המחברים רוצים להכיר בתרומתם של Meritxell רומאו-נדאל למחקר החולדה.

1. נהלי בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל העבודה של בעלי החיים צריכה להתבצע בהתאם לבעלי חיים בית המשרד (הליכים מדעיים) Act (1986). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Mate חולדות Wistar בני 10 שבועות ישנים על ידי רבייה מונוגמיים, ולאשר את ההריון על ידי הופעתו של תקע נרתיק. להקליט זה כמו יום 1 של הריון, ולהתחיל בדיאטה ניסיונית. לנקבות בתולה, בית עכברוש אחד בנפרד, ולהתחיל בדיאטה ניסיונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר האכלת הדיאטות הניסיוניות ל20 ימים להרדים חולדות על ידי CO מחנק 2 ואחריו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים ומספריים לנתיחה על מנת לחשוף את חלל הבטן, ולהסיר את הכבד על ידי חיתוך הרצועות המחברות את הכבד לסרעפת, קיר קדמי של הבטן, הקיבה והתריסריון. שטוף את הכבד ב-PBS ולהקפיא בחנקן נוזלי לפני האחסון ב -80 ° C. </li></ol> 2. הכנת ליפידים סה&quot;כ חלץ 9 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת moleculמסננות ar (כדי למלא 1/10 של מיכל ממס) לכל הממסים ליצור ממסים &quot;יבשים&quot;. לבצע את כל עבודת הממס בתוך מנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים כ 100 מ&quot;ג כבד קפוא ולשקול. הנח את הרקמה לתוך צינור בדלי קרח ולהוסיף 0.8 0.9% הקרח קר מיליליטר NaCl. Homogenize הרקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת התקנים פנימיים המומסים ב 1 מיליליטר / מ&quot;ג של כלורופורם יבש: מתנול (2:1, V / V) מכיל hydroxytoluene butylated (BHT; 50 מ&quot;ג / ליטר) כנוגד חמצון. לשל כבד חולדה 100 מ&quot;ג להוסיף לסטנדרטים של CE 100 מיקרוגרם (כולסטריל heptadecanoate 17:00) זהירות:. כלורופורם וBHT הם מסוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 5.0 מיליליטר כלורופורם יבש: מתנול (2:1, V / V) מכיל BHT (50 מ&quot;ג / ליטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 1.0 מיליליטר 1 M NaCl, ומערבב היטב על ידי vortexing עד שתערובת נראית אחידה. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה XG ב 1000 עבור 10 דקות, בלם נמוך בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף נמוךשלב באמצעות זכוכית פיפטה פסטר, להעביר לצינור חדש כובע בורג זכוכית ויבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li></ol> 3. הפרדה של חוגים ליפידים ידי מיצוי שלב מוצק (SPE) 10 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מיכל SPE למשאבת ואקום ולמקם aminopropyl מחסנית SPE סיליקה על הטנק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם תג חדש שפופרת זכוכית ההברגה כובע שכותרתו ו &#39;לסה&quot;נ במעמד הטנק תחת העמודה לאסוף חלק ראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים בסך הכל תמצית שומנים ב1.0 מיליליטר כלורופורם ומערבולת יבשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל המדגם לעמודה באמצעות פיפטה פסטר זכוכית ולאפשר לטפטף אל תוך צינור בורג יתר תחת כוח הכבידה. כאשר אינו מטפטפים נוסף ליפול, להסיר את הנוזל שנותר בחלל ריק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Elute שבריר TAG ו &#39;לסה&quot;נ תחת ואקום, לשטוף את העמודה עם שטיפת 2 x 1.0 מיליליטר של כלורופורם יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר כל הנוזלים מוסרים, לייבש את fractio TAG ו &#39;לסה&quot;נn תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את מחשב שפופרת זכוכית חדש בורג יתר שכותרתו לתוך מגש הטנק תחת העמודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Elute שבריר המחשב תחת ואקום עם התוספת של 2 x 1.0 מיליליטר כלורופורם יבש: מתנול (60:40, V / V) עד שכל הנוזל הוא להסיר את העמודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר ושבריר מחשב יבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח PE שפופרת זכוכית חדש בורג יתר שכותרתו לתוך מגש הטנק וelute שבריר PE עם התוספת של 1.0 מיליליטר מתנול היבש תחת ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר וחלק PE יבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שפופרת זכוכית ההברגה כובע חדשה NEFA שכותרתו לתוך מגש הטנק וelute שבריר NEFA תחת ואקום על ידי התוספת של 2 x 1.0 מיליליטר שוטף של כלורופורם יבש: מתנול: חומצה אצטית קרחונית. (100:2:2, v / v / v) זהירות: החומצה אצטית קרחונית היא מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר שבריר NEFA שנאסף ויבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מחסנית SPE סיליקה aminopropyl חדשה על טנק SPE ולמקם את שפופרת זכוכית בורג מכסה במגש הטנק מתחת למחסנית לאיסוף פסולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את העמודה עם 3 שוטף של הקסאן היבש תחת ואקום ולאחר מכן לשטוף 1.0ml סופי תחת כובד. אל תאפשר את המחסנית להיות יבשה (להפוך את ערוצי עמודת מחסנית למצב סגור כאשר רמת הקסאן היא קרובה למטריקס המחסנית) זהירות:. הקסאן הוא מסוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלפת צינור פסולת עם CE שכותרתו שפופרת זכוכית ההברגה כובע חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את החלק המיובש TAG ו &#39;לסה&quot;נ (מוכן בשלב 3.6) ב1.0 מיליליטר של הקסאן ומערבולת יבשים. ליישם את זה לעמודה באמצעות פיפטה פסטר זכוכית ולאפשר לטפטף דרך תחת gravity. