The work was supported by grants from NIH/NINDS (NS054883), Craig H. Neilsen Foundation (280072), and the Veterans Administration and Canadian Spinal Research Organization. We thank the Rat Resource and Research Center, University of Missouri, Columbia, Missouri, for providing GFP rats.

כל הפרוטוקולים של בעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC). הנחיות NIH לטיפול בבעלי חיים במעבדה ובטיחות ורק אחריו. בעלי חיים עם ניתוחים טופלו כראוי למזעור כאב ואי נוחות. 1 חוט השדרה Curgery והארכה נייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירי ניתוח החיטוי לפני כל הניתוחים. השתמש חם ביד מעקר (כלי מדע פיין) כדי להסיר פתוגנים ומזהמי חיידקים ממכשירים בין נהלים על בעלי חיים שונים. השתמש בכפפות סטריליות כירורגיות, שמלה, ווילאות במהלך הניתוח. להעסיק טכניקה ניתוחית ספטית לכל הליך כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי נקבת פישר 344 חולדות עם שילוב (2 מ&quot;ל / קילוגרם) של קטמין (25 מ&quot;ג / מ&quot;ל), xylazine (1.3 מ&quot;ג / מ&quot;ל), וacepromazine (0.25 מ&quot;ג / מ&quot;ל) מנוהלות באמצעות זריקת intraperitoneal (IP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אזור הגב ולנקות את העור שוב ושוב עם פולידין ואתנול.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את העור באמצעות מס &#39;10 להב ובוטות לנתח שכבות שרירים. השתמש באזמל כדי לבודד את החוליות, לחשוף את החוליה T3, ולבצע laminectomy גב באמצעות rongeurs דק שקצהו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הדורה אורכים או תחצה את חוט השדרה ברמת T4 באמצעות שילוב של המספריים ומייקרו אספירציות iridectomy ליצור פער rostrocaudal כ 1 מ&quot;מ בין גדמי חוט השדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן כ 1 - 2 דקות עד שהדימום באופן מלא מפסיק, אז שרירי תפר עם 3-0 Vycril ולסגור את העור עם קליפים פצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק Lactated Ringer של (5 מ&quot;ל), עצירות (0.035 מ&quot;ג / קילוגרם), ואמפיצילין (33 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי מייד לאחר הניתוח ולשמור על חולדות בחממה חמה עד ער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק רינגר ופתרון אמפיצילין פעם ביום עד 10 ימים, ועצירות פעמיים ביום למשך 3 ימים או עד שסימנים של כאב ומצוקה ייעלמו. אל תחזרו בעלי חיים לחברתם של בעלי חיים אחרים, עד fully התאושש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן ידני לרוקן את שלפוחית ​​השתן פעמיים ביום במשך כשבועיים, עד להקמת שלפוחית ​​השתן רפלקס התרוקנות, ולאחר מכן רוקן את שלפוחית ​​השתן פעם ביום בכל רחבי ההישרדות במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבועיים לאחר מכן, שוב להרדים חולדות SCI כפי שתואר לעיל ומחדש לחשוף את אתר נגע חוט השדרה. שמור את הדורה סגורה כדי לשמור על תאים מושתלים באתר הנגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 10 μl של פתרון תא (3.5 × 10 5 μl), שנאסף מעוברי עכברים מהונדסים GFP בכל מקום E14 והמשובץ בפיברינוגן וטרומבין 5,6, למוקד של חלל הנגע והממשק מקורי ואת הזנב של נגע עם הזרקה מרובה אתרים, באמצעות micropipette זכוכית משך עם קוטר פנימי של 40 מיקרומטר, מחובר למזרק המילטון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את שכבות שרירים ולסגור את העור עם קליפים פצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הזרקת ניתוח הודעה וטיפול בשלפוחית ​​השתן, כמתואר בצעדים 1.6-1.8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבוע יהיהזלוף הקדמי, להזריק 0.5% Fluorogold (FG, 0.4 מ&quot;ל במים מזוקקים) intraperitoneally לנוירונים preganglionic אוהדים תווית retrogradely בחוט השדרה 7. </li></ol> 2 משדר השרשה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים transmittersin 2% פתרון glutaraldehyde (4 מ&quot;ל של glutaraldhyde 50% ב96 מ&quot;ל מים מזוקקים) לפחות 1 - 2 שעה (עד 10 hr) בטמפרטורת חדר למשך העיקור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף ביסודיות עם משדרים מלוחים 0.9% סטרילי 3 פעמים ולאחסן אותם במלח עד לשימוש (לא יותר מ 1 שעה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמונה שבועות לאחר השתלת E14 תא (לאחר פציעת 10 שבועות), reanesthetize החולדות שעברו SCI עם או בלי השתלת תא וחולדות שליטה נאיביות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את האזור וhindlimbs בטן. נקה את העור עם פולידין. מניחים את החולדה על שולחן הניתוחים במצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את העור על ירך בטן והפנימית הגחון בצד ימין באמצעות סכין # 