This research was supported by the Australian Research Council through the ARC Centre of Excellence in Vision Science (CE0561903), the National Health and Medical Research Council (1049990), and Progetto regionale speciale multiasse 'Reti per l'Alta Formazione' - PO FSE Abruzzo 2007-2013 - Azione 4.II.iii.

כל הניסויים שנערכו היו בהתאם להצהרת ארוו לשימוש בבעלי חיים ברפואת עיניים וחזון מחקר, ובאישור של אוניברסיטת ועדת בעלי החיים Aquila L&#39;אתיקה והוועדה הניסויים בבעלי החיים באוניברסיטה הלאומית של אוסטרליה האתיקה. חולדות מבוגרות (P100-200) שמשו במהלך מחקר זה. .1 מכינים את פלטות שרף קופולימר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח 20 כדורי Elvax 40W לתוך כוס זכוכית קטנה בארון קטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את הכוס עם 100% אתנול להבטיח לכסות את כל כדורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כסה את הכוס עם Parafilm, ולספוג את כדורים ב100% אתנול בטמפרטורת חדר למשך 7-10 ימים. הערה: משלב זה ואילך, לא משתמש במתכת או פלסטיק כדי לטפל או לאחסן את השרף. </li></ol> 2 הכן את פתרון הסמים לטעינה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את תרופת בחירה ב0.1% sulfoxide דימתיל (DMSO). הפוך את פתרון הסמים עד 40 μl בנפח.טען את השרף עם שלוש פעמים את הריכוז של התרופה שתינתן במנה אחת. </li></ol> .3 להכין וטען את קומפלקס סמים שרף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את 20 כדורים שטפו למשנהו כוס זכוכית קטנה. ממיסים את כדורים בdichloromethane 4 מ&quot;ל ל45 כ דקות. כסה את הכוס עם Parafilm בעוד כדורים הולכים ומתפוגגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון של גרין המהיר FCF על ידי המסתו בDMSO 0.1% לריכוז של 0.001 מ&quot;ג / מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח פיפטה אחד, ולהכין 40 μl של פתרון התרופה שהוכן קודם לכן. לטעון פיפטה אחרת עם 40 μl של פתרון ירוק מהיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת שני הפתרונות בו זמנית לתוך הכוס. מיקס במהירות באמצעות זכוכית ערבוב מוט עד הצבע הירוק מפוזר באופן אחיד לאורך כל התערובת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד להעביר את הכוס על קרח יבש ל10 דקות לצום להקפיא את השרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרה &quot;תא אידוי&quot; להתאדות הממס. מלאמיכל עד גדול יותר לשליש עם חלוקי נחל סידן גופרתי. צור גם בחלוקי הנחל, ולמקם בזהירות את הכוס בכל כך טוב שהחלוקים להגיע עד למחצית הכוס, כדי לייצב את הכוס בחדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כסה את המכל מחוץ גדול יותר עם Parafilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את תא האידוי למקפיא. שמור ב-20 מעלות צלזיוס למשך 2-3 שבועות. </li></ol> .4 הכן את קומפלקס סמים שרף להשרשת כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תא האידוי מהמקפיא. מעבירים את גוש סמים שרף המוצק לצלחת זכוכית כל הזמן על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מיקרוסקופ או זכוכית מגדלת, לחתוך חתיכה כ 0.05 מ&quot;מ קוטר ו0.1 מ&quot;מ אורך מהגוש באמצעות כלי מקדחה או אגרוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף את שארית הבלוק בחומר הקפאת הוכחה (למשל, נייר אלומיניום) ולשמור ב-20 ° C עד נדרש. </li></ol> .5 כירורגי של השתל מורכב סמים שרף לתוך העיניים של העכברוש </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את החיה לניתוח. הרדימי באמצעות זריקת intraperitoneal של תערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף) ו xylazine (מ&quot;ג 12 / קילוגרם משקל גוף). שים לב לבעלי החיים עד שהרדמה מלאה מושגת. הערה: בעלי החיים צריכים להיות אובדן של תנועות (פרט לנשימה), ואובדן הרפלקסים קמצוץ של קרנית ואת הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החיה בהרדמה המלאה לשולחן הניתוחים. mydriaticum השימוש (לדוגמא, סולפט אטרופין), והרדמה מקומית (לדוגמא, hydrochloride tetracaine) יורדים על העין (ים) שעברה ניתוח. החל דמעות מלאכותיות כדי לשמור על הקרנית לחה במהלך ניתוח. משתמש במחטים חד פעמיות וכלים סטריליים לאורך כל הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצב את העין בעזרת זוג מלקחיים מעוקלים בוטים אחרי שהתלמיד הוא פתיחה מלאה. השתמש במיקרוסקופ כדי להפוך את פצע עומק מלא כדי להגיע לכ -2 מ&quot;מ זגוגי, מימבוס באמצעות מחט 25 G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את פיסת t מוכנההוא מורכב סמים שרף לתוך הפצע בעזרת זוג מלקחיים בסדר, מחודדים (לדוגמא, פינצטה) כי הם מסוגלים לחדור לאתר לנקב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כטיפול מונע לזיהום חיידקים, חל משחה אנטיביוטית לעין, כדי למנוע דלקת, כמו גם מניעת יובש בקרנית בעוד החיה מתאוששת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לבעלי החיים עד להחלמה מלאה. אל תשאיר את בעל החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה. אל תחזרו בעלי החיים לחברתם של בעלי חיים אחרים, עד שהתאוששו באופן מלא. אם בעל החיים מראה סימנים של מתח או אי נוחות, יש להשתמש במשככי כאבים על פי הפרוטוקול שאושר על האתיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הליכי ניסוי הרגילים לאיסוף וניתוח של הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיום ניסויים, להרדימו עם זריקת intraperitoneal של pentobarbital (60 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף) 2% פתרון hydrochloride לידוקאין. </li></ol> הערה: Lignocaine הידרוכלוריד דקותimizes אי נוחות מקומית.