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר אינו מטפטפים נוסף ליפול, להסיר את הנוזל שנותר תחת ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת ואקום, לשטוף את העמודה עם 2 x 1.0 מיליליטר שוטף של הקסאן היבש לelute CE וחלק שנאסף יבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם תג שפופרת זכוכית ההברגה כובע חדש שכותרתו במגש הטנק וTAG elute עם התוספת של 2 x 1.0 מיליליטר שוטף של הקסאן היבש: מתנול: אתיל אצטט (100:5:5) תחת ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק קטן שנאסף יבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע זהירות:. אתיל אצטט היא מסוכן. </li></ol> 4. הכנת התהילה מספירה 10 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.5 מיליליטר של טולואן היבש לשבריר המופרד לסה&quot;נ (שנאסף בשלב 3.19) ו מערבולת זהירות:. טולואן הוא מסוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מגיב מתילציה (מתנול יבש עם 2% (v/ V) H 2 SO 4), מתוכם 1.0 מיליליטר נדרש לדגימה. לוותר על הנפח של מתנול היבש לתוך כוס או מיכל פלסטיק עם מכסה מתאים ולהוסיף את הכמות הנדרשת של H 2 SO 4 dropwise אז מערבב על ידי היפוך זהירות:. חומצה גופרתית היא מסוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 1.0 מיליליטר של מגיב methylating לדגימות המומסים בטולואן היבש, מכסה את הצינורות באופן מאובטח, ומערבבים בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את הדגימות לשעה 2 ב 50 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 2 שעות להסיר את הצינורות מחום. ברגע שמגניב להוסיף 1.0 מיליליטר נטרול פתרון (0.25 M KHCO 3 0.5MK 2 CO 3) זהירות:. יקרבונט אשלגן פחם אשלגן הוא מסוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 1.0 מיליליטר הקסאן ומערבולת יבשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב 250 XG במשך 2 דקות, בלם נמוך בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף שלב עליון, המכיל את התהילה, ולהעביר לתוך צינור שאינו חדש בורג מכסה זכוכית חד פעמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את התהילה שנאסף תחתחנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע. </li></ol> 5. ההסרה של כולסטרול חינם זיהום מתהילה לספירה 14 (כולסטרול חינם יכול לזהם את המדגם; ראה איור 1 עבור עקבות דוגמא כרומטוגרף עם ובלי הסרת כולסטרול חופשי). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח צינור פסולת למכל SPE ולמקם את מחסנית SPE ג&#39;ל סיליקה על גבי הטנק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף טור עם 3 x 1 מיליליטר שוטף של הקסאן היבש תחת ואקום ו1 x 1 מיליליטר תחת כובד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר שוטף פסולת ולהוסיף צינור שפכים חדש לתוך טנק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים FAME CE ב1 הקסאן, מערבולת מיליליטר יבשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחול על העמודה בעזרת פיפטה פסטר זכוכית ולאפשר לטפטף דרך תחת כוח הכבידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף טור עם 3 x 1 מיליליטר שוטף של הקסאן תחת ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר שוטף פסולת ומניח את צינור כובע בורג שאינו חדש לתהילה לספירה טנק שכותרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Eluteתהילה לספירה עם הקסאן היבש 2 x 1 מיליליטר: אתר diethyl (95:5 V / V) שוטף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש תחת חנקן ב40 ° C. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד שבוע זהירות:. דיאתיל האתר הוא מסוכן. </li></ol> 6. העברת תהילה לGC האוטומטי סמפלר ויאל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 75 הקסאן μl היבש לדגום, מערבולת, ולהעביר לבקבוקון מדגם האוטומטי GC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת הקסאן μl יבש נוסף 75 לדגום, מערבולת ולהעביר לאותו בקבוקון המדגם האוטומטי GC. ניתן הכתירה דגימות ומאוחסנות ב -20 מעלות צלזיוס בשלב זה לתקופה של עד חודש. </li></ol> 7. ניתוח שימוש בגז כרומטוגרף 14 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את התהילה בגז כרומטוגרף. דוגמא להגדיר: 30 MX 0.25 מיקרומטר x 0.25 מ&quot;מ BPX-70 עמודת נימי סיליקה התמזגו עם פרוטוקול טמפרטורה: הטמפרטורה ההתחלתית 115 ° C, להחזיק 2 דקות, כבש 10 ° C / min 200 ° C, החזק 18.5 דקות, 60 ° C / min רמפה ל245 ° C, hדקות בן 4. טור: גז הליום, קצב זרימת 1.0, לחץ 14.6 ומהירות 29. מזרק: טמפרטורה = 300 ° C. גלאי: זרימת מימן 40.0, אוויר זורמת 184.0, לפצות הליום גז, תזרום 45.0, טמפרטורה = 300 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יחס פיצול קבע כמתאים (למשל 25:1 לניתוח תהילה לספירה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את האזור מתחת לכל שיא באמצעות תוכנה מתאימה ולזהות תהילה בהשוואה לסטנדרטים. ראה איור 2 לchromatograms ירושלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשטח מתחת לשיא נתונים כדי לחשב את התרומה של חומצות שומן בודדות כאחוז מכלל חומצות שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב ריכוזים מוחלטים של חומצות שומן על ידי חלוקת השטח של תקן הפנימי על ידי הכמות הוסיף. לחלק את השטח של כל חומצת שומן על ידי תוצאה זו כדי להשיג ריכוזים מוחלטים של כל חומצת שומן בכמות הרקמה בשימוש. </li></ol>

