פרויקט זה נתמך על חלקו על ידי מענק למכונים לאומיים לבריאות NIAID (לAJB וLGA, R01 AI076246). אוסף המוטציה סלמונלה נתמכה בחלקו על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענקים (לMM, U01 A152237-05, R01 AI07397-01, R01 AI039557-11 וR01 AI075093-01), בחלקו על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענקים (לנייח, R21 AI083964-01, 1R0 1AI083646-01, 1R56AI077645, R01 AI075093). אנו מודים סטפן Prowollik להעתק ציפוי ומאשר את מוטציות באוסף.

תרבית תאים 1 Murine מקרופאג RAW264.7 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדל תאי מקרופאג עכבריים מספר מעבר הנמוך, RAW264.7 (ATCC ® מספר, TIB-71) בכובע T-75 תרבית תאי בקבוק פרק מסנן בנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM) בתוספת סרום 10% שור עוברי (FBS) , 0.5% 3 NaHCO, ו -1% 100x חומצות חיוניות אמינו (NEAA) על 37 מעלות צלזיוס, ב5% CO 2 באינקובטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שתאים מגיעים מפגש 60-80% בבקבוק, להשתמש מגרד תא למסוק תאים, ולספור את התאים בhemacytometer ולחשב את ריכוז התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התאים ולדלל את ריכוז התא ל2.5 x 10 5 / מ&quot;ל במדיום תרבות תא טרי DMEM. השתמש בטפטפות רבות ערוצים לצלחת 200 μl של מדיום תרבות תא DMEM המכיל 5 x 10 4 תאים בכל טוב של צלחות תרבית תאי 96 היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט ארבע בארות של כל זן סלמונלה. הגדר את שלוש צלחות נפרדות עבור קבוצה אחתשל assay פלישת תאי phagocytic, ולסמן אותם עם, &quot;פלישה&quot;, &quot;האגודה&quot; ו &quot;שכפול&quot;, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הצלחות ב5% CO 2 באינקובטור ב 37 ° C על מנת לאפשר את תאי מקרופאג לצרף לתחתית הבארות. </li></ol> 2 הכנת סלמונלה Wild-type ומוטאנטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באותו היום של הכנת תאי RAW264.7 מקרופאג, לאסוף מושבות אחת של wild-type 14028s (WT) סלמונלה serotype enterica Typhimurium, מוטציה DinvA, מוטציה DphoP, וזנים מוטנטים מבחן הרצוי, ותרבותם לוריא-Bertani ( מרק LB) בתוספת אנטיביוטיקה על פי צורך. השתמש בכל סט של מבחני פלישת תאי phagocytic לבדוק עד 10 זנים מוטנטים (המוטציה DinvA ומוטצית DphoP פגומות בפלישה ושכפול תאיים, בהתאמה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגדל את החיידקים ל14 שעה על 37 מעלות צלזיוס עם יםhaking ב220 סל&quot;ד ב 5 מ&quot;ל כל אחת ממרק LB בפוליפרופילן 14 מ&quot;ל הכתיר באופן רופף בצינור תחתון עגול. מרק LB מכיל אנטיביוטיקה מתאימה, במקרה שלנו, רוב הזנים מוטנטים עמידים לKanamycin, 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, תת כל אחד מON תרבויות של זני סלמונלה ב 5 מ&quot;ל רגיל של מרקי LB ביחס של 1:50 ל4 שעות נוספות עם רעד ב220 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קראו OD 600 ערכים של כל תרבות חיידקים בספקטרופוטומטר, וכל קריאה צריכה לנוע 0.6-1.2 כדי לייעל את מערכת פתוגניות סלמונלה האי-1 הסוג III הפרשה (TTSS SPI-1) ביטוי גנים לפלישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בנוסחא של OD 1 600 = 7.5 x 10 8 CFU / מ&quot;ל להעריך את ריכוז החיידקים, ואז לדלל חיידקים לריכוז של 5 x 10 6 CFU / מ&quot;ל במדיום תרבות תא טרי DMEM. </li></ol> .3 הפלישה Assay בצלחת תרבות 96 היטב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את שלושה cel 96 היטבצלחות תרבות l מן החממה CO 2 ולשטוף היטב כל פעם עם 200 μl של חיץ 1x PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כביסה וההסרה של PBS מלא, להוסיף 200 חיידקי μl במדיום DMEM (ראה לעיל) לכל אחד. התוצאה היא 1 x 10 6 תאי סלמונלה בכל ריבוי טוב ושל זיהום (משרד הפנים) של 20: 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצלחות XG ב 1000 במנשא אטום ל10 דקות, ולאחר מכן להחליף צלחות (זמן אפס) ב37 מעלות צלזיוס, חממה 5% CO 2 למשך 30 דקות. עבור כל זן, להגדיר לפחות ארבע בארות כפולות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 30 דקות, להסיר את הצלחות מן החממה ולשטוף שלוש פעמים עם 200 μl של 1x PBS להסיר חיידקי