فإن الكتاب أود أن نعترف بمساهمة Meritxell روميو ونادال لدراسة الفئران.

1. إجراءات الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي تنفيذ جميع أعمال الحيوانية وفقا للوزارة الداخلية على الحيوانات (الإجراءات العلمية) لعام (1986). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتزاوج فئران ويستار الذين تتراوح أعمارهم بين 10 أسابيع من العمر عن طريق تربية بزوجة واحدة، وتأكيد الحمل بظهور المكونات المهبلية. تسجيل هذه كيوم 1 من الحمل، ويبدأ النظام الغذائي التجريبية. للإناث عذراء، إيواء كل الفئران بشكل فردي، وبدء اتباع نظام غذائي التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تغذية علائق تجريبية لمدة 20 يوما الموت ببطء الفئران عن طريق CO 2 الخنق تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط تشريح ومقص لفضح تجويف البطن واستئصال الكبد عن طريق قطع الأربطة، التي تربط الكبد إلى الحجاب الحاجز، والجدار الأمامي للبطن والمعدة والاثني عشر. يغسل الكبد في برنامج تلفزيوني وتجميد في النيتروجين السائل قبل تخزينها في -80 درجة مئوية. </li></ol> 2. إعداد الدهن إجمالي استخراج 9 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة moleculالمناخل ع (لملء 1/10 من الحاويات المذيبات) لجميع المذيبات المذيبات لخلق &#39;الجافة&#39;. القيام بجميع أعمال المذيبات داخل غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع ما يقرب من 100 ملغ الكبد المجمدة وتزن. وضع الأنسجة في أنبوب في دلو الثلج وإضافة 0.8 مل الجليد الباردة 0.9٪ كلوريد الصوديوم. تجانس الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة المعايير الداخلية الذائبة في 1 مل / ملغ من كلوروفورم الجافة: الميثانول (2:1، ت / ت) التي تحتوي على hydroxytoluene الأنيسول (BHT و 50 ملغ / لتر)، ومضادة للأكسدة. ل100 ملغ من كبد الفئران إضافة 100 ميكروغرام من معيار CE (الكوليسترول heptadecanoate 17:00) تنبيه: الكلوروفورم وBHT خطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5.0 مل كلوروفورم الجافة: الميثانول (2:1، ت / ت) التي تحتوي على BHT (50 ملغم / لتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1.0 مل 1 M كلوريد الصوديوم، مزيج دقيق من قبل vortexing حتى خليط تبدو موحدة. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 1000 x ج لمدة 10 دقيقة، الفرامل المنخفضة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع أقلمرحلة استخدام الزجاج ماصة باستور، ونقل إلى جديدة قبعة المسمار أنبوب زجاجي والجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li></ol> 3. الفصل بين فئات الدهون الصلبة عن طريق استخراج المرحلة (SPE) 10 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط خزان SPE إلى مضخة الفراغ ووضع أمينو السيليكا خرطوشة SPE على الخزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جديد المسمار غطاء أنبوب زجاجي المسمى TAG وCE في رف خزان تحت عمود لجمع جزء الأول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل مجموع استخراج الدهون في 1.0 مل كلوروفورم الجافة والدوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق العينة إلى العمود باستخدام ماصة باستير الزجاج والسماح لبالتنقيط من خلال أنبوب في غطاء المسمار تحت الجاذبية. عندما تسقط لا تقطر أبعد من ذلك، إزالة السائل المتبقية فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أزل TAG CE وجزء تحت فراغ، وغسل العمود مع 2 × 1.0 مل يغسل كلوروفورم الجافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تتم إزالة جميع السائل، وتجفيف TAG CE fractioن تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جديد المسمار غطاء أنبوب زجاجي PC وصفت في درج خزان تحت العمود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أزل الكسر PC تحت فراغ مع إضافة 2 × 1.0 مل كلوروفورم الجافة: الميثانول (60:40، ت / ت) حتى تتم إزالة جميع السائل من العمود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة جزء PC والجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع المسمار غطاء أنبوب زجاجي المسمى PE جديدة في علبة دبابات وأزل PE جزء مع إضافة 1.0 مل الميثانول الجاف تحت فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة وPE الجافة جزء تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الزجاج الجديد المسمار غطاء أنبوب المسمى NEFA في علبة دبابات وأزل NEFA جزء تحت فراغ بإضافة 2 × 1.0 مل يغسل كلوروفورم الجافة: الميثانول: حمض الخليك الجليدي(100:2:2، ت / ت / ت) تنبيه: حامض الخليك الجليدي هو الخطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة جزء جمعها NEFA والجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أمينو السيليكا جديدة خرطوشة SPE على خزان SPE ووضع أنبوب زجاجي المسمار الحد الأقصى في علبة خزان تحت خرطوشة لجمع النفايات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العمود مع 3 يغسل من الهكسان الجافة في ظل فراغ ثم يغسل 1.0ml النهائي تحت الجاذبية. لا تسمح خرطوشة لتصبح جافة (تحويل قنوات العمود خرطوشة لموقف مغلقة عند مستوى الهكسان على مقربة من مصفوفة خرطوشة) تنبيه: الهكسين خطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال أنبوب النفايات مع أنبوب جديد الزجاج المسمار الحد الأقصى المسمى CE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل المجففة وTAG CE جزء (المعد في الخطوة 3.6) في 1.0 مل من الهكسان الجافة والدوامة. لتطبيق هذا العمود باستخدام ماصة باستير الزجاج والسماح لبالتنقيط من خلال إطار زravity. