We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

כל הניסויים אושרו על ידי ועדת המחקר האתית של KU Leuven והיו בהתאם קפדן עם הקהילות האירופיות הנחיית המועצה של 22 ספטמבר 2010 (2010/63 / איחוד אירופי) ועם החקיקה הבלגית (KB של 29 מאי 2013). כל מאמץ אפשרי נעשה כדי למזער את הסבל של בעלי חיים ולצמצם את מספרם של בעלי החיים. .1 בעלי החיים טיפול וחומרי הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם זריקת intraperitoneal של תערובת של קטמין הידרוכלוריד (75 מ&quot;ג / מ&quot;ל) וhydrochloride medetomidine (1 מ&quot;ג / קילוגרם) בתמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הרפלקסים ידי צובט את קצות האצבעות עם מלקחיים כדי להבטיח את העכבר הוא מסומם לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 70% אתנול לחיטוי העפעפיים והאזור שמסביב לעין באמצעות קצה כותנה. בדוק את רפלקס העפעף כדי להעריך את מידת ההרגעה בנוסף. </li></ol> 2 הסרת עין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא בעלי החיים שוכנות ובשטוח, יבשמשטח חלק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מלקחיים עם קצה משונן (גודל העדיף טיפ: 0.5 x 0.4 מ&quot;מ) מעוקל,. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות על גבי canthus (פינה של העין) עם המלקחיים עד גלגל העין היא עקור מהשקע ועצב הראייה הוא נגיש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדריך המלקחיים מאחורי העין. לחץ והחזק את עצב הראייה בתקיפות, רצוי עם תחילת העקומה ולא את קצה קצהו של המלקחיים. זה יעזור להרים את העולם מהשקע ומהדק את עצב ראייה המלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות תנועות מעגליות עם היד האוחזת במלקחיים בכיוון עם ההתנגדות לפחות בזמן שהעכבר נשאר על המשטח השטוח. העכבר יהיה נדנדה על פני השטח בהתאם לכיוון של תנועת הידיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע פעולה זו במהירות הולכת וגוברת בהדרגה עד לעצב הראייה מכווץ בשני (בדרך כלל בין 7 עד 15 תנועות סיבוביות, כ חצי לסיבוב מלא אחד לשנייה). לפיכך, גלגל העין המנותק היאהוסר. </li></ol> טיפול .3 לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של דימום (נדיר), למלא את המסלול עם להקריש צמיג וסוכן עוצר דמום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את ההרדמה על ידי הזרקת 1 מ&quot;ג / ק&quot;ג atipamezol hydrochloride מלוחים intraperitoneally. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל 1 מ&quot;ג / ק&quot;ג Meloxicam intraperitoneally כל שעה 24 כדי להקל על כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה עין לעין שנותרה על מנת למנוע התייבשות של הקרנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו החיה להתאושש על צלחת חימום או לעטוף את החיה בחומר בידוד בכלוב נפרד כדי לשלוט בטמפרטורת גוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את המשקל של העכבר בכל יום לפחות 2 ימים. ירידה במשקל של יכולה להצביע על סבל ובמקרה הזה, להמשיך את טיפול Meloxicam עד שהחיה הוא התאושש באופן מלא. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

