Sandeep Khurana נתמכת על ידי NIH (K08DKO81479). Vikrant Rachakonda נתמך על ידי (T32DK067872).

דוגמאות שהובאו כאן הן מניסויים שאושרו על ידי IACUC בג&#39;ורג&#39;יה עוצרים אוניברסיטה - פרוטוקול לא: # 2011-0408 1. הכנת ריאגנטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מניית פתרון לנתיחה: עבור 500 מיליליטר של תמיסת נתיחת המניות (5x), לפזר 21.18 גרם NaCl, 0.875 גרם KCl, .739 MgSO ז 4, 1.049 מגבים גרם ו0.019 EDTA גרם ב450 מיליליטר מים מילי- Q. התאם ל- pH 7.3-7.4 באמצעות 1 N NaOH. מרכיבים את הנפח 500 מיליליטר עם מים מילי- Q. פתרון מניות יכול להיות מאוחסן עד 7-10 ימים. ראה טבלה 1 לרשימה של כימיקלים והספקים שלהם. ראה טבלה 2 לריכוז במ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרון לנתיחה עובד: הכן פתרון לנתיחה עבודה טרי בכל יום. לפתרון עובד 100 מיליליטר, לפזר .091 גלוקוז גרם, 0.016 Nah גרם פירובט נתרן 4 ו0.022 גרם 2 PO ב79.8 מיליליטר של מים מילי- Q. להוסיף מניית פתרון לנתיחה 0.2 מיליליטר 1M CaCl 2 ו -20 מיליליטר להביא voluלי 100 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תמיסת מלח פיזיולוגית (PSS): כדי להכין 1,000 מיליליטר PSS, לפזר .365 גרם KCl, NaCl 6.545 g, .296 MgSO ז 4, 0.163 גרם KH 2 PO 4, 2.072 גלוקוז גרם, 2.184 NaHCO ז 3 ו2.383 HEPES גרם ב950 מיליליטר מים מילי- Q. התאם ל- pH 7.3-7.4 באמצעות 1 N NaOH. מרכיבים את הנפח 1,000 מיליליטר עם מים מילי- Q. הסר 2 מיליליטר של תמיסה ולהחליף אותו עם 2 מיליליטר של 1 M CaCl 2. (טרי PSS צריך להיות מוכן ביום) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן סידן PSS בחינם (Ca 2 +): 100 מיליליטר לPSS ללא Ca 2 +, לפזר .036 גרם KCl, NaCl .654 גרם, 0.029 MgSO ז 4, 0.016 גרם KH 2 PO 4, .207 גלוקוז גרם, 0.218 גרם NaHCO 3, .238 ז HEPES, 0.015 EGTA גרם ו0.0026 nitroprusside נתרן גרם (SNP) ב -95 מיליליטר מים מילי- Q. התאם ל- pH 7.3-7.4 באמצעות 1 N NaOH. מרכיבים את הנפח 100 מיליליטר עם מים מילי- Q. </li></ol> 2. הכנת זכוכית קנולות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך טפטפות זכוכיתעל מנת ליצור את קנולות הטו 100-150 מיקרומטר באמצעות חולץ פיפטה בהתאם להנחיות יצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוע הטיפים צינורית זכוכית באמצעות beveller microelectrode, האש ללטש אותם ולכופף את הטיפים צינורית זכוכית על ידי ~ 45 מעלות באמצעות בדיקה דוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את קנולות לבעל micropipette ולצרף את בעל micropipette לתא זלוף. </li></ol> 3. הכנת זלוף הקאמרי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תא זלוף לשטוף עם מים מילי- Q ואחריו פתרון לנתיחה במשך 5 דקות כל אחד. טען את התא עם 2 מיליליטר של פתרון לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון יניקה נתיחה דרך צינורית באמצעות מזרק 10 מ&quot;ל ולמלא בקפידה את כל הצינורית וצינורות המחוברים ללא כל בועות. החל יניקה בעדינות כדי למנוע דור של בועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שני תפרים עם חצי קשר כל שימוש במלקחיים בוטים. מאז תפרי ניילון monofilament עיניים (10-0, 0.2 מטרי) משמשים