<ol>
	<li>Access Economics, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+economic+cost+of+visual+impairment.">The global economic cost of visual impairment.</a> AMD Alliance International. , 26-27 (2010).</li><li>Jager, R., Aiello, L., Patel, S., Cunningham, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+of+intravitreous+injection:+A+comprehensive+review.">Risks of intravitreous injection: A comprehensive review.</a> Retina. 24 (5), 676-698 (2004).</li><li>Rosenfeld, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ranibizumab+for+neovascular+age-related+macular+degeneration.">Ranibizumab for neovascular age-related macular degeneration.</a> New England Journal of Medicine. 355 (14), 1419-1431 (2006).</li><li>Cunningham, M. A., Edelman, J. L., Kaushal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+steroids+for+macular+edema:+The+past,+the+present,+and+the+future.">Intravitreal steroids for macular edema: The past, the present, and the future.</a> Survey of Ophthalmology. 53 (2), 139-149 (2008).</li><li>Folkman, J., Long, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+silicone+rubber+as+a+carrier+for+prolonged+drug+therapy.">The use of silicone rubber as a carrier for prolonged drug therapy.</a> Journal of Surgical Research. 4 (3), 139-142 (1964).</li><li>Herrero-Vanrell, R., Refojo, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+microspheres+for+vitreoretinal+drug+delivery.">Biodegradable microspheres for vitreoretinal drug delivery.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 52 (1), 5-16 (2001).</li><li>Kim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+scleral+diffusion+of+anticancer+drugs+from+solution+and+nanoparticle+formulation.">Human scleral diffusion of anticancer drugs from solution and nanoparticle formulation.</a> Pharmaceutical Research. 26 (5), 1155-1161 (2009).</li><li>Bochot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+delivery+of+oligonucleotides+by+sterically+stabilized+liposomes.">Intravitreal delivery of oligonucleotides by sterically stabilized liposomes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (1), 253-259 (2002).</li><li>Bochot, A., Fattal, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+for+intravitreal+drug+delivery:+A+state+of+the+art.">Liposomes for intravitreal drug delivery: A state of the art.</a> Journal of Controlled Release. 161 (2), 628-634 (2012).</li><li>Okabe, K., Kimura, H., Okabe, J., Kato, A., Kunou, N., Ogura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraocular+tissue+distribution+of+betamethasone+after+intrascleral+administration+using+a+non-biodegradable+sustained+drug+delivery+device.">Intraocular tissue distribution of betamethasone after intrascleral administration using a non-biodegradable sustained drug delivery device.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 44 (6), 2702-2707 (2003).</li><li>Langer, R., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymers+for+the+sustained+release+of+proteins+and+other+macromolecules.">Polymers for the sustained release of proteins and other macromolecules.</a> Nature. 263 (5580), 797-800 (1976).</li><li>Silberstein, G. B., Daniel, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elvax+40P+implants:+Sustained,+local+release+of+bioactive+molecules+influencing+mammary+ductal+development.">Elvax 40P implants: Sustained, local release of bioactive molecules influencing mammary ductal development.</a> Developmental Biology. 93 (1), 272-278 (1982).</li><li>Smith, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+role+of+auditory+cortex+in+sound+localization+using+muscimol-releasing+Elvax.">An investigation of the role of auditory cortex in sound localization using muscimol-releasing Elvax.</a> European Journal of Neuroscience. 19 (11), 3059-3072 (2004).</li><li>Anomal, R., De Villers-Sidani, E., Merzenich, M. M., Panizzutti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+BDNF+signaling+modifies+the+experience-dependent+plasticity+induced+by+pure+tone+exposure+during+the+critical+period+in+the+primary+auditory+cortex.">Manipulation of BDNF signaling modifies the experience-dependent plasticity induced by pure tone exposure during the critical period in the primary auditory cortex.</a> PloS one. 8 (5), e64208 (2013).</li><li>Tu, S., Butt, C. M., Pauly, J. R., Debski, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+regulation+of+substance+P+expression+and+topographic+map+maintenance+by+a+cholinergic+pathway.">Activity-dependent regulation of substance P expression and topographic map maintenance by a cholinergic pathway.</a> The Journal of Neuroscience. 20 (14), 5346-5357 (2000).</li><li>Sernagor, E., Grzywacz, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+spontaneous+activity+and+visual+experience+on+developing+retinal+receptive+fields.">Influence of spontaneous activity and visual experience on developing retinal receptive fields.</a> Current Biology. 6 (11), 1503-1508 (1996).</li><li>Leitch, E., Coaker, J., Young, C., Mehta, V., Sernagor, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+type-A+activity+controls+its+own+developmental+polarity+switch+in+the+maturing+retina.">GABA type-A activity controls its own developmental polarity switch in the maturing retina.</a> The Journal of Neuroscience. 25 (19), 4801-4805 (2005).</li><li>Park, C. M., Hollenberg, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+induces+retinal+regeneration+in+vivo.">Basic fibroblast growth factor induces retinal regeneration in vivo.</a> Developmental Biology. 134 (1), 201-205 (1989).</li><li>Whitsel, A. I., Johnson, C. B., Forehand, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+ovo+chicken+model+to+study+the+systemic+and+localized+teratogenic+effects+of+valproic+acid.">An in ovo chicken model to study the systemic and localized teratogenic effects of valproic acid.</a> Teratology. 66 (4), 153-163 (2002).</li><li>Prusky, G. T., Ramoa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+method+of+chronically+blocking+retinal+activity.">Novel method of chronically blocking retinal activity.</a> Journal of Neuroscience Methods. 87 (1), 105-110 (1999).</li><li>Colonnese, M. T., Constantine-Paton, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+NMDA+receptor+blockade+from+birth+increases+the+sprouting+capacity+of+ipsilateral+retinocollicular+axons+without+disrupting+their+early+segregation.">Chronic NMDA receptor blockade from birth increases the sprouting capacity of ipsilateral retinocollicular axons without disrupting their early segregation.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (5), 1557-1568 (2001).</li><li>Oliveira-Silva, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase-9+is+involved+in+the+development+and+plasticity+of+retinotectal+projections+in+rats.">Matrix metalloproteinase-9 is involved in the development and plasticity of retinotectal projections in rats.</a> Neuroimmunomodulation. 14 (3-4), 144-149 (2007).</li><li>Trindade, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+role+of+calcineurin+in+the+development+of+retinocollicular+fine+topography.">Evidence for a role of calcineurin in the development of retinocollicular fine topography.</a> Neuroscience Letters. 487 (1), 47-52 (2011).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-year+intraocular+delivery+of+ciliary+neurotrophic+factor+by+encapsulated+cell+technology+implants+in+patients+with+chronic+retinal+degenerative+diseases.">Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).</li><li>Birch, D. G., Weleber, R. G., Duncan, J. L., Jaffe, G. J., Tao, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+of+ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+retinitis+pigmentosa.">Randomized of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).</li><li>Rauck, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+reverse+thermal+gel+sustains+the+release+of+intravitreal+bevacizumab+in+vivo.">Biocompatible reverse thermal gel sustains the release of intravitreal bevacizumab in vivo.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (1), 469-476 (2014).</li><li>Liu, Y. C., Peng, Y., Lwin, N. C., Venkatraman, S. S., Wong, T. T., Mehta, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biodegradable,+sustained-released,+prednisolone+acetate+microfilm+drug+delivery+system+effectively+prolongs+corneal+allograft+survival+in+the+rat+keratoplasty+model.">A biodegradable, sustained-released, prednisolone acetate microfilm drug delivery system effectively prolongs corneal allograft survival in the rat keratoplasty model.</a> PloS one. 8 (8), e70419 (2013).</li><li>Slaughter, M. M., Miller, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2-amino-4-phosphonobutyric+acid:+a+new+pharmacological+tool+for+retina+research.">2-amino-4-phosphonobutyric acid: a new pharmacological tool for retina research.</a> Science. 211 (4478), 182-185 (1981).</li><li>Bodnarenko, S., Jeyarasasingam, G., Chalupa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+regulation+of+dendritic+stratification+in+retinal+ganglion+cells+by+glutamate-mediated+afferent+activity.">Development and regulation of dendritic stratification in retinal ganglion cells by glutamate-mediated afferent activity.</a> The Journal of Neuroscience. 15 (11), 7037-7045 (1995).</li><li>Deplano, S., Gargini, C., Maccarone, R., Chalupa, L. M., Bisti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+treatment+of+the+developing+retina+with+the+metabotropic+glutamate+agonist+APB+induces+long-term+changes+in+the+stratification+of+retinal+ganglion+cell+dendrites.">Long-term treatment of the developing retina with the metabotropic glutamate agonist APB induces long-term changes in the stratification of retinal ganglion cell dendrites.</a> Dev Neurosci. 26 (5-6), 396-405 (2004).</li><li>Horton, J., Sherk, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptive+field+properties+in+the+cat's+lateral+geniculate+nucleus+in+the+absence+of+on-center+retinal+input.">Receptive field properties in the cat's lateral geniculate nucleus in the absence of on-center retinal input.</a> The Journal of Neuroscience. 4 (2), 374-380 (1984).</li><li>Smith, A. L., Cordery, P. M., Thompson, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manufacture+and+release+characteristics+of+Elvax+polymers+containing+glutamate+receptor+antagonists.">Manufacture and release characteristics of Elvax polymers containing glutamate receptor antagonists.</a> Journal of Neuroscience Methods. 60 (1), 211-217 (1995).</li><li>Gargini, C., Bisti, S., Demontis, G. C., Valter, K., Stone, J., Cervetto, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+changes+associated+with+retinal+upregulation+of+trophic+factors:+observations+following+optic+nerve+section.">Electroretinogram changes associated with retinal upregulation of trophic factors: observations following optic nerve section.</a> Neuroscience. 126 (3), 775-783 (2004).</li><li>Maccarone, R., Di Marco, S., Bisti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saffron+supplement+maintains+morphology+and+function+after+exposure+to+damaging+light+in+mammalian+retina.">Saffron supplement maintains morphology and function after exposure to damaging light in mammalian retina.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49 (3), 1254-1261 (2008).</li><li>Tsai, T., Bui, B., Vingrys, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethyl+sulphoxide+dose-response+on+rat+retinal+function.">Dimethyl sulphoxide dose-response on rat retinal function.</a> Documenta Ophthalmologica. 119 (3), 199-207 (2009).</li></ol>