unassociated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות כביסה, לשמור את הצלחת שכותרתו עם &quot;עמותה&quot; להמשך טיפול. הוסף 200 μl של מדיום DMEM המכיל 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​גנטמיצין היטב בכל הצלחות מסומנות &quot;פלישה&quot; ו &quot;שכפול&quot; בt כדיo להרוג סלמונלה תאית. החזר את הצלחות ל37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באינקובטור לשעה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציל את אחד גם מכל זן נגוע להקלטת ספירת תאי מקרופאג, טיפול בשאר בארות בצלחת &quot;עמותה&quot; עם 200 μl של 1x PBS המכיל 1% Triton X-100 עבור 10 דקות. פתרון טריטון יהיה lyse תאי מקרופאג ולשחרר סלמונלה קשורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקציר סלמונלה מכל טוב ולהכניס אותם לתוך צינורות 1.5 מ&quot;ל אפנדורף. בצע שלושה 10 דילולים סדרתי של פי עם 900μl 1x PBS על הדגימות שנקטפו מכל טוב, המערבולת מתבצעת בין כל דילול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט הדילול השלישי, 10 -3, משני צלחות LB (WT) או LB קאן (מוטציות). תווית הצלחות עם שם מתאים סלמונלה מתח, מספר דילול, נקודת זמן ותאריך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר vortexing צינור הדילול השלישי, לוותר מדגם 10 μl על פני השטח של אגר וf החוזרתפעמינו עבור הסכום כולל של 5 טיפות. הקפד חלל חמישה 10 μl טיפות באופן שווה על צלחות צלחת פטרי 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הטיפות לספוג לתוך אגר, להפוך את הצלחות שוב ודגירת הלילה בשעה 37 מעלות צלזיוס, חממת 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את הבארות הצילו לספירה של מקרופאגים עם 150 1xPBS μl מכיל 0.25% טריפסין-EDTA עבור 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר trypsinization, מקרופאגים מקום לתוך צינורות 1.5 מ&quot;ל אפנדורף ולהתייחס אליהם ב50 μl של FBS לנטרל פתרון טריפסין / EDTA, להכתים את התאים עם 0.4% Trypan כחול ולהבקיע אותם דרך השימוש בhemacytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הדגירה שעה אחת חלפה, להסיר את &quot;הפלישה&quot; וצלחות &quot;שכפול&quot; מחממת CO 2, ולשטוף היטב כל כ&quot; שלב 3.4 &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הצלחת &quot;פלישה&quot; להמשך טיפול בשם &quot;שלב 3.6-3.12&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 200 μl של מדיום DMEM המכיל גנטמיצין 10 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​להצלחת &quot;שכפול&quot; כדי לשמור על מרווח של סלמונלה תאית במדיום. להחזיר את הצלחת ל37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באינקובטור ל22.5 שעות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, להסיר את הצלחת &quot;שכפול&quot; מ37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באינקובטור, ולשטוף היטב כל אחד בשם &quot;שלב 3.4&quot; ולהתייחס אליהם כ&quot; שלב 3.6-3.12 &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, להסיר את הצלחות אגר לאחר הדגירה לילה ב37 ° C חממה ואת הציון את מספר מושבות חיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפצת מושבה טובה צריכה להיות בין 10 ו100 מושבות, כל נקודה מכילה כ 2 עד 20 מושבות, שזה יהיה קשה להבקיע אם היו יותר מ 20 מושבות במקום אחד. אם הספירה היא נמוכה מדי או גבוהה מדי, replate המדגם עם פי 10 דילולים גבוהים יותר או נמוכים יותר בהתאם לצורך. </li></ol> ניתוח .4 נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב (יחידות יצירת מושבות לכל מ&quot;ל) CFU של כל צלחת המבוססת על הציפוינפח וגורם לדילול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לברר את המספר של סלמונלה למקרופאג באמצעות ספירת תאי מקרופאג שנרשמה מכל זן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את האמצעים הגיאומטריים של CFU למקרופאג מלפחות שלושה ניסויים בלתי תלויים לעמותת תא, פלישה או שכפול, בהתאמה, ולנרמל נוסף לWT לערך היחסי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הנתונים לעמותה, פלישה, ושכפול על ידי -test t של סטודנט בהתאמה, על ידי השוואת כל זן לWT, ולקבוע את המובהקות הסטטיסטיות על ידי p-value. </li></ol>