להכנת הקשרים שרק1-2 מ&quot;מ בקוטר, ייתכן שיהיה צורך מיקרוסקופ לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדמיה תחת מיקרוסקופ לנתיחה, להשתמש במלקחיים לנתיחה כדי לטעון שני קנולות עם קשרים תפר סגורים חלקית מעט מהקצה. מאוחר יותר קשרים אלה החליקו בזהירות על קצות עורקי cannulated וסגורים לחלוטין. </li></ol> 4. אוסף של עורקי mesenteric ארקייד מSprague-Dawley חולדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחפש אישור הוועדה המקומית המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) לפני ביצוע ניסויים אלה. בעלי חיים בית במתקן החיה עם טמפרטורה מבוקרת ותאורה ולאפשר גישה חופשית למים ואוכל מכרסם מסחרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדות על ידי הזרקת intraperitoneal של קטמין (80 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם). לאשר הרדמה עמוקה על ידי הבוהן קמצוץ ואם הרדמה נוספת ניהול &#39;דרוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אישור ההרדמה כירורגית, להרדימו על ידי עריפת ראש. פעל לפי הנחיות AAALAC לדלקת בדרכי שתןLizing שיטות מתאימות להמתת חסד של בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מספריים לנתיחה ומלקחיים לבצע laparotomy קו אמצע מאגן לעצם חזה. הדבר נעשה בשני שלבים: ראשון, לחתוך את העור והשני, לחתוך את שכבת השריר הבסיסית. יש להקפיד שלא לפגוע באיברים תוך-בטני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הקצה הפרוקסימלי של מעי קרוב לשוער ואת הקצה הדיסטלי הקרוב לצומת ileo-cecal. לקשור שני קצוות בנפרד כדי למנוע דליפה של chyme וצואה וכך למנוע זיהום של פתרון רחצה תאי. לחתוך את לפדר בבסיסו ליד כלומר כלי דם האכלה, עורק mesenteric מעולה ולהעביר את מיטת mesenteric מעיים קטנה כל לכוס 50 מיליליטר המכילה פתרון לנתיחה קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר רקמה שנקטפו להישאר בפתרון לנתיחה קר קרח למשך 5 דקות ולשטוף עם פתרון לנתיחה טרי להיפטר מדם. </li></ol> 5. בידוד וCannulation של 4 th </sup&gt; עורקים להזמין mesenteric <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להצמיד את הקצה הפרוקסימלי של המעי בצד ימין בצלחת מצופה sylgard. להאריך את המעי שנותר בנתיב נגד כיוון השעון, מצמיד את הקטע למטה כדי להפיץ את לפדר וחושף את כלי הדם (איור 1). הערה: אנו לבודד מגזרי עורקים בטמפרטורת חדר. אחרת אנו שמים ארקייד mesenteric מכיל מנה על קרח. מעבדות מסוימות, כוללים אלה במוסד שלנו, להשתמש ביחידות ילר לנתח עורקים ב 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ זום סטריאו לנתח את 3 rd ו-4 עורקי mesenteric קטנים כדי מקביל (~ 260 מיקרומטר) למעי הדק באמצעות מספריים קטנים. לנתח ראשון את כל שומן הכיסוי. לאחר מכן לנתח את הווריד ולבודד את העורק עם נקודת סניף בצורת V. היזהר שלא לנקב את הקטע שנבחר. התחל לנתח את השומן ליד סניף כדי 2 nd ולמצוא את הדרך ל-3 או 4 ORD הכלי אה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתן להבחין עורקים וורידים המבוססים על עובי הקיר שלהם - קיר העורק הוא עבה יותר מהווריד של: הערה. יתר על כן, כאשר סמוך רקמת חיבור הוא משך בעדינות בניצב לקריסת כלי, ורידים בקלות תוך עורקים לא. מאז עורקים עם קוטר לום &lt;400 מיקרומטר הם אתרים מרכזיים של התנגדות כלי דם מערכתית, לפרוטוקול זה היינו 4 th עורקי mesenteric חולדה כדי (לומן קוטר &lt;300 מיקרומטר). