Sandeep Khurana é suportado pelo NIH (K08DKO81479). Vikrant Rachakonda é suportado por (T32DK067872).

Os exemplos mostrados aqui são de experimentos aprovados pelo IACUC na Georgia Regents University - Protocolo nº: # 2011-0408 1. Preparação dos Reagentes <ol><li> Preparar solução de estoque dissecção: Por 500 ml da solução de dissecção (5x), dissolver 21,18 g de NaCl, 0,875 g de KCl, 0,739 g de MgSO4, 1,049 g de MOPS e 0,019 g de EDTA em 450 ml de água Milli-Q. Ajustar o pH a 7,3-7,4 utilizando NaOH 1 N. Completar o volume a 500 ml com água Milli-Q. Da solução pode ser armazenada até 7-10 dias. Ver Tabela 1 para uma lista de produtos químicos e seus fornecedores. Ver Tabela 2 para a concentração em mM. </li><li> Preparar a solução de dissecção de trabalho: Preparar a solução de trabalho dissecção fresco todos os dias. Para 100 ml de solução de trabalho, dissolver 0,091 g de glucose, 0,016 g de NaH 2 PO 4 e 0,022 g de piruvato de sódio em 79,8 ml de água Milli-Q. Adicionar 0,2 ml 1M CaCl 2 e 20 ml da solução de dissecção para trazer volume a 100 ml. </li><li> Preparar a solução salina fisiológica (PSS): Para preparar 1000 ml PSS, dissolver 0,365 g de KCl, NaCl 6,545 g, 0,296 g MgSO4, 0,163 g KH 2 PO 4, 2,072 g de glicose, 2.184 g de NaHCO 3 e 2,383 g de HEPES em 950 ml de água Milli-Q. Ajustar o pH a 7,3-7,4 utilizando NaOH 1 N. Completar o volume a 1000 ml com água Milli-Q. Retirar 2 ml de solução e substituí-la com 2 ml de 1 M de CaCl2. (Fresh PSS precisa ser preparada diariamente) </li><li> Prepare de cálcio (Ca2 +) PSS livre: Para 100 ml PSS sem Ca 2+, dissolver 0,036 g de KCl, 0,654 g de NaCl, 0,029 g de MgSO4, 0,016 g de KH 2 PO 4, 0,207 g de glucose, 0,218 g de NaHCO3, 0,238 g de HEPES, 0,015 g de EGTA e 0,0026 g de nitroprussiato de sódio (SNP) em 95 ml de água Milli-Q. Ajustar o pH a 7,3-7,4 utilizando NaOH 1 N. Completar o volume a 100 ml com água Milli-Q. </li></ol> 2. Preparação de vidro cânulas <ol><li> Puxe pipetas de vidropara gerar os 100-150 ^ m cânulas derrubadas usando um extrator pipeta de acordo com as orientações do fabricante. </li><li> Bevel as dicas cânula de vidro usando um beveller microeletrodos, fogo polonês-los e dobrar as pontas cânula de vidro por ~ 45 ° utilizando uma sonda aquecedor. </li><li> Coloque as cânulas no suporte micropipeta e anexar o titular da micropipeta para a câmara de perfusão. </li></ol> 3. Preparação de Perfusão Secção <ol><li> Câmara de perfusão de enxaguamento com água Milli-Q, seguido por solução de dissecção durante 5 minutos cada. Carregar a câmara com 2 ml de solução de dissecção. </li><li> Solução de dissecção de sucção através de uma cânula usando seringa de 10 ml e preencher cuidadosamente toda a cânula e o tubo ligado sem quaisquer bolhas. Aplicar sucção com cuidado para evitar a geração de bolhas. </li><li> Prepare duas suturas com uma meia-nó cada usando uma pinça sem corte. Desde suturas monofilamento de nylon oftálmicas (10-0, 0,2 métrico) são usados ​​para preparar os nós que só são1-2 mm de diâmetro, pode ser necessária dissecção microscópio. </li><li> A visualização sob dissecção microscópio, utilize uma pinça de dissecção para carregar ambas as cânulas com nós de sutura parcialmente fechados um pouco longe da ponta. Mais tarde, esses nós serão deslizou