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تسقط لا تقطر أبعد من ذلك، إزالة السائل المتبقية تحت فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت فراغ، وغسل العمود مع 2 × 1.0 مل من الهكسان يغسل الجافة إلى أزل م وجزء جمعت الجافة تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع جديد المسمار غطاء أنبوب زجاجي المسمى TAG في علبة دبابات وأزل TAG مع إضافة 2 × 1.0 مل من الهكسان يغسل الجافة: الميثانول: خلات الإيثيل (100:5:5) تحت فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جزء الجافة التي تم جمعها تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع تحذير: خلات الإيثيل خطرة. </li></ol> 4. إعداد FAME من CE 10 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.5 مل من التولوين جافة لجزء CE فصل (جمعها في الخطوة 3.19) ودوامة الحذر: التولوين هو الخطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مثيلة كاشف (الميثانول الجاف مع 2٪ (الخامس/ V) H 2 SO 4)، منها 1.0 مل هو مطلوب لكل عينة. الاستغناء حجم الميثانول الجاف في كوب أو وعاء من البلاستيك مناسب مع غطاء وإضافة المبلغ المطلوب من H 2 SO 4 نقطه نقطه ثم تخلط بواسطة انعكاس تنبيه: حمض الكبريتيك هو الخطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1.0 مل من كاشف مزج بالميثيل للعينات الذائبة في التولوين الجاف، وكأب الأنابيب بشكل آمن، والمزيج بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين العينات لمدة 2 ساعة على 50 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 2 ساعة إزالة الأنابيب من الحرارة. مرة واحدة إضافة 1.0 مل بارد تحييد الحل (0.25 M KHCO 3 0.5MK 2 CO 3) تنبيه: بيكربونات البوتاسيوم وكربونات البوتاسيوم والخطرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1.0 مل الهكسان الجافة والدوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 2 دقيقة، الفرامل المنخفضة في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع المرحلة العليا، والذي يحتوي على الشهرة، ونقل إلى غير المسمار غطاء أنبوب زجاجي المتاح الجديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجفيف FAME جمعها تحتالنيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع. </li></ol> 5. إزالة الكولسترول مجانا من التلوث CE FAME 14 (الكولسترول الحرة يمكن أن تلوث العينة، وانظر الشكل 1 لآثار سبيل المثال اللوني مع وبدون إزالة الكولسترول مجانا). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب في خزان النفايات SPE ووضع هلام السيليكا خرطوشة SPE على الخزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العمود مع 3 × 1 مل من الهكسان يغسل الجافة في ظل فراغ و1 × 1 مل تحت الجاذبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة النفايات ويغسل إضافة أنبوب في خزان النفايات الجديد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل FAME CE في 1 مل الجافة الهكسان، دوامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنطبق على العمود باستخدام ماصة باستير الزجاج والسماح لبالتنقيط من خلال إطار الجاذبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العمود مع 3 × 1 مل من الهكسان يغسل تحت فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة يغسل النفايات ووضع أنبوب جديد غير سقف المسمار في خزان المسمى FAME CE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أزلFAME CE مع 2 × 1 مل الهكسان الجافة: ايثر (95:5 ت / ت) يغسل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجف تحت النيتروجين عند 40 درجة مئوية. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل إلى أسبوع تحذير: ثنائي اثيل ايثر غير الخطرة. </li></ol> 6. نقل FAME إلى GC السيارات عينات فيال <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 75 ميكرولتر الهكسان الجافة لعينة، دوامة، ونقل إلى GC عينة السيارات القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 75 ميكرولتر مزيد من الهكسان الجافة لعينة، دوامة ونقل إلى GC نفس العينة السيارات القارورة. عينات يمكن توج وتخزينها في -20 درجة مئوية في هذه المرحلة لمدة تصل الى شهر. </li></ol> 7. التحليل باستخدام كروماتوغرافيا الغاز 14 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل FAME على الكروماتوجرافي الغاز. تعيين المثال الأعلى: 30 متر x 0.25 ميكرون 0.25 × مم BPX-70 تنصهر السيليكا العمود الشعري مع بروتوكول درجة الحرارة: درجة الحرارة الأولية 115 درجة مئوية، وعقد 2 دقيقة، منحدر 10 درجة مئوية / دقيقة إلى 200 درجة مئوية، وعقد 18.5 دقيقة، منحدر 60 درجة مئوية / دقيقة إلى 245 درجة مئوية، حالعمر 4 دقائق. العمود: الغاز الهليوم، ومعدل تدفق 1.0، 14.6 ضغط وسرعة 29. حاقن: درجة الحرارة = 300 ° C. كاشف: تدفق الهيدروجين 40.0، 184.0 تدفق الهواء، وتشكل الهليوم الغاز، وتدفق 45.0، ودرجة الحرارة = 300 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين نسبة الانقسام حسب الاقتضاء (على سبيل المثال 25:1 لتحليل FAME CE). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد منطقة تحت كل الذروة باستخدام البرمجيات المناسبة وتحديد المجد من خلال المقارنة مع المعايير. انظر الشكل 2 على سبيل المثال الاستشرابية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المنطقة تحت بيانات الذروة لحساب مساهمة الأحماض الدهنية الفردية كنسبة مئوية من مجموع الأحماض الدهنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واضاف حساب تركيزات المطلقة من الأحماض الدهنية من خلال تقسيم المنطقة من المعايير الداخلية من المبلغ. تقسيم مساحة كل الأحماض الدهنية من خلال هذه النتيجة للحصول على تركيزات المطلقة من كل الأحماض الدهنية داخل كمية الأنسجة المستخدمة. </li></ol>