המחברים אין לגילוי.

מאמר זה מדגים את השימוש בתרופה מורכב שרף עבור משלוח השחרור האיטי של תרופות לרשתית. אנחנו אמורים להציג את שיטה שבה היא זול יחסית וקל ליישום במודל של בעלי חיים קטנים. בהתחשב בכך שהפונקציה של APB היא לפעול כאנלוגי גלוטמט, זה יחסום את תגובת הרשתית בעין. התוצאות מראות כי APB גרם לחסימה של תגובת הרשתית על ידי postimplantation שבוע אחד. זה מצביע על כך APB שוחרר בהצלחה לתוך הזגוגית והרשתית, ושהשפעתה הייתה מוגבלת לעין שמורכבת סמים השרף היה מושתל לתוך. ההשפעה המלאה של התרופה הפכה בשבוע אחד ברור לאחר ההשתלה (איור 1). איור 1A מראה כי ביום 1 לאחר השתלה, הפחתה משמעותית של b-הגל הייתה רק נוכחים בעוצמת φ 10 6 בעין המושתלת. זה עשוי להצביע על כך בתחילת נקודת זמן זו, רקמסלול חרוט, המגיב &#160; לעוצמות אור גבוהות יותר, הושפע. כדי לקבוע את משך הזמן שהשרף יכול לספק את APB לרשתית, יש לחקור נקודות זמן נוספות. מוצע כי הקלטות בנקודות זמן נוספות בפרק זמן 0-7 היום צריכים לקחת, למשל, בשעה 3 ו -5 ימים לאחר השתלה, כדי לקבוע בדיוק מתי תגובת הרשתית הוא בוטל באופן מלא. בנוסף, יש לקחת בהקלטות מעבר 7 ימים, כדי לקבוע כמה זמן APB הוא שוחרר ל. זה יהיה ברור כתגובת הרשתית תמשיך תבוטל אם APB הוא הרף ששוחרר לאט לתוך הזגוגית. במחקר זה, מורכב סמים השרף היה נמצא בטוח למסירה לרשתית. APB פורקה ב 0.1% DMSO. בריכוזים שווים או גבוה מ0.6%, DMSO יכול לגרום לרעילות ברשתית. עם זאת, 0.1% DMSO כבר נמצא בטוח לכלי רכב עבור המשלוח של תרכובות לעין חולדה 35, וריכוז זה הייתה בשימוש לאורך כל הניסויים במחקר זה. השתלים הוכנסו transclerally לתוך חלל הזגוגית בserrata האורה. השתלים נצפו להישאר בserrata האורה בcryosections של העין העכברוש, שנאספה לאחר הקלטות ERG נעשו. מיצוב זה של השתל מבטיח שמורכב סמים השרף אינו גורם לליקוי ראייה. שיטה זו כרוכה במתחם הסמים השרף נבדקה עם תרכובות אחרות (פרסום בהכנה), ונמצא כי אין נזק מבני או תפקודי לעין נצפה עד חודשים לאחר השתלה. כולל של 60 בעלי חיים הושתלו, וב90% מהמקרים עמדת השתל נותרת ללא שינוי. כמה שינויים יכולים להתבצע לטכניקה במידת צורך. בניסויים אלה, שלוש פעמים את הריכוז של מנה בודדת של APB הועמס לתוך השרף (50 מיקרומטר x 3 = 150 מיקרומטר), וsho זהULD לשמש כקו מנחה להכנת הפתרון התרופתי לטעינה. עם זאת, הריכוז היעיל של התרופה בשרף הוא משתנה, ויש לבדוק ולשנות בהתאם. נקודות הזמן שבו ניתוח מתבצע יכול גם להיות שונה, כדי לקבוע כמה זמן השרף הוא יעיל בשחרור התרופה. בניסויים אלו, שהראה כי המינון האפקטיבי היציב של התרופה מועבר באמצעות מורכב סמים שרף עבור שבוע אחד לפחות, ולכן מומלץ שהניתוח של הרקמה מתבצע לפחות שבוע לאחר ההשתלה. במהלך שלב טעינת סמים, ירוק מהיר שימש כדי להבטיח שהתערובת הייתה הומוגני. צבעי צבע ביולוגי בטוחים אחרים יכולים לשמש כחלופה לגרין מהיר, כדי להמחיש את האחידות של התרופה בתוך השרף. מגבלה של שיטה זו היא שהצבע הירוק המהיר הוא המדד היחיד לערבוב אחיד. טכניקה זו יכולה להיות גם נבדקה באמצעות מודלים של בעלי חיים אלטרנטיביים ובתרופות, רק עם מודעת קטיןjustments לשיטה. אם סכום גבוה יותר של התרופה צריך להיות מועבר, שתל בגודל גדול יותר עשוי להיות נחוץ. אם יצליח במודלים אלה, שרף קופולימר זה יכול להיחשב כאופציה טיפולית לאספקת תרופות באיטיות לרשתית להיות השפעה מתמשכת לאורך זמן. ישנם מספר צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול שבו טיפול נוסף יש לנקוט. אין להשתמש במכשירי פלסטיק ומתכת בכל רחבי הסינתזה והטיפול בשרף. זה מונע זיהום של הפולימר, כdichloromethane יכולה להמס פלסטיק ומתכת לשיתוק. יובש נכון של בלוק סמים שרף צריך להיות מושגים לפני השימוש בו להשתלה כירורגית. ודא שהמבחנה המכילה את התרופה ושרף נחשפה במלואו לסידן גופרתי כדי להתאדות הממס. לחלופין, lyophilizer יכול לשמש כדי להקפיא לייבש את הסמים השרף. בלוק הסמים השרף מוכן לשימוש כאשר הממס התאדה לחלוטין, ורק בלוק כחלחל מוצק נשאר בכוס. בעת חיתוך חתיכה מהגוש להשתלה, כל חתיכה צריכה רק להיות מוכנה מייד לפני הניתוח כחתיכות קטנות מאוד וקשים לחנות. יש להשתמש בכלי מקדחה או אגרוף לחתוך חתיכות בגודל שווה, כדי להבטיח כי כל פיסה מכילה בערך אותה הכמות של התרופה. לבסוף, בעת הכנסת החתיכה לתוך הפצע שנעשה על ידי מחט 25 G, להשתמש בפינצטה בסדר, מחודדת כדי להדריך בזהירות החתיכה לתוך הפצע. מיקרוסקופ או זכוכית מגדלת הספק גבוהה צריך לשמש כאמצעי עזר חזותי. רק תרופות ותרכובות הידרופילי נבדקו בשיטה זו. מתחמי סמים השרף לא הראו שום היווצרות משקעים או תוצר לוואי בלתי רצויה, כאשר התרופה הייתה מעורבבת עם הפולימר וdichloromethane. הוא הציע כי עם כל תרופה חדשה, הריכוז, זמן מחצית חיים של השפעה, וכל תגובות אפשריות עם תערובת השרף צריךלהיבדק על ידי המשתמש כדי לקבוע אם השיטה מתאימה.