<ol>
	<li>Browning, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+eicosapentaenoic+and+docosahexaenoic+acids+into+lipid+pools+when+given+as+supplements+providing+doses+equivalent+to+typical+intakes+of+oily+fish.">Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into lipid pools when given as supplements providing doses equivalent to typical intakes of oily fish.</a> Am. J. Clin. Nutr. 96 (4), 748-758 (2012).</li><li>Cao, J., Schwichtenberg, K. A., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+and+clearance+of+omega-3+fattyacids+in+erythrocyte+membranes+and+plasma+phospholipids.">Incorporation and clearance of omega-3 fattyacids in erythrocyte membranes and plasma phospholipids.</a> Clin. Chem. 52 (12), 2265-2272 (2006).</li><li>Lauritzen, L., Carlson, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+fatty+acid+status+during+pregnancy+andlactation+and+relation+to+newborn+and+infant+status.">Maternal fatty acid status during pregnancy andlactation and relation to newborn and infant status.</a> Matern. Child Health. 7 (2), 41-58 (2011).</li><li>Kelsall, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+dysfunction+induced+in+offspring+by+maternal+dietary+fat+involves+altered+arterial+polyunsaturated+fatty+acid+biosynthesis.">Vascular dysfunction induced in offspring by maternal dietary fat involves altered arterial polyunsaturated fatty acid biosynthesis.</a> PLoS One. 7 (4), (2012).</li><li>Karpe, F., Dickmann, J. R., Frayn, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids,+obesity,+and+insulin+resistance:+time+for+a+re-evaluation.">Fatty acids, obesity, and insulin resistance: time for a re-evaluation.</a> Diabetes. 60 (10), 2441-2449 (2011).</li><li>Mossoba, M. M., Moss, J., Kramer, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans+fat+labelling+and+levels+in+U.S.+foods:+assessment+of+gas+chromatographic+and+infrared+spectroscopic+techniques+for+regulatory+compliance.">Trans fat labelling and levels in U.S. foods: assessment of gas chromatographic and infrared spectroscopic techniques for regulatory compliance.</a> J. AOAC Int. 92 (5), 1284-1300 (2009).</li><li>Chee, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+content+of+marine+oil+capsules.">Fatty acid content of marine oil capsules.</a> Lipids. 25 (9), 523-528 (1990).</li><li>Folch, J., Lees, M., Sloane-Stanley, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+the+isolation+and+purification+of+total+lipids+from+animal+tissues.">A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.</a> J. Biol. Chem. 226 (1), 497-509 (1957).</li><li>Burdge, G. C., Wright, P., Jones, E. A., Wootton, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+separation+of+phosphatidylcholine,+triacylglycerol,+non-esterified+fatty+acids+and+cholesterol+esters+from+plasma+by+solid-phase+extraction.">A method for separation of phosphatidylcholine, triacylglycerol, non-esterified fatty acids and cholesterol esters from plasma by solid-phase extraction.</a> Br. J. Nutr. 84 (5), 781-787 (2000).</li><li>Sepp&#228;nen-Laakso, T., Laakso, I., Hiltunen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+fatty+acids+by+gas+chromatography,+and+its+relevance+to+research+on+health+and+nutrition.">Analysis of fatty acids by gas chromatography, and its relevance to research on health and nutrition.</a> Anal. Chim. Acta. 465 (1), 39-62 (2002).</li><li>Beesley, T. E., Buglio, B., Scott, R. P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Quantitative chromatographic analysis. , (2000).</li><li>Bartle, K. D., Myers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+gas+chromatography.">History of gas chromatography.</a> Trends Anal. Chem. 21 (9), 9-10 (2002).</li><li>Childs, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The effect of gender, pregnancy and diet upon rat tissue fatty acid composition and immune function. , 378 (2008).</li><li>Harris, S. W., Pottala, J. V., Ramachandran, S. V., Larson, M. G., Robins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+erythrocyte+membrane+Trans+and+marine+fatty+acids+between+1999+and+2006+in+older+Americans.">Changes in erythrocyte membrane Trans and marine fatty acids between 1999 and 2006 in older Americans.</a> J. Nutr. 142 (7), 1297-1303 (2012).</li><li>Roberts, L. D., McCombie, G., Titman, C. M., Griffin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+matter+of+fat:+An+introduction+to+lipidomic+profiling+method.">A matter of fat: An introduction to lipidomic profiling method.</a> J. Chromatogr. B. 871 (2), 174-181 (2008).</li></ol>

המחברים מצהירים שום אינטרסים כלכליים מתחרים.

גז כרומטוגרפיה היא טכניקה מדויקת לשימוש לניתוח חומצות שומן, והשחזור הגבוה שלו ימצא לטכניקה זו מתאימה לניתוחים קליניים. עמודות GC מתאימות חייבים להיות בשימוש על מנת לאפשר זיהוי של חומצות שומן של עניין, עם עמודות זמינות שיש וריאציות בקוטביות של השלב נייח, אורך עמודה וה?...