<ol>
	<li>Browning, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+eicosapentaenoic+and+docosahexaenoic+acids+into+lipid+pools+when+given+as+supplements+providing+doses+equivalent+to+typical+intakes+of+oily+fish.">Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into lipid pools when given as supplements providing doses equivalent to typical intakes of oily fish.</a> Am. J. Clin. Nutr. 96 (4), 748-758 (2012).</li><li>Cao, J., Schwichtenberg, K. A., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+and+clearance+of+omega-3+fattyacids+in+erythrocyte+membranes+and+plasma+phospholipids.">Incorporation and clearance of omega-3 fattyacids in erythrocyte membranes and plasma phospholipids.</a> Clin. Chem. 52 (12), 2265-2272 (2006).</li><li>Lauritzen, L., Carlson, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+fatty+acid+status+during+pregnancy+andlactation+and+relation+to+newborn+and+infant+status.">Maternal fatty acid status during pregnancy andlactation and relation to newborn and infant status.</a> Matern. Child Health. 7 (2), 41-58 (2011).</li><li>Kelsall, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+dysfunction+induced+in+offspring+by+maternal+dietary+fat+involves+altered+arterial+polyunsaturated+fatty+acid+biosynthesis.">Vascular dysfunction induced in offspring by maternal dietary fat involves altered arterial polyunsaturated fatty acid biosynthesis.</a> PLoS One. 7 (4), (2012).</li><li>Karpe, F., Dickmann, J. R., Frayn, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acids,+obesity,+and+insulin+resistance:+time+for+a+re-evaluation.">Fatty acids, obesity, and insulin resistance: time for a re-evaluation.</a> Diabetes. 60 (10), 2441-2449 (2011).</li><li>Mossoba, M. M., Moss, J., Kramer, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans+fat+labelling+and+levels+in+U.S.+foods:+assessment+of+gas+chromatographic+and+infrared+spectroscopic+techniques+for+regulatory+compliance.">Trans fat labelling and levels in U.S. foods: assessment of gas chromatographic and infrared spectroscopic techniques for regulatory compliance.</a> J. AOAC Int. 92 (5), 1284-1300 (2009).</li><li>Chee, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+content+of+marine+oil+capsules.">Fatty acid content of marine oil capsules.</a> Lipids. 25 (9), 523-528 (1990).</li><li>Folch, J., Lees, M., Sloane-Stanley, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+the+isolation+and+purification+of+total+lipids+from+animal+tissues.">A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.</a> J. Biol. Chem. 226 (1), 497-509 (1957).</li><li>Burdge, G. C., Wright, P., Jones, E. A., Wootton, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+separation+of+phosphatidylcholine,+triacylglycerol,+non-esterified+fatty+acids+and+cholesterol+esters+from+plasma+by+solid-phase+extraction.">A method for separation of phosphatidylcholine, triacylglycerol, non-esterified fatty acids and cholesterol esters from plasma by solid-phase extraction.</a> Br. J. Nutr. 84 (5), 781-787 (2000).</li><li>Sepp&#228;nen-Laakso, T., Laakso, I., Hiltunen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+fatty+acids+by+gas+chromatography,+and+its+relevance+to+research+on+health+and+nutrition.">Analysis of fatty acids by gas chromatography, and its relevance to research on health and nutrition.</a> Anal. Chim. Acta. 465 (1), 39-62 (2002).</li><li>Beesley, T. E., Buglio, B., Scott, R. P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Quantitative chromatographic analysis. , (2000).</li><li>Bartle, K. D., Myers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+gas+chromatography.">History of gas chromatography.</a> Trends Anal. Chem. 21 (9), 9-10 (2002).</li><li>Childs, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The effect of gender, pregnancy and diet upon rat tissue fatty acid composition and immune function. , 378 (2008).</li><li>Harris, S. W., Pottala, J. V., Ramachandran, S. V., Larson, M. G., Robins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+erythrocyte+membrane+Trans+and+marine+fatty+acids+between+1999+and+2006+in+older+Americans.">Changes in erythrocyte membrane Trans and marine fatty acids between 1999 and 2006 in older Americans.</a> J. Nutr. 142 (7), 1297-1303 (2012).</li><li>Roberts, L. D., McCombie, G., Titman, C. M., Griffin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+matter+of+fat:+An+introduction+to+lipidomic+profiling+method.">A matter of fat: An introduction to lipidomic profiling method.</a> J. Chromatogr. B. 871 (2), 174-181 (2008).</li></ol>

الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

اللوني للغاز هو أسلوب دقيق لاستخدامها لتحليل الأحماض الدهنية، ويرى استنساخ العالية هذه التقنية مناسبة للالتحليلات السريرية. يجب استخدام الأعمدة GC المناسبة لتمكين تحديد الأحماض الدهنية من الفائدة، مع وجود اختلافات الأعمدة المتوفرة في قطبية الطور الثابت، طول العمو...