הטיפול במחלות כרוניות כמו סוכרת ולחץ דם גבוה מציבה בפנינו אתגרים רבים, כמו מחלות אלה בדרך כלל דורשים טיפול לתקופות ממושכות של זמן, לעתים קרובות לכל חיים. זה נקרא לפיתוח מערכות למתן תרופות שחרור האיטי, המקטין את הצורך במינון תכוף. יעילותן של שיטות שחרור איטיות אלה הודגמה באמצעות הפיתוח של משאבות אינסולין, כדי להפחית את מספר זריקות אינסולין הנדרש לטיפול בסוכרת. מחלות כרוניות של העין, במיוחד אלה המשפיעים על השכבות הפנימיות שלה, דורשים את המתן התכוף של תרופות באמצעות הליכים פולשניים. מחלה כרונית אחת כזו המשפיעה על העין האנושית היא ניוון מקולרי גיל קשור (AMD). זה משפיע על הרשתית המרכזית, שהיא שכבה של רקמה עצבית הממוקמת בחלק האחורי של העין אחראית על ייזום חזון. AMD הוא הגורם המוביל לעיוורון בעולם המערבי 1. אתגר מיוחד בטיפול מחדשהמחלות tinal היא שנדרשת לתרופה להגיע שכבה עמוקה זו בעיניים, אשר לעתים קרובות דורשת שיטות פולשניות של משלוח. תרופות בדרך כלל מנוהלות לתא הזגוגית והרשתית באמצעות זריקות זגוגית. עם זאת, עם כל זריקה יש סיכון לסיבוכי postinjection, כולל אנדופתלמיטיס, היפרדות רשתית, קטרקט והדימום זגוגי 2. סיכון זה מוכפל עם כל reinjection של התרופה. הקטנת הצורך של זריקות מרובות תהיה יתרון עיקרי בטיפול בAMD. לטיפול בצורה הרטובה של AMD, שבו צמיחת כלי חדשה היא סימן היכר, האסטרטגיה הטיפולית שהוקמה היא למקד את גורמי אנדותל הצמיחה (VEGF) באמצעות מעכבי VEGF 3. נכון לעכשיו, אלה מועברים באמצעות זריקות זגוגית חוזרות ונשנות. באופן דומה, בטיפול בבצקת מקולרית, סיבוך שכיח של רטינופתיה סוכרתית, סטרואידים מועברים באמצעות זריקות חוזרות ונשנות <sעד&gt; 4. משלוח של תרופות אלה באמצעות שיטות שחרור איטיות אכן יכול להפחית את הסיכון לסיבוכי postinjection. הרעיון של מערכת אספקת הסמים שחרור איטית תואר לראשונה שימוש ברכב גומי סיליקון, כדי לספק מולקולות קטנות לתוך הרקמות של בעלי חיים 5. מאז, שיטות שחרור איטיות אחרות פותחו כדי לספק מולקולות גדולות יותר, כמה מהם נבדקו בעין. ספקי חלקיקים, כגון microspheres מתכלה, poly-lactide-CO-glycolide חלקיקים (PLGA) ושלפוחית ​​פוספוליפידים (יפוזומים) יכולים להיות שימושיים ככלי רכב משלוח 6,7. חלקיקי PLGA ויפוזומים כבר הושוו בסביבה במבחנה ליכולת שלהם לספק סוכנים אנטי סרטניים על פני לובן העין לאורך זמן 7. שני כלי הרכב היו יעילים בשחרור לאט הסמים. עם זאת, המחקר נערך רק בסביבה במבחנה. Bochot et al. (2002) 8 נבדקוהיעילות של יפוזומים להחדיר מולקולות לרשתית in vivo. הם הוכיחו כי ליפוזומים לספק בהצלחה oligonucleotides הקטן ברשתית עין הארנב. המחברים טען כי ליפוזומים יכולים להיות מועילים בטיפול במחל רשתית 8. עם זאת, הטבע של שלפוחית ​​אלה לצוף בזגוגית אומר שסביר להניח שהם לטשטש או לפגוע בראייה 9. Okabe et al. (2003) 10 להשתמש בדיסקי פולימר מתכלה שאינם מורכבים מ33% אצטט אתילן ויניל ליישם beta-methasone בארנבות. הם מושתלים דיסקים לתוך כיס scleral והפגינו לשחרור היעיל של התרופה לתוך הזגוגית והרשתית לעד חודש 10. עם זאת, בפרוטוקול ספציפי זה, השתל היה גדול יחסית ונוקשה, ונדרש הליך כירורגי מורכב יותר הכוללים חתך scleral גדול ותפירה. מחקר מוקדם יותר נחקר tissuתגובת דואר לכלי רכב פולימר שונים על ידי השתלה אותם לתוך הקרנית של עיני ארנב, ומצאה כי קופולימרים אצטט אתילן ויניל נשטפו באלכוהול לא לגרום לדלקת או גירוי. מתחמים אלה הוצגו כדי לקיים את המסירה של תרכובות גדולות יותר לרקמות של בעלי חיים לתקופות ממושכות של זמן, כמה עולה עד 100 ימים תלויים בתרופה 11. סוג אחד כזה של שרף קופולימר פותח תעשייתי בצורה של Elvax 40W (40% על ידי תוכן comonomer אצטט משקל אתילן ויניל עם תוסף אמיד &#39;W&#39; כדי לשפר את הטיפול גלולה). שרף קופולימר זה חומר אינרטי שהוא יציב בשני חדרים וטמפרטורת גוף. זה לא הוכח לגרום לאלרגיות או רעיל ברקמות ביולוגיות. שרף זה למעשה סיפק מגוון גדול של תרופות במודלי ניסויים שונים שיחקרו את הפונקציות של מערכות שונות, כגון מערכת החלב ductal 12, שמיעתי הקליפה העיקרית 13,14 &lt;/ Sup&gt;, וצפרדע מערכת ראייה 15. שרף זה שימש גם בעין, כדי לספק תרופות לפיתוח צב 16,17, עובר עוף 18,19, וחמוס מבוגר רשתיות 20. במערכת העצבים המרכזית החולדה, השרף יש רק שימש במוח 21-23, אך השימוש