cuidadosamente sobre as extremidades arteriais canulados e completamente fechada. </li></ol> 4. Cobrança dos mesentérica Artéria Arcade de Sprague-Dawley <ol><li> Buscar a aprovação do Animal Care e Use Comitê Institucional local (IACUC) antes de realizar esses experimentos. Animais casa no biotério com temperatura controlada e iluminação e permitir o acesso livre à água e uma ração comercial para roedores. </li><li> Anestesiar ratos por injecção intraperitoneal de cetamina (80 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg). Confirme anestesia profunda por toe-pitada e se necessário Administrar anestésicos adicionais. </li><li> Após a confirmação da anestesia cirúrgica, eutanásia do animal por decapitação. Siga as orientações AAALAC para utilizing métodos adequados para a eutanásia dos animais. </li><li> Use uma tesoura de dissecção e uma pinça para realizar uma laparotomia na linha média da pelve para esterno. Isto é feito em dois passos: primeiro, incisão na pele e, segundo, a incisão camada muscular subjacente. Cuidados devem ser tomados para não ferir os órgãos intra-abdominais. </li><li> Cortar a extremidade proximal do intestino próximo do piloro e a extremidade distai perto da junção íleo-cecal. Tie separadamente ambas as extremidades para impedir o escape do quimo e fezes, evitando assim a contaminação da solução de banho extracelular. Inciso o mesentério na sua base, perto da alimentação vasculatura ou seja, artéria mesentérica superior e transferir toda a pequena cama mesentérica intestinal para uma proveta de 50 ml contendo solução de dissecção gelado. </li><li> Permita tecido colhido para ficar em solução dissecção fria gelo durante 5 minutos e enxágüe com solução dissecção fresco para se livrar de sangue. </li></ol> 5. O isolamento ea canulação da 4ª </sup&gt; Ordem mesentérica Artéria <ol><li> Pin para baixo a extremidade proximal do intestino, no lado direito em uma placa revestida-Sylgard. Estender o intestino remanescente em um caminho de sentido anti-horário, fixando o segmento para baixo para espalhar o mesentério e expondo os vasos sanguíneos (Figura 1). Nota: isolar segmentos arteriais à temperatura ambiente. Caso contrário, coloque a arcada mesentérica contendo prato no gelo. Alguns laboratórios, incluindo aqueles em nossa instituição, utilizar unidades chiller para dissecar as artérias a 4 ° C. </li><li> Sob um microscópio estéreo zoom dissecar 3 ª e 4 ª ordem pequena artéria mesentérica (~ 260 mm) paralelo ao intestino delgado usando uma tesoura pequena. Primeiro dissecar afastado toda a gordura de cobertura. Então dissecar a veia e isolar a artéria com ponto de ramificação em forma de V. Tenha cuidado para não perfurar o segmento selecionado. Comece dissecar a gordura perto de um fim ramo 2º e encontrar o caminho para a 3ª ou 4ª ordvasos de er. <ol><li> Nota: Artérias e veias podem ser distinguidos com base na sua espessura de parede - parede arterial é mais espessa do que veia do. Além disso, quando o tecido conjuntivo adjacente é puxado suavemente perpendicular aos vasos, veias colapso prontamente quando as artérias não. Desde artérias com diâmetro luminal &lt;400 mm são os principais locais de resistência vascular sistêmica, para este protocolo que usamos 4º artéria mesentérica fim de rato (diâmetro