اللوني للغاز (GC) هي تقنية راسخة المستخدمة لتحديد وقياس إدماج الأحماض الدهنية في تجمعات الدهون وأغشية الخلايا 1،2 خلال مكملات أو الفسيولوجية الظروف مثل السمنة (والأمراض ذات الصلة مثل مرض السكري) أو الحمل 3 - 5. بل هو أيضا مناسبة لتحليل أنواع وكميات الدهون في الأطعمة. هذا مفيد عندما تميز العلائق، وكذلك التأكد من أن صناعة المواد الغذائية يتوافق مع اللوائح. على سبيل المثال، GC يمكن استخدامها لتأكيد هوية وكمية من الأحماض الدهنية داخل منتج مثل المكملات الغذائية لضمان وضع العلامات هو الصحيح، ويتم الالتزام اللوائح إلى 6،7. تحليل الأحماض الدهنية يمكن أن توفر معلومات قيمة حول التمثيل الغذائي للدهون في الصحة والمرض، وتأثير تغيير النظام الغذائي، وتأثير التغيرات في الحالة الفسيولوجية 8. وقد وفرت استخدام GC لدراسة عينات خلال فترة الحمل مهمةمعلومات عن التغيرات في الأحماض الدهنية والدهون المعقدة التوازن 3. في وقت مبكر من الفصل الكروماتوغرافي، وعادة ما تكون نسبة الدهون المستخرجة من العينة باستخدام ذوبان الدهون في مخاليط المذيبات من الكلوروفورم والميثانول. يتم إضافة كلوريد الصوديوم إلى تسهيل فصل الخليط في الدهون المائية والعضوية التي تحتوي مراحل 9،10. يمكن فصل الطبقات الدهنية المعقدة من الاهتمام من مجموع استخراج الدهون من خلال المرحلة الصلبة استخراج (SPE). هذه التقنية فصل elutes الطبقات الدهنية على أساس قطبية أو تقارب ملزمة. ومزال Triacyglycerols (TAG) واسترات الكوليسترول (CE) أولا ككسر مجتمعة، كذلك الطبقات، فسفاتيديل (PC)، فسفاتيديل (PE)، والأحماض الدهنية غير تجمعت (NEFA) ومزال عن طريق زيادة قطبية المذيب يبلغ حجمه . فصل TAG من CE يستغل الملزمة TAG فقط لخراط SPE جديدةDGE، مما يسمح CE أن مزال. ويمكن بعد ذلك أن TAG مزال عن طريق زيادة قطبية المذيب 9،10 يبلغ حجمه. يسمح هذا الأسلوب يتحقق عينات متعددة في وقت واحد لا يمكن فصلها مع تحقيق عائد أعلى من مع طبقة رقيقة اللوني، مما يعني أن عينات صغيرة نسبيا الحجم (على سبيل المثال &lt;البلازما أو مصل 100 ميكرولتر، &lt;100 ملغ الأنسجة) يمكن تحليلها 11،12. GC هي تقنية راسخة وصف لأول مرة في 1950s؛ اقترح أن الطور المتحرك في النظم ثم السائل السائل يمكن الاستعاضة مع بخار. انه كان يستخدم في البداية لتحليل البترول ولكن توسعت بسرعة في مجالات أخرى مثل تحليل الأحماض الأمينية والدهون الكيمياء الحيوية، والتي لا تزال ذات أهمية كبرى. وقد أدى التقدم في المعدات والتكنولوجيا GC مثل وضع الأعمدة الشعرية من الأعمدة معبأة المستخدمة سابقا إلى التقنيات الحالية لدينا في الأحماض الدهنية التي هي قادرة على أن تكونفصل أكثر كفاءة في درجات حرارة أقل مما أدى إلى GC تستخدم بشكل روتيني لتحديد وقياس الأحماض الدهنية في مجموعة واسعة من التحقيقات 13. يتطلب GC الأحماض الدهنية أن derivatized من اجل ان يتمكنوا قد تصبح متقلبة بما فيه الكفاية ليكون مزال في درجات حرارة معقولة دون التحلل الحراري. هذا وعادة ما ينطوي على الاستعاضة عن مجموعة وظيفية تحتوي على الهيدروجين لتكوين استرات، thioesters أو الأميدات للتحليل. ودرس استرات الميثيل عادة المشتقات التي يتم إنتاجها من قبل مثيلة. في هذا الأسلوب يتم تحلل السندات استر في الدهون المعقدة للافراج عن الأحماض الدهنية الحرة، والتي transmethylated لتشكيل استرات الأحماض الدهنية الميثيل (FAME). الملف الشخصى الناتجة من FAME، والتي تحددها القيادة العامة، ويشار إليها باسم تكوين الأحماض الدهنية، ويمكن بسهولة مقارنة بين المجموعات التجريبية المختلفة 9،10. يسمح للتقنية كل من نسب individالأحماض الدهنية السياقية وتركيزاتها المراد قياسها. بالإضافة إلى استخدام GC لتحليل الأحماض الدهنية في دراسات التغذية وداخل صناعة الأغذية، وتقنية يمكن استخدامها عبر مجموعة واسعة من المجالات التحليلية. على سبيل المثال، التحليلات البيئية باستخدام GC تشمل قياس تلوث المياه من خلال المبيدات الحشرية والتربة تحاليل قياس محتوى كلوروبنزين. في علم السموم، كما تم استخدام GC لتحديد المواد غير المشروعة في البول وعينات الدم من الأفراد؛ مثل هذه القدرة على الأداء الرياضي 12 والقدرة على فصل مخاليط معقد من الهيدروكربونات يجعل هذه التقنية شعبية في الصناعة النفطية لتحليل البتروكيماويات 12. ويرتبط الحمل مع تغييرات كبيرة في تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة الأمهات، وتحديدا في محتوى أوميغا 3 (ن 3) وأوميغا 6 (ن 6) غير المشبعة المجلس الدولي للمطارات الدهنيةس (بوفا) 3. في الدراسة الحالية، ونحن مثالا على استخدام GC في قياس الأحماض الدهنية من خلال وصف استخدامه في تحليل تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة المأخوذة من الكبد الفئران الحوامل البكر وتغذية حمية منخفضة الدهون وعالية مع مصادر النفط المختلفة. كانت العلائق المقدمة هنا على النفط على أساس نظام غذائي منخفض الدهون فول الصويا، اتباع نظام غذائي عالي الدهون التي تعتمد على النفط فول الصويا (130.9 ز الدهون / كجم من الدهون الكل) أو اتباع نظام غذائي تعتمد على النفط بذر الكتان غنية بالدهون (130.9 ز الدهون / كجم النظام الغذائي)، شريطة لمدة 20 يوما. وقد وصفت والمواد الغذائية كاملة وتكوين الأحماض الدهنية من هذه الوجبات سابقا 14. الوجبات الغذائية زيت فول الصويا غنية في حمض اللينوليك (18:02 ن 6) وتحتوي على بعض حمض اللينولينيك α (18:03 ن 3) في حين أن اتباع نظام غذائي زيت بذر الكتان غنية في حمض اللينولينيك-α. تمثل هذه الوجبات الغنية بالدهون حصص مختلفة من اللينوليك إلى α لينولينيك والأحماض (حصص من 8:1 و 1:1 على التوالي). طريقة لعزل الطبقات الدهنية الفردية وتحليلها بواسطة GC هو أنناليرة لبنانية أنشئت والتحقق من صحتها، وقد نشرت سابقا 10 ولكن من دون صفا تقنيا مفصلا وجدت في هذه الوثيقة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Methanol:</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M/4056/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform:</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/4966/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHT:</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>W218405</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Dust fumes - Anhydrous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Anhydrous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H/0406/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>695084</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Burns - 99.85%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric acid</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>339741</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Burns - 99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>209619</td>
			<td>99% ACS Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium bicarbonate</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>237205</td>
			<td>99.7% ACS Reasgent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10204340</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - 99+% GLC SpeciFied</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>T/2300/15</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>309966</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen (oxygen free) cylinder</td>
			<td>BOC</td>
			<td>44-w</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Compressed gas - explosion risk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aminopropyl silica SPE cartridges</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>12102014</td>
			<td>Cartridge - Bead mass 100mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel SPE cartidges</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>14102010</td>
			<td>Cartridge - Bead mass 100mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular seives</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>334324</td>
			<td>Pellets, AW-300, 1.6mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB50251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass test tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB59527</td>
			<td>Non-screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw thread glass test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB59555</td>
			<td>13mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caps for screw thread test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB51353</td>
			<td>To fit 13mm tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solida phase extraction (SPE) tank</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>VacElut 20 Manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer stopcocks for SPE tank</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>12131005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>2656-194GB-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC vials</td>
			<td>Kinesis</td>
			<td>STV 12-03TS</td>
			<td>Short thread 9mm, TPX 0.2ml fused glass insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC vial lids</td>
			<td>Kinesis</td>
			<td>SCC09-0.2B</td>
			<td>Short thread 9mm blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC inlet liners</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>092002</td>
			<td>Split/splitless Focus liner ID 4mm, OD 6.3mm length 78.5mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC septa</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>041856</td>
			<td>11mm, MN material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC column</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>054612</td>
			<td>Length 30m, ID 0.22mm, Film thickness 0.25&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HP 6890 series</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of gas chromatography to analyze compositional changes of fatty acids in rat liver tissue during pregnancy