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את החלק של 4-5 מ&quot;מ מקביל עורק למעי דק. דמיינו את כל 5 הסניפים כדי ה הטבעה לתוך מעי דק וחותך אותם מעט מהמקור של סניפים ולשמר חלק. חלקים אלה השתמרו סניפים לשמש מחזיקים אתרים (עם מלקחיים נתיחה) להעברת קטעי עורקים לתא זלוף ו, לאחר מכן להדריך את cannulation. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז לחתוך קטעי עורקים על ידי ביצוע חתכים 2 דיסטלי5 סניפים ה סדר בכל צד של העורק ולהעביר אותו לתא זלוף (ראו איור 1 ג ואגדה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cannulate קצה אחד של כלי על אחד micropipette הזכוכית (קוטר: 100-150 מיקרומטר) באמצעות מלקחיים לנתיחה על ידי לחיצה על הטיפים של מגזר העורקים עם מלקחיים לנתיחה. חלק את התפר הסגור באופן חלקי נטען בעבר על סוף cannulated ולאבטח אותו. הערה: קצה הפרוקסימלי של העורק ניתן cannulated על צינורית הזכוכית שמחוברת למכשיר ויסות לחץ שליטת סרוו לחקות בסביבת אתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף פתרון לנתיחה עמוס 10 מיליליטר מזרק לברזלים מחוברים לצינורית זו כך שפתרון לנתיחה בצינור המחבר את הצינורית וברזלים מתמזג עם שבמזרק. בעדינות להעלות את המזרק. הכוח הכבידה על הפתרון יסיר את הדם בכלי דם התוך מהקצה הפתוח של כלי השיט. לאחר הסרת הדם תוך-עורקים, לסגור את ברזלים. הערה: לחלופין, לצרף את ברזלים לבקר הלחץ, להפעיל אותו ולהגביר את הלחץ בעדינות כדי 5-10 מ&quot;מ כספית כדי להשיג את אותה התוצאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את הקצה הדיסטלי של כלי על צינורית זכוכית שנייה על ידי הבאת הצינורית אחרת הקרובה ככל האפשר לסוף התיר של מגזר העורקים בזהירות. חלק את התפר הסגור באופן חלקי נטען בעבר על סוף cannulated ולאבטח אותו. יש להקפיד לא למשוך או למתוח על מגזרי עורקים. ודא כי ברזים למיניהם מצורפים לשתי קנולות סגורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את תא זלוף על הבמה של מיקרוסקופ ההפוך מצוידים בהקלטת וידאו חי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את ברזלים של הצינורית קשורה לקצה הפרוקסימלי של קטע העורקי למכשיר ויסות לחץ שליטת סרוו ולוודא שברזלים מחוברים לצינורית אחרת נותר סגור כדי לשמור על לחץ intraluminal יציב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, לצרף את צינורות ואקום ליציאת יניקהND זלוף צינורות ליציאת זלוף של החדר. הערה: יציאת מחט משופעת משמשת ליניקה ויציאת מחט קהה לזלוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל זלוף של כלי עם PSS החם באמצעות דוד פתרון מוטבע יחיד (37 מעלות צלזיוס, equilibrated עם תערובת גז: 5% CO 2, 5% O 2 ו- N 90% כדי לשמור על pH ניטראלי וחמצון נאות 17) ב 2 מיליליטר / דקה באמצעות משאבת peristaltic. הפעל הוואקום על גם כן. הנח thermistor בתא לעקוב אחר טמפרטורה ברציפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ככל שהטמפרטורה של PSS בתא מתקרבת ~ 37 ° C (בדרך כלל תוך 5 דקות), להגדיל לאט לחץ intraluminal 20-100 מ&quot;מ כספית ולבדוק כלי דליפות. הדבר נעשה באמצעות ההגדרה האוטומטית של לחץ ווסת לחץ. מחק כלי עם דליפה ולהחליף עם מגזר אחר. כלי עם הדלפות לא יוכלו להחזיק את הלחץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את קטע עורקים לעיקולים, תוך שמירה על הלחץ על 100 מ&quot;מ כספית.