luminal &lt;300 mm). </li></ol></li><li> Isolar uma secção de 4-5 mm da artéria paralelo para o intestino delgado. Visualize todas as 5 filiais th ordem de incorporação para o intestino delgado e cortá-los um pouco longe da origem de ramos e preservar uma parte. Estas porções preservadas de ramos servem como segurando locais (com uma pinça de dissecção) para a transferência de segmentos arteriais a uma câmara de perfusão e, posteriormente, orientar a sua punção. </li><li> Em seguida, corte os segmentos arteriais, fazendo duas incisões para distal5 ramos ordem th em cada lado da artéria e transferi-lo para a câmara de perfusão (ver Figura 1C e legenda). </li><li> Canular uma extremidade dos vasos em uma micropipeta de vidro (diâmetro: 100-150 mm) usando uma pinça de dissecação, mantendo as pontas do segmento arterial com uma pinça de dissecação. Deslize a sutura parcialmente fechada previamente carregado para o fim canulada e prendê-lo. Nota: A extremidade proximal da artéria pode ser canulada para a cânula de vidro que está ligado ao dispositivo de regulação de pressão servo-controlada para imitar no ambiente in situ. </li><li> Anexar uma solução de dissecção carregado seringa de 10 ml com a torneira de passagem ligado a esta cânula de tal modo que na solução de dissecção a tubagem de ligação da cânula e que se funde com a torneira na seringa. Levantar suavemente a seringa. A força gravitacional sobre a solução irá remover o sangue intravascular da extremidade aberta do recipiente. Depois de retirar a intra-arterial, Fechar a torneira. Nota: Como alternativa, coloque a torneira para o controlador de pressão, ligue-o suavemente e aumentar a pressão para 5-10 mm Hg para alcançar o mesmo resultado. </li><li> Ate a extremidade distal dos vasos para uma segunda cânula de vidro levando cuidadosamente o outro cânula tão próximo quanto possível da extremidade não ligada do segmento arterial. Deslize a sutura parcialmente fechada previamente carregado para o fim canulada e prendê-lo. Cuidados devem ser tomados para não puxar ou puxar os segmentos arteriais. Certifique-se de que as torneiras ligadas a ambas as cânulas são fechadas. </li><li> Transferir câmara de perfusão para a fase de microscópio invertido equipado com gravação de vídeo ao vivo. </li><li> Ligue a torneira de cânula ligada à extremidade proximal do segmento arterial a um dispositivo de regulação de pressão servo-controlada e certificar-se que a torneira anexa à outra cânula permanece fechado para manter a pressão intraluminal estável. </li><li> Em seguida, conectar o tubo de vácuo para a porta de sucção umnd a perfusão tubulação para a porta da câmara de perfusão. Nota: chanfrada porta agulha é usada para aspiração e porta agulha romba para perfusão. </li><li> Iniciar a perfusão de navio com PSS quente através aquecedor em linha única solução (37 ° C, equilibrada com a mistura de gás: 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N para manter o pH neutro e uma oxigenação adequada 17) em 2 mL / min usando uma bomba peristáltica. Rode o vácuo no bem. Inserir um termistor na câmara para monitorizar continuamente a temperatura. </li><li> À medida que a temperatura do PSS na câmara aproxima ~ 37 ° C (geralmente dentro de 5 min), lentamente aumentar a pressão intraluminal