15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך דרך יםרקמות חיבור ubcutaneous לחשוף החבילה של כלי הירך ועצב באמצעות מספריים קטנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את עורק הירך מהווריד והעצב באמצעות מלקחיים בסדר עם טיפים מעוגלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים שלושה תפרי משי מתחת לעורק ולהפוך את קשר רופף בכל תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 0.1 מ&quot;ל לידוקאין (2%) על פני השטח של העורק לעורר התרחבות לצנתור שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את ספינת distally עם קשר משי קבוע ובלוק זמני proximally על ידי מתיחת תפר משי רופף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקב את העורק באמצעות מחט מעוקלת 20 מד והכנס את קצה צנתר telemeter (באורך של 8 סנטימטר) באמצעות כלי הוספת קטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קטטר rostrally עד 4 סנטימטר ובכך למקם את הקצה באב העורקים החזי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעגן את הצנתר בתוך כלי על ידי קשירת שלושה תפרי משי סביב עורק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך כיס תת עורי לאורך האגף בין קצה הזנב של בית חזה ולאהוא הארכת הגולגולת ביותר של הטווח של הברך עם מספריים קהים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את גוף משדר לכיס והתפר לרקמות חיבור המקיפות את המשדר, כדי למנוע תנועה מוגזמת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את העור עם מס &#39;6 חוט משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק Lactated Ringer של (5 מ&quot;ל), עצירות (0.035 מ&quot;ג / קילוגרם), ואמפיצילין (33 מ&quot;ג / קילוגרם) תת עורי מייד לאחר הניתוח ולשמור על חולדות בחממה חמה עד ער. </li></ol> .3 בסל ממוצע עורקים לחץ (MAP) ודופק הקלטה (HR) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבר ביום אחד לאחר השתלת משדר, לשים את חיה אחת על משטח המקלט ולהפוך את המשדר ב. חכה לי סביב 10 - 15 דקות להרגיל את בעל החיים ולייצב את הפרמטרים לב וכלי דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MAP הרשומה מנוחה ומשאבי אנוש, אשר נגזרים מלחץ דם דופק עם נתוני מערכת רכישה ממוחשבת לשעה לפחות 1. לאסוף נתונים כל 5 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח עלimals ברציפות ולהסיר נקודות נתונים במהלך המופע של התכווצויות נראות לעין. לכל בעל חיים, נקודות נתונים ממוצעת לקבלת ערכים ממוצעים. </li></ol> .4 מעי גס התנפחות-induced האוטונומי דיסרפלקסיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסן את החולדות מורכבים NSC או שליטת SCI במגבת מסופקת עם כדורי מזון בתוך על מקלט משדר. בדרך כלל חולדות יכולות להישאר בשיתוף פעולה במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס קטטר שקצהו בלון לטקס לתוך פי הטבעת למשך כ 2 סנטימטר ולאבטח אותו לזנב עם קלטת 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את המשדר והמתן ל10 - 15 דקות מאפשרות לחץ הדם לחזור לנקודת התחלת preinsertion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום להתנפחות מעי גס על ידי אינפלציה של הכדור הפורח מעל 10 שניות עם 1.4 מ&quot;ל של אוויר 1 דקות לאט, כדי ליצור לחץ של כ 30 מ&quot;מ כספית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרשומה MAP ודקות HR 1 לפני, 1 דקות במהלך, ו1 דקות לאחר התנפחות מעי גס; נתונים לדוגמה בכל 3 שניות במהלך הליך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">בצע 2 - 3 ניסויים לכל בעל חיים עם לפחות 15 התאוששות מרווח דק בין שני ניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים מנת יתר (IP) עם שילוב הרדמה במינון כפול שתואר לעיל, אם אין הערכה נוספת. Perfuse בעלי חיים עם מי מלח ואחריו paraformaldehyde 4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכל בעל חיים, בממוצע הערכים לפני ובמהלך התנפחות מעי גס בהתאמה; לחשב את ההפרש בין נקודת התחלה ומושרה התנפחות MAP ומשאבי אנוש שינויים עבור כל משפט; ממוצע מעל 2 - 3 ניסויים להשגת ערכים ממוצעים. </li></ol> .5 משדר ניקוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המשדר מהגוף של בעלי החיים לאחר הרדמה אבל לפני זלוף. משרים מייד בכוס מלאה במים מזוקקים עד ניקוי; להימנע מייבוש של מכשיר telemeter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את telemeter עד 1% פתרון Terg-A-Zyme ניקוי אנזימטי (מים L / 10 ז) ל24 שעות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Regel קצה צנתר משדר עם מחט 30 מד בוטהמחובר למזרק Regel. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבש היטב את המשדר באמצעות רקמות רכות מקופלות ולאחסן אותו במגש הפלסטיק המקורי. </li></ol>