اللوني للغاز (GC) هو وسيلة حساسة للغاية يستخدم لتحديد وقياس محتوى الأحماض الدهنية من الدهون من الأنسجة، والخلايا، والبلازما / مصل، مما أسفر عن النتائج بدقة عالية واستنساخ عالية. في دراسات التمثيل الغذائي والتغذية يسمح GC تقييم التغيرات في تركيزات الأحماض الدهنية التالية تدخلات أو خلال التغيرات في الحالة الفسيولوجية مثل الحمل. المرحلة الصلبة استخراج (SPE) باستخدام خراطيش أمينو السيليكا يسمح الفصل بين الطبقات الدهنية الرئيسية بما في ذلك زعت عشوائيا إلى ثلاثة، الدهون الفوسفاتية المختلفة، واسترات الكوليسترول (CE). تم استخدام GC جنبا إلى جنب مع جمعية مهندسي البترول لتحليل التغيرات في تكوين الأحماض الدهنية من جزء CE في كبد الفئران الحوامل البكر والتي تم تغذيتها مختلف الوجبات الغذائية العالية والمنخفضة الدهون. هناك آثار التفاعل حمية / الحمل كبير على محتوى حمض أوميغا 3 و أوميغا 6 الدهنية من الكبد CE، مشيرا إلى أن الإناث الحوامل لديهم استجابة مختلفة لmanipulat الغذائيةوينظر أيون من بين الإناث البكر.

نجاح هذه الطريقة يعتمد على بعد بروتوكول بالضبط وعلى استخدام المذيبات والكواشف نظيفة من أجل الحد من &#39;الضوضاء&#39; والتلوث التي يمكن أن تظهر على اللوني. العينات الملوثة هي أكثر صعوبة لتحليل، وتخفيض دقة المساحة تحت منحنى العمليات الحسابية. إذا تم اتباع البروتوكول بنجا?...