de 20 a 100 mmHg e vasos para verificar fugas. Isso é feito usando o ajuste de pressão automático do regulador de pressão. Descarte navios com vazamento e substitua-o por outro segmento. Os recipientes com fugas não vai ser capaz de manter a pressão. </li><li> Avaliar o segmento arterial para curvas, mantendo a pressão a 100 mmHg.Usando a alavanca de parafuso, mover a cânula para endireitar o segmento arterial. Não mais de esticar os segmentos arteriais; a meta é imitar em comprimento do segmento arterial in vivo. </li><li> Reduzir a pressão para 70 mmHg (para imitar na pressão vivo na arcada mesentérica 18) e permitir que o segmento arterial para estabilizar e desenvolver tom miogênica. Artérias pode ser pressurizado variável (40-70 mmHg) de acordo com a estratégia experimental e leito vascular. Uma revisão publicada anteriormente proporciona uma excelente avaliação da variabilidade em MT em segmentos arteriais de diferentes leitos vasculares 8. </li></ol> 6. Medição do diâmetro arterial <ol><li> Veja as artérias na objetiva de 10X em um microscópio equipado com uma câmera de vídeo monocromática dispositivo de carga acoplada. Medir o diâmetro luminal usando quadro de vídeo grabber e em tempo real do sistema de detecção de bordas. Uma lista de equipamento utilizado é fornecido na Tabela 3. </li><li> Monitorar e vaso registro diameter continuamente. </li><li> Observar o desenvolvimento de MT. Nota: Observamos que, em ratos artérias mesentéricas de resistência, em 70 mmHg, desenvolvimento de MT é caracterizada pela diminuição ~ 20% de diâmetro. MT varia de acordo com a cama e as espécies animais vasculares. </li><li> Confirmar viabilidade vascular, avaliando vasoconstritores e vasodilatadores respostas a fenilefrina 1 fiM (Phe) e 1 uM de acetilcolina (ACh). </li><li> No final de cada experiência, determinar diâmetro passiva (PD) por incubação em artérias de Ca 2 + livre PSS durante 20 min. </li></ol> 7. Miogênica Response <ol><li> Reduzir a pressão até 20 mm Hg e permitir que o diâmetro para estabilizar. Aumentar a pressão intraluminal em passos incrementais (20, 40, 60, 80 e 100) e em cada passo de permitir que a pressão artérias para atingir um diâmetro estável (usualmente dentro de 5 min). </li><li> Reduzir a pressão intraluminal para 20 mmHg e incubar o segmento arterial em Ca 2 + livre PSS contendo 0,39 mMSNP mM de EGTA e 0,1. Permitir que o diâmetro arterial para estabilizar (geralmente 15 min). </li><li> Repita a resposta da pressão passo em Ca 2 + livre PSS contendo EGTA 0,39 e 0,1 mM SNP. </li></ol> 8. Interpretação dos Resultados e cálculo dos dados <ol><li> Calcular o MT como a diferença percentual em diâmetro observado para Ca 2+ molecular contendo contra Ca 2 + livre PSS para cada pressão de acordo com a seguinte cálculo: <img alt="Equação 1" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li> Para artérias submetidos a vasomotricidade o diâmetro pode ser calculada tomando a média da fase de plateau durante 1 min. Expressar os dados coletados como por cento de relaxamento máximo (% PD) de acordo com a relação:% DP = 100 x [ΔD / PD]; ΔD é a diferença entre o diâmetro antes e depois da adição de qualquer composto em investigação (por exemplo, Phe); DP é o diâmetro passiva (também adiâmetro máximo). </li></ol>

