nkx2-1.</a> Nature. 473, 101-104 (2011).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

אינטובציה Intratracheal המתוארת כאן היא שיטה לא פולשנית פשוטה, אך מצוינת, כדי לספק באופן שווה חומרים המעניינים את ריאות עכבר. שיטה זו מאפשרת מחקר ההשפעה ו / או התפקיד של החומר מנוהל על הפיסיולוגיה ו / או פתולוגיה של ריאה. החומרים יכולים להיות מנוהלים על מולקולות אנדוגני כגון ...

ריאות היא איבר שבו רבות במחלות הרסניות הם מאובחנים כלל. ביניהם, סרטן הריאות הוא הסרטן השני הכי מאובחן בגברים והן נשים, והגורם השכיח ביותר למוות מסרטן. מחלת ריאות חסימתית כרונית, המכונה גם נפחת או ברונכיטיס כרוני, היא מחלה קשה מאוד והגורם השלישי למוות בארצות הברית. ב2011, הוערך כי היו לי 25.9 מיליון אמריקאים אסתמה, כוללים 7.1 מיליון ילדים מתחת לגיל 18. אסטמה היא הגורם השלישי לאשפוז בקרב ילדים מתחת לגיל 15 (איגוד ריאות אמריקאי, <a href="http://www.lung.org" target="_blank">http://www.lung.org).</a> על מנת ללמוד את הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלות הרסניות אלה והמנגנונים הבסיסיים שלהם, השימוש במודלים מדויקים הוא קריטי בשיתוף עם ממשל נוח ולא פולשנית של חומרים שונים המעניינים את הריאות. עכברים לספק אחד הדגמים הטובים ביותרלחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפתולוגיה והפיסיולוגיה של מחלות ריאה בגלל הזמינות הגוברת של נוקאאוט ועכברים הטרנסגניים וכמות עצומה של מידע גנטי זמין. שיטות שונות שנוצלו על ידי מספר החוקרים במסגרות שונות, כדי לספק חומרים המעניינים את ריאות עכבר, כולל שאיפה, החדרה אפי, החדרת intratracheal, ואינטובציה intratracheal 1-4. ההליך זה האחרון לא היה בשימוש באופן שגרתי, כי זה נחשב די קשה לביצוע. אינטובציה Intratracheal המתוארת כאן היא שיטה לא פולשנית, פשוטה, ומהירה כדי לספק חומרים המעניינים את ריאות בעכבר כדי לחקור את ההשפעה של החומרים מועברים על דפוסי ביטוי גנים, פתולוגיה ו / או פיזיולוגיה של ריאות 5. טכניקה זו מבטיחה האספקה ​​של חומרים אקסוגניים לכל ריאה ואינה כרוכה בניתוח הישרדות ובכך יהיה likely להיות מאושר על ידי כל ועדות טיפול בבעלי החיים ושימוש מוסדיות.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>KetaVed</td>
			<td>Vedco</td>
			<td></td>
			<td>Ketamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AnaSed Injection 20 mg</td>
			<td>LLOYD</td>
			<td></td>
			<td>Xylazine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioLite Stand</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RIS100</td>
			<td>For mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioLite Intubation Illumination System</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>BIO MI-KIT</td>
			<td>For mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 G, 1 inch i.v. catheter</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OX2225CA</td>
			<td>For mice below 30 g.&#160;Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>or</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 G, 1 inch i.v. catheter</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OX2025CA</td>
			<td>For mice over 30 g.&#160;Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. עם הזמינות הגוברת של נגזרים בנוקאאוט ומהונדסים, יחד עם כמות עצומה של מידע גנטי, עכברים לספק אחד הדגמים הטובים ביותר כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפתולוגיה והפיסיולוגיה של מחלות ריאה. שאיפה, החדרה אפי, החדרת intratracheal, ואינטובציה intratracheal הן הטכניקות ביותר בשימוש נרחב על ידי מספר החוקרים לניהול חומרים המעניינים את ריאות עכבר. ישנם יתרונות וחסרונות לכל שיטה בהתאם למטרות מחקר. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת. טכניקה זו יושמה כדי לנהל bleomycin לריאות עכבר כמודל ללמוד פיברוזיס ריאתי. &lt;/ P&gt;

<html> בתחילה, פתרון ירוק צבוע שימש לצנרר עכברים לאימון. הריאות שעברו כריתה מייד לאחר אינטובציה לבחון כיצד באופן שווה את הצבע הופץ בריאה (איור 2). טכניקה זו יושמה ללמוד פיברוזיס ריאתי מושרה bleomycin באמצעות עכברי C57BL / 6. כאשר העכברים היו מחוברים לצינורות intratracheally עם 1....

Watch this Scientific Journal Video about Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung at JoVE.com

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת.

פולשנית Intratracheal אינטובציה ללמוד פתולוגיה והפיזיולוגיה של עכבר ריאות

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

noninvasive-intratracheal-intubation-to-study-pathology-physiology

Research

JoVE Journal

Medicine

24.4K Views.  National Institutes of Health.  השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת. 