<ol>
	<li>Krassioukov, A. V., Furlan, J. C., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+dysreflexia+in+acute+spinal+cord+injury:+an+under-recognized+clinical+entity.">Autonomic dysreflexia in acute spinal cord injury: an under-recognized clinical entity.</a> J Neurotrauma. 20, 707-716 (2003).</li><li>Lindan, R., Joiner, E., Freehafer, A. A., Hazel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+clinical+features+of+autonomic+dysreflexia+in+patients+with+spinal+cord+injury.">Incidence and clinical features of autonomic dysreflexia in patients with spinal cord injury.</a> Paraplegia. 18, 285-292 (1980).</li><li>Inskip, J. A., Ramer, L. M., Ramer, M. S., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+assessment+of+animals+with+spinal+cord+injury:+tools,+techniques+and+translation.">Autonomic assessment of animals with spinal cord injury: tools, techniques and translation.</a> Spinal Cord. 47, 2-35 (2009).</li><li>Mayorov, D. N., Adams, M. A., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telemetric+blood+pressure+monitoring+in+conscious+rats+before+and+after+compression+injury+of+spinal+cord.">Telemetric blood pressure monitoring in conscious rats before and after compression injury of spinal cord.</a> J Neurotrauma. 18, 727-736 (2001).</li><li>Hou, S., Tom, V. J., Graham, L., Lu, P., Blesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+restoration+of+cardiovascular+function+by+embryonic+neural+stem+cell+grafts+after+complete+spinal+cord+transection.">Partial restoration of cardiovascular function by embryonic neural stem cell grafts after complete spinal cord transection.</a> J Neurosci. 33, 17138-17149 (2013).</li><li>Lu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-distance+growth+and+connectivity+of+neural+stem+cells+after+severe+spinal+cord+injury.">Long-distance growth and connectivity of neural stem cells after severe spinal cord injury.</a> Cell. 150, 1264-1273 (2012).</li><li>Akhavan, M., Hoang, T. X., Havton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+fluorogold-labeled+neurons+in+long-term+studies.">Improved detection of fluorogold-labeled neurons in long-term studies.</a> J Neurosci Methods. 152, 156-162 (2006).</li><li>Maiorov, D. N., Fehlings, M. G., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+severity+of+spinal+cord+injury+and+abnormalities+in+neurogenic+cardiovascular+control+in+conscious+rats.">Relationship between severity of spinal cord injury and abnormalities in neurogenic cardiovascular control in conscious rats.</a> J Neurotrauma. 15, 365-374 (1998).</li><li>Laird, A. S., Carrive, P., Waite, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+temperature+changes+in+spinal+cord+injured+rats+at+rest+and+during+autonomic+dysreflexia.">Cardiovascular and temperature changes in spinal cord injured rats at rest and during autonomic dysreflexia.</a> J Physiol. 577, 539-548 (2006).</li><li>Phillips, A. A., Krassioukov, A. V., Ainslie, P. N., Warburton, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baroreflex+function+after+spinal+cord+injury.">Baroreflex function after spinal cord injury.</a> J Neurotrauma. 29, 2431-2445 (2012).</li><li>Osborn, J. W., Taylor, R. F., Schramm, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinants+of+arterial+pressure+after+chronic+spinal+transection+in+rats.">Determinants of arterial pressure after chronic spinal transection in rats.</a> Am J Physiol. 256, 666-673 (1989).</li><li>Rabchevsky, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gabapentin+on+muscle+spasticity+and+both+induced+as+well+as+spontaneous+autonomic+dysreflexia+after+complete+spinal+cord+injury.">Effects of gabapentin on muscle spasticity and both induced as well as spontaneous autonomic dysreflexia after complete spinal cord injury.</a> Front Physiol. 3, 329 (2012).</li><li>Hou, S., Lu, P., Blesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+supraspinal+vasomotor+pathways+and+autonomic+dysreflexia+after+spinal+cord+injury+in+F344+rats.">Characterization of supraspinal vasomotor pathways and autonomic dysreflexia after spinal cord injury in F344 rats.</a> Auton Neurosci. 176, 54-63 (2013).</li></ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