שימוש בבורג-המנוף, להעביר את הצינורית ליישר את קטע העורקים. אל מעל למתוח את מגזרי עורקים; המטרה היא לחקות באורך קטע עורקי vivo. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפחית את הלחץ עד 70 מ&quot;מ כספית (לחקות בלחץ vivo בארקייד mesenteric 18) ולאפשר למגזר העורקים לייצב ולפתח טון myogenic. עורקים עשויים להיות בלחץ variably (40-70 מ&quot;מ כספית) על פי אסטרטגיה ניסיונית ומיטת כלי דם. סקירה שפורסמה בעבר מספקת סקירה מצוינת של השתנות בMT במגזרי עורקים מהמיטות כלי דם שונות 8. </li></ol> 6. מדידת קוטר עורקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צפה בעורקים במטרת 10X על מיקרוסקופ מצויד במצלמה מכשיר מצמידה מטען וידאו בשחור-לבן. למדוד קוטר luminal באמצעות מערכת קצה-זיהוי בזמן אמת וחוטף מסגרת וידאו. רשימה של ציוד המשמש מסופקת בטבלה 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ד צג וכלי השיאiameter ברציפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב להתפתחות של MT. הערה: הבחנו כי בעורקי התנגדות mesenteric חולדה, על 70 מ&quot;מ כספית, פיתוח של MT מאופיין על ידי ~ ירידה של 20% בקוטר. MT משתנה בהתאם למין מיטה ובעלי החיים וכלי דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר כדאיות של כלי דם על ידי הערכת תגובות מכווץ כלי דם וvasodilator לphenylephrine 1 מיקרומטר (Phe) ואצטילכולין 1 מיקרומטר (ACH). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של כל ניסוי, לקבוע קוטר פסיבי (PD) על ידי דוגרים עורקים בCa 2 + PSS -חינם במשך 20 דקות. </li></ol> 7. תגובה myogenic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפחית את הלחץ עד 20 מ&quot;מ כספית ולאפשר הקוטר לייצב. להגביר את לחץ intraluminal בצעדים הדרגתיים (20, 40, 60, 80 ו -100) ובכל שלב לחץ לאפשר עורקים להשיג קוטר יציב (בדרך כלל תוך 5 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפחית את לחץ intraluminal עד 20 מ&quot;מ כספית ודגירת מגזר העורקים בCa 2 + PSS -חינם מכיל 0.39 מ&quot;מEGTA ו0.1 מ&quot;מ SNP. לאפשר הקוטר העורק לייצב (בדרך כלל 15 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תגובת לחץ-צעד בPSS 2 + -חינם Ca מכיל 0.39 מ&quot;מ EGTA ו0.1 מ&quot;מ SNP. </li></ol> 8. פרשנות של תוצאות וחישוב נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את MT כהפרש אחוזים בקוטר נצפה עבור Ca 2 + המכיל לעומת Ca 2 + PSS -חינם בכל לחץ על פי החישוב הבא: <img alt="משוואת 1" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעורקים עוברים vasomotion הקוטר עשוי להיות מחושב על ידי ממוצע שלב הרמה 1 דקות. להביע את הנתונים שנאספו כאחוז מהרפיה המקסימלי (PD%) על פי מערכת היחסים: PD% = 100 x [ΔD / PD]; ΔD ההבדל בין הקוטר לפני ואחרי תוספת של כל מתחם מחקרי (למשל Phe); PD הוא קוטר פסיבי (גםקוטר מקסימאלי). </li></ol>