בו בעין של החולדה לא תועד. היתרונות של שימוש בשרף קופולימר זה כדי לספק תרופות לאט לרשתית על פני שיטות אחרות, הוא שזה הוא תרכובת יציבה שאינו גורם לדלקת או גירוי בעין. בניגוד למנשא חלקיקים, מורכב סמים השרף לא לפגוע בראייה לאחר השתלה, כפי שבדרך כלל נשאר באתר של משלוח במקום צף בזגוגית. זה רק היה דורש תהליך השתלה פשוט לתוך חלל הזגוגית הקרוב לימבוס של העין, ולא דורש תפירה לאחר השתלה. לאחרונה, חלה עלייה במספר מערכות אספקת רומן, כגוןטכנולוגיית תא במארז (ECT) 24,25, הידרוג 26, ומיקרופילמים 27. עם זאת, השיטה ששמשה במחקר הנוכחי להכנה ואספקה ​​מורכבת סמים שרף היא גם קלה לעקוב ולא יקר, ובכך להיות יתרון נוסף לשימוש בסביבת מחקר בסיסית. האתגר של שימוש מורכב זה כדי לספק טיפולים תרופתיים לטווח הארוך הוא לקבוע את הריכוז האופטימלי של התרופה שיהיה למקסם את היתרונות הטיפוליים שיש זריקות זגוגית פחות. מאמר זה נועד להדגים את השימוש במתחם הסמים השרף לטיפול לטווח ארוך של רשתית החולדה הבוגרת. היעילות של מצב של משלוח זה נבדקה באמצעות 2-אמינו-4-phosphonobutyrate האנלוגי גלוטמט (APB) כתרופה. בלוקים APB תגובת האור של התאים דו קוטביים על ידי חיקוי גלוטמט, מוליך עצבי אנדוגני ב28 הרשתית. כאשר APB מתחרה עם גלוטמט לרצפטור שלו, חוסם את הניהול התאורהתגובה לא. APB נעשה שימוש במחקרים פיסיולוגיים לשליטה בתפקוד רשתית ולמדוד את השפעתו תוך שימוש בשיטות אלקטרו כגון electroretinography (ERG). במחקרים קודמים, APB היה בשימוש כבר הקצר טווח 29 וטיפול לטווח הארוך של הרשתית המתפתחת; האחרון מעורב נותן מנה אחת באמצעות הזרקה תוך עינית יומית ל30 ימים 30. אותה הכמות של APB (0.092 מ&quot;ג בתמיסת מלח סטרילית, בריכוז של 50 מיקרומטר) שימשה לכל הזריקות כפי שהוצעה ב28,29,31 עבודה קודמות. בחרנו APB לבדוק מורכב סמים שרף ככלי בשחרור איטי, כדי לספק תרופות לעין. השיטות שתוארו במחקר זה דומות לשיטות שתוארו קודם לכן היו מעורבות בהכנה של תרופות השרף המורכב 16,32; עם זאת אנו גם פירוט את השימוש בו באופן ספציפי בעין של החולדה הבוגרת. לאחר השתלה כירורגית של השרף הטעון APB לתוך העין, ERG בוצע כדי לקבוע אם APB מבטל את rתגובת אור etinal, ולכן אם APB כבר פורסם בהצלחה לתוך הזגוגית ורשתית.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Elvax 40W Pellets</td>
			<td>Du Pont, DE, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-amino-4-phosphonobutyric acid (APB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA</td>
			<td>A1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA</td>
			<td>34856</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drierite, calcium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co. LLC., MO, USA</td>
			<td>238910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine, Ilium Ketamil</td>
			<td>Troy Laboratories Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine, Ilium Xylazil-20</td>
			<td>Troy Laboratories Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulphate, Minims eye drops</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracaine Hydrochloride, Minims eye drops</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol, Chlorsig ointment</td>
			<td>Aspen Pharma Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital, Lethabarb</td>
			<td>Virbac Australia Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lignocaine Hydrochloride, Ilium Lignocaine-20</td>
			<td>Troy Laboratories Pty. Ltd., NSW, Australia</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uni-Core Punch Tool</td>
			<td>World Precision Instruments Inc., FL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments Inc., FL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Microscope, Zeiss OPMI 99</td>
			<td>Zeiss, West Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G Insulin Needle</td>
			<td>Terumo Corp., Tokyo, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Tweezers</td>
			<td>World Precision Instruments Inc., FL, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