<ol>
	<li>Haraga, A., Ohlson, M. B., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonellae+interplay+with+host+cells.">Salmonellae interplay with host cells.</a> Nat Rev Microbiol. 6, 53-66 (2008).</li><li>Mandell, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+intraleukocytic+bacteria+and+antibiotics.">Interaction of intraleukocytic bacteria and antibiotics.</a> The Journal of clinical investigation. 52, 1673-1679 (1973).</li><li>Elsinghorst, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+invasion+by+gentamicin+resistance.">Measurement of invasion by gentamicin resistance.</a> Methods Enzymol. 236, 405-420 (1994).</li><li>Elsinghorst, E. A., Weitz, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+invasion+and+adherence+directed+by+the+enterotoxigenic+Escherichia+coli+tib+locus+is+associated+with+a+104-kilodalton+outer+membrane+protein.">Epithelial cell invasion and adherence directed by the enterotoxigenic Escherichia coli tib locus is associated with a 104-kilodalton outer membrane protein.</a> Infect Immun. 62, 3463-3471 (1994).</li><li>Behlau, I., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+PhoP-repressed+gene+promotes+Salmonella+typhimurium+invasion+of+epithelial+cells.">A PhoP-repressed gene promotes Salmonella typhimurium invasion of epithelial cells.</a> J Bacteriol. 175, 4475-4484 (1993).</li><li>Hueck, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+typhimurium+secreted+invasion+determinants+are+homologous+to+Shigella+Ipa+proteins.">Salmonella typhimurium secreted invasion determinants are homologous to Shigella Ipa proteins.</a> Mol Microbiol. 18, 479-490 (1995).</li><li>Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+epithelial+cells+with+Salmonella+enterica.">Infection of epithelial cells with Salmonella enterica.</a> Methods Mol Biol. 431, 201-211 (2008).</li><li>Foster, J. W., Spector, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Salmonella+survive+against+the+odds.">How Salmonella survive against the odds.</a> Annu Rev Microbiol. 49, 145-174 (1995).</li><li>Edwards, A. M., Massey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+human+cells+by+a+bacterial+pathogen.">Invasion of human cells by a bacterial pathogen.</a> Journal of visualized experiments JoVE. 10, (2011).</li><li>Molinari, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+played+by+the+group+A+streptococcal+negative+regulator+Nra+on+bacterial+interactions+with+epithelial+cells.">The role played by the group A streptococcal negative regulator Nra on bacterial interactions with epithelial cells.</a> Mol Microbiol. 40, 99-114 (2001).</li><li>Van der Velden, A. W., Lindgren, S. W., Worley, M. J., Heffron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+pathogenicity+island+1-independent+induction+of+apoptosis+in+infected+macrophages+by+Salmonella+enterica+serotype+typhimurium.">Salmonella pathogenicity island 1-independent induction of apoptosis in infected macrophages by Salmonella enterica serotype typhimurium.</a> Infect Immun. 68, 5702-5709 (2000).</li><li>Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+molecular+characterization+of+Salmonella+typhimurium+infection+in+neonatal+calves.">Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves.</a> Vet Pathol. 39, 200-215 (2002).</li><li>Lawhon, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+SPI-1+secreted+effectors+in+acute+bovine+response+to+Salmonella+enterica+Serovar+Typhimurium+a+systems+biology+analysis+approach.">Role of SPI-1 secreted effectors in acute bovine response to Salmonella enterica Serovar Typhimurium a systems biology analysis approach.</a> PLoS One. 6, e26869 (2011).</li><li>Drecktrah, D., Knodler, L. A., Galbraith, K., Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Salmonella+SPI1+effector+SopB+stimulates+nitric+oxide+production+long+after+invasion.">The Salmonella SPI1 effector SopB stimulates nitric oxide production long after invasion.</a> Cell Microbiol. 7, 105-113 (2005).</li></ol>

We have nothing to disclose.

Assay ההגנה גנטמיצין הוא בשימוש נרחב כדי לחקור את הפלישה ושכפול של חיידקים פתוגנים תאיים בתוך תא מארח, וזה בעיקר כלי ביולוגי חשוב ללימוד פתוגנים, כמו סלמונלה, הפלישה שלו הוא צעד תנאי מוקדם להקמת זיהום 1. Assay ההגנה גנטמיצין הסטנדרטי בקהילת מחקר סלמונלה מיו...