גז כרומטוגרפיה (GC) היא טכניקה מבוססת היטב המשמשת לזיהוי ולכמת את השילוב של חומצות שומן לתוך בריכות שומנים בדם וקרומים תא 1,2 בתנאי תוספים או פיסיולוגיים כמו השמנה (ומחלות הקשורות כגון סוכרת) או הריון - 3 5. זה מתאים גם לניתוח הסוגים והכמויות של שומנים במזון. זה שימושי כאשר אפיון דיאטות ניסיוניות, כמו גם להבטיח כי תעשיית המזון עומדת בתקנות. לדוגמא, GC ניתן להשתמש כדי לאשר את זהותו וכמות של חומצות שומן בתוך מוצר כגון תוסף תזונה כדי להבטיח התיוג שהוא נכון ותקנות הם דבקו 6,7. ניתוח של חומצות שומן יכול לספק תובנות רבות ערך חילוף חומרים של שומנים בבריאות ובחוליים, את ההשפעה של שינוי תזונתי, ואת ההשפעה של שינויים במצב פיסיולוגי 8. שימוש של GC כדי ללמוד דגימות במהלך ההריון סיפק חשובמידע על שינויים בחומצות שומן והומאוסטזיס שומנים מורכבים 3. לקראת הפרדת chromatographic, שומנים המחולצים בדרך כלל מהמדגם באמצעות המסיסות של שומנים בתערובות ממיסים של כלורופורם ומתנול. נתרן כלורי הוא הוסיף כדי להקל על הפרדת התערובת לתוך שומנים מימיים ואורגניים המכילים שלבי 9,10. כיתות שומנים מורכבות של עניין ניתן להפריד בסך הכל תמצית שומנים בדם על ידי מיצוי שלב מוצק (SPE). טכניקת הפרדה זו elutes כיתות שומנים המבוססות על הקוטביות שלהם או זיקה מחייבת. Triacyglycerols (TAG) ואסטרים כולסטריל (CE) הם eluted הראשון כשבר משולבת, כיתות נוספות, phosphatidylcholine (PC), Phosphatidylethanolamine (PE), וחומצות שאינם esterified שומן (NEFA) הם eluted על ידי הגדלת הקוטביות של ממס משחררי . ההפרדה של TAG מהספירה מנצלת מחייבת של TAG רק למחסניות SPE טריותdge, המאפשר לספירה להיות eluted. TAG אז יכול להיות eluted על ידי הגדלת הקוטביות של 9,10 ממס משחררי. שיטה זו מאפשרת דגימות מרובות כדי להפריד בו זמנית עם תשואה גבוהה יותר מזו שהושגה עם כרומטוגרפיה בשכבה דקה, מה שאומר שדגימות בגודל קטנות יחסית (למשל &lt;פלזמה 100 μl או סרום, &lt;רקמת מ&quot;ג 100) ניתן לנתח 11,12. GC הוא טכניקה מבוססת היטב תוארה לראשונה בשנת 1950s; הוצע כי השלב הנייד במערכות אז נוזל נוזל יכול להיות מוחלף עם אדים. בהתחלה זה היה בשימוש לניתוח נפט אך התרחב במהירות לתחומים אחרים כגון ניתוח חומצת אמינו וביוכימיה שומנים בדם, שהוא עדיין עניין גדול. התקדמות בציוד GC וטכנולוגיה, כגון הפיתוח של עמודות נימים מהשתמשו בעבר הטורים עמוסים הובילה לטכניקות הנוכחיות שלנו שבו חומצות שומן יכולות להיותנפרד בצורה יעילה יותר בטמפרטורות נמוכות יותר וכתוצאה מכך GC בשימוש באופן שגרתי כדי לזהות ולכמת את חומצות שומן במגוון רחב של חקירות 13. GC דורש חומצות שומן להיות derivatized על מנת שהם עשויים להיות תנודתי במידה מספקת כדי להיות eluted בטמפרטורות סבירות ללא פירוק תרמי. בדרך כלל הדבר כרוך ההחלפה של קבוצה פונקציונלית המכילה מימן ליצירת אסטרים, thioesters או אורגני חיבור לניתוח. אסטרים מתיל בדרך כלל נלמדים נגזרים, אשר מיוצרים על ידי מתילציה. בשיטה זו אג&quot;ח אסתר בשומנים מורכבים הידרוליזה לשחרר חומצות שומן חופשיות, הtransmethylated כדי ליצור אסטרים מתילים של חומצות שומן (FAME). הפרופיל וכתוצאה מכך של תהילה, שנקבע על ידי GC, שמכונה הרכב חומצות שומן וניתן להשוות בקלות בין קבוצות ניסוי השונות 9,10. הטכניקה מאפשרת גם את הפרופורציות של אדם מסוים עלחומצות שומן רע&quot;מ וריכוזיהם כדי להימדד. בנוסף לשימוש של GC לניתוח חומצות שומן בלימודי תזונה ובתוך תעשיית המזון, הטכניקה יכולה לשמש במגוון רחב של תחומים אנליטיים. לדוגמא, ניתוח סביבתי באמצעות GC כולל מדידת זיהום מים על ידי חומרי הדברה ואדמה מנתחת מדידת תכולת chlorobenzene. בטוקסיקולוגיה, GC שימש גם לזיהוי חומרים לא חוקיים בשתן ודגימות של אנשים בדם; משפרי ביצועים כגון ספורט 12 ואת היכולת להפריד תערובות מורכבות של פחמימנים הופכים טכניקה זו פופולרית בתעשיית הנפט לניתוח פטרוכימי 12. הריון קשור לשינויים משמעותיים בהרכב חומצות השומן של רקמות אימהיות, במיוחד בתוכן של אומגה 3 (n-3) ואומגה 6 (n-6) ACI שומן רב בלתי רוויDS (PUFA) 3. במחקר הנוכחי, אנו מדגימים את השימוש של GC במדידה של חומצות שומן על ידי המתאר את השימוש בו בניתוח של הרכב חומצות שומן של רקמת כבד שנלקחה מחולדות בתולה ובהריון קבלו תזונה דלת שומן וגבוהה עם מקורות נפט שונים. הדיאטות הניסיוניות הניתנות כאן היו דיאטת סויה דלת שומן על בסיס שמן, תזונה עתירה שומן סויה על בסיס שמן (סה&quot;כ שומן סה&quot;כ שומן / קילוגרם 130.9 ז) או דיאטה הבוסס על שמן פשתן עשיר בשומן (סה&quot;כ שומן / קילוגרם 130.9 גרם דיאטה), ובלבד ל20 ימים. הרכב חומצות שומן התזונתי ומלא של דיאטות אלה תוארו בעבר 14. דיאטות שמן הסויה עשירות בחומצה לינולאית (18:02 n-6) ומכילות כמה חומצת α לינולנית (18:03 n-3) בזמן דיאטת שמן הפשתן עשירה בחומצה לינולנית α. תזונה עשירה בשומן אלה מייצגות מנות שונות של חומצות לינולאית לα לינולנית (מנות של 08:01 ו1:1, בהתאמה). השיטה לבידוד של כיתות שומנים בודדות וניתוח על ידי GC היא שאנחנוll הוקם ותוקף, וכבר פורסם בעבר 10 אך ללא התיאור הטכני מפורט מצא במסמך זה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Methanol:</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M/4056/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform:</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/4966/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHT:</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>W218405</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Dust fumes - Anhydrous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Anhydrous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H/0406/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>695084</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Burns - 99.85%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric acid</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>339741</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Burns - 99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>209619</td>
			<td>99% ACS Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium bicarbonate</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>237205</td>
			<td>99.7% ACS Reasgent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10204340</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - 99+% GLC SpeciFied</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>T/2300/15</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>309966</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen (oxygen free) cylinder</td>
			<td>BOC</td>
			<td>44-w</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Compressed gas - explosion risk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aminopropyl silica SPE cartridges</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>12102014</td>
			<td>Cartridge - Bead mass 100mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel SPE cartidges</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>14102010</td>
			<td>Cartridge - Bead mass 100mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular seives</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>334324</td>
			<td>Pellets, AW-300, 1.6mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB50251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass test tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB59527</td>
			<td>Non-screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw thread glass test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB59555</td>
			<td>13mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caps for screw thread test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB51353</td>
			<td>To fit 13mm tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solida phase extraction (SPE) tank</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>VacElut 20 Manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer stopcocks for SPE tank</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>12131005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>2656-194GB-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC vials</td>
			<td>Kinesis</td>
			<td>STV 12-03TS</td>
			<td>Short thread 9mm, TPX 0.2ml fused glass insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC vial lids</td>
			<td>Kinesis</td>
			<td>SCC09-0.2B</td>
			<td>Short thread 9mm blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC inlet liners</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>092002</td>
			<td>Split/splitless Focus liner ID 4mm, OD 6.3mm length 78.5mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC septa</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>041856</td>
			<td>11mm, MN material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC column</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>054612</td>
			<td>Length 30m, ID 0.22mm, Film thickness 0.25&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HP 6890 series</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of gas chromatography to analyze compositional changes of fatty acids in rat liver tissue during pregnancy