Video: Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

שיטה פשוטה של ​​אינטובציה ריאות המאוסות

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Implantation of Fibrin Gel on Mouse Lung to Study Lung-specific Angiogenesis

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and repair damage in simple tissues in the orthopedic and periodontal fields. However, attempts to regenerate the structures and functions of more complex three-dimensional (3D) organs such as lungs have not been very successful because the biological processes of organ regeneration have not been well explored. It is becoming clear that angiogenesis, the formation of new blood vessels, plays key roles in organ regeneration. Newly formed vasculatures not only deliver oxygen, nutrients and various cell components that are required for organ regeneration but also provide instructive signals to the regenerating local tissues. Therefore, to successfully regenerate lungs in an adult, it is necessary to recapitulate the lung-specific microenvironments in which angiogenesis drives regeneration of local lung tissues. Although conventional in vivo angiogenesis assays, such as subcutaneous implantation of extracellular matrix (ECM)-rich hydrogels (e.g., fibrin or collagen gels or Matrigel - ECM protein mixture secreted by Engelbreth-Holm-Swarm mouse sarcoma cells), are extensively utilized to explore the general mechanisms of angiogenesis, lung-specific angiogenesis has not been well characterized because methods for orthotopic implantation of biomaterials in the lung have not been well established. The goal of this protocol is to introduce a unique method to implant fibrin gel on the lung surface of living adult mouse, allowing for the successful recapitulation of host lung-derived angiogenesis inside the gel. This approach enables researchers to explore the mechanisms by which the lung-specific microenvironment controls angiogenesis and alveolar regeneration in both normal and pathological conditions. Since implanted biomaterials release and supply physical and chemical signals to adjacent lung tissues, implantation of these biomaterials on diseased lung can potentially normalize the adjacent diseased tissues, enabling researchers to develop new therapeutic approaches for various types of lung diseases.

Recapitulation of the organ-specific microenvironment, which stimulates local angiogenesis, is indispensable for successful regeneration of damaged tissues. This report demonstrates a novel method to implant fibrin gels on the lung surface of living mouse in order to explore how the lung-specific microenvironment modulates angiogenesis and alveolar regeneration in adult mouse.

השרשה של הפיברין ג&#39;ל על עכבר ריאות לחקר אנגיוגנזה ריאות ספציפית

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and ...

Intubation-mediated Intratracheal (IMIT) Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Respiratory disease studies typically involve the use of murine models as surrogate systems. However, there are significant physiologic differences between the murine and human respiratory systems, especially in their upper respiratory tracts (URT). In some models, these differences in the murine nasal cavity can have a significant impact on disease progression and presentation in the lower respiratory tract (LRT) when using intranasal instillation techniques, potentially limiting the usefulness of the mouse model to study these diseases. For these reasons, it would be advantageous to develop a technique to instill bacteria directly into the mouse lungs in order to study LRT disease in the absence of involvement of the URT. We have termed this lung specific delivery technique intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation. This noninvasive technique minimizes the potential for instillation into the bloodstream, which can occur during more invasive traditional surgical intratracheal infection approaches, and limits the possibility of incidental digestive tract delivery. IMIT is a two-step process in which mice are first intubated, with an intermediate step to ensure correct catheter placement into the trachea, followed by insertion of a blunt needle into the catheter to mediate direct delivery of bacteria into the lung. This approach facilitates a &#62;98% efficacy of delivery into the lungs with excellent distribution of reagent throughout the lung. Thus, IMIT represents a novel approach to study LRT disease and therapeutic delivery directly into the lung, improving upon the ability to use mice as surrogates to study human respiratory disease. Furthermore, the accuracy and reproducibility of this delivery system also makes it amenable to Good Laboratory Practice Standards (GLPS), as well as delivery of a wide range of reagents which require high efficiency delivery to the lung.

Intubation-mediated Intratracheal IMIT Instillation: A Noninvasive, Lung-specific Delivery System

Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation of reagents is an excellent, noninvasive method for studying respiratory disease, as well as a method for instilling therapeutic reagents directly into the lung. It is a rapid and highly reproducible method which is suitable for preclinical testing.

Intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח

Respiratory disease studies typically involve the use of murine models as surrogate systems. However, there are significant physiologic differences ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

צנתור לב בעכברים כדי למדוד את יחסי נפח לחץ: חקירת אפקט Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring cardiomyocytes lost due to injury and disease. In contrast to the robust cardiac regeneration of certain lower vertebrates, adult mammalian hearts typically show minimal capacity for heart regeneration and repair. However, recent studies have sparked considerable scientific interest with the finding that, between postnatal day 1 to 7 (P1 to P7), the neonatal mouse heart retains significant regenerative potential after apical resection (i.e., surgical amputation and exposure of left ventricular apex). One major controversy over this finding might be due to the diverse surgery-related procedures used in efforts to replicate or expand upon this important finding. These instructions dynamically present the materials and methodology for apical resection in a mouse model. The salient steps of this rodent survival surgery involve hypothermia anesthesia, thoracotomy, surgical amputation of heart ventricular apex, and suture and recovery of mice. The approach described could expand the application of the apical resection mouse model for cardiovascular research.