Nontyphoidal סלמונלה הן גורמים חשובים במחל מעיים בכל החוליות. סלמונלה בבני האדם היא בין המחלות שמקורן במזון חיידקים העליונים 1. אפיון של המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס האינטראקציות של סלמונלה עם מארחי בעלי החיים שלהם מושגת בעיקר באמצעות המחקר של סלמונלה typhimurium serotype enterica (STM) במודלים של בעלי החיים תרבות ורקמות של זיהום. תובנה באינטראקציות STM-מארח תעזור לנו להבין איך סלמונלה לשרוד ולגדול בתוך תאי מארח. האתגר הראשון בחקר האינטראקציות אלה הוא לזהות גורמים המשתתפים רבים ככל האפשר משני מארח ופתוגן, אבל המאמצים הללו מופרים בעיקר על ידי הקשיים המשמעותיים של התמודדות עם שתי מערכות ביולוגיות מורכבות עצמאיות בו זמנית, כלומר, מארח וסלמונלה, בתנאים פיסיולוגיים. בנוסף, repert הגדולoire של סלמונלה וגני מארח פוטנציאלי קידוד גורמים מעורבים באינטראקציות מארח דורשים פלטפורמה ביולוגית תפוקה גבוהה כדי להתמודד עם אתגר זה. Assay שונה, סטנדרטי לפנוטיפ עמותת סלמונלה, פלישה ושכפול במקרופאגים עם קיבולת תפוקה גבוהה פותח כדי לבחון קבוצה גדולה של גנים סביר העוסקים ביחסי גומלין -host סלמונלה. Assay ההגנה גנטמיצין פותח בשנת 1973 2, אבל ראשון שתואר ביסודיות על ידי Elsinghorst ב -1994 3,4. עכשיו זה הפך להיות כלי סטנדרטי ללימוד רב פתוגנים תאיים חיידקי vivo לשעבר, כולל סלמונלה 5,6. חיידקים הפנימו להימנע מלהיות נהרגו על ידי כמה אנטיביוטיקה, כמו גנטמיצין, שלא יכול לחדור לתאים אוקריוטים 3. על ידי ניצול של תופעה זו, assay הגנת גנטמיצין מודד את ההישרדות וצמיחה של ba תאייםפתוגנים cterial. שלושה אירועים במהלך הזיהום, כלומר, שיתוף עם תאים, פלישה ושכפול אוקריוטים, ניתן להעריך לחיידקים פתוגנים תאית המבוססים על מרווח הזמן בין זיהום, טיפול גנטמיצין, ודגירה נוספת (איור 1). שורות תאים אוקריוטים לספק סביבה פיזיולוגית שהיא פחות מורכב ממודלים של בעלי חיים רלוונטיים ללימודי אינטראקציה המאכסן לפתוגן. Assay ההגנה גנטמיצין הוא פלטפורמה מתאימה כדי לחקור אינטראקציות STM-מארח, אבל assay הסטנדרטי בצלחת תרבות 24 גם יש קיבולת נמוכה תפוקה. אנליזה חישובית של in vivo מערכי נתונים מזוהה 149 מוצרי גן סלמונלה שהם חזו אינטראקציה עם כ 300 מוצרי גן המארח (נתונים שלא פורסמו). Assay ההגנה גנטמיצין הסטנדרטי אין את יכולת פנוטיפ מספר זה של מוטציות ביעילות. בadditיון, assay הגנת גנטמיצין יכול באופן תיאורטי לזהות הפלישה של אפילו חיידק בודד. בגלל רגישות טבעית זו, את הנתונים הגולמיים רגישים לסטיות טכניות כאשר חזרו בזמנים שונים. הבקרות הפנימיות ולהצגה נתונים היחסית לאחר הנורמליזציה חיוניות לפרשנות משמעותית של התוצאות. בהתחשב בשיקולים אלה,, assay הגנת גנטמיצין הותאם סטנדרטי פותח כדי לשפר את יכולת בדיקה ולהגדיל את הדיוק. הפרוטוקול הבא הוא מפורט ומאויר לבצע assay הגנת גנטמיצין שונה באמצעות כלים תרבות 96 היטב ושורת תאי RAW264.7 מקרופאג העכברית. בהשוואה לפרוטוקול הסטנדרטי בכלי תרבות 24 גם, יש הפרוטוקול שונה את היתרונות הבאים: 1) שימוש בכלי תרבות 96 גם מאפשר עד 10 זנים מוטנטים שונים כדי להיות phenotyped כולל בקרות חיוביות ושליליות פנימיות עם עוצמה סטטיסטית מספקת;2) השונות של תוצאות מצטמצמת משמעותי, משום שהזנים מוטנטים נבדקים באותה צלחת התרבות ובו בזמן; 3) השימוש בטפטפות רבת ערוצים מגבירה את התפוקה תוך הפחתת עייפות מפעיל. לבסוף, בהשוואה לתרבות מנות 24 גם, חששות של תאי מארח פחות לכל גם בצלחת תרבות 96 היטב טופלו באמצעות אופטימיזציה פרוטוקול ותקינה. לסיכום, assay שונה, הסטנדרטי במבחנת סלמונלה פנוטיפ או עמותת חיידקים אחרת, פלישה ושכפול בתאי phagocytic מגביר דיוק ומשיג יכולת תפוקה גבוהה תוך הפחתת עייפות מפעיל.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:173px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:173px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:173px;">11965</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:173px;">HyClone</td>
			<td style="width:173px;">SH30910.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:173px;">T-75 cell culture flask vented filter cap</td>
			<td style="width:173px;">Nest Biotechnology</td>
			<td style="width:173px;">708003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:173px;">100X Non-Essential Amino Acids</td>
			<td style="width:173px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:173px;">11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">Cell scraper</td>
			<td style="width:173px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:173px;">353086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:173px;">96-well cell culture plate</td>
			<td style="width:173px;">Corning Incorporated</td>
			<td style="width:173px;">3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:173px;">Luria-Bertani (LB) broth</td>
			<td style="width:173px;">MP Biomedicals</td>
			<td style="width:173px;">3002-075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:173px;">14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube</td>
			<td style="width:173px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:173px;">352059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">PBS pH7.4 (1x)</td>
			<td style="width:173px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:173px;">10010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:173px;">Sigma</td>
			<td style="width:173px;">T-8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">Kanamycin solution</td>
			<td style="width:173px;">Sigma</td>
			<td style="width:173px;">K0254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">Gentamicin solution</td>
			<td style="width:173px;">Sigma</td>
			<td style="width:173px;">G1272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:173px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:173px;">25200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:173px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:173px;">Sigma</td>
			<td style="width:173px;">T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput assay to phenotype salmonella enterica typhimurium association, invasion, and replication in macrophages