slow-release drug delivery through elvax 40w to the rat retina: implications for the treatment of chronic conditions

מחלות של הרשתית הן קשות לטיפול כרשתית נמצאת עמוק בתוך העין. שיטות פולשניות של משלוח סמים פעם נדרשות לטיפול במחלות אלה. מחלות רשתית כרוניות כגון בצקת או neovascularization רשתית בדרך כלל דורשות זריקות תוך עיניות מרובות כדי לטפל במצב בצורה יעילה. עם זאת, הסיכונים הכרוכים בזריקות אלה יגדלו עם משלוח חוזר ונשנה של התרופה. לכן, שיטות משלוח חלופיות צריכה להיות הוקמו כדי למזער את הסיכונים של reinjection. כמה חקירות אחרות פיתחו שיטות לאספקת תרופות לאורך זמן ממושך, באמצעות חומרים המסוגלים שחרור כימיקלים לאט לתוך העין. בחקירה זו, אנו מתארים את השימוש בElvax 40W, שרף קופולימר, לפעול ככלי להעברת תרופות לרשתית החולדה הבוגרת. השרף הוא עשה ועמוס בסמים. מורכב סמים השרף מושתל אז לתוך חלל הזגוגית, שבו היא תשחרר לאט את התרופה מעל tiשלי. שיטה זו נבדקה באמצעות 2-אמינו-4-phosphonobutyrate (APB), אנלוגי גלוטמט שחוסם את תגובת האור של הרשתית. זה הודגם כי APB שוחרר לאט מהשרף, והיה מסוגל לחסום את תגובת הרשתית על ידי 7 ימים לאחר השתלה. זה מצביע על כך משלוח סמים שחרור איטי באמצעות שרף קופולימר זה הוא יעיל לטיפול ברשתית, ויכולים לשמש טיפולי עם בדיקות נוספות.

electroretinography שדה מלא (ERG) שימש כדי לזהות את ההשפעה של APB על הרשתית. לפרטים כיצד ERG בוצע, מתייחס ללימודי 33,34 הבאים. בקיצור, אחרי הרדמת בעלי החיים, אלקטרודה זהב הונחה על הקרנית של העין, ואת האלקטרודה ההתייחסות הוצבה בקרקפת הקדמית בין העיניים, כדי להקליט את הפעילות החשמלית של הרשתית. גירויים היו שנוצרו באמצעות יחידת פלאש אלקטרונית והעוצמה נעה בין 10-10 יוני photoisomerization, המייצג את מספר המולקולות רגישות לאור הופעלו למוט. בניסויים אלה, הקלטות ERG נלקחו בהודעת הליך 1 ו -7 ימים. עין ימין של כל חיה הייתה מושתלת עם מורכב סמים שרף, ואילו הבחור עזב את העין שימשה כביקורת לא טופלה פנימית. איור 1 מציג את השינויים במשרעת של b-הגל עם עלייה בphotoisomerization למוט(Φ). בעיני השליטה, המשרעת של b-הגל גדלה ככל שגדלה עוצמת הפלאש. באיור 1 א, מקבלות הקלטות תגובת רשתית יום 1 לאחר השתלה. עין המושתלת הראתה דפוס משרעת דומה לעין השליטה. ההבדל משרעת בין שתי העיניים הפך שונה באופן משמעותי ב10 6 φ (p &lt;0.0001). זה מצביע על כך בשלב מוקדם זה, מורכב סמים שרף אין השפעה על תגובת רשתית עד שמגיע בעוצמות גבוהות יותר פלאש. איור 1 מדגים את השינויים בתגובת ERG ב7 ימים לאחר השתלה. ב-הגל הוא בוטל בכל הרמות של הבזק אינטנסיביות בעין המושתל, בהשוואה לעין השליטה, שבו יש אמפליטודות דומה להקלטות היום 1. זה שונה באופן משמעותי לכל אמפליטודות לעין המושתלת ביום 1 (p &lt;0.0001). זה מראה שתגובת הרשתית בוטלה על ידי (בשבוע אחד) לאחר implantatiעל של מתחם סמים שרף לתוך העין. <img alt="איור 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51563/51563fig1highres.jpg" width="400" /> איור 1 המשרעת של b-הגל ביום 1 ובשבוע 1 לאחר ההשתלה המורכבת סמים שרף. לשני הלוחות, עין השליטה מוצגת בכתום (ריבועים), ואילו בעין המושתלת מוצגת בירוק ( עיגולים). הסמל * מייצג משמעות בשלב זה בין שתי העיניים, שבי p &lt;0.0001. לכל הקבוצות, n = 5 (א) המשרעת של היום ב-גל 1 לאחר ההשתלה המורכבת סמים שרף לתוך העין. המשרעת של b-הגל ביחס לעוצמת הפלאש (photoisomerization לφ מוט) היא אינדיקטור של תגובת רשתית. אין הבדל משמעותי במשרעת ב-הגל בין העיניים בכל עוצמות הבזק אלא ב10 6 φ, בו העין המושתלתיש משרעת נמוך יותר. (ב) משרעת של השבוע ב-גל 1 (7 ימים) לאחר השתלה. אמפליטודות שנרשמו משני העיניים שונות באופן משמעותי בכל עוצמות הבזק. ברשתית המושתל, המשרעת של b-גל לא הייתה מדידה בכל עוצמות גירוי.

Watch this Scientific Journal Video about Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions at JoVE.com

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

מאמר זה מפרט כיצד Elvax 40W יכול לשמש כשיטת שחרור איטי לאספקת סמים לרשתית החולדה הבוגרת. הפרוטוקול להכנה, טעינה, ומספקים מורכב סמים שרף לעין מתואר.

משלוח שחרור איטי תרופות דרך Elvax 40W לרשתית העכברוש: ​​השלכות לטיפול במצבים כרוניים

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

slow-release-drug-delivery-through-elvax-40w-to-rat-retina

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

11.4K Views.  University of L'Aquila.  מאמר זה מפרט כיצד Elvax 40W יכול לשמש כשיטת שחרור איטי לאספקת סמים לרשתית החולדה הבוגרת. הפרוטוקול להכנה, טעינה, ומספקים מורכב סמים שרף לעין מתואר. 