באופן מסורתי, צינורית נוזל מילא מוכנסת לתוך העורק ומחוברת למתמר לחץ להקליט פרמטרים לב וכלי דם כתמונת מצב סופני בכל חיה 11. ברציפות לפקח על ביצועי לב וכלי דם במשך זמן רב, מערכות רדיו telemetric מועסקות במעבדות רבות. כלי מעודן יותר זה יכול להקליט את לחץ דם במודע, נע בחופש...

תפקוד לקוי של לב וכלי דם מתרחש לאחר פגיעה בחוט השדרה (SCI) ברמות גבוהות. זה בא לידי ביטוי בלחץ דם והפרעות קצב לב במנוחה, ירידה בלחץ דם orthostatic, תת לחץ דם כתוצאה ממאמץ, ודיסרפלקסיה האוטונומי מאופיינים באפיזודות של יתר לחץ דם וקצב לב איטי בתיווך baroreflex בתגובה לגירויים חושיים מתחת לרמת פגיעת 1,2. תסמינים אלה מפריעים לחיים היום היום של חולי כבל נפגע בעמוד השדרה. לפיכך, חשוב לקבוע כלים יעילים לחקירה של שינויי לב וכלי דם בבעלי חיים עם SCI וטיפולים ניסיוניים. לחקור פונקצית לב וכלי דם בבעלי חיים, כמה טכניקות שמשמשות לניטור לחץ דם וקצב לב. ניתן להקליט פרמטרים לב וכלי דם מרכזי על ידי החדרת צינורית וטלמטריה, ואילו יכולים להיות מועסקים זנב אזיקים לא פולשנית למדידת לחץ דם היקפי 3. בהשוואה לשיטות, טלה אחריש metry היתרון העיקרי שמאפשר הקלטה רציפה בבעלי חיים לנוע בחופשיות וניטור ארוך טווח של פונקצית לב וכלי דם 4. במודלים של בעלי החיים SCI, השינויים בלחץ דם היקפי לאחר גירוי ניסיוני עשויים שלא להיות גדולים מספיק כדי להיות מזוהה. בהתאם לכך, טכניקת ניטור לב מתאימה יש לבחור בעלי חיים עם SCI. במחקר הנוכחי, מערכת רדיו telemetric הוצגה לפקח פונקצית לב וכלי דם בחולדות מבוגרות לאחר חיתוך רוחב חוט השדרה מלא. חולדות קיבלו שתלים של עכברוש syngeneic יום עוברי 14 (E14) תאי גזע עצביים שמקורם בגזע המוח (BS-NSCs) באתר הנגע. חולדות עם פציעה ולא השתלה וחולדות נאיביות, ללא פגע שימשו כבקרה. ההליך של טלמטריה כולל עיקור משדר והשתלה (איור 1), הקלטה של פרמטר לב וכלי דם בסיסי, תגובות מושרה התנפחות מעי גס, וניקוי משדר ואחסון.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:315px;">Table of Specific Materials/Equipment:</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:120px;">Reagents</td>
			<td rowspan="2" style="width:195px;">Company</td>
			<td rowspan="2" style="width:103px;">Catalogue</td>
			<td rowspan="2" style="width:164px;">Comment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="83" rowspan="2" style="height:83px;width:120px;">Fibrinogen (rat)</td>
			<td rowspan="2" style="width:195px;">Sigma</td>
			<td rowspan="2" style="width:103px;">F6755-25MG</td>
			<td rowspan="2" style="width:164px;">2 hr at 37oC to dissovle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:120px;">Thrombin (rat)</td>
			<td rowspan="2" style="width:195px;">Sigma</td>
			<td rowspan="2" style="width:103px;">T5772-100UN</td>
			<td rowspan="2" style="width:164px;">Dissovle in 10 mM CaCl2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">1% Terg-A-Zyme</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">Z273287</td>
			<td style="width:164px;">Enzymatic solution for telemeter cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">Fluorogold</td>
			<td style="width:195px;">Fluorochrome</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;">Dissovle in distilled water and avoid light</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">Telemeter&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (PA-C40)</td>
			<td style="width:195px;">Data Sciences International</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:120px;">Telementric recording and analysis system</td>
			<td style="width:195px;">Data Sciences International</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;">Signal stimulator, Data Exchange Matrix, receivers, Ambient pressure reference monitor</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:120px;">Balloon-tipped catheter</td>
			<td style="width:195px;">Edward Lifesciences</td>
			<td style="width:103px;">111F7-P</td>
			<td style="width:164px;">For colorectal distension</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a radio-telemetric system to monitor cardiovascular function in rats with spinal cord transection and embryonic neural stem cell grafts