A step-by-step video protocol of apical resection is demonstrated in this study. Apical resection is a recently highlighted surgical approach in mammalian heart regeneration research. This study may promote the application of apical resection as a standard methodology in research into the mechanism underlying heart regeneration.

דגם פסגת כריתת עכבר כדי ללמוד התחדשות לב יונקים מוקדמת

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate postprandial delivery of nutrients and hormones to insulin-sensitive tissues. We here describe a technique for combining intravital microscopy (IVM) and contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) of the adductor compartment of the mouse hindlimb to simultaneously visualize muscle resistance arteries and perfusion of the microcirculation in vivo. Simultaneously assessing insulin's effect at multiple levels of the vascular tree is important to study relationships between insulin's multiple vasoactive effects and muscle perfusion. Experiments in this study were performed in mice. First, the tail vein cannula is inserted for the infusion of anesthesia, vasoactive compounds and ultrasound contrast agent (lipid-encapsulated microbubbles). Second, a small incision is made in the groin area to expose the arterial tree of the adductor muscle compartment. The ultrasound probe is then positioned at the contralateral upper hindlimb to view the muscles in cross-section. To assess baseline parameters, the arterial diameter is assessed and microbubbles are subsequently infused at a constant rate to estimate muscle blood flow and microvascular blood volume (MBV). When applied before and during a hyperinsulinemic-euglycemic clamp, combined IVM and CEUS allow assessment of insulin-induced changes of arterial diameter, microvascular muscle perfusion and whole-body insulin sensitivity. Moreover, the temporal relationship between responses of the microcirculation and the resistance arteries to insulin can be quantified. It is also possible to follow-up the mice longitudinally in time, making it a valuable tool to study changes in vascular and whole-body insulin sensitivity.

Insulin-induced vasodilation regulates muscle perfusion and increases the microvascular surface area (microvascular recruitment) available for solute exchange between blood and tissue interstitium. Combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography is presented to simultaneously assess insulin&#39;s action at the larger vessels and the microcirculation in vivo.

משולב מיקרוסקופ Intravital משופרת לעומת זאת בדיקת אולטרה סאונד של Hindlimb העכבר ללמוד Vasodilation הנוצרות על-ידי אינסולין זלוף שריר

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Echocardiographic Measurement of Right Ventricular Diastolic Parameters in Mouse

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV diastolic function is rarely quantified in experimental studies. This might be due to technical difficulties in the visualization of the RV in the apical four-chamber view in rodents. Here we describe two positions facilitating the visualization of the apical four-chamber view in mice to assess the RV diastolic function.
The apical four-chamber view is enabled by tilting the mouse fixation platform to the left and caudally (LeCa) or to the right and cranially (RiCr). Both positions provide images of comparable quality. The results of the RV diastolic function obtained from two positions are not significantly different. Both positions are comparably easy to perform. This protocol can be incorporated into published protocols and enables detailed investigations of the RV function.

Here we describe and compare two positions for obtaining the apical four-chamber view in mice. These positions enable the quantification of the right ventricular function, provide comparable results, and can be used interchangeably.

המדידה האקוקרדיוגרפית של פרמטרים של הימני החדרית בעכבר

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Noninvasive Electrocardiography in the Perinatal Mouse

Electrocardiography (ECG) has long been relied upon as an effective and reliable method of assessing cardiovascular (and cardiopulmonary) function in both human and animal models of disease. Individual heart rate, rhythm, and regularity, combined with quantitative parameters collected from ECG, serve to assess the integrity of the cardiac conduction system as well as the integrated physiology of the cardiac cycle. This article provides a comprehensive description of the methods and techniques used to perform a noninvasive ECG on perinatal and neonatal mouse pups as early as the first postnatal day, without requiring the use of anesthetics. This protocol was designed to directly address a need for a standardized and repeatable method for obtaining ECG in newborn mice. From a translational perspective, this protocol proves to be entirely effective for characterization of congenital cardiopulmonary defects generated using transgenic mouse lines, and particularly for analysis of defects causing lethality at or during the first postnatal days. This protocol also aims to directly address a gap in the scientific literature to characterize and provide normative data associated with maturation of the early postnatal cardiac conduction system. This method is not limited to a specific postnatal timepoint, but rather allows for ECG data collection in neonatal mouse pups from birth to postnatal day 10 (P10), a window that is of critical importance for modeling human diseases in vivo, with particular emphasis on congenital heart disease (CHD).

Here, we present a noninvasive electrocardiography (ECG) protocol, optimized for early postnatal mice, that does not require the use of anesthetics.

אלקטרוקרדיוגרפיה לא פולשנית בעכבר פרילינטל

Electrocardiography (ECG) has long been relied upon as an effective and reliable method of assessing cardiovascular (and cardiopulmonary) function in both ...