כדי לבצע אנוקלאציה מוצלחת על פי השיטה שלנו, השלבים הקריטיים ביותר שיש לשקול הם: 1) שימוש במלקחיים עם קצה מעוגל ומשונן בגודל המתאים; 2) ביצוע אנוקלאציה על משטח חלק ויבש; ו 3) נהיגה במהירות מופרזת בהדרגה עד התנועות הסיבוביות בכיוון עם החיכוך לפחות. לתוצאה אפקטיבית הוא חיוני לשימוש במלקחיים מתאימים מאופיינים בקצה מעוגל ומשונן (גודל קצה העדיף: עכבר: 0.5 x 0.4 מ&quot;מ; חולדה: 2.15 x 1.3 מ&quot;מ). העקמומיות מאפשרת גישה קלה לעצב הראייה לאחר עקירת גלגל העין ויש צורך ליד המיקום נכון בעת ​​ביצוע התנועות מעגליות. טיפים חלקים אינם מומלצים מכיוון שהם חסרים את האחיזה ההכרחית כאשר מחזיקים את עצב הראייה. כישלון להחזיק את עצב הראייה כראוי במהלך התנועות הסיבוביות תוצאות בקרע של עורק העיניים, ניתוק עני של העין ושחזור עני ומכאן.לכן מומלץ לאימון ראשון בטכניקה זו על בעלי חיים מורדמים לאופטימיזציה של המלקחיים טיפול על מנת להבטיח את רווחת בעלי חיים מקסימלי פעם יישום שיטת in vivo. אנוקלאציה עין המוצלחת לאחרונה גם בוצעה בעכברים במעבדה שלנו משתמשת באותה הטכניקה, פרט להפיכת הגוף של בעלי החיים באופן ידני ושמירה נייחת מלקחיים. מגבלה אחת של הטכניקה היא שזה יכול לגרום נזק לרשתית. לכן שיטה זו היא פחות מתאימה לאיסוף רשתיות לבצע היסטולוגיה 5. יתר על כן, השיטה שלנו היא מוגבל לפרסם גילאי עין פתיחה מאז גלגל העין צריכה להיות עקורה מהשקע מבלי להסיר או חיתוך העפעפיים. אנוקלאציה עין במינים שונים, ביניהם מכרסמים, מבוצעת באופן שוטף תוך שימוש בשיטות חלופיות, אשר לעתים קרובות כרוכה בהסרה של העפעפיים וחיתוך עצב הראייה 18,23-25. metho אלהds נוטה להיות פולשנית יותר ויש להם עקומה למידה גבוהה יותר מאשר הטכניקה המתוארת כאן. ללא צורך בהסרה או תפירת העפעפיים, זמן ההחלמה לאחר ניתוח הוא ממוזער, וכתוצאה מכך לרווחת בעלי חיים גבוהה יותר ותוצאות לשחזור יותר.