פגיעה גבוהה בבית חזה או בצוואר הרחם בחוט השדרה (SCI) יכולה להוביל לבעיות בתפקוד לב וכלי דם. כדי לפקח על פרמטרים לב וכלי דם, השתלנו קטטר מחובר למשדר רדיו לתוך עורק הירך של חולדות שעברו חיתוך רוחב חוט השדרה T4 עם או בלי השתלה של תאי גזע עצבי עובריים המופק מגזע המוח לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק. בהשוואה לשיטות אחרות, כגון החדרת צינורית או זנב שרוול, טלמטריה היא יתרון ברציפות לפקח על לחץ דם וקצב לב בבעלי חיים לנוע בחופשיות. הוא גם מסוגל רכישות נתונים מרובות לטווח ארוך. בחולדות חוט השדרה נפגע, נתוני לב וכלי דם בסיסיים בתנאי בלתי מרוסן ודיסרפלקסיה האוטונומי בתגובה להתנפחות מעי גס נרשמו בהצלחה. בנוסף, ניתן להשוות פרמטרים לב וכלי דם לפני ואחרי SCI באותו החולדה אם משדר הוא מושתל לפני חיתוך רוחב חוט השדרה. מגבלה אחת של telemet תארהליך ר&quot;י הוא שההשתלה בעורק הירך עשויה להשפיע על אספקת הדם לhindlimb ipsilateral.

שימוש בטכניקת טלמטריה שתוארה לעיל, הקלטנו בהצלחה פרמטרים לב וכלי דם בבעלי חיים כבל נפצע בעמוד השדרה. בבעלי חיים עם SCI לבד, MAP הופחת באופן משמעותי ואילו HR גדל לעומת בעלי חיים תמימים, עולים בקנה אחד עם דיווחים קודמים 9. בבעלי חיים עם BS-NSC השתלה, MAP ומשאבי אנוש פנה רמות ...

Watch this Scientific Journal Video about A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts at JoVE.com

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

אנו מציגים פרוטוקול לשימוש במערכת רדיו telemetric להקליט פרמטרים לב וכלי דם בחולדות חוט השדרה T4 transected שמונה שבועות לאחר תאי גזע עצביים בגזע מוח העוברי השתלה לאתר הנגע. טלמטריה היא טכניקה מתקדמת לאבחון תפקוד לב וכלי דם אצל חולדות שנפגעו נעו בחופשיות מודעת חוט השדרה באופן מדויק.