גז כרומטוגרפיה (GC) היא שיטה רגישה מאוד המשמשת לזיהוי ולכמת את תכולת חומצות שומן של שומנים ברקמות, תאים ופלזמה / סרום, מניב תוצאות ברמת דיוק גבוהה ושחזור גבוה. במחקרים מטבוליים והתזונה GC מאפשר הערכה של שינויים בריכוז חומצות השומן הבאים התערבויות או במהלך שינויים במצב פיסיולוגי כגון הריון. מיצוי שלב מוצק (SPE) באמצעות aminopropyl מחסניות סיליקה מאפשר הפרדה של מעמדות שומנים בדם הגדולות, כולל triacylglycerols, פוספוליפידים שונים, ואסטרים כולסטריל (CE). GC בשילוב עם SPE שימש כדי לנתח את השינויים בהרכב חומצות שומן של שבריר CE בכבדים של חולדות בתולה והרות שקבלו תזונה שומן גבוהה ונמוכה שונות. ישנן השפעות אינטראקציה דיאטה / הריון משמעותיות על תכולת חומצות אומגה 3 ואומגה 6 וחומצות השומן של CE כבד, מצביעים על כך שנשים בהריון יש תגובה שונה לmanipulat התזונתייון ממה שראה אצל נקבות בתולה.

ההצלחה של שיטה זו תלויה בביצוע הפרוטוקול מדויק ועל שימוש בממסים וריאגנטים נקיים על מנת להקטין &#39;רעש&#39; וזיהום שיכול להופיע על הכרומתוגרמה. דגימות מזוהמות הן יותר מאתגר כדי לנתח, הפחתת הדיוק של השטח מתחת לעקומת החישובים. יש לקבל אם הפרוטוקול ואחריו בהצלחה הכרומתוגרמ...