הסרת עין ובכך באופן בלתי הפיך בהרס המשטח החושי קולט (רשתית), מטיל אובדן ניכר של קלט חושי לאורך המסלול החזותי. מודל אנוקלאציה במערכת הראייה לנוער ומבוגרים הוכיח להיות יקר בהבנת ההתפתחות, הפלסטיות והתפקוד של מרכזים חזותיים השונים 1-4. השלכות מולקולריות, תאיות ופיזיולוגיות של החסך החושי הזה יכול לספק תובנות על אופן בי פיתוח מוסדר וכיצד הוקם מעגלים בקליפת המוח להתמודד ולשנות את המבנה והתפקוד שלהם בתגובה לשינוי נרחב כזה בניסיון. שיטות שונות של קיפוח חזותי קיימות ולכולם יש יתרונות הספציפיים שלהם במחקר הקשור לחזון. לגידול כהה דוגמא ספציפית מבטל חזותי מונע פעילות עדיין זה לא משפיע על פעילות הרשתית הספונטנית. visua באופן דומה, תפרי מכסה או רטיות להסיר את הדוגמתקלט l מבלי להפריע פעילות ספונטנית אך הם מאפשרים חדיר אור מפוזר דרך עיניו הסגורות. שיטות אלה הן הפיכים והוכחו להיות בעל ערך בהבנת תפקידו של מתאם חזון ורמה נמוכה בדוגמת תשומות משקפת בפיסול מעגלים בקליפת המוח במהלך ההתפתחות 6-8. במחקר גלאוקומה, המודל למעוך עצב הראייה בבעלי חיים מבוגרים כבר בשימוש נרחב משום שהוא קובע אובדן הדרגתי של תשומות תא הגנגליון ברשתית, המהוות את עצב הראייה 9,10. מצד השני, אנוקלאציה, בו העין ובכך הרשתית נמחקה לחלוטין ומייד, היא הבחירה המתאימה של קיפוח כאשר המטרה היא להסיר את החזון שני ספונטני ובלתי הפיך בדוגמת בבת אחת. זה גם גורם לחוסר איזון בפעילות התוך עיני חזק שיכול לשפר את יחס האות לרעש במחקרי מיפוי פעילות 11,12. השוואת שינויים תפקודיים ומבניים בתגובה לאנוקלאציה עם הOSE לאחר החסך בשיטות דרסטיים פחות כגון תפר מכסה למשל, עשויים גם לחשוף תובנות חדשות על תפקידה של פעילות רשתית ספונטנית בשני סוגים ההומיאוסטטית והסינפטי של פלסטיות. Enucleation מפעיל אובדן של השפעות תזונתיות ביעדי רשתית ישירים. לדוגמא, רמות BDNF הם downregulated באופן משמעותי בגרעין לרוחב הברכיתיים (LGN) וcolliculus מעולה של חולדות enucleated מבוגרות 13. מיני חמצן תגובתי, שמתפקדים כמולקולות שליח לתווך שיפוץ מבני, גם התגלו במבנים קורטיקליים של החולדה הבוגרת מערכת ראייה 14. יתר על כן, microglial והפעלת astroglial פני מבני יעד שונים קורטיקליים חזותיים בעכבר מתרחשים במסגרת זמן ההודעה אנוקלאציה ספציפית של שבוע 15 אחד. יחד, תוצאות deafferentation אופטיות בתגובות קורטיקליים שונות בגליה, הרמה מבנית ומולקולרית. למרות קורטיקליים אלהאפקטים, זה לא בהכרח לסבך השפעות ברמת קליפת המוח 16. פלסטיות ראויה לציון, צלב מודאלית בקליפת המוח, ובכלל זה שינויים באזורים חושיים אחרים הבא לחיזוקו של תשומות שאינן חזותיות לנשללה קליפת הראייה מתרחשת לאחר שתי המשקפת (ME) 3,4,17,18 ומשקף (BE) 1,17 אנוקלאציה. מלבד תרומה למדעי מוח חזותי, אנוקלאציה כסוג של deafferentation יכולה לשמש כדי ללמוד את האיזון בין 20-22 תכונות הגנה עצביות 19 וניווניות של מערכת העצבים המרכזית. הליכים שונים לביצוע אנוקלאציה כבר תוארו בספרות. מתודולוגיות מסוימות לin vivo ME בחולדות ועכברים הן פחות ברורות בשל חתך מיותר של שרירים ורקמות 23-25 ​​מסלולית. פרסומים אחרים כגון Mahajan et al. (2011) 5 מספקים פרוטוקול מפורט באמצעות<html> נתיחה בוטה לאוסף תפוקה גבוהה של עיניים כדי ללמוד את מתאמי גנוטיפ, פנוטיפ, שלאחר המוות צפוי. למטרתם, השיטה נוחה ומהירה. עם זאת, שיטה זו היא פחות מתאימה לאנוקלאציה in vivo, כאשר אחד בוחר ללמוד במסלול החזותי מביא הבא אנוקלאציה (בבעלי חיים), ולא בעין עצמה. בסביבה כזו, הישרדות ההודעה אנוקלאציה-היא בעל חשיבות גבוהה. כמו כן, מינימאלי בנזק vivo ושימור של עצב הראייה ורקמות מסלולית הוא חיובי. כאן, אנו מציגים שיטת אנוקלאציה חלופית, יותר דומה לזה שתואר על ידי פאגה et al (2008) 26, המציע מאפייני יתרון מסוימים:. זה קשור להתאוששות שלאחר ניתוח מהיר ומאופיין בסף למידה נמוך מאוד לחוקרים. באופן כללי, שיטות שונות משלימות בהתאם למוקד של המחקר הבא: מורפולוגיה עין או מחקר מסלול חזותי. ve_content &quot;&gt; לסיכום, אנוקלאציה ניתן ליישם ממחקר חזון כלפי חקירות של פלסטיות ההומיאוסטטית וחוצת מודאלי מוח, מאפייני תגובת גליה, ויציבות האקסון. במאמר דמיין את זה, אנחנו מדגימים שיטה ריאלי ואמינה לin vivo אנוקלאציה עין ב העכבר.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td>
			<td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td>
			<td>BE-V136516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td>
			<td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td>
			<td>BE-V151742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td>
			<td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td>
			<td>BE-V153352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment (Fucithalmic)</td>
			<td>Leo Pharma nv-sa</td>
			<td>BE 144654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps - Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic cotton wool</td>
			<td>Qualiphar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Other hemostatic agents are equally suitable (e.g. Viscostat, #649, Ultradent Products)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