מערכת רדיו-telemetric לפקח פונקצית לב וכלי דם אצל חולדות עם חוט השדרה חיתוך רוחב ועוברי גזע עצבי שתלי סלולארי

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

a-radio-telemetric-system-to-monitor-cardiovascular-function-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

10.4K Views.  Drexel University College of Medicine.  אנו מציגים פרוטוקול לשימוש במערכת רדיו telemetric להקליט פרמטרים לב וכלי דם בחולדות חוט השדרה T4 transected שמונה שבועות לאחר תאי גזע עצביים בגזע מוח העוברי השתלה לאתר הנגע. טלמטריה היא טכניקה מתקדמת לאבחון תפקוד לב וכלי דם אצל חולדות שנפגעו נעו בחופ...

Video: A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT 2000

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of the panoply of paracrine factors that it secretes, the endothelium regulates the contractile and proliferative state of the underlying vascular smooth muscle, as well as the interaction of the vessel wall with circulating blood elements. Because of its central role in mediating vessel tone and growth, its position as gateway to circulating immune cells, and its local regulation of hemostasis and coagulation, the the properly functioning endothelium is the key to cardiovascular health. Conversely, the earliest disorder in most vascular diseases is endothelial dysfunction.
In the arterial circulation, the healthy endothelium generally exerts a vasodilator influence on the vascular smooth muscle. There are a number of methods to assess endothelial vasodilator function. The Endo-PAT 2000 is a new device that is used to assess endothelial vasodilator function in a rapid and non-invasive fashion. Unlike the commonly used technique of duplex ultra-sonography to assess flow-mediated vasodilation, it is totally non-operator-dependent, and the equipment is an order of magnitude less expensive. The device records endothelium-mediated changes in the digital pulse waveform known as the PAT ( peripheral Arterial Tone) signal, measured with a pair of novel modified plethysmographic probes situated on the finger index of each hand. Endothelium-mediated changes in the PAT signal are elicited by creating a downstream hyperemic response. Hyperemia is induced by occluding blood flow through the brachial artery for 5 minutes using an inflatable cuff on one hand. The response to reactive hyperemia is calculated automatically by the system. A PAT ratio is created using the post and pre occlusion values. These values are normalized to measurements from the contra-lateral arm, which serves as control for non-endothelial dependent systemic effects. Most notably, this normalization controls for fluctuations in sympathetic nerve outflow that may induce changes in peripheral arterial tone that are superimposed on the hyperemic response.
In this video we demonstrate how to use the Endo-PAT 2000 to perform a clinically relevant assessment of endothelial vasodilator function.

A noninvasive procedure to assess endothelial function is demonstrated using the Endo-PAT 2000.

הערכת תפקוד האנדותל vasodilator עם 2000 Endo-PAT

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of ...

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory testing in rat SCI models is needed. However, until recently, no single testing approach had been validated for SCI so that standardized methods have not been implemented across labs. Additionally, available testing methods could not be implemented acutely or when severe motor impairments existed, preventing studies of the development of SCI-induced allodynia3. Here we present two validated sensory testing methods using von Frey Hair (VFH) monofilaments which quantify changes in tactile sensory thresholds after SCI4-5. One test is the well-established Up-Down test which demonstrates high sensitivity and specificity across different SCI severities when tested chronically5. The other test is a newly-developed dorsal VFH test that can be applied acutely after SCI when allodynia develops, prior to motor recovery4-5. Each VFH monofilament applies a calibrated force when touched to the skin of the hind paw until it bends. In the up-down method, alternating VFHs of higher or lower forces are used on the plantar L5 dermatome to delineate flexor withdrawal thresholds. Successively higher forces are applied until withdrawal occurs then lower force VFHs are used until withdrawal ceases. The tactile threshold reflects the force required to elicit withdrawal in 50% of the stimuli. For the new test, each VFH is applied to the dorsal L5 dermatome of the paw while the rat is supported by the examiner. The VFH stimulation occurs in ascending order of force until at least 2 of 3 applications at a given force produces paw withdrawal. Tactile sensory threshold is the lowest force to elicit withdrawal 66% of the time. Acclimation, testing and scoring procedures are described. Aberrant trials that require a retest and typical trials are defined. Animal use was approved by Ohio State University Animal Care and Use Committee.

