We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة الأبحاث الأخلاقية من جامعة الكويت لوفين و كان بما يتفق بدقة مع توجيه مجلس الجماعات الأوروبية في 22 سبتمبر 2010 (2010/63 / الاتحاد الأوروبي) ومع التشريع البلجيكي (KB من 29 مايو 2013). تم بذل كل جهد ممكن لتقليل معاناة الحيوانات وتقليل عدد الحيوانات. 1. العلاج والتخدير الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع حقنة داخل الصفاق من خليط من هيدروكلوريد الكيتامين (75 ملغ / مل)، وهيدروكلوريد medetomidine (1 ملغ / كلغ) في المياه المالحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من ردود الفعل من قبل معسر أصابع القدم مع ملقط لضمان ومخدرا الماوس تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 70٪ من الإيثانول لتطهير الجفون والمنطقة المحيطة بالعين باستخدام تلميح القطن. تحقق منعكس الجفن بالإضافة إلى تقييم درجة التخدير. </li></ol> 2. إزالة العين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من يقيم الحيوان على شقة، جافة وسطح أملس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم الملقط مع المنحني، الحافة مسننة (يفضل حجم غيض: 0.5 X 0.4 ملم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط بلطف على لحاظ (زاوية العين) مع ملقط حتى يتم النازحين مقلة العين من مأخذ والعصب البصري قابلة للوصول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه ملقط وراء العين. اضغط مع الاستمرار على العصب البصري بقوة، ويفضل مع بداية منحنى وليس غيض جدا من الملقط. وهذا سوف يساعد على رفع العالم من مأخذ وكبح العصب البصري الكامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل حركات دائرية مع يد تمسك الملقط في الاتجاه مع أقل قدر من المقاومة بينما يبقى الماوس على سطح مستو. سوف الماوس تتأرجح على طول السطح وفقا لاتجاه حركة اليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ هذا الإجراء مع تزايد سرعة تدريجيا حتى يتم مقيدة العصب البصري في اثنين (عادة ما بين 7 إلى 15 حركات دائرية، ما يقرب من نصف إلى واحد بدوره الكامل في الثانية الواحدة). وبالتالي، فإن مقلة العين هي منفصلةإزالتها. </li></ol> العناية 3. بعد المنطوق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة النزيف (نادرة)، وملء المدار مع تخثر لزج وكيل مرقئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عكس تخدير عن طريق حقن 1 ملغ / كغ من هيدروكلوريد atipamezol في المياه المالحة داخل الصفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة 1 ملغ / كغ من ميلوكسيكام البريتونى كل 24 ساعة لتخفيف الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم العين للعين المتبقية لمنع جفاف القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للحيوان استرداد على لوحة التسخين أو التفاف الحيوان في المواد العازلة في قفص منفصل للسيطرة على درجة حرارة الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وزن الماوس كل يوم لمدة 2 أيام على الأقل. فقدان الوزن يمكن أن تشير إلى معاناة وفي هذه الحالة، يستمر العلاج ميلوكسيكام حتى يتم استرداد الحيوان بالكامل. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

لإجراء استئصال ناجحة وفقا لأسلوبنا، الخطوات الأكثر أهمية للنظر هي: 