Watch this Scientific Journal Video about The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy at JoVE.com

The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

הריון גורם לשינויים משמעותיים בהרכב חומצות שומן של רקמות אימהיות. ניתן להשיג פרופילי שומנים בדם באמצעות גז כרומטוגרפיה כדי לאפשר זיהוי וכימות של חומצות שומן בכיתות שומנים בודדות בקרב חולדות קבלו תזונה שומן גבוה ונמוך שונות במהלך הריון.

השימוש בגז כרומטוגרפיה לנתח הלחנה שינויים של חומצות שומן ברקמות חולדה כבד במהלך הריון

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

the-use-gas-chromatography-to-analyze-compositional-changes-fatty

Research

JoVE Journal

Chemistry

29.9K Views.  University of Southampton.  הריון גורם לשינויים משמעותיים בהרכב חומצות שומן של רקמות אימהיות. ניתן להשיג פרופילי שומנים בדם באמצעות גז כרומטוגרפיה כדי לאפשר זיהוי וכימות של חומצות שומן בכיתות שומנים בודדות בקרב חולדות קבלו תזונה שומן גבוה ונמוך שונות במהלך הריון. 

Video: The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue located at or near the N-terminus of a helix is often more acidic than that at or near the C-terminus 1-6. Although extensive experimental studies on the acid-base properties of peptides have been carried out in the condensed phase, in particular in aqueous solutions 6-8, the results are often complicated by solvent effects 7. In fact, most of the active sites in proteins are located near the interior region where solvent effects have been minimized 9,10. In order to understand intrinsic acid-base properties of peptides and proteins, it is important to perform the studies in a solvent-free environment.
We present a method to measure the acidities of oligopeptides in the gas-phase. We use a cysteine-containing oligopeptide, Ala3CysNH2 (A3CH), as the model compound. The measurements are based on the well-established extended Cooks kinetic method (Figure 1) 11-16. The experiments are carried out using a triple-quadrupole mass spectrometer interfaced with an electrospray ionization (ESI) ion source (Figure 2). For each peptide sample, several reference acids are selected. The reference acids are structurally similar organic compounds with known gas-phase acidities. A solution of the mixture of the peptide and a reference acid is introduced into the mass spectrometer, and a gas-phase proton-bound anionic cluster of peptide-reference acid is formed. The proton-bound cluster is mass isolated and subsequently fragmented via collision-induced dissociation (CID) experiments. The resulting fragment ion abundances are analyzed using a relationship between the acidities and the cluster ion dissociation kinetics. The gas-phase acidity of the peptide is then obtained by linear regression of the thermo-kinetic plots 17,18.
The method can be applied to a variety of molecular systems, including organic compounds, amino acids and their derivatives, oligonucleotides, and oligopeptides. By comparing the gas-phase acidities measured experimentally with those values calculated for different conformers, conformational effects on the acidities can be evaluated.

The determination of the gas-phase acidities of cysteine-containing oligopeptides is described. The experiments are performed using a triple quadrupole mass spectrometer. The relative acidities of the peptides are measured using collision-induced dissociation experiments, and the quantitative acidities are determined using the extended Cooks kinetic method.

קביעת Acidities גז השלב של Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Isolation and Preparation of Bacterial Cell Walls for Compositional Analysis by Ultra Performance Liquid Chromatography

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the face of turgor pressures several atmospheres in magnitude. Across the diverse shapes and sizes of the bacterial kingdom, the cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by short peptides. Peptidoglycan&#8217;s central importance to bacterial physiology underlies its use as an antibiotic target and has motivated genetic, structural, and cell biological studies of how it is robustly assembled during growth and division. Nonetheless, extensive investigations are still required to fully characterize the key enzymatic activities in peptidoglycan synthesis and the chemical composition of bacterial cell walls. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is a powerful analytical method for quantifying differences in the chemical composition of the walls of bacteria grown under a variety of environmental and genetic conditions, but its throughput is often limited. Here, we present a straightforward procedure for the isolation and preparation of bacterial cell walls for biological analyses of peptidoglycan via HPLC and Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC), an extension of HPLC that utilizes pumps to deliver ultra-high pressures of up to 15,000 psi, compared with 6,000 psi for HPLC. In combination with the preparation of bacterial cell walls presented here, the low-volume sample injectors, detectors with high sampling rates, smaller sample volumes, and shorter run times of UPLC will enable high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition and fundamental bacterial cell biology in most biological laboratories with access to an ultracentrifuge and UPLC.

The bacterial cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by peptides. Ultra Performance Liquid Chromatography provides high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition. We present a procedure for the isolation of cell walls (sacculi) and their subsequent preparation for analysis via UPLC.

בידוד והכנת קירות תא חיידקי לניתוח קומפוזיציוני על ידי כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה ביצועים

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the ...

Quantitative Detection of Trace Explosive Vapors by Programmed Temperature Desorption Gas Chromatography-Electron Capture Detector

The direct liquid deposition of solution standards onto sorbent-filled thermal desorption tubes is used for the quantitative analysis of trace explosive vapor samples. The direct liquid deposition method yields a higher fidelity between the analysis of vapor samples and the analysis of solution standards than using separate injection methods for vapors and solutions, i.e., samples collected on vapor collection tubes and standards prepared in solution vials. Additionally, the method can account for instrumentation losses, which makes it ideal for minimizing variability and quantitative trace chemical detection. Gas chromatography with an electron capture detector is an instrumentation configuration sensitive to nitro-energetics, such as TNT and RDX, due to their relatively high electron affinity. However, vapor quantitation of these compounds is difficult without viable vapor standards. Thus, we eliminate the requirement for vapor standards by combining the sensitivity of the instrumentation with a direct liquid deposition protocol to analyze trace explosive vapor samples.