<ol>
	<li>Christensen, K. L., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Location+of+resistance+arteries.">Location of resistance arteries.</a> J Vasc Res. 38, 1-12 (2001).</li><li>Rietzschel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidized+low-density+lipoprotein+cholesterol+is+associated+with+decreases+in+cardiac+function+independent+of+vascular+alterations.">Oxidized low-density lipoprotein cholesterol is associated with decreases in cardiac function independent of vascular alterations.</a> Hypertension. 52, 535-541 (2008).</li><li>Hill, M. A., Ege, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+and+passive+mechanical+properties+of+isolated+arterioles+from+STZ-induced+diabetic+rats.+Effect+of+aminoguanidine+treatment.">Active and passive mechanical properties of isolated arterioles from STZ-induced diabetic rats. Effect of aminoguanidine treatment.</a> Diabetes. 43, 1450-1456 (1994).</li><li>Osol, G., Cipolla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+myogenic+and+adrenergic+mechanisms+in+isolated,+pressurized+uterine+radial+arteries+from+late-pregnant+and+nonpregnant+rats.">Interaction of myogenic and adrenergic mechanisms in isolated, pressurized uterine radial arteries from late-pregnant and nonpregnant rats.</a> Am J Obstet Gynecol. 168, 697-705 (1993).</li><li>Cipolla, M. J., McCall, A. L., Lessov, N., Porter, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+decreases+myogenic+reactivity+and+alters+middle+cerebral+artery+function+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Reperfusion decreases myogenic reactivity and alters middle cerebral artery function after focal cerebral ischemia in rats.</a> Stroke. 28, 176-180 (1997).</li><li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+myogenic+response+in+the+afferent+arteriole+of+spontaneously+hypertensive+rats.">Enhanced myogenic response in the afferent arteriole of spontaneously hypertensive rats.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, H1769-H1775 (2010).</li><li>Hayashi, K., Epstein, M., Saruta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+myogenic+responsiveness+of+the+renal+microvasculature+in+experimental+hypertension.">Altered myogenic responsiveness of the renal microvasculature in experimental hypertension.</a> J Hypertens. 14, 1387-1401 (1996).</li><li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96, 313-326 (1999).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Buus, N. H., Vanbavel, E., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Sensitivity+of+Rat+Mesenteric+Small+Arteries+to+Agonists+When+Studied+as+Ring+Preparations+or+as+Cannulated+Preparations.">Differences in Sensitivity of Rat Mesenteric Small Arteries to Agonists When Studied as Ring Preparations or as Cannulated Preparations.</a> British Journal of Pharmacology. 112, 579-587 (1994).</li><li>Falloon, B. J., Stephens, N., Tulip, J. R., Heagerty, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am J Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Schubert, R., Wesselman, J. P. M., Nilsson, H., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenaline-induced+depolarization+is+smaller+in+isobaric+compared+to+isometric+preparations+of+rat+mesenteric+small+arteries.">Noradrenaline-induced depolarization is smaller in isobaric compared to isometric preparations of rat mesenteric small arteries.</a> Pflugers Archiv-European Journal of Physiology. 431, 794-796 (1996).</li><li>Khurana, S., Raina, H., Pappas, V., Raufman, J. P., Pallone, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+deoxycholylglycine,+a+conjugated+secondary+bile+acid,+on+myogenic+tone+and+agonist-induced+contraction+in+rat+resistance+arteries.">Effects of deoxycholylglycine, a conjugated secondary bile acid, on myogenic tone and agonist-induced contraction in rat resistance arteries.</a> PLoS One. 7, e32006 (2012).</li><li>Bayliss, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+local+reactions+of+the+arterial+wall+to+changes+of+internal+pressure.">On the local reactions of the arterial wall to changes of internal pressure.</a> J Physiol. 28, 220-231 (1902).</li><li>Hughes, J. M., Bund, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+myogenic+properties+of+the+spontaneously+hypertensive+rat.">Arterial myogenic properties of the spontaneously hypertensive rat.</a> Exp Physiol. 87, 527-534 (2002).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Raina, H., Zacharia, J., Li, M., Wier, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+Ca2+/calmodulin+of+an+exogenous+myosin+light+chain+kinase+in+mouse+arteries.">Activation by Ca2+/calmodulin of an exogenous myosin light chain kinase in mouse arteries.</a> J Physiol. 587, 2599-2612 (2009).</li><li>Fenger-Gron, J., Mulvany, M. J., Christensen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+blood+pressure+profile+of+conscious,+freely+moving+rats.">Mesenteric blood pressure profile of conscious, freely moving rats.</a> J Physiol. 488 (Pt 3), 753-760 (1995).</li><li>Davis, M. J., Hill, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+mechanisms+underlying+the+vascular+myogenic+response).">Signaling mechanisms underlying the vascular myogenic response).</a> Physiol Rev. 79, 387-423 (1999).</li><li>Osmond, J. M., Mintz, J. D., Dalton, B., Stepp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+increases+blood+pressure,+cerebral+vascular+remodeling,+and+severity+of+stroke+in+the+Zucker+rat.">Obesity increases blood pressure, cerebral vascular remodeling, and severity of stroke in the Zucker rat.</a> Hypertension. 53, 381-386 (2009).</li><li>Ge, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenously+produced+20-HETE+modulates+myogenic+and+TGF+response+in+microperfused+afferent+arterioles.">Endogenously produced 20-HETE modulates myogenic and TGF response in microperfused afferent arterioles.</a> Prostaglandins Other Lipid Mediat. 102-103, 42-48 (2013).</li><li>Ryan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+ischemia+impairs+middle+cerebral+artery+myogenic+responses+in+the+pregnant+rat.">Placental ischemia impairs middle cerebral artery myogenic responses in the pregnant rat.</a> Hypertension. 58, 1126-1131 (2011).</li><li>Bagi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetic+mice+have+increased+arteriolar+tone+and+blood+pressure:+enhanced+release+of+COX-2-derived+constrictor+prostaglandins.">Type 2 diabetic mice have increased arteriolar tone and blood pressure: enhanced release of COX-2-derived constrictor prostaglandins.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 1610-1616 (2005).</li></ol>