Watch this Scientific Journal Video about The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy at JoVE.com

The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

الحمل يؤدي إلى تغييرات كبيرة في تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة الأمهات. ويمكن الحصول على ملامح من المادة الدهنية عبر اللوني للغاز للسماح تحديد وتقدير الأحماض الدهنية في الطبقات الدهنية الفردية بين الفئران التي تغذت مختلف الوجبات الغذائية عالية الدهون ومنخفضة خلال فترة الحمل.

استعمال اللوني للغاز لتحليل التغييرات التركيبية من الأحماض الدهنية في الفئران الكبد الأنسجة أثناء الحمل

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

the-use-gas-chromatography-to-analyze-compositional-changes-fatty

Research

JoVE Journal

Chemistry

29.9K Views.  University of Southampton.  الحمل يؤدي إلى تغييرات كبيرة في تكوين الأحماض الدهنية من الأنسجة الأمهات. ويمكن الحصول على ملامح من المادة الدهنية عبر اللوني للغاز للسماح تحديد وتقدير الأحماض الدهنية في الطبقات الدهنية الفردية بين الفئران التي تغذت مختلف الوجبات الغذا?...

Video: The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue located at or near the N-terminus of a helix is often more acidic than that at or near the C-terminus 1-6. Although extensive experimental studies on the acid-base properties of peptides have been carried out in the condensed phase, in particular in aqueous solutions 6-8, the results are often complicated by solvent effects 7. In fact, most of the active sites in proteins are located near the interior region where solvent effects have been minimized 9,10. In order to understand intrinsic acid-base properties of peptides and proteins, it is important to perform the studies in a solvent-free environment.
We present a method to measure the acidities of oligopeptides in the gas-phase. We use a cysteine-containing oligopeptide, Ala3CysNH2 (A3CH), as the model compound. The measurements are based on the well-established extended Cooks kinetic method (Figure 1) 11-16. The experiments are carried out using a triple-quadrupole mass spectrometer interfaced with an electrospray ionization (ESI) ion source (Figure 2). For each peptide sample, several reference acids are selected. The reference acids are structurally similar organic compounds with known gas-phase acidities. A solution of the mixture of the peptide and a reference acid is introduced into the mass spectrometer, and a gas-phase proton-bound anionic cluster of peptide-reference acid is formed. The proton-bound cluster is mass isolated and subsequently fragmented via collision-induced dissociation (CID) experiments. The resulting fragment ion abundances are analyzed using a relationship between the acidities and the cluster ion dissociation kinetics. The gas-phase acidity of the peptide is then obtained by linear regression of the thermo-kinetic plots 17,18.
The method can be applied to a variety of molecular systems, including organic compounds, amino acids and their derivatives, oligonucleotides, and oligopeptides. By comparing the gas-phase acidities measured experimentally with those values calculated for different conformers, conformational effects on the acidities can be evaluated.

The determination of the gas-phase acidities of cysteine-containing oligopeptides is described. The experiments are performed using a triple quadrupole mass spectrometer. The relative acidities of the peptides are measured using collision-induced dissociation experiments, and the quantitative acidities are determined using the extended Cooks kinetic method.

تحديد الحموضة في مرحلة غاز من Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Isolation and Preparation of Bacterial Cell Walls for Compositional Analysis by Ultra Performance Liquid Chromatography

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the face of turgor pressures several atmospheres in magnitude. Across the diverse shapes and sizes of the bacterial kingdom, the cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by short peptides. Peptidoglycan&#8217;s central importance to bacterial physiology underlies its use as an antibiotic target and has motivated genetic, structural, and cell biological studies of how it is robustly assembled during growth and division. Nonetheless, extensive investigations are still required to fully characterize the key enzymatic activities in peptidoglycan synthesis and the chemical composition of bacterial cell walls. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is a powerful analytical method for quantifying differences in the chemical composition of the walls of bacteria grown under a variety of environmental and genetic conditions, but its throughput is often limited. Here, we present a straightforward procedure for the isolation and preparation of bacterial cell walls for biological analyses of peptidoglycan via HPLC and Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC), an extension of HPLC that utilizes pumps to deliver ultra-high pressures of up to 15,000 psi, compared with 6,000 psi for HPLC. In combination with the preparation of bacterial cell walls presented here, the low-volume sample injectors, detectors with high sampling rates, smaller sample volumes, and shorter run times of UPLC will enable high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition and fundamental bacterial cell biology in most biological laboratories with access to an ultracentrifuge and UPLC.

The bacterial cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by peptides. Ultra Performance Liquid Chromatography provides high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition. We present a procedure for the isolation of cell walls (sacculi) and their subsequent preparation for analysis via UPLC.

عزل وإعداد جدران الخلايا البكتيرية للتحليل التركيبي بواسطة الترا الأداء الكروماتوغرافيا السائلة

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the ...

Quantitative Detection of Trace Explosive Vapors by Programmed Temperature Desorption Gas Chromatography-Electron Capture Detector

The direct liquid deposition of solution standards onto sorbent-filled thermal desorption tubes is used for the quantitative analysis of trace explosive vapor samples. The direct liquid deposition method yields a higher fidelity between the analysis of vapor samples and the analysis of solution standards than using separate injection methods for vapors and solutions, i.e., samples collected on vapor collection tubes and standards prepared in solution vials. Additionally, the method can account for instrumentation losses, which makes it ideal for minimizing variability and quantitative trace chemical detection. Gas chromatography with an electron capture detector is an instrumentation configuration sensitive to nitro-energetics, such as TNT and RDX, due to their relatively high electron affinity. However, vapor quantitation of these compounds is difficult without viable vapor standards. Thus, we eliminate the requirement for vapor standards by combining the sensitivity of the instrumentation with a direct liquid deposition protocol to analyze trace explosive vapor samples.