מיני סלמונלה הם פתוגנים zoonotic וגורמים המובילים למחל מזון מובל בבני אדם ובעלי החיים 1. הבנת המנגנונים בבסיס אינטראקציות -host סלמונלה הם חשובים על מנת להבהיר את הפתוגנזה המולקולרית של זיהום סלמונלה. Assay ההגנה גנטמיצין לפנוטיפ עמותת סלמונלה, פלישה ושכפול בתאי phagocytic הותאם כדי לאפשר הקרנת תפוקה גבוהה כדי להגדיר את התפקידים של מוטציות מחיקה של Typhimurium serotype enterica סלמונלה באינטראקציות מארח באמצעות 264.7 מקרופאגים עכבריים RAW. לפי פרוטוקול זה, את השונות במדידות מצטמצמת משמעותית בהשוואה לפרוטוקול הסטנדרטי, כי wild-type וזנים מוטנטים מרובים, ניתן לבדוק באותו צלחת התרבות ובו בזמן. השימוש בטפטפות רבת ערוצים מגביר את התפוקה ומשפרת דיוק. יתר על כן, חששות הקשורים לשימוש בפחות הותאי st לכל גם בצלחת תרבות 96 היטב טופלו. הנה, בפרוטוקול של במבחנה assay פלישת סלמונלה שונה באמצעות תאי phagocytic הועסק בהצלחה לפנוטיפ 38 מוטציות מחיקת סלמונלה פרטניות לעמותה, פלישה ושכפול תאיים. פנוטיפים במבחנה מוצגים, שחלקם אישרו לאחר מכן יש בפנוטיפים vivo במודל חיה. לפיכך, assay שונה, הסטנדרטי לפנוטיפ סלמונלה עמותה, פלישה ושכפול במקרופאגים עם קיבולת תפוקה גבוהה יכולה להיות מנוצלת באופן רחב יותר כדי לחקור אינטראקציות חיידקים-מארח.

ראה תוצאות נציג (איור 2) לאחר שהנתונים שהם זממו מבוססים על assay פלישת תאי phagocytic שונה. הנתונים כוללים חמישה זנים שונים, WT, ΔinvA, ΔphoP, מוטציה, וב &#39;שעבר מוטציה Δ invA, ידוע כפגום לפלישה, וΔphoP ידועים כפגום לשכפול 8, המשמשים כביקורת חיובית כדי להעריך ...

Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages at JoVE.com

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

Assay תפוקה גבוהה לסלמונלה במבחנה פנוטיפ או עמותת חיידקים אחרת, פלישה, ושכפול בתאי phagocytic עם קיבולת תפוקה גבוהה פותח. השיטה הועסקה כדי להעריך זנים מוטנטים נוקאאוט גן סלמונלה למעורבותם באינטראקציות מאכסן לפתוגן.

Assay תפוקה גבוהה להפנוטיפ<em&gt; Enterica סלמונלה</em&gt; Typhimurium איגוד, פלישה, ושכפול בהמקרופאגים

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying ...

high-throughput-assay-to-phenotype-salmonella-enterica-typhimurium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

12.5K Views.  Texas A&M University.  Assay תפוקה גבוהה לסלמונלה במבחנה פנוטיפ או עמותת חיידקים אחרת, פלישה, ושכפול בתאי phagocytic עם קיבולת תפוקה גבוהה פותח. השיטה הועסקה כדי להעריך זנים מוטנטים נוקאאוט גן סלמונלה למעורבותם באינטראקציות מאכסן לפתוגן. 