יש סופרים לא סכסוכים כספיים.

צעדים, פתרון בעיות ושינויים קריטיים בהכנת כלי isobaric טיפוסית, העורק בלחץ על 70 מ&quot;מ כספית בין שתי קנולות זכוכית perfused עם PSS החם (37 מעלות צלזיוס). לאחר 30-45 דקות, עורקים לפתח MT, מאופיינים בירידה ספונטנית בקוטר שמייצבת ב20-30 דקות. עורקי ההתנג...

עורקי התנגדות קטנים הם גורמים עיקריים של SVR ולשחק תפקיד חשוב בפתופיזיולוגיה של מחלות רבות 1,2. תנאים כגון סוכרת 3, הריון 4, איסכמיה reperfusion 5, השמנת יתר ולחץ דם 6,7 לעתים קרובות קשורים בתפקוד כלי דם שונה. myography כלי דם לא יכול רק לספק תובנות חשובות שינויים בתפקוד כלי דם במחלות שונות, אלא גם לסייע בזיהוי מטרות טיפוליות ולהעריך את היעילות של תרכובות vasoactive. תפקוד כלי דם נחקר באמצעות עורקים קטנים מבודדים בתנאי כלי איזומטרי או isobaric 8. תיאור מפורט של myography איזומטרי מסופק במקום אחר 9. עם זאת יש הבדלים בנתונים המתקבלים מאיזומטרי לעומת הכנות isobaric 10-12. מאז הכנות עורקים בלחץ תאפשר המחקר של פונקצית כלי דם בתנאים קרובים-פיסיולוגיים,ממצאים שהתקבלו עשויים להיות מתואמים טובים יותר עם ​​התנהגות של מיטת כלי דם 8,13 in vivo. בשינה 1902 בייליס תואר לראשונה את ההשפעה של לחץ transmural בקוטר כלי דם 14. הוא נצפה בעורקי התנגדות קטנים מהמיטות כלי דם שונות של ארנבים, חתולים וכלבים שירידה בלחץ בעקבות התרחבות, ועלייה בלחץ בעקבות התכווצות כלי דם. תופעה זו ידועה בשם תגובת myogenic. בייליס וחוקרים שלאחר מכן הבחינו כי בתנאי isobaric עורקי התנגדות קטנה לפתח התכווצות מתמשכת הידועה כMT 15,16. שתי תגובת myogenic וMT ניתן להעריך באמצעות myography לחץ טכניקה (PM). PM משמש בעיקר כדי לקבוע vasoactivity של עורקים קטנים, ורידים וכלי שיט אחרים. בנוסף להערכת ההשפעה של תרכובות vasoactive בקוטר כלי דם, אחר הצהריים - כשמו מציין - משמש כדי להעריך CH-תיווך לחץ תוך-Anges בקוטר כלי דם. במהלך העשורים האחרונים התקדמות בתוכנת מחשב, שמשופרות מיקרוסקופיה הווידאו ופיפטה הזכוכית מושכים קדימה, עשו PM קל יותר לבצע. עם זאת, דיסקציה של מגזרים שלמים קיימא של כלי דם קטנים נשארה מייגע ולעתים מאתגרת. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט ללמוד תגובת myogenic בעורקי התנגדות mesenteric הקטנים המבודדים מחולדות.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Chemical</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3784</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5162</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5881</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13451</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1.</td>
		 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>
 <table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Physiological salt solution (1000 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.365 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>6.545 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.296 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.163 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>2.072 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>2.184 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>2.383 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>998 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ca2+ free physiological salt solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.036 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>0.645 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.029 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>0.207 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>0.218 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>0.238 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EGTA </td>
			<td>0.39</td>
			<td>0.015 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside </td>
			<td>0.1</td>
			<td>0.0026 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>100 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution, stock (500 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>145</td>
			<td>21.18 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.875 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.739 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>2</td>
			<td>1.049 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0.02</td>
			<td>0.019 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>500 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Working dissection solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution stock</td>
			<td>20 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.091 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>5</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>2</td>
			<td>0.022 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>0.2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>79.8 ml</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>
 </td>
	 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>Table 2. Composition of Experimetnal solutions</td>
	 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CCD Monochrome Camera</td>
			<td>The imaging Source</td>
			<td>DMK 21AU04</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Single inline solution heater</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thermistor</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0108</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dual automatic temperature controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>TC-344B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments </td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence System Interface</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>model FSI-700</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Forceps and scissors </td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ion Wizard-Core and Analysis</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>Ion Wizard 6.0</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Laboratory tubing</td>
			<td>Silastic </td>
			<td>508-005</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Male Sprague Dawley rat</td>
			<td>Harlan Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Master flex console drive</td>
			<td>Cole-parmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Milli-Q Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZD5211584</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ophthalmic monofilament nylon suture </td>
			<td>Ethicon </td>
			<td>9007G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Photometry and Dimensioning Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE31</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>PS-200</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc</td>
			<td>SMZ660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vessel Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW120-6</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51550</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3.</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>