<ol>
	<li>Christensen, K. L., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Location+of+resistance+arteries.">Location of resistance arteries.</a> J Vasc Res. 38, 1-12 (2001).</li><li>Rietzschel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidized+low-density+lipoprotein+cholesterol+is+associated+with+decreases+in+cardiac+function+independent+of+vascular+alterations.">Oxidized low-density lipoprotein cholesterol is associated with decreases in cardiac function independent of vascular alterations.</a> Hypertension. 52, 535-541 (2008).</li><li>Hill, M. A., Ege, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+and+passive+mechanical+properties+of+isolated+arterioles+from+STZ-induced+diabetic+rats.+Effect+of+aminoguanidine+treatment.">Active and passive mechanical properties of isolated arterioles from STZ-induced diabetic rats. Effect of aminoguanidine treatment.</a> Diabetes. 43, 1450-1456 (1994).</li><li>Osol, G., Cipolla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+myogenic+and+adrenergic+mechanisms+in+isolated,+pressurized+uterine+radial+arteries+from+late-pregnant+and+nonpregnant+rats.">Interaction of myogenic and adrenergic mechanisms in isolated, pressurized uterine radial arteries from late-pregnant and nonpregnant rats.</a> Am J Obstet Gynecol. 168, 697-705 (1993).</li><li>Cipolla, M. J., McCall, A. L., Lessov, N., Porter, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+decreases+myogenic+reactivity+and+alters+middle+cerebral+artery+function+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Reperfusion decreases myogenic reactivity and alters middle cerebral artery function after focal cerebral ischemia in rats.</a> Stroke. 28, 176-180 (1997).</li><li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+myogenic+response+in+the+afferent+arteriole+of+spontaneously+hypertensive+rats.">Enhanced myogenic response in the afferent arteriole of spontaneously hypertensive rats.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, H1769-H1775 (2010).</li><li>Hayashi, K., Epstein, M., Saruta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+myogenic+responsiveness+of+the+renal+microvasculature+in+experimental+hypertension.">Altered myogenic responsiveness of the renal microvasculature in experimental hypertension.</a> J Hypertens. 14, 1387-1401 (1996).</li><li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96, 313-326 (1999).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Buus, N. H., Vanbavel, E., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Sensitivity+of+Rat+Mesenteric+Small+Arteries+to+Agonists+When+Studied+as+Ring+Preparations+or+as+Cannulated+Preparations.">Differences in Sensitivity of Rat Mesenteric Small Arteries to Agonists When Studied as Ring Preparations or as Cannulated Preparations.</a> British Journal of Pharmacology. 112, 579-587 (1994).</li><li>Falloon, B. J., Stephens, N., Tulip, J. R., Heagerty, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am J Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Schubert, R., Wesselman, J. P. M., Nilsson, H., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenaline-induced+depolarization+is+smaller+in+isobaric+compared+to+isometric+preparations+of+rat+mesenteric+small+arteries.">Noradrenaline-induced depolarization is smaller in isobaric compared to isometric preparations of rat mesenteric small arteries.</a> Pflugers Archiv-European Journal of Physiology. 431, 794-796 (1996).</li><li>Khurana, S., Raina, H., Pappas, V., Raufman, J. P., Pallone, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+deoxycholylglycine,+a+conjugated+secondary+bile+acid,+on+myogenic+tone+and+agonist-induced+contraction+in+rat+resistance+arteries.">Effects of deoxycholylglycine, a conjugated secondary bile acid, on myogenic tone and agonist-induced contraction in rat resistance arteries.</a> PLoS One. 7, e32006 (2012).</li><li>Bayliss, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+local+reactions+of+the+arterial+wall+to+changes+of+internal+pressure.">On the local reactions of the arterial wall to changes of internal pressure.</a> J Physiol. 28, 220-231 (1902).</li><li>Hughes, J. M., Bund, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+myogenic+properties+of+the+spontaneously+hypertensive+rat.">Arterial myogenic properties of the spontaneously hypertensive rat.</a> Exp Physiol. 87, 527-534 (2002).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Raina, H., Zacharia, J., Li, M., Wier, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+Ca2+/calmodulin+of+an+exogenous+myosin+light+chain+kinase+in+mouse+arteries.">Activation by Ca2+/calmodulin of an exogenous myosin light chain kinase in mouse arteries.</a> J Physiol. 587, 2599-2612 (2009).</li><li>Fenger-Gron, J., Mulvany, M. J., Christensen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+blood+pressure+profile+of+conscious,+freely+moving+rats.">Mesenteric blood pressure profile of conscious, freely moving rats.</a> J Physiol. 488 (Pt 3), 753-760 (1995).</li><li>Davis, M. J., Hill, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+mechanisms+underlying+the+vascular+myogenic+response).">Signaling mechanisms underlying the vascular myogenic response).</a> Physiol Rev. 79, 387-423 (1999).</li><li>Osmond, J. M., Mintz, J. D., Dalton, B., Stepp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+increases+blood+pressure,+cerebral+vascular+remodeling,+and+severity+of+stroke+in+the+Zucker+rat.">Obesity increases blood pressure, cerebral vascular remodeling, and severity of stroke in the Zucker rat.</a> Hypertension. 53, 381-386 (2009).</li><li>Ge, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenously+produced+20-HETE+modulates+myogenic+and+TGF+response+in+microperfused+afferent+arterioles.">Endogenously produced 20-HETE modulates myogenic and TGF response in microperfused afferent arterioles.</a> Prostaglandins Other Lipid Mediat. 102-103, 42-48 (2013).</li><li>Ryan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+ischemia+impairs+middle+cerebral+artery+myogenic+responses+in+the+pregnant+rat.">Placental ischemia impairs middle cerebral artery myogenic responses in the pregnant rat.</a> Hypertension. 58, 1126-1131 (2011).</li><li>Bagi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetic+mice+have+increased+arteriolar+tone+and+blood+pressure:+enhanced+release+of+COX-2-derived+constrictor+prostaglandins.">Type 2 diabetic mice have increased arteriolar tone and blood pressure: enhanced release of COX-2-derived constrictor prostaglandins.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 1610-1616 (2005).</li></ol>