Trace explosive vapors of TNT and RDX collected on sorbent-filled thermal desorption tubes were analyzed using a programmed temperature desorption system coupled to GC with an electron capture detector. The instrumental analysis is combined with direct liquid deposition method to reduce sample variability and account for instrumentation drift and losses.

الكشف عن كمية من المتفجرات عن طريق تتبع الأبخرة درجة الحرارة المبرمجة الامتزاز الغاز اللوني-الكترون التقاط الكاشف

The direct liquid deposition of solution standards onto sorbent-filled thermal desorption tubes is used for the quantitative analysis of trace explosive ...

Use of Stopped-Flow Fluorescence and Labeled Nucleotides to Analyze the ATP Turnover Cycle of Kinesins

The kinesin superfamily of microtubule associated motor proteins share a characteristic motor domain which both hydrolyses ATP and binds microtubules. Kinesins display differences across the superfamily both in ATP turnover and in microtubule interaction. These differences tailor specific kinesins to various functions such as cargo transport, microtubule sliding, microtubule depolymerization and microtubule stabilization. To understand the mechanism of action of a kinesin it is important to understand how the chemical cycle of ATP turnover is coupled to the mechanical cycle of microtubule interaction. To dissect the ATP turnover cycle, one approach is to utilize fluorescently labeled nucleotides to visualize individual steps in the cycle. Determining the kinetics of each nucleotide transition in the ATP turnover cycle allows the rate-limiting step or steps for the complete cycle to be identified. For a kinesin, it is important to know the rate-limiting step, in the absence of microtubules, as this step is generally accelerated several thousand fold when the kinesin interacts with microtubules. The cycle in the absence of microtubules is then compared to that in the presence of microtubules to fully understand a kinesin&#8217;s ATP turnover cycle. The kinetics of individual nucleotide transitions are generally too fast to observe by manually mixing reactants, particularly in the presence of microtubules. A rapid mixing device, such as a stopped-flow fluorimeter, which allows kinetics to be observed on timescales of as little as a few milliseconds, can be used to monitor such transitions. Here, we describe protocols in which rapid mixing of reagents by stopped-flow is used in conjunction with fluorescently labeled nucleotides to dissect the ATP turnover cycle of a kinesin.

Kinesins are characterized by nucleotide-dependent interaction with microtubules: a cycle of ATP turnover coupled to a cycle of microtubule interaction. Here, we describe protocols to analyze the kinetics of individual nucleotide transitions in the ATP turnover cycle of a kinesin using fluorescently labeled nucleotides and stopped-flow fluorescence.

استخدام توقف تدفق الإسفار وإعتبر النيوكليوتيدات لتحليل دورة دوران اعبي التنس المحترفين من Kinesins

The kinesin superfamily of microtubule associated motor proteins share a characteristic motor domain which both hydrolyses ATP and binds microtubules. ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular identity and function. Each of the seven PtdInsPs varies in their distribution and abundance, which are tightly regulated by specific kinases and phosphatases. The abundance of PtdInsPs can change abruptly in response to various signaling events or disturbance of the regulatory machinery. To understand how these events lead to changes in the amount of PtdInsPs and their resulting impact, it is important to quantify PtdInsP levels before and after a signaling event or between control and abnormal conditions. However, due to their low abundance and similarity, quantifying the relative amounts of each PtdInsP can be challenging. This article describes a method for quantifying PtdInsP levels by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, which is incorporated into PtdInsPs. Phospholipids are then precipitated and deacylated. The resulting soluble 3H-glycero-inositides are further extracted, separated by high-performance liquid chromatography (HPLC), and detected by flow scintillation. The labeling and processing of yeast samples is described in detail, as well as the instrumental setup for the HPLC and flow scintillator. Despite losing structural information regarding acyl chain content, this method is sensitive and can be optimized to concurrently quantify all seven PtdInsPs in cells.

Phosphoinositides are signaling lipids whose relative abundance rapidly changes in response to various stimuli. This article describes a method to measure the abundance of phosphoinositides by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, followed by extraction and deacylation. Extracted glycero-inositides are then separated by high-performance liquid chromatography and quantified by flow scintillation.

Radiolabeling والكمي لمستويات الخلايا من Phosphoinositides التي كتبها التلألؤ تدفق عالية الأداء اللوني السائل الديناميكي

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Facile Preparation of 4-Substituted Quinazoline Derivatives

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted 2-aminobenzophenones and thiourea in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO). This is a unique complementary reaction system in which thiourea undergoes thermal decomposition to form carbodiimide and hydrogen sulfide, where the former reacts with 2-aminobenzophenone to form 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate, whilst hydrogen sulfide reacts with DMSO to give methanethiol or other sulfur-containing molecule which then functions as a complementary reducing agent to reduce 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate into 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine. Subsequently, the elimination of ammonia from 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine affords substituted quinazoline derivative. This reaction usually gives quinazoline derivative as a single product arising from 2-aminobenzophenone as monitored by GC/MS analysis, along with small amount of sulfur-containing molecules such as dimethyl disulfide, dimethyl trisulfide, etc. The reaction usually completes in 4-6 hr at 160 &#186;C in small scale but may last over 24 hr when carried out in large scale. The reaction product can be easily purified by means of washing off DMSO with water followed by column chromatography or thin layer chromatography.