We describe two tactile sensory testing methods for acute or chronic periods of spinal cord injury in rats. These validated procedures can detect the development and maintenance of allodynia-like sensations.

אקוטי וכרוני בדיקה חושי טקטילי לאחר פגיעה בחוט השדרה של חולדות

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is described to obtain a consistent model of severe SCI. Use of a stereotactic frame and computer controlled impactor allows for creation of reproducible injury. Hypothermia and urinary tract infection pose significant challenges in the post-operative period. Careful monitoring of animals with daily weight recording and bladder expression allows for early detection of post-operative complications. The functional results of this contusion model are equivalent to transection models. The contusion model can be utilized to evaluate the efficacy of both neuroprotective and neuroregenerative approaches.

A contusion model of severe spinal cord injury is described. Detailed pre-operative, operative and post-operative steps are described to obtain a consistent model.

דגם חבורה של פגיעה בחוט השדרה חמורה בחולדות

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Synergetic Use of Neural Precursor Cells and Self-assembling Peptides in Experimental Cervical Spinal Cord Injury

Spinal cord injuries (SCI) cause serious neurological impairment and psychological, economic, and social consequences for patients and their families. Clinically, more than 50% of SCI affect the cervical spine1. As a consequence of the primary injury, a cascade of secondary mechanisms including inflammation, apoptosis, and demyelination occur finally leading to tissue scarring and development of intramedullary cavities2,3. Both represent physical and chemical barriers to cell transplantation, integration, and regeneration. Therefore, shaping the inhibitory environment and bridging cavities to create a supportive milieu for cell transplantation and regeneration is a promising therapeutic target4. Here, a contusion/compression model of cervical SCI using an aneurysm clip is described. This model is more clinically relevant than other experimental models, since complete transection or ruptures of the cord are rare. Also in comparison to the weight drop model, which in particular damage the dorsum columns, circumferential compression of the spinal cord appears advantageous. Clip closing force and duration can be adjusted to achieve different injury severity. A ring spring facilitates precise calibration and constancy of clip force. Under physiological conditions, synthetic self-assembling peptides (SAP) self-assemble into nanofibers and thus, are appealing for application in SCI5. They can be injected directly into the lesion minimizing damage to the cord. SAPs are biocompatible structures erecting scaffolds to bridge intramedullary cavities and thus, equip the damaged cord for regenerative treatments. K2(QL)6K2 (QL6) is a novel SAP introduced by Dong et al.6 In comparison to other peptides, QL6 self-assembles into &#946;-sheets at neutral pH6.14 days after SCI, after the acute stage, SAPs are injected into the center of the lesion and neural precursor cells (NPC) are injected into adjacent dorsal columns. In order to support cell survival, transplantation is combined with continuous subdural administration of growth factors by osmotic micro pumps for 7 days.

Treating cervical spinal cord injury with both self-assembling peptides (SAP) and neural precursor cells (NPC), together with growth factors, is a promising approach to promote regeneration and recovery. A contusion/compression aneurysm clip rat model of cervical SCI and combined treatment involving SAP injection and NPC transplantation is established.

שימוש סינרגטי של תאים עצביים מבשר ופפטידים עצמי הרכבה בפגיעה בחוט השדרה הניסויית צוואר הרחם

Spinal cord injuries (SCI) cause serious neurological impairment and psychological, economic, and social consequences for patients and their families. ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can be used both to investigate the biological responses to injury and to test potential therapies. Contusion or compression injury delivered to the surgically exposed spinal cord are the most widely used models of the pathology. In this report the experimental contusion is performed by using the Infinite Horizon (IH) Impactor device, which allows the creation of a reproducible injury animal model through definition of specific injury parameters. Stem cell transplantation is commonly considered a potentially useful strategy for curing this debilitating condition. Numerous studies have evaluated the effects of transplanting a variety of stem cells. Here we demonstrate an adapted method for spinal cord injury followed by tail vein injection of cells in CD1 mice. In short, we provide procedures for: i) cell labeling with a vital tracer, ii) pre-operative care of mice, iii) execution of a contusive spinal cord injury, and iv) intravenous administration of post mortem neural precursors. This contusion model can be utilized to evaluate the efficacy and safety of stem cell transplantation in a regenerative medicine approach.