Enucleation או הסרה כירורגית של העין, בדרך כלל, יכול להיחשב כמודל לdeafferentation עצב. הוא מספק כלי רב ערך כדי ללמוד את ההיבטים השונים של, מודאלי חוצי החזותי ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של היונקים 1-4. הנה, אנחנו מדגימים טכניקה אלגנטית ופשוטה להסרת אחד או בשני העיניים בעכבר, אשר קיבלה תוקף בעכברים של 20 ימים ההם עד מבוגרים. בקצרה, מלקחיים מעוקלים חיטוי משמש כדי לצבוט את עצב הראייה מאחורי העין. בהמשך לכך, תנועות סיבוביות מבוצעות כדי להצר את עצב הראייה ולהסיר את גלגל העין. היתרונות של שיטה זו הם שחזור גבוה, מינימאלי ללא דימום, התאוששות שלאחר ניתוח מהירה וסף למידה נמוך מאוד לניסוי. לפיכך, כמות גדולה של בעלי חיים ניתן להשפיע ומעובד עם כמות מינימאלית של מאמץ. הטבע של הטכניקה עשוי לגרום לניזק קל להרשתית במהלך ההליך. תופעת לוואי זו הופכת שיטה זו פחות מתאים לעומת Mahajan et al. (2011) 5 אם המטרה היא לאסוף ולנתח רקמת רשתית. כמו כן, השיטה שלנו היא רק לגילי הודעה מאיירים עיניים (עכבר: P10 - 13 ואילך) מאז גלגל העין צריכה להיות עקורה מהשקע מבלי להסיר את העפעפיים. לאחרונה in vivo טכניקת אנוקלאציה המתוארת בכתב היד הזה כבר מיושם בהצלחה עם שינויים קלים בחולדות ונראית שימושי כדי ללמוד את המסלול החזותי מביא מכרסמים באופן כללי.