assessing myogenic response and vasoactivity in resistance mesenteric arteries using pressure myography

עורקי התנגדות קטנים להצר ולהרחיב בהתאמה בתגובה לעלייה או ירידה בלחץ intraluminal; תופעה זו ידועה כתגובת myogenic היא רגולטור מרכזי של זרימת דם מקומית. בתנאי isobaric עורקי התנגדות קטנים לפתח ספגו התכווצות הידועה כטון myogenic (MT), אשר הוא הקובע עיקרי של התנגדות המערכתית של כלי דם (SVR). מכאן, הכנות בלחץ vivo לשעבר של עורקי התנגדות קטנים הן כלים עיקריים ללמוד לתפקד כלי דם במדינות קרובים-פיסיולוגיות. כדי להשיג זאת, קטע שלם מבודד טרי של עורק קטן התנגדות (קוטר ~ 260 מיקרומטר) הוא רכוב על שתי קנולות זכוכית קטנה ודחוסות. הכנות עורקים אלה לשמר ביותר במאפייני vivo והערכת היתר של טון של כלי דם בזמן אמת. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט להערכת vasoactivity בעורקי mesenteric ההתנגדות קטנות בלחץ מחולדות; עורקים אלה לפתחהתכווצות כלי דם מתמשך - כ -25% מקוטר מקסימאלי - כאשר לחץ על 70 מ&quot;מ כספית. הכנות עורקים אלה ניתן להשתמש כדי לחקור את ההשפעה של תרכובות מחקריות על קשר בין לחץ וvasoactivity התוך עורקים ולקבוע שינויים בתפקוד כלי דם במודלים של בעלי חיים במחלות שונות.

ייצוג סכמטי של הגדרת myograph לחץ אופייני מוצג באיור 1. שני קצוות של כלי השיט הם cannulated עם micropipette זכוכית ומאובטח עם תפרים בשני הצדדים. דרך צינורות וברזלים פתוחים, צינורית אחד מחוברת ללחץ-רגולטור בשליטת סרוו; הצינורית אחרת מחוברת לברזלים סגורים. הקאמרית הוא perfused עם...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography at JoVE.com

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

myography לחץ משמש כדי להעריך vasoactivity של עורקים קטנים המתפתחים התכווצות מתמשכת כאשר לחץ. כתב יד זה מספק פרוטוקול מפורט להעריך במגזרים בודדים של עורקי mesenteric קטנים מחולדות, vasoactivity ואת ההשפעה של לחץ intraluminal על קוטר כלי דם.

הערכת myogenic תגובה וVasoactivity בעורקי ההתנגדות mesenteric שימוש Myography לחץ

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

assessing-myogenic-response-vasoactivity-resistance-mesenteric

Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K Views.  Georgia Regents University.  myography לחץ משמש כדי להעריך vasoactivity של עורקים קטנים המתפתחים התכווצות מתמשכת כאשר לחץ. כתב יד זה מספק פרוטוקול מפורט להעריך במגזרים בודדים של עורקי mesenteric קטנים מחולדות, vasoactivity ואת ההשפעה של לחץ intraluminal על קוטר כלי דם. 