Video: Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current estimates put the prevalence of amblyopia at approximately 1-3%1-3, the majority of cases being monocular2. Amblyopia is most frequently caused by ocular misalignment (strabismus), blur induced by unequal refractive error (anisometropia), and in some cases by form deprivation.
Although amblyopia is initially caused by abnormal visual input in infancy, once established, the visual deficit often remains when normal visual input has been restored using surgery and/or refractive correction. This is because amblyopia is the result of abnormal visual cortex development rather than a problem with the amblyopic eye itself4,5 . Amblyopia is characterized by both monocular and binocular deficits6,7 which include impaired visual acuity and poor or absent stereopsis respectively. The visual dysfunction in amblyopia is often associated with a strong suppression of the inputs from the amblyopic eye under binocular viewing conditions8. Recent work has indicated that suppression may play a central role in both the monocular and binocular deficits associated with amblyopia9,10 .
Current clinical tests for suppression tend to verify the presence or absence of suppression rather than giving a quantitative measurement of the degree of suppression. Here we describe a technique for measuring amblyopic suppression with a compact, portable device11,12 . The device consists of a laptop computer connected to a pair of virtual reality goggles. The novelty of the technique lies in the way we present visual stimuli to measure suppression. Stimuli are shown to the amblyopic eye at high contrast while the contrast of the stimuli shown to the non-amblyopic eye are varied. Patients perform a simple signal/noise task that allows for a precise measurement of the strength of excitatory binocular interactions. The contrast offset at which neither eye has a performance advantage is a measure of the "balance point" and is a direct measure of suppression. This technique has been validated psychophysically both in control13,14 and patient6,9,11 populations.
In addition to measuring suppression this technique also forms the basis of a novel form of treatment to decrease suppression over time and improve binocular and often monocular function in adult patients with amblyopia12,15,16 . This new treatment approach can be deployed either on the goggle system described above or on a specially modified iPod touch device15.

Amblyopia is a developmental disorder of the visual cortex that is often accompanied by strong suppression of one eye. We present a new technique for measuring and treating interocular suppression in patients with amblyopia that can be deployed using virtual reality goggles or a portable iPod Touch device.

המדידה והטיפול בדיכוי בעין עצלה

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to affect the function of several organs and tissues and to contribute to the development of the many complications associated with obesity and the metabolic syndrome, including type 2 diabetes. To study the mechanisms by which excessive levels of glucose and fatty acids affect the pancreatic beta-cell and the secretion of insulin, we have established a chronic nutrient infusion model in the rat. The procedure consists of catheterizing the right jugular vein and left carotid artery under general anesthesia; allowing a 7-day recuperation period; connecting the catheters to the pumps using a swivel and counterweight system that enables the animal to move freely in the cage; and infusing glucose and/or Intralipid (a soybean oil emulsion which generates a mixture of approximately 80% unsaturated/20% saturated fatty acids when infused with heparin) for 72 hr. This model offers several advantages, including the possibility to finely modulate the target levels of circulating glucose and fatty acids; the option to co-infuse pharmacological compounds; and the relatively short time frame as opposed to dietary models. It can be used to examine the mechanisms of nutrient-induced dysfunction in a variety of organs and to test the effectiveness of drugs in this context.

A protocol for chronic infusions of glucose and Intralipid in rats is described. This model can be used to study the impact of nutrient excess on organ function and physiological parameters.

דגם של עירוי מזין כרוני בחולדה

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to stimulate microcirculation. The choice of delivery method for these agents is important because the route of administration profoundly affects the bioactivity and efficacy of these agents1,2. In this article, we demonstrate how to locally administer a substance in ischemic hindlimbs by using a catheterized osmotic pump. This pump can deliver a fixed volume of aqueous solution continuously for an allotted period of time. We also present our mouse model of unilateral hindlimb ischemia induced by ligation of the common femoral artery proximal to the origin of profunda femoris and epigastrica arteries in the left hindlimb. Lastly, we describe the in vivo cannulation and ligation of the infrarenal abdominal aorta and perfusion of the hindlimb vasculature with Microfil, a silicone radiopaque casting agent. Microfil can perfuse and fill the entire vascular bed (arterial and venous), and because we have ligated the major vascular conduit for exit, the agent can be retained in the vasculature for future ex vivo imaging with the use of small specimen micro-CT3.

We show here the in vivo insertion of an osmotic pump for constant local drug delivery and the creation of hindlimb ischemia in a mouse model. Moreover, the hindlimb vasculature is perfused with Microfil, a silicone radiopaque agent, to prepare for micro-computed tomography (micro-CT) imaging.

משלוח סמים האוסמוטי לhindlimbs איסכמי וטפטוף של כלי דם עם Microfil למייקרו-טומוגרפיה ממוחשבת הדמיה

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high molecular weight compounds from the bloodstream and into brain tissue. Some direct delivery success in humans has been achieved via implantation of transcranial catheters; however this method is highly invasive and associated with numerous complications. A less invasive alternative would be to dose the brain through a surgically implanted, semipermeable membrane such as the nasal mucosa that is used to repair skull base defects following endoscopic transnasal tumor removal surgery in humans. Drug transfer though this membrane would effectively bypass the BBB and diffuse directly into the brain and cerebrospinal fluid. Inspired by this approach, a surgical approach in mice was developed that uses a donor septal mucosal membrane engrafted over an extracranial surgical BBB defect. This model has been shown to effectively allow the passage of high molecular weight compounds into the brain. Since numerous drug candidates are incapable of crossing the BBB, this model is valuable for performing preclinical testing of novel therapies for neurological and psychiatric diseases.

A mouse model of human endoscopic skull base reconstruction has been developed that creates a semipermeable interface between the brain and nose using nasal mucosal grafts. This method allows researchers to study delivery to the central nervous system of high molecular weight therapeutics which are otherwise excluded by the blood-brain barrier when administered systemically.

Heterotopic הרירי Engrafting נוהל העברת תרופות ישיר למוח בעכברים

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

החדרת תרופות Intraluminal אל האנדותל מורסה arteriovenous עכבר

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage Renal Disease with high risk of death for cardiovascular events. Moreover, recent clinical studies have shown that renovascular structure and function may have a great impact on functional renal recovery after surgery. Here, we describe a protocol for the delivery of drugs into the renal artery of rats. This procedure offers significant advantages over the frequently used systemic administration as it may allow a more localized therapeutic effect. In addition, the use of rodents in pharmacodynamic analysis of preclinical studies may be cost effective, paving the way for the design of translational experiments in larger animal models. Using this technique, infusion of rat recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) protein in rats has induced activation of VEGF signaling as shown by increased expression of FLK1, pAKT/AKT, pERK/ERK. In summary, we established a protocol for the intrarenal delivery of drugs in rats, which is simple and highly reproducible.

The administration of drugs for recovery of kidney function requires control of the localization and distribution of the therapeutic compound. Here, we describe in detail a simple technique for intrarenal delivery of drugs in rats. This procedure may be easily performed with no mortality and high reproducibility.