איור 1 מדגים את ההסרה המוצלחת של העין באמצעות הפרוטוקול המתואר ומאופיין בהעדר הדימום או כל נזק פיזי נראית לעין לרקמה מסלולית או שקע העין (איורים 1 א, 1 ב &#39;). יתר על כן, יש לו את העין הוסרה קרנית חלקה, דמית העין ודיסק אופטי, מעיד על עולם שלם לחלוטין (תרשים 1C). מאז הפרוטוקול שלנו כולל ההידוק של עצב הראייה מאחורי העין ומפנה מכאניים, עצב הראייה של העין שהוסרה הוא מכווץ בבסיס של הרשתית (1D איור). ביצוע תוצאות ההליך המתואר בעצב ראייה ומסודר ללא כל נזק לאזור במוח שמסביב (איור 1E). אנוקלאציה משקפת, בשילוב עם מיפוי פעילות (איור 2), מאפשרת לשרטט בחדות אזורי הקלט הפונקציונליים או עין ספציפית בvisua הנגדיקליפת l של העכבר 12,27 או עמודות דומיננטיות אפילו עיניות ביונקים מסדר גבוה כמו קופים 28. בניסויים עם עכברים, הסרת אחד (ME) או בשני העיניים (להיות) בשילוב עם גירוי חזותי ממוקד וזיהוי של zif268 רמות ביטוי חלבון mRNA או c-Fos יושם לחשוף הפעלה עצבית אזורית בקליפת המוח הראייתית 12,27 . בניגוד לבקרות מגורה מבחינה ויזואלית (איור 2 א), עכברי BE הראו פעילות בסיסית בראייה כתוצאה מהשלמת חוסר הקלט החזותי (איור 2) הקליפה. ככזה, הגבולות בין חזותי עם שאינה קליפת ראייה (כלומר. קליפה החושית במקטעים נוספים קדמי וקליפת מוח השמיעתית במקטעים נוספים אחורי) נחשפו. תוצאות מעכברי ME עם זמן הישרדות של שבוע דמיינו אזורי קלט מסוימים עין בנגדית קליפת הראייה. שני האזורים מונעים monocularly היו hypoactive וממוקמים Medi<html> אל ורוחב של האזור המשקפת המרכזי (איור 2 ג). <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1 הערכה איכותית של מדינת פוסט אנוקלאציה-של שקע העין, העין הוסרה ועצב הראייה. לאחר הסרת עין עם מלקחיים מעוקלים () אין דימום או נזק הוא ציין בשקע העין (B). עין שהוסרה היא שלמה לחלוטין כפי שמשתקף במראה רגיל של הקרנית ודמה העין (C, D). עצב הראייה הוא מכווץ בדיסק האופטי שבו הוא עוזב את העין (ד &#39;). בדיקה של החלק הגחוני של המוח מגלה עצב חתך נקי אופטי (כוכבית) ולא נגרם נזק ניכר למבנים אחרים (E). ברים סולם בC, D: 1 מ&quot;מ. סרגל קנה מידה בE: 5 מ&quot;מ. : קדמי; L: שמאל; P: אחורי; R: תקין. &quot;Jove_content&quot; FO: לשמור-together.within-page = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig2highres.jpg" width="500" /> איור 2 יחידות משנה פונקציונליות עין קלט ספציפית בעכבר קליפת המוח הראייתית כפי שנחשפו על ידי אנוקלאציה. קווים שחורים ואפורים המחברים את העיניים וקליפת המוח מייצגים את המעבר של מעל afferents רשתית ואזורי קלט הספציפיים עין. פעילות עצבית היא מדמיין על סעיפי העטרה של שליטה (), BE (B), וME עכברים (C) על ידי רדיואקטיביים בכלאה באתר (ISH) לzif268 (בסולם אפור) סביב רמת גבחת -3.40 מ&quot;מ. בבעלי חיים שליטה (), קליפת המוח הראייתית בשני חצי הכדור מבטאת פעילות גבוהה בעקבות גירוי חזותי. כאשר עין אחת או בשני (ים) הושמדה, ירידה ברורה באות הפעילות גלויה במקביל אזורים בקליפת המוח מקופחים. Monocularly enucleated עכברים (C) להראות אזור הגבוה activity באזור המשקפת של החזותית מוקפות אות ירד באזורים המשקפים נגדי לעין שהוסרה הקליפה. סרגל קנה מידה: 2 מ&quot;מ. הודפס מחדש באישור ומאן בריסל et 12 אל.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

הסרת עיניים, המכונות גם אנוקלאציה, מספקת אסטרטגיה שימושית ללמוד היבטים של מודלי חוצי חזותיים,, ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של יונקים שכן הוא גורם בלתי הפיך חלקית (משקפת) או אובדן ראייה (משקפת) מלא. כאן אנו מתארים גישה לשחזור וברורה מאוד לביצוע באנוקלאציה vivo.

שיטה מאוד לשחזור וישיר לביצוע<em&gt; בVivo</em&gt; Ocular Enucleation בעכבר לאחר פתיחת העיניים

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.1K Views.  KU Leuven - University of Leuven.  הסרת עיניים, המכונות גם אנוקלאציה, מספקת אסטרטגיה שימושית ללמוד היבטים של מודלי חוצי חזותיים,, ופלסטיות התפתחותית לאורך מערכת הראייה של יונקים שכן הוא גורם בלתי הפיך חלקית (משקפת) או אובדן ראייה (משקפת) מלא. כאן אנו מתארים גישה לשחזור וברורה...