Video: High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

Current commercial PCRs tests for identifying Salmonella target genes unique to this genus. However, there are two species, six subspecies, and over 2,500 different Salmonella serovars, and not all are equal in their significance to public health. For example, finding S. enterica subspecies IIIa Arizona on a table egg layer farm is insignificant compared to the isolation of S. enterica subspecies I serovar Enteritidis, the leading cause of salmonellosis linked to the consumption of table eggs. Serovars are identified based on antigenic differences in lipopolysaccharide (LPS)(O antigen) and flagellin (H1 and H2 antigens). These antigenic differences are the outward appearance of the diversity of genes and gene alleles associated with this phenotype.
We have developed an allelotyping, multiplex PCR that keys on genetic differences between four major S. enterica subspecies I serovars found in poultry and associated with significant human disease in the US. The PCR primer pairs were targeted to key genes or sequences unique to a specific Salmonella serovar and designed to produce an amplicon with size specific for that gene or allele. Salmonella serovar is assigned to an isolate based on the combination of PCR test results for specific LPS and flagellin gene alleles. The multiplex PCRs described in this article are specific for the detection of S. enterica subspecies I serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium.
Here we demonstrate how to use the multiplex PCRs to identify serovar for a Salmonella isolate.

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

We describe a multiplex PCR for the rapid detection of Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium. Specific Salmonella serovars can be identified by targeting a multiplex PCR to genes and sequences unique to the O-antigen biosynthesis cluster and flagellin of a given serovar. Serovar is assigned then to a Salmonella isolate based on the appearance of specific, size amplicons (PCR product) corresponding to the target allele.

Allelotyping PCR לזיהוי סלמונלה enterica Serovars enteritidis, הדר, היידלברג, ו Typhimurium

Current commercial PCRs tests for identifying Salmonella target genes unique to this genus.  However, there are two species, six subspecies, and over ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Cancer immunotherapy can harness the specificity of immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT) based on the adoptive transfer of T cells genetically modified to express a chimeric antigen receptor (CAR) has shown considerable promise in clinical trials1-4. There are several advantages to using CAR+ T cells for the treatment of cancers including the ability to target non-MHC restricted antigens and to functionalize the T cells for optimal survival, homing and persistence within the host; and finally to induce apoptosis of CAR+ T cells in the event of host toxicity5.
Delineating the optimal functions of CAR+ T cells associated with clinical benefit is essential for designing the next generation of clinical trials. Recent advances in live animal imaging like multiphoton microscopy have revolutionized the study of immune cell function in vivo6,7. While these studies have advanced our understanding of T-cell functions in vivo, T-cell based ACT in clinical trials requires the need to link molecular and functional features of T-cell preparations pre-infusion with clinical efficacy post-infusion, by utilizing in vitro assays monitoring T-cell functions like, cytotoxicity and cytokine secretion. Standard flow-cytometry based assays have been developed that determine the overall functioning of populations of T cells at the single-cell level but these are not suitable for monitoring conjugate formation and lifetimes or the ability of the same cell to kill multiple targets8.
Microfabricated arrays designed in biocompatible polymers like polydimethylsiloxane (PDMS) are a particularly attractive method to spatially confine effectors and targets in small volumes9. In combination with automated time-lapse fluorescence microscopy, thousands of effector-target interactions can be monitored simultaneously by imaging individual wells of a nanowell array. We present here a high-throughput methodology for monitoring T-cell mediated cytotoxicity at the single-cell level that can be broadly applied to studying the cytolytic functionality of T cells.

We describe a single-cell high-throughput assay to measure cytotoxicity of T cells when incubated with tumor target cells. This method employs a dense, elastomeric array of sub-nanoliter wells (~100,000 wells/array) to spatially confine the T cells and target cells at defined ratios and is coupled to fluorescence microscopy to monitor effector-target conjugation and subsequent apoptosis.

Assay כמותית תפוקה גבוהה מתא בודד Cytotoxicity לתאי T

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense against gram-negative bacterium Salmonella typhimurium. Salmonella establishes persistent infection in the intestine of C. elegans and results in early death of infected animals. A number of immunity mechanisms have been identified in C. elegans to defend against Salmonella infections. Autophagy, an evolutionarily conserved lysosomal degradation pathway, has been shown to limit the Salmonella replication in C. elegans and in mammals. Here, a protocol is described to infect C. elegans with Salmonella typhimurium, in which the worms are exposed to Salmonella for a limited time, similar to Salmonella infection in humans. Salmonella infection significantly shortens the lifespan of C. elegans. Using the essential autophagy gene bec-1 as an example, we combined this infection method with C. elegans RNAi feeding approach and showed this protocol can be used to examine the function of C. elegans host genes in defense against Salmonella infection. Since C. elegans whole genome RNAi libraries are available, this protocol makes it possible to comprehensively screen for C. elegans genes that protect against Salmonella and other intestinal pathogens using genome-wide RNAi libraries.

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

C. elegans has emerged as a new genetic model to study host-pathogen interactions. Here we describe a protocol to infect C. elegans with Salmonella typhimurium coupled with the double-strand RNAi interference technique to examine the role of host genes in defense against Salmonella infection.