Trace explosive vapors of TNT and RDX collected on sorbent-filled thermal desorption tubes were analyzed using a programmed temperature desorption system coupled to GC with an electron capture detector. The instrumental analysis is combined with direct liquid deposition method to reduce sample variability and account for instrumentation drift and losses.

כמותי איתור של אדי נפץ Trace ידי טמפרטורת מתוכנת Desorption גלאי גז לכידת כרומטוגרפיה-אלקטרונים

The direct liquid deposition of solution standards onto sorbent-filled thermal desorption tubes is used for the quantitative analysis of trace explosive ...

Use of Stopped-Flow Fluorescence and Labeled Nucleotides to Analyze the ATP Turnover Cycle of Kinesins

The kinesin superfamily of microtubule associated motor proteins share a characteristic motor domain which both hydrolyses ATP and binds microtubules. Kinesins display differences across the superfamily both in ATP turnover and in microtubule interaction. These differences tailor specific kinesins to various functions such as cargo transport, microtubule sliding, microtubule depolymerization and microtubule stabilization. To understand the mechanism of action of a kinesin it is important to understand how the chemical cycle of ATP turnover is coupled to the mechanical cycle of microtubule interaction. To dissect the ATP turnover cycle, one approach is to utilize fluorescently labeled nucleotides to visualize individual steps in the cycle. Determining the kinetics of each nucleotide transition in the ATP turnover cycle allows the rate-limiting step or steps for the complete cycle to be identified. For a kinesin, it is important to know the rate-limiting step, in the absence of microtubules, as this step is generally accelerated several thousand fold when the kinesin interacts with microtubules. The cycle in the absence of microtubules is then compared to that in the presence of microtubules to fully understand a kinesin&#8217;s ATP turnover cycle. The kinetics of individual nucleotide transitions are generally too fast to observe by manually mixing reactants, particularly in the presence of microtubules. A rapid mixing device, such as a stopped-flow fluorimeter, which allows kinetics to be observed on timescales of as little as a few milliseconds, can be used to monitor such transitions. Here, we describe protocols in which rapid mixing of reagents by stopped-flow is used in conjunction with fluorescently labeled nucleotides to dissect the ATP turnover cycle of a kinesin.

Kinesins are characterized by nucleotide-dependent interaction with microtubules: a cycle of ATP turnover coupled to a cycle of microtubule interaction. Here, we describe protocols to analyze the kinetics of individual nucleotide transitions in the ATP turnover cycle of a kinesin using fluorescently labeled nucleotides and stopped-flow fluorescence.

שימוש בנוקלאוטידים פסיקת זרימת הקרינה ותווית לניתוח מחזור מחזור ATP של Kinesins

The kinesin superfamily of microtubule associated motor proteins share a characteristic motor domain which both hydrolyses ATP and binds microtubules. ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular identity and function. Each of the seven PtdInsPs varies in their distribution and abundance, which are tightly regulated by specific kinases and phosphatases. The abundance of PtdInsPs can change abruptly in response to various signaling events or disturbance of the regulatory machinery. To understand how these events lead to changes in the amount of PtdInsPs and their resulting impact, it is important to quantify PtdInsP levels before and after a signaling event or between control and abnormal conditions. However, due to their low abundance and similarity, quantifying the relative amounts of each PtdInsP can be challenging. This article describes a method for quantifying PtdInsP levels by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, which is incorporated into PtdInsPs. Phospholipids are then precipitated and deacylated. The resulting soluble 3H-glycero-inositides are further extracted, separated by high-performance liquid chromatography (HPLC), and detected by flow scintillation. The labeling and processing of yeast samples is described in detail, as well as the instrumental setup for the HPLC and flow scintillator. Despite losing structural information regarding acyl chain content, this method is sensitive and can be optimized to concurrently quantify all seven PtdInsPs in cells.

Phosphoinositides are signaling lipids whose relative abundance rapidly changes in response to various stimuli. This article describes a method to measure the abundance of phosphoinositides by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, followed by extraction and deacylation. Extracted glycero-inositides are then separated by high-performance liquid chromatography and quantified by flow scintillation.

Radiolabeling וכימות של רמות סלולריות של Phosphoinositides ידי נצנץ זרימה מצמיד כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Facile Preparation of 4-Substituted Quinazoline Derivatives

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted 2-aminobenzophenones and thiourea in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO). This is a unique complementary reaction system in which thiourea undergoes thermal decomposition to form carbodiimide and hydrogen sulfide, where the former reacts with 2-aminobenzophenone to form 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate, whilst hydrogen sulfide reacts with DMSO to give methanethiol or other sulfur-containing molecule which then functions as a complementary reducing agent to reduce 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate into 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine. Subsequently, the elimination of ammonia from 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine affords substituted quinazoline derivative. This reaction usually gives quinazoline derivative as a single product arising from 2-aminobenzophenone as monitored by GC/MS analysis, along with small amount of sulfur-containing molecules such as dimethyl disulfide, dimethyl trisulfide, etc. The reaction usually completes in 4-6 hr at 160 &#186;C in small scale but may last over 24 hr when carried out in large scale. The reaction product can be easily purified by means of washing off DMSO with water followed by column chromatography or thin layer chromatography.