משלוח intravascular של מוצרים ביולוגיים לכליה עכברוש

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control seizures. However, a significant minority of patients continues to exhibit post-operative seizures, even in those cases in which the suspected source of seizures has been correctly localized and resected. The protocol presented here combines a clinical procedure routinely employed during the pre-operative evaluation of temporal lobe epilepsy (TLE) patients with a novel technique for network analysis. The method allows for the evaluation of the temporal evolution of mesial network parameters. The bilateral insertion of foramen ovale electrodes (FOE) into the ambient cistern simultaneously records electrocortical activity at several mesial areas in the temporal lobe. Furthermore, network methodology applied to the recorded time series tracks the temporal evolution of the mesial networks both interictally and during the seizures. In this way, the presented protocol offers a unique way to visualize and quantify measures that considers the relationships between several mesial areas instead of a single area.

This protocol describes a procedure to track the evolution of mesial network measures in temporal lobe epilepsy (TLE) patients. It is based on the combination of intracranial recordings with a novel numerical technique for data analysis. Specifically, we present a protocol for network analyses of foramen ovale recordings.

ניתוח רשת של הקלטות אלקטרודה foramen ovale בחולים עמידים בפני תרופות Temporal Lobe אפילפסיה

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening pulmonary manifestations. Ivacaftor (IVA) and ivacaftor-lumacaftor (LUMA) combination are two new breakthrough CF drugs that directly modulate the activity and trafficking of the defective CFTR-protein. However, there is still a dearth of understanding on pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters and the pharmacology of ivacaftor and lumacaftor. The HPLC-MS technique for the simultaneous analysis of the concentrations of ivacaftor, hydroxymethyl-ivacaftor, ivacaftor-carboxylate, and lumacaftor in biological fluids in patients receiving standard ivacaftor or ivacaftor-lumacaftor combination therapy has previously been developed by our group and partially validated to FDA standards. However, to allow the high-throughput analysis of a larger number of patient samples, our group has optimized the reported method through the use of a smaller pore size reverse-phase chromatography column (2.6 &#181;m, C8 100 &#197;; 50 x 2.1 mm) and a gradient solvent system (0-1 min: 40% B; 1-2 min: 40-70% B; 2-2.7 min: held at 70% B; 2.7-2.8 min: 70-90% B; 2.8-4.0 min: 90% B washing; 4.0-4.1 min: 90-40% B; 4.1-6.0 min: held at 40% B) instead of an isocratic elution. The goal of this study was to reduce the HPLC-MS analysis time per sample dramatically from ~15 min to only 6 min per sample, which is essential for the analysis of a large amount of patient samples. This expedient method will be of considerable utility for studies into the exposure-response relationships of these breakthrough CF drugs.

Ivacaftor and ivacaftor-lumacaftor combination are two new CF drugs. However, there is still a dearth of understanding on their PK/PD and pharmacology. We present an optimized HPLC-MS technique for the simultaneous analysis of ivacaftor and its major metabolites, and lumacaftor.

שיטת אופטימיזציה LC-MS/MS לניתוח תפוקה גבוהה של דגימות קליניות של Ivacaftor, שלה מטבוליטים העיקריים Lumacaftor של נוזלים ביולוגיים של חולי סיסטיק פיברוזיס

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) models based on pBECs in mono-culture (MC), MC with astrocyte-conditioned medium (ACM), and non-contact co-culture (NCC) with astrocytes of porcine or rat origin. pBECs were isolated and cultured from fragments of capillaries from the brain cortices of domestic pigs 5-6 months old. These fragments were purified by careful removal of meninges, isolation and homogenization of grey matter, filtration, enzymatic digestion, and centrifugation. To further eliminate contaminating cells, the capillary fragments were cultured with puromycin-containing medium. When 60-95% confluent, pBECs growing from the capillary fragments were passaged to permeable membrane filter inserts and established in the models. To increase barrier tightness and BBB characteristic phenotype of pBECs, the cells were treated with the following differentiation factors: membrane permeant 8-CPT-cAMP (here abbreviated cAMP), hydrocortisone, and a phosphodiesterase inhibitor, RO-20-1724 (RO). The procedure was carried out over a period of 9-11 days, and when establishing the NCC model, the astrocytes were cultured 2-8 weeks in advance. Adherence to the described procedures in the protocol has allowed the establishment of endothelial layers with highly restricted paracellular permeability, with the NCC model showing an average transendothelial electrical resistance (TEER) of 1249 &#177; 80 &#937; cm2, and paracellular permeability (Papp) for Lucifer Yellow of 0.90 10-6 &#177; 0.13 10-6 cm sec-1 (mean &#177; SEM, n=55). Further evaluation of this pBEC phenotype showed good expression of the tight junctional proteins claudin 5, ZO-1, occludin and adherens junction protein p120 catenin. The model presented can be used for a range of studies of the BBB in health and disease and, with the highly restrictive paracellular permeability, this model is suitable for studies of transport and intracellular trafficking.

Improved Method for the Establishment of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model Based on Porcine Brain Endothelial Cells

The aim of the protocol is to present an optimized procedure for the establishment of an in vitro blood-brain barrier (BBB) model based on primary porcine brain endothelial cells (pBECs). The model shows high reproducibility, high tightness, and is suitable for studies of transport and intracellular trafficking in drug discovery.

שיפור שיטה להקמת במבחנה מחסום הדם - מוח מודל המבוסס על תאי אנדותל המוח חזירי

The aim of this protocol presents an optimized procedure for the purification and cultivation of pBECs and to establish in vitro blood-brain barrier (BBB) ...

Trans-Tympanic Drug Delivery for the Treatment of Ototoxicity

The systemic administration of protective agents to treat drug-induced ototoxicity is limited by the possibility that these protective agents could interfere with the chemotherapeutic efficacy of the primary drugs. This is especially true for the drug cisplatin, whose anticancer actions are attenuated by antioxidants which provide adequate protection against hearing loss. Other current or potential otoprotective agents could pose a similar problem, if administered systemically. The application of various biologicals or protective agents directly to the cochlea would allow for high levels of these agents locally with limited systemic side effects. In this report, we demonstrate a trans-tympanic method of delivery of various drugs or biological reagents to the cochlea, which should enhance basic science research on the cochlea and provide a simple way of directing the use of otoprotective agents in the clinics. This report details a method of trans-tympanic drug delivery and provides examples of how this technique has been used successfully in experimental animals to treat cisplatin ototoxicity.

We present a technique for localized administration of drugs through the trans-tympanic route into the cochlea. Drug delivery through this route would not interfere with the anti-cancer efficacy of the chemotherapeutic drugs such as cisplatin.

משלוח סמים טרנס-Tympanic לטיפול Ototoxicity

The systemic administration of protective agents to treat drug-induced ototoxicity is limited by the possibility that these protective agents could ...

משלוח שחרור איטי תרופות דרך Elvax 40W לרשתית העכברוש: ​​השלכות לטיפול במצבים כרוניים

משלוח שחרור איטי תרופות דרך Elvax 40W לרשתית העכברוש: השלכות לטיפול במצבים כרוניים