פרוטוקול להדביק<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; עם<em&gt; Typhimurium סלמונלה</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like Shigella flexneri and Francisella novicida need to induce the rupture of the phagosome. In contrast, Salmonella typhimurium replicates in a vacuolar compartment, known as Salmonella-containing vacuole (SCV). However certain mutants of Salmonella fail to maintain SCV integrity and are thus released into the cytosol. The percentage of cytosolic vs. vacuolar bacteria on the level of single bacteria can be measured by differential permeabilization, also known as phagosome-protection assay. The approach makes use of the property of detergent digitonin to selectively bind cholesterol. Since the plasma membrane contains more cholesterol than other cellular membranes, digitonin can be used to selectively permeabilize the plasma membrane while leaving intracellular membranes intact. In brief, following infection with the pathogen expressing a fluorescent marker protein (e.g. mCherry among others), the plasma membrane of host cells is permeabilized with a short incubation in digitonin containing buffer. Cells are then washed and incubated with a primary antibody (coupled to a fluorophore of choice) directed against the bacterium of choice (e.g. anti-Salmonella-FITC) and washed again. If unmarked bacteria are used, an additional step can be done, in which all membranes are permeabilized and all bacteria stained with a corresponding antibody. Following the staining, the percentage of vacuolar and cytosolic bacteria can be quantified by FACS or microscopy by counting single or double-positive events. Here we provide experimental details for use of this technique with the bacterium Salmonella typhimurium. The advantage of this assay is that, in contrast to other assay, it provides a quantification on the level of single bacteria, and if analyzed by microscopy provides the exact number of cytosolic and vacuolar bacteria in a given cell.

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

We describe the quantification of cytosolic and vacuolar Salmonella typhimurium in bone-marrow derived macrophages using differential digitonin permeabilization.

כימות של Cytosolic לעומת vacuolar<em&gt; סלמונלה</em&gt; ביסודי המקרופאגים על ידי דיפרנציאל permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins can give insights into their function by determining their localization within the cell and enabling interaction partner identification. We recently published a fast and scalable method to generate Trypanosoma brucei cell lines that express a tagged protein from the endogenous locus. The method was based on a plasmid we generated that, when coupled with long primer PCR, can be used to modify a gene to encode a protein tagged at either terminus. This allows the tagging of dozens of trypanosome proteins in parallel, facilitating the large-scale validation of candidate genes of interest. This system can be used to tag proteins for localization (using a fluorescent protein, epitope tag or electron microscopy tag) or biochemistry (using tags for purification, such as the TAP (tandem affinity purification) tag). Here, we describe a protocol to perform the long primer PCR and the electroporation in 96-well plates, with the recovery and selection of transgenic trypanosomes occurring in 24-well plates. With this workflow, hundreds of proteins can be tagged in parallel; this is an order of magnitude improvement to our previous protocol and genome scale tagging is now possible.

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Addition of a tag to a protein is a powerful way of gaining insight into its function. Here, we describe a protocol to endogenously tag hundreds of Trypanosoma brucei proteins in parallel such that genome scale tagging is achievable.

תפוקה גבוהה ג&#39;ין תיוג ב<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or cellular processes. With the advancement of biotechnologies and the high translational potential of small molecules, a number of innovative approaches in drug discovery have evolved, which explains the resurgent interest in the use of HTS. The oncology field is currently the most active research area for drug screening, with no major breakthrough made for the identification of new immunomodulatory compounds targeting transplantation-related complications or autoimmune ailments. Here, we present a novel in vitro murine fluorescent-based lymphocyte assay easily adapted for the identification of new immunomodulatory compounds. This assay uses T or B cells derived from a transgenic mouse, in which the Nur77 promoter drives GFP expression upon T- or B-cell receptor stimulation. As the GFP intensity reflects the activation/transcriptional activity of the target cell, our assay defines a novel tool to study the effect of given compound(s) on cellular/biological responses. For instance, a primary screening was performed using 4,398 compounds in the absence of a &#34;target hypothesis&#34;, which led to the identification of 160 potential hits displaying immunomodulatory activities. Thus, the use of this assay is suitable for drug discovery programs exploring large chemical libraries prior to further in vitro/in vivo validation studies.

We present in the current study a novel fluorescence-based assay using lymphocytes derived from a transgenic mouse. This assay is suitable for high-throughput screening (HTS) of small molecules endowed with the capacity of either inhibiting or promoting lymphocyte activation.