Spinal cord injury is a traumatic condition that causes severe morbidity and high mortality. In this work we describe in detail a contusion model of spinal cord injury in mice followed by a transplantation of neural stem cells.

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Photothrombosis-induced Focal Ischemia as a Model of Spinal Cord Injury in Mice

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) below the site of injury. The secondary ischemia that develops following the initial mechanical insult is a serious complication of the SCI and severely impairs the function and viability of surviving neuronal and non-neuronal cells in the SC. In addition, ischemia is also responsible for the growth of lesion during chronic phase of injury and interferes with the cellular repair and healing processes. Thus there is a need to develop a spinal cord ischemia model for studying the mechanisms of ischemia-induced pathology. Focal ischemia induced by photothrombosis (PT) is a minimally invasive and very well established procedure used to investigate the pathology of ischemia-induced cell death in the brain. Here, we describe the use of PT to induce an ischemic lesion in the spinal cord of mice. Following retro-orbital sinus injection of Rose Bengal, the posterior spinal vein and other capillaries on the dorsal surface of SC were irradiated with a green light resulting in the formation of a thrombus and thus ischemia in the affected region. Results from histology and immunochemistry studies show that PT-induced ischemia caused spinal cord infarction, loss of neurons and reactive gliosis. Using this technique a highly reproducible and relatively easy model of SCI in mice can be achieved that would serve the purpose of scientific investigations into the mechanisms of ischemia induced cell death as well as the efficacy of neuroprotective drugs. This model will also allow exploration of the pathological changes that occur following SCI in live mice like axonal degeneration and regeneration, neuronal and astrocytic Ca2+ signaling using two-photon microscopy.

Photothrombosis is a minimally invasive and highly reproducible procedure to induce focal ischemia in the spinal cord and serves as a model of spinal cord injury in mice.

Photothrombosis-induced איסכמיה מיקוד כדגם של חוט השדרה פגיעה בעכברים

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

וריד ביון דגם: מודל מתאים ללמוד patency מעקף

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues contributes to type 2 diabetes mellitus (T2DM) development and appetite regulation in the hypothalamus. Chemokine CCL5 and C-C chemokine receptor type 5 (CCR5) levels have been suggested to mediate arteriosclerosis and glucose intolerance in type 2 diabetes mellitus (T2DM). In addition, CCL5 plays a neuroendocrine role in the hypothalamus by regulating food intake and body temperature, thus, prompting us to investigate its function in hypothalamic insulin signaling and the regulation of peripheral glucose metabolism.
The micro-osmotic pump brain infusion system is a quick and precise way to manipulate CCL5 function and study its effect in the brain. It also provides a convenient alternative approach to generating a transgenic knockout animal. In this system, CCL5 signaling was blocked by intracerebroventricular (ICV) infusion of its antagonist, MetCCL5, using a micro-osmotic pump. The peripheral glucose metabolism and insulin responsiveness was detected by the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT). Insulin signaling activity was then analyzed by protein blot from tissue samples derived from the animals.
After 7-14 days of MetCCL5 infusion, the glucose metabolism and insulin responsiveness was impaired in mice, as seen in the results of the OGTT and ITT. The IRS-1 serine302 phosphorylation was increased and the Akt activity was reduced in mice hypothalamic neurons following CCL5 inhibition. Altogether, our data suggest that blocking CCL5 in the mouse brain increases the phosphorylation of IRS-1 S302 and interrupts hypothalamic insulin signaling, leading to a decrease in insulin function in peripheral tissues as well as the impairment of glucose metabolism.

This protocol studies the role of chemokine (C-C motif) ligand 5 (CCL5) in the hypothalamus by delivering an antagonist, MetCCL5, into the mouse brain using a micro-osmotic pump brain infusion system. This transient inhibition of CCL5 activity interrupted hypothalamic insulin signaling, leading to glucose intolerance and peripheral systemic insulin sensitivity.

לומדים את האות ההיפותלמוס אינסולין סובלנות גלוקוז היקפי עם מערכת עירוי רציף סמים לתוך המוח העכבר

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...