A protocol for facile preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from 2-aminobenzophenones, thiourea and dimethyl sulfoxide is presented.

إعداد سطحي المشتقات كينازولين 4 تبديل،

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic acids containing three to six carbons), such as malate and citrate, are critical to the proper functioning of many biological systems, where they function in cellular respiration and can serve as indicators of cell health. In foods, organic acid content can have significant impact on taste, with increased SCCA levels resulting in a sour or &#34;acid&#34; taste. Because of this, methods for the rapid analysis of organic acid levels are of particular interest to the food and beverage industries. Unfortunately, however, most methods used for SCCA quantification are dependent on time-consuming protocols requiring the derivatization of samples with hazardous reagents, followed by costly chromatographic and/or mass spectrometric analyses. This method details an alternate method for the detection and quantification of organic acids from plant material and food samples using free zonal capillary electrophoresis (CZE), sometimes simply referred to as capillary electrophoresis (CE). CZE provides a cost-effective method for measuring SCCAs with a low limit of detection (0.005 mg/ml). This article details the extraction and quantification of SCCAs from plant samples. While the method provided focuses on measurement of SCCAs from coffee beans, the method provided can be applied to multiple plant-based food materials.

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

This article presents a method for the detection and quantification of organic acids from plant material using free zonal capillary electrophoresis. An example of the potential application of this method, determining the effects of a secondary fermentation on organic acid levels in coffee seeds, is provided.

باستخدام شعري الكهربائي لقياس الأحماض العضوية من الأنسجة النباتية: حالة اختبار فحص<em&gt; كافيا ارابيكا</em&gt; بذور

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Raman and IR Spectroelectrochemical Methods as Tools to Analyze Conjugated Organic Compounds

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule on the vibrational level of energy. Raman and IR spectroelectrochemistry can be used for advanced characterization of the structural changes in the organic electroactive compounds. Here, the step-by-step analysis by means of Raman and IR spectroelectrochemistry is shown. Raman and IR spectroelectrochemical techniques provide complementary information about structural changes occurring during an electrochemical process, i.e. allows for the investigation of redox processes and their products. The examples of IR and Raman spectroelectrochemical analysis are presented, in which the products of the redox reactions, both in solution and solid state, are identified.

A protocol of step-by-step Raman and IR spectroelectrochemical analysis is presented.

رامان وأساليب سبيكترويليكتروكهيميكال الأشعة تحت الحمراء كأدوات لتحليل المركبات العضوية مترافق

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. In this method for two-step pyrolysis online coupled to gas chromatography mass spectrometry (py-GC-MS) volatile compounds are analyzed during a first desorption run. In the second run, the same dried sample is pyrolyzed for analysis of non-volatile compounds such as pigments and polymers. These can be identified by their specific decomposition patterns. Additionally, this method can be used to differentiate original from counterfeit inks. Easy screening methods for data evaluation using the average mass spectra and self-made pyrolysis libraries are applied to speed up substance identification. Using specialized evaluation software for pyrolysis GS-MS data, a fast and reliable comparison of the full chromatogram can be achieved. Since GC-MS is used as separation technique, the method is limited to volatile substances upon desorption and after pyrolysis of the sample. The method can be applied for quick substance screening in market control surveys since it requires no sample preparation steps.

This method for two-step pyrolysis online coupled to gas chromatography with mass spectrometric detection and data evaluation protocol can be used for multi-component analysis of tattoo inks and discrimination of counterfeit products.

طريقه التحلل اللوني للغاز بخطوتين مع الكشف الطيفي الشامل لتحديد مكونات حبر الوشم والمنتجات المزيفة

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Nitrogen Compound Characterization in Fuels by Multidimensional Gas Chromatography

Certain nitrogen-containing compounds can contribute to fuel instability during storage. Hence, detection and characterization of these compounds is crucial. There are significant challenges to overcome when measuring trace compounds in a complex matrix such as fuels. Background interferences and matrix effects can create limitations to routine analytical instrumentation, such as GC-MS. In order to facilitate specific and quantitative measurements of trace nitrogen compounds in fuels, a nitrogen-specific detector is ideal. In this method, a nitrogen chemiluminescence detector (NCD) is used to detect nitrogen compounds in fuels. NCD utilizes a nitrogen-specific reaction that does not involve the hydrocarbon background. Two-dimensional (GCxGC) gas chromatography is a powerful characterization technique as it provides superior separation capabilities to one-dimensional gas chromatography methods. When GCxGC is paired with a NCD, the problematic nitrogen compounds found in fuels can be extensively characterized without background interference. The method presented in this manuscript details the process for measuring different nitrogen-containing compound classes in fuels with little sample preparation. Overall, this GCxGC-NCD method has been shown to be a valuable tool to enhance the understanding of the chemical composition of nitrogen-containing compounds in fuels and their impact on fuel stability. The % RSD for this method is &#60;5% for intraday and &#60;10% for interday analyses; the LOD is 1.7 ppm and the LOQ is 5.5 ppm.

Here, we present a method utilizing two-dimensional gas chromatography and nitrogen chemiluminescence detection (GCxGC-NCD) to extensively characterize the different classes of nitrogen-containing compounds in diesel and jet fuels.

توصيف مركب النيتروجين في الوقود بواسطة كروماتوغرافيا الغاز متعددة الأبعاد

Certain nitrogen-containing compounds can contribute to fuel instability during storage. Hence, detection and characterization of these compounds is ...