A protocol for facile preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from 2-aminobenzophenones, thiourea and dimethyl sulfoxide is presented.

הכנה קלילה של נגזרי Quinazoline 4-הוחלפו

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic acids containing three to six carbons), such as malate and citrate, are critical to the proper functioning of many biological systems, where they function in cellular respiration and can serve as indicators of cell health. In foods, organic acid content can have significant impact on taste, with increased SCCA levels resulting in a sour or &#34;acid&#34; taste. Because of this, methods for the rapid analysis of organic acid levels are of particular interest to the food and beverage industries. Unfortunately, however, most methods used for SCCA quantification are dependent on time-consuming protocols requiring the derivatization of samples with hazardous reagents, followed by costly chromatographic and/or mass spectrometric analyses. This method details an alternate method for the detection and quantification of organic acids from plant material and food samples using free zonal capillary electrophoresis (CZE), sometimes simply referred to as capillary electrophoresis (CE). CZE provides a cost-effective method for measuring SCCAs with a low limit of detection (0.005 mg/ml). This article details the extraction and quantification of SCCAs from plant samples. While the method provided focuses on measurement of SCCAs from coffee beans, the method provided can be applied to multiple plant-based food materials.

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

This article presents a method for the detection and quantification of organic acids from plant material using free zonal capillary electrophoresis. An example of the potential application of this method, determining the effects of a secondary fermentation on organic acid levels in coffee seeds, is provided.

באמצעות אלקטרופורזה נימים לכמת חומצות אורגניות מרקמות צמח: מקרה מבחן בחינה<em&gt; קפה ערביקה</em&gt; זרעים

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Raman and IR Spectroelectrochemical Methods as Tools to Analyze Conjugated Organic Compounds

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule on the vibrational level of energy. Raman and IR spectroelectrochemistry can be used for advanced characterization of the structural changes in the organic electroactive compounds. Here, the step-by-step analysis by means of Raman and IR spectroelectrochemistry is shown. Raman and IR spectroelectrochemical techniques provide complementary information about structural changes occurring during an electrochemical process, i.e. allows for the investigation of redox processes and their products. The examples of IR and Raman spectroelectrochemical analysis are presented, in which the products of the redox reactions, both in solution and solid state, are identified.

A protocol of step-by-step Raman and IR spectroelectrochemical analysis is presented.

ראמאן ושיטות IR Spectroelectrochemical ככלים לניתוח מצומדת תרכובות אורגניות

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. In this method for two-step pyrolysis online coupled to gas chromatography mass spectrometry (py-GC-MS) volatile compounds are analyzed during a first desorption run. In the second run, the same dried sample is pyrolyzed for analysis of non-volatile compounds such as pigments and polymers. These can be identified by their specific decomposition patterns. Additionally, this method can be used to differentiate original from counterfeit inks. Easy screening methods for data evaluation using the average mass spectra and self-made pyrolysis libraries are applied to speed up substance identification. Using specialized evaluation software for pyrolysis GS-MS data, a fast and reliable comparison of the full chromatogram can be achieved. Since GC-MS is used as separation technique, the method is limited to volatile substances upon desorption and after pyrolysis of the sample. The method can be applied for quick substance screening in market control surveys since it requires no sample preparation steps.

This method for two-step pyrolysis online coupled to gas chromatography with mass spectrometric detection and data evaluation protocol can be used for multi-component analysis of tattoo inks and discrimination of counterfeit products.

דו-שלב פירוליזה-גז כרומטוגרפיה שיטה עם זיהוי ספקטרומטרי המוני לזיהוי של החומרים דיו קעקועים מוצרים מזויפים

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Nitrogen Compound Characterization in Fuels by Multidimensional Gas Chromatography

Certain nitrogen-containing compounds can contribute to fuel instability during storage. Hence, detection and characterization of these compounds is crucial. There are significant challenges to overcome when measuring trace compounds in a complex matrix such as fuels. Background interferences and matrix effects can create limitations to routine analytical instrumentation, such as GC-MS. In order to facilitate specific and quantitative measurements of trace nitrogen compounds in fuels, a nitrogen-specific detector is ideal. In this method, a nitrogen chemiluminescence detector (NCD) is used to detect nitrogen compounds in fuels. NCD utilizes a nitrogen-specific reaction that does not involve the hydrocarbon background. Two-dimensional (GCxGC) gas chromatography is a powerful characterization technique as it provides superior separation capabilities to one-dimensional gas chromatography methods. When GCxGC is paired with a NCD, the problematic nitrogen compounds found in fuels can be extensively characterized without background interference. The method presented in this manuscript details the process for measuring different nitrogen-containing compound classes in fuels with little sample preparation. Overall, this GCxGC-NCD method has been shown to be a valuable tool to enhance the understanding of the chemical composition of nitrogen-containing compounds in fuels and their impact on fuel stability. The % RSD for this method is &#60;5% for intraday and &#60;10% for interday analyses; the LOD is 1.7 ppm and the LOQ is 5.5 ppm.

Here, we present a method utilizing two-dimensional gas chromatography and nitrogen chemiluminescence detection (GCxGC-NCD) to extensively characterize the different classes of nitrogen-containing compounds in diesel and jet fuels.

אפיון של מתחם חנקן בדלקים על ידי כרומטוגרפיה גז רב מימדית

Certain nitrogen-containing compounds can contribute to fuel instability during storage. Hence, detection and characterization of these compounds is ...