Video: Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

התכווצות העורקים mesenteric ללימודי הרפיה באמצעות Myography בנקאית אוטומטית

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

מדידת לחץ תוך גולגולתי אפידורל בחולדות באמצעות מתמר סיבים אופטיים לחץ

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות<em&gt; In vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

תגובת meshwork trabecular להעלאת לחץ בעין האנושית החי

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant CFTR channel in subjects with cystic fibrosis (CF). Identification of subjects that may benefit from these drugs is challenging because of the extensive heterogeneity of CFTR mutations, as well as other unknown factors that contribute to individual drug efficacy. Here, we describe a simple and relatively rapid assay for measuring individual CFTR function and response to CFTR modulators in vitro. Three dimensional (3D) epithelial organoids are grown from rectal biopsies in standard organoid medium. Once established, the organoids can be bio-banked for future analysis. For the assay, 30-80 organoids are seeded in 96-well plates in basement membrane matrix and are then exposed to drugs. One day later, the organoids are stained with calcein green, and forskolin-induced swelling is monitored by confocal live cell microscopy at 37 &#176;C. Forskolin-induced swelling is fully CFTR-dependent and is sufficiently sensitive and precise to allow for discrimination between the drug responses of individuals with different and even identical CFTR mutations. In vitro swell responses correlate with the clinical response to therapy. This assay provides a cost-effective approach for the identification of drug-responsive individuals, independent of their CFTR mutations. It may also be instrumental in the development of future CFTR modulators.

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

This protocol describes an assay for measuring CFTR function and CFTR modulator responses in cultured tissue from subjects with cystic fibrosis (CF). Biopsy-derived intestinal organoids swell in a cAMP-driven fashion, a response that is defective (or strongly reduced) in CF organoids and can be restored by exposure to CFTR modulators.

Forskolin-induced נפיחות מעיים Organoids: An<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay עבור הערכת תגובה לתרופה בחולי סיסטיק פיברוזיס

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

מודל התרבות התא של התנגדות העורקים

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other vessels), and describes techniques for evaluating tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry (LDF) and microvessel density utilizing fluorescently labeled Griffonia simplicifolia (GS1) lectin. Current methods for studying isolated resistance arteries at transmural pressures encountered in vivo and in the absence of parenchymal cell influences provide a critical link between in vivo studies and information gained from molecular reductionist approaches that provide limited insight into integrative responses at the whole animal level. LDF and techniques to selectively identify arterioles and capillaries with fluorescently-labeled GS1 lectin provide practical solutions to enable investigators to extend the knowledge gained from studies of isolated resistance arteries. This paper describes the application of these techniques to gain fundamental knowledge of vascular physiology and pathology in the rat as a general experimental model, and in a variety of specialized genetically engineered &#34;designer&#34; rat strains that can provide important insight into the influence of specific genes on important vascular phenotypes. Utilizing these valuable experimental approaches in rat strains developed by selective breeding strategies and new technologies for producing gene knockout models in the rat, will expand the rigor of scientific premises developed in knockout mouse models and extend that knowledge to a more relevant animal model, with a well understood physiological background and suitability for physiological studies because of its larger size.

This manuscript describes in vitro video microscopy protocols for evaluating vascular function in rat cerebral resistance arteries. The manuscript also describes techniques for evaluating microvessel density with fluorescently labeled lectin and tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry.

הערכה של מנגנוני הבקרה וסקולרית ניצול מיקרוסקופ וידאו מבודד התנגדות העורקים של חולדות

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Cardiac Response to &#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of specific treatments on the heart. Due to the feasibility of genetic manipulations the mouse has become the most common mammalian animal model to study cardiac function and to search for new potential therapeutic targets. Here we describe a protocol to determine cardiac function&#160;in vivo using pressure-volume loop measurements and analysis during basal conditions and under &#946;-adrenergic stimulation by intravenous infusion of increasing concentrations of isoproterenol. We provide a refined protocol including ventilation support taking into account the positive end-expiratory pressure to ameliorate negative effects during open-chest measurements, and potent analgesia (Buprenorphine) to avoid uncontrollable myocardial stress evoked by pain during the procedure. All together the detailed description of the procedure and discussion about possible pitfalls enables highly standardized and reproducible pressure-volume loop analysis, reducing the exclusion of animals from the experimental cohort by preventing possible methodological bias.

Cardiac Response to &amp;#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Here we describe a cardiac pressure-volume loop analysis under increasing doses of intravenously infused isoproterenol to determine the intrinsic cardiac function and the &#946;-adrenergic reserve in mice. We use a modified open-chest approach for the pressure-volume loop measurements, in which we include ventilation with positive end-expiratory pressure.

תגובת לב לגירוי β-אדנרגיות שנקבע על ידי ניתוח לולאת נפח לחץ

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of ...