Video: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

אימות של מודל עכבר לשבש מכלולי LINC באופן ספציפי בתא

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

בידוד סינון של חומצות גרעין: שיטת הפקת DNA פשוטה ומהירה

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a versatile analytical tool for characterizing viscoelastic mechanical properties for a variety of materials ranging from hard (plastic, glass, metal, etc.) surfaces to cells on any substrate. It has been widely used to measure the stiffness of cells, but less frequently used to measure the stiffness of aortas. In this paper, we will describe the procedures for using AFM in contact mode to measure the ex vivo elastic modulus of unloaded mouse arteries. We describe our procedure for isolation of mouse aortas, and then provide detailed information for the AFM analysis. This includes step-by-step instructions for alignment of the laser beam, calibration of the spring constant and deflection sensitivity of the AFM probe, and acquisition of force curves. We also provide a detailed protocol for data analysis of the force curves.

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

We present detailed protocols for isolation of aortas from mouse and measurement of their elastic modulus using atomic force microscopy.

מדידת הקשיחות של<em&gt; Ex Vivo</em&gt; עכבר Aortas באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet infusion is far from ideal and therefore, the omentum is re-emerging as a potentially valuable site for islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and the implantation of the islets to the diabetic recipients. Transplantation to the omentum requires surgical steps that can be better demonstrated visually. Here, the detailed steps for this procedure are presented. Two methods of mixing the isolated islets with hydrogel before placing the mixture into the omental pouch of diabetic mice are described here. Different hydrogels are used for the different conditions. Blood glucose levels of diabetic mouse recipients of syngeneic islets in the omentum were monitored for up to 35 days. Some animals were sacrificed after 14 days to perform immuno-histochemical analysis. This pre-clinical transplantation approach can be used as preliminary data leading up to translation to clinical transplantation.

A method for the omental transplantation of islets in a mouse is introduced. The isolated islets are mixed with hydrogel and the mixture is placed into the omental pouch of a diabetic mouse. Then, the blood glucose is monitored, and immuno-histochemical analysis is performed.

שיטת השתלת איון כדי Omentum העכבר

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to understand the pathophysiology of ocular diseases because of their similarities with human anatomy and physiology. Alterations in the retinal pigment epithelium (RPE), including changes in morphology and function, are common features shared by many ocular disorders. However, successful isolation and culture of primary mouse RPE cells is very challenging. This paper is an updated audiovisual version of the protocol previously published by Fernandez-Godino et al. in 2016 to efficiently isolate and culture primary mouse RPE cells. This method is highly reproducible and results in robust cultures of highly polarized and pigmented RPE monolayers that can be maintained for several weeks on Transwells. This model opens new avenues for the study of the molecular and cellular mechanisms underlying eye diseases. Moreover, it provides a platform to test therapeutic approaches that can be used to treat important eye diseases with unmet medical needs, including inherited retinal disorders and macular degenerations.

This protocol, which was originally reported by Fernandez-Godino et al. in 20161, describes a method to efficiently isolate and culture mouse RPE cells, which form a functional and polarized RPE monolayer within one week on Transwell plates. The procedure takes approximately 3 hours.

ניתוח יעיל ותרבות של תאי אפיתל פיגמנט רשתית העכבר הראשי

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative sparsity of information about C. elegans in its natural context comes from the challenges involved in the identification of the small nematode in nature. Despite these challenges, an increasing focus on the ecology of C. elegans has caused a wealth of new information regarding its life outside of the laboratory. The intensified search for C. elegans in nature has contributed to the discovery of many new Caenorhabditis species and revealed that congeneric nematodes frequently cohabitate in the wild, where they feed on microbial blooms associated with rotting plant material. The identification of new species has also revealed that the androdioecious mating system of males and self-fertilizing hermaphrodites has evolved three times independently within Caenorhabditis. The other two selfing species, C. briggsae and C. tropicalis, share the experimental advantages of C. elegans and have enabled comparative studies into the mechanistic basis of important traits, including self-fertilization. Despite these advances, much remains to be learned about the ecology and natural diversity of these important species. For example, we still lack functional information for many of their genes, which might only be attained through an understanding of their natural ecology. To facilitate ecological research of selfing Caenorhabditis nematodes, we developed a highly scalable method to collect nematodes from the wild. Our method makes use of mobile data collection platforms, cloud-based databases, and the R software environment to enhance researchers&#39; ability to collect nematodes from the wild, record associated ecological data, and identify wild nematodes using molecular barcodes.