Autores não têm conflitos financeiros.

Passos crítico, resolução de problemas e modificações Numa preparação típica vaso isobárica, a artéria é pressurizado a 70 mmHg entre duas cânulas de vidro perfundidos com água morna (37 ° C) PSS. Após 30-45 min, artérias desenvolver MT, caracterizado por diminuição espontânea de diâmetro que se estabiliza em 20-30 min. As artérias de resistência de vários leitos vasculares desenvolver MT variável. Por exemplo resistência rato artéria mesentérica desenvolver MT ~ 25% ...

Pequenas artérias de resistência são os principais determinantes do SVR e desempenham um papel importante na fisiopatologia de muitas doenças 1,2. Condições como a diabetes 3, 4 a gravidez, de isquemia-reperfusão 5, obesidade e hipertensão 6,7 são frequentemente associados com a função microvascular alterada. Miografia vascular pode não só fornecer importantes insights sobre mudanças na função microvascular em várias doenças, mas também ajudar a identificar alvos terapêuticos e avaliar a eficácia dos compostos vasoativas. Função vascular foi estudada usando isoladas pequenas artérias em condições de vasos isométricos ou isobáricas 8. Descrição detalhada do Miografia isométrica é fornecido em outros lugares 9. No entanto, existem diferenças nos dados obtidos a partir de preparações contra isométrica isobáricas 10-12. Desde preparações arteriais pressurizados permitir o estudo da função microvascular em condições de quase-fisiológicas, aresultados obtidos podem correlacionar melhor com o comportamento in vivo do leito vascular 8,13. Em 1902 Bayliss descreveu pela primeira vez o efeito da pressão transmural do diâmetro vascular 14. Ele observada em artérias de resistência pequenas de vários leitos vasculares de coelhos, gatos e cães que uma diminuição na pressão foi seguido por vasodilatação, e um aumento da pressão foi seguido por vasoconstrição. Este fenômeno é conhecido como resposta miogênica. Bayliss e investigadores subseqüentes observou que, em condições isobáricas artérias pequena resistência desenvolver constrição sustentado conhecida como MT 15,16. Tanto a resposta miogénica e MT pode ser avaliada usando Miografia pressão (PM) técnica. PM é usado principalmente para determinar vasoactividade de pequenas artérias, veias e outros recipientes. Além de avaliar o efeito dos compostos vasoativos no diâmetro vascular, PM - como o nome indica - é utilizado para avaliar ch mediada por pressão intravascularanges do diâmetro vascular. Ao longo das últimas décadas os avanços em software de computador, o que aprimorou microscopia de vídeo e pipeta de vidro puxando, fizeram PM mais fácil de executar. No entanto, a dissecção de segmentos intactas viáveis ​​de pequenos vasos sanguíneos continua a ser tedioso e às vezes desafiador. Aqui destacamos um protocolo detalhado para estudar resposta miogênica em pequenas artérias mesentéricas de resistência isolados de ratos.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Chemical</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3784</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5162</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5881</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13451</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1.</td>
		 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>
 <table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Physiological salt solution (1000 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.365 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>6.545 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.296 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.163 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>2.072 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>2.184 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>2.383 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>998 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ca2+ free physiological salt solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.036 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>0.645 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.029 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>0.207 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>0.218 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>0.238 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EGTA </td>
			<td>0.39</td>
			<td>0.015 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside </td>
			<td>0.1</td>
			<td>0.0026 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>100 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution, stock (500 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>145</td>
			<td>21.18 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.875 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.739 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>2</td>
			<td>1.049 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0.02</td>
			<td>0.019 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>500 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Working dissection solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution stock</td>
			<td>20 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.091 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>5</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>2</td>
			<td>0.022 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>0.2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>79.8 ml</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>
 </td>
	 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>Table 2. Composition of Experimetnal solutions</td>
	 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CCD Monochrome Camera</td>
			<td>The imaging Source</td>
			<td>DMK 21AU04</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Single inline solution heater</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thermistor</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0108</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dual automatic temperature controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>TC-344B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments </td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence System Interface</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>model FSI-700</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Forceps and scissors </td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ion Wizard-Core and Analysis</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>Ion Wizard 6.0</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Laboratory tubing</td>
			<td>Silastic </td>
			<td>508-005</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Male Sprague Dawley rat</td>
			<td>Harlan Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Master flex console drive</td>
			<td>Cole-parmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Milli-Q Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZD5211584</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ophthalmic monofilament nylon suture </td>
			<td>Ethicon </td>
			<td>9007G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Photometry and Dimensioning Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE31</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>PS-200</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc</td>
			<td>SMZ660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vessel Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW120-6</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51550</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3.</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>