Assay לימפוציטים הקרינה מבוסס מתאים להקרנה תפוקה גבוהה של מולקולות קטנות

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to effectiveness in the clinical setting. This is likely due to a lack of consideration for the physiologically relevant cellular penetration barriers that exist in the infected host. We recently established an alternative infection model that generates large macrophage aggregate structures containing densely packed M. tuberculosis (Mtb) at its core, which was suitable for drug susceptibility testing. This infection model is inexpensive, rapid, and most importantly BSL-2 compatible. Here, we describe the experimental procedures to generate Mtb/macrophage aggregate structures that would produce macrophage-passaged Mtb for drug susceptibility testing. In particular, we demonstrate how this infection system could be directly adapted to the 96-well plate format showing throughput capability for the screening of compound libraries against Mtb. Overall, this assay is a valuable addition to the currently available Mtb drug discovery toolbox due to its simplicity, cost effectiveness, and scalability.

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

New models and assays that would improve the early drug development process for next-generation anti-tuberculosis drugs are highly desirable. Here, we describe a quick, inexpensive, and BSL-2 compatible assay to evaluate drug efficacy against Mycobacterium tuberculosis that can be easily adapted for high-throughput screening.

Assay תואם תפוקה גבוהה כדי להעריך יעילות התרופה נגד Macrophage passaged<em&gt; שחפת Mycobacterium</em

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. typhimurium bacteria are quickly detected and phagocytized by macrophages, and contained in vesicles known as phagosomes in order to be degraded. Isolation of S. typhimurium-containing phagosomes have been widely used to study how S. typhimurium infection alters the process of phagosome maturation to prevent bacterial degradation. Classically, the isolation of bacteria-containing phagosomes has been performed by sucrose gradient centrifugation. However, this process is time-consuming, and requires specialized equipment and a certain degree of dexterity. Described here is a simple and quick method for the isolation of S. typhimurium-containing phagosomes from macrophages by coating the bacteria with biotin-streptavidin-conjugated magnetic beads. Phagosomes obtained by this method can be suspended in any buffer of choice, allowing the utilization of isolated phagosomes for a broad range of assays, such as protein, metabolite, and lipid analysis. In summary, this method for the isolation of S. typhimurium-containing phagosomes is specific, efficient, rapid, requires minimum equipment, and is more versatile than the classical method of isolation by sucrose gradient-ultracentrifugation.

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

We describe here a simple and quick method for the isolation of Salmonella typhimurium-containing phagosomes from macrophages by coating the bacteria with biotin and streptavidin.

בידוד של סלמונלה typhimurium-המכיל Phagosomes של מקרופאגים

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella spp./Shigella spp. The gold standard method for the detection of Salmonella spp./Shigella spp. is direct culture but this is labor-intensive and time-consuming. Here, we describe a high-throughput platform for Salmonella spp./Shigella spp. screening, using real-time polymerase chain reaction (PCR) combined with guided culture. There are two major stages: real-time PCR and the guided culture. For the first stage (real-time PCR), we explain each step of the method: sample collection, pre-enrichment, DNA extraction and real-time PCR. If the real-time PCR result is positive, then the second stage (guided culture) is performed: selective culture, biochemical identification and serological characterization. We also illustrate representative results generated from it. The protocol described here would be a valuable platform for the rapid, specific, sensitive and high-throughput screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Salmonella spp./Shigella spp. are common pathogens attributed to diarrhea. Here, we describe a high-throughput platform for the screening of Salmonella spp./Shigella spp. using real-time PCR combined with guided culture.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

A High-throughput Assay to Assess and Quantify Neutrophil Extracellular Trap Formation

Neutrophil extracellular traps (NETs) are immunogenic extracellular DNA structures that can be released by neutrophils upon a wide variety of triggers. NETs have been demonstrated to serve as an important host defense mechanism that traps and kills microorganisms. On the other hand, they have been implicated in diverse systemic autoimmune diseases. NETs are immunogenic and toxic structures that contain a pool of relevant autoantigens including anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA)-associated vasculitis (AAV) and systemic lupus erythematosus (SLE). Different forms of NETs can be induced depending on the stimulus. The amount of NETs can be quantified using different techniques including measuring DNA release in supernatants, measuring DNA-complexed with NET-molecules like myeloperoxidase (MPO) or neutrophil elastase (NE), measuring the presence of citrullinated histones by fluorescence microscopy, or flow cytometric detection of NET-components which all have different features regarding their specificity, sensitivity, objectivity, and quantity. Here is a protocol to quantify ex vivo NET formation in a highly-sensitive, high-throughput manner by using three-dimensional immunofluorescence confocal microscopy. This protocol can be applied to address various research questions about NET formation and degradation in health and disease.

This protocol describes a highly sensitive and high throughput neutrophil extracellular trap (NET) assay for the semi-automated quantification of ex vivo NET formation by immunofluorescence three-dimensional confocal microscopy. This protocol can be used to evaluate NET formation and degradation after different stimuli and can be used to study potential NET-targeted therapies.

תפוקה גבוהה הנועד להעריך ולכמת את היווצרות נויטרופילים מלכודת חוץ-תאית

Neutrophil extracellular traps (NETs) are immunogenic extracellular DNA structures that can be released by neutrophils upon a wide variety of triggers. ...