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

This protocol can be used to perform large-scale ecological surveys of selfing Caenorhabditis nematodes. The primary advantage of this method is the efficient organization and analysis of ecological and molecular data associated with the nematodes collected from nature.

גישה מדרגית מאוד לביצוע סקרים אקולוגיים של נמטודות קאנורהבדיטיס Selfing

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative ...

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin that is secreted by conjunctival goblet cells (CGCs) onto the ocular surface contributes to multiple ocular surface diseases. The elimination of exogenous sex hormones is essential to obtain consistent results during in vitro study of sex-based differences in CGCs. This paper describes a method to minimize the presence of exogenous hormones in the study of sex-based differences in CGCs while maintaining their physiological function. CGCs from postmortem human donors of both sexes were cultured from pieces of the conjunctiva in RPMI medium with 10% fetal bovine serum (FBS) (referred to as the complete medium) until confluency. Nearly 48 h before the start of the experiments, CGCs were transferred to RPMI medium without phenol red or FBS but with 1% BSA (referred to as phenol-red-free medium). The normal cellular function was studied by measuring the increase in intracellular [Ca2+] ([Ca2+]i) after carbachol (Cch, 1 x 10-4 M) stimulation using fura 2/acetoxymethyl (AM) microscopy. The result shows that CGCs maintained normal function in the phenol-red-free media after 48 h. No significant difference in [Ca2+]i response was observed between phenol red-free RPMI medium and complete medium upon Cch stimulation. Therefore, we recommend using the phenol-red free RPMI medium with 1% BSA to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of CGCs in the study of sex-based differences.

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Phenol red-free/fetal bovine serum-free medium is a better option than advanced RPMI to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of conjunctival goblet cells in the study of sex-based differences.

במבחנה שיטה לחקר הבדלים מבוססי מין בתאי גביע הלחמית

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin ...

מידול וניתוח ניוון הרשתית

LipidUNet-Machine Learning-Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of hexagonal cells located at the back of the eye. It provides nourishment and support to photoreceptors and choroidal capillaries, performs phagocytosis of photoreceptor outer segments (POS), and secretes cytokines in a polarized manner for maintaining the homeostasis of the outer retina. Dysfunctional RPE, caused by mutations, aging, and environmental factors, results in the degeneration of other retinal layers and causes vision loss. A hallmark phenotypic feature of degenerating RPE is intra and sub-cellular lipid-rich deposits. These deposits are a common phenotype across different retinal degenerative diseases. To reproduce the lipid deposit phenotype of monogenic retinal degenerations in vitro, induced pluripotent stem cell-derived RPE (iRPE) was generated from patients&#39; fibroblasts. Cell lines generated from patients with Stargardt and Late-onset retinal degeneration (L-ORD) disease were fed with POS for 7 days to replicate RPE physiological function, which caused POS phagocytosis-induced pathology in these diseases. To generate a model for age-related macular degeneration (AMD), a polygenic disease associated with alternate complement activation, iRPE was challenged with alternate complement anaphylatoxins. The intra and sub-cellular lipid deposits were characterized using Nile Red, boron-dipyrromethene (BODIPY), and apolipoprotein E (APOE). To quantify the density of lipid deposits, a machine learning-based software, LipidUNet, was developed. The software was trained on maximum-intensity projection images of iRPE on culture surfaces. In the future, it will be trained to analyze three-dimensional (3D) images and quantify the volume of lipid droplets. The LipidUNet software will be a valuable resource for discovering drugs that decrease lipid accumulation in disease models.

מחבר זרקור: חשיפת הפתוגנזה של ניוון מקולרי הקשור לגיל וגילוי טיפולים פוטנציאליים 

Degenerative eye diseases that affect the retinal pigment epithelium layer of the eye have monogenic and polygenic origins. Several disease models and a software application, LipidUNet, have been developed to study mechanisms of disease, as well as potential therapeutic interventions.