assessing myogenic response and vasoactivity in resistance mesenteric arteries using pressure myography

Artérias resistência pequena constrição e dilatar, respectivamente, em resposta ao aumento ou diminuição da pressão intraluminal; este fenómeno conhecido como resposta miogénica é um regulador chave do fluxo sanguíneo local. Em condições isobáricas artérias de resistência pequenas desenvolverem elevações contínuas constrição conhecida como tom miogênica (MT), que é um dos principais determinantes da resistência vascular sistêmica (RVS). Daí, ex vivo preparações pressurizados das artérias de resistência pequenas são as principais ferramentas para estudar função microvascular em estados próximos a-fisiológica. Para alcançar este objectivo, um segmento intacto isolada de fresco de uma artéria pequena resistência (diâmetro ~ 260 uM) está montada em duas cânulas de vidro pequenas e pressurizado. Estas preparações arteriais reter mais características in vivo e avaliação de autorização do tônus ​​vascular em tempo real. Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado para avaliar vasoactividade em pressurizados pequenas artérias mesentéricas de resistência de ratos; estas artérias desenvolvervasoconstrição sustentada - cerca de 25% do diâmetro máximo - quando pressurizado a 70 mmHg. Estas preparações arteriais pode ser utilizada para estudar o efeito dos compostos experimentais na relação entre a pressão intra-arterial e vasoactividade e determinar alterações na função microvascular em modelos animais de várias doenças.

Representação esquemática de um myograph pressão típica configuração é mostrado na Figura 1. As duas extremidades do recipiente é canulada com uma micropipeta de vidro e protegido com suturas de ambos os lados. Por meio da tubagem e uma torneira aberta, uma cânula é ligada a um regulador de pressão de servo-controlada; a outra cânula é ligada a uma torneira de passagem fechada. A câmara é perfundido com PSS e diâmetro vascular mudanças são observadas por um microscópio invertido liga...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography at JoVE.com

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Miografia pressão é utilizado para avaliar a vasoactividade das pequenas artérias que se desenvolvem constrição prolongada quando pressurizado. Este manuscrito proporciona um protocolo detalhado para avaliar em segmentos isolados de pequenas artérias mesentéricas de ratos, vasoactividade e o efeito da pressão intraluminal no diâmetro vascular.

Avaliando Miogênica Resposta e vasoactividade em artérias mesentéricas de resistência Usando Miografia Pressão

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

assessing-myogenic-response-vasoactivity-resistance-mesenteric

Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K visualizações.  Georgia Regents University.  Miografia pressão é utilizado para avaliar a vasoactividade das pequenas artérias que se desenvolvem constrição prolongada quando pressurizado. Este manuscrito proporciona um protocolo detalhado para avaliar em segmentos isolados de pequenas artérias mesentéricas de ratos, vasoactividade e o efeito da pressão intraluminal no diâmetro vascular. 

Vídeo: Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

A contração da artéria mesentérica e Estudos Relaxamento Usando Miografia Fio Automated

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Medicina

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

Medida da Pressão Intracraniana peridural em ratos, utilizando um transdutor de pressão de fibra óptica

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

Isolando e com cortes de bovinos artéria e veia mesentérica como Bioassay teste para vasoactividade no intestino delgado

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Telemetria Intrauterine medir Rato contrátil Pressão<em&gt; In Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

Response malha trabecular para elevação de pressão na Vida Olho Humano

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant CFTR channel in subjects with cystic fibrosis (CF). Identification of subjects that may benefit from these drugs is challenging because of the extensive heterogeneity of CFTR mutations, as well as other unknown factors that contribute to individual drug efficacy. Here, we describe a simple and relatively rapid assay for measuring individual CFTR function and response to CFTR modulators in vitro. Three dimensional (3D) epithelial organoids are grown from rectal biopsies in standard organoid medium. Once established, the organoids can be bio-banked for future analysis. For the assay, 30-80 organoids are seeded in 96-well plates in basement membrane matrix and are then exposed to drugs. One day later, the organoids are stained with calcein green, and forskolin-induced swelling is monitored by confocal live cell microscopy at 37 &#176;C. Forskolin-induced swelling is fully CFTR-dependent and is sufficiently sensitive and precise to allow for discrimination between the drug responses of individuals with different and even identical CFTR mutations. In vitro swell responses correlate with the clinical response to therapy. This assay provides a cost-effective approach for the identification of drug-responsive individuals, independent of their CFTR mutations. It may also be instrumental in the development of future CFTR modulators.

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

This protocol describes an assay for measuring CFTR function and CFTR modulator responses in cultured tissue from subjects with cystic fibrosis (CF). Biopsy-derived intestinal organoids swell in a cAMP-driven fashion, a response that is defective (or strongly reduced) in CF organoids and can be restored by exposure to CFTR modulators.

Inchaço na Organóides intestinal induzida por forscolina: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Ensaio para a Avaliação de Medicamentos Response na Fibrose Cística Os pacientes

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

Um modelo de cultura celular de artérias de resistência

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other vessels), and describes techniques for evaluating tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry (LDF) and microvessel density utilizing fluorescently labeled Griffonia simplicifolia (GS1) lectin. Current methods for studying isolated resistance arteries at transmural pressures encountered in vivo and in the absence of parenchymal cell influences provide a critical link between in vivo studies and information gained from molecular reductionist approaches that provide limited insight into integrative responses at the whole animal level. LDF and techniques to selectively identify arterioles and capillaries with fluorescently-labeled GS1 lectin provide practical solutions to enable investigators to extend the knowledge gained from studies of isolated resistance arteries. This paper describes the application of these techniques to gain fundamental knowledge of vascular physiology and pathology in the rat as a general experimental model, and in a variety of specialized genetically engineered &#34;designer&#34; rat strains that can provide important insight into the influence of specific genes on important vascular phenotypes. Utilizing these valuable experimental approaches in rat strains developed by selective breeding strategies and new technologies for producing gene knockout models in the rat, will expand the rigor of scientific premises developed in knockout mouse models and extend that knowledge to a more relevant animal model, with a well understood physiological background and suitability for physiological studies because of its larger size.

This manuscript describes in vitro video microscopy protocols for evaluating vascular function in rat cerebral resistance arteries. The manuscript also describes techniques for evaluating microvessel density with fluorescently labeled lectin and tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry.

Avaliação dos mecanismos de controlo Vascular utilizando a microscopia das artérias de resistência isolada de ratos

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Cardiac Response to &#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of specific treatments on the heart. Due to the feasibility of genetic manipulations the mouse has become the most common mammalian animal model to study cardiac function and to search for new potential therapeutic targets. Here we describe a protocol to determine cardiac function&#160;in vivo using pressure-volume loop measurements and analysis during basal conditions and under &#946;-adrenergic stimulation by intravenous infusion of increasing concentrations of isoproterenol. We provide a refined protocol including ventilation support taking into account the positive end-expiratory pressure to ameliorate negative effects during open-chest measurements, and potent analgesia (Buprenorphine) to avoid uncontrollable myocardial stress evoked by pain during the procedure. All together the detailed description of the procedure and discussion about possible pitfalls enables highly standardized and reproducible pressure-volume loop analysis, reducing the exclusion of animals from the experimental cohort by preventing possible methodological bias.

Here we describe a cardiac pressure-volume loop analysis under increasing doses of intravenously infused isoproterenol to determine the intrinsic cardiac function and the &#946;-adrenergic reserve in mice. We use a modified open-chest approach for the pressure-volume loop measurements, in which we include ventilation with positive end-expiratory pressure.

Resposta cardíaca à estimulação β-adrenérgica determinada pela análise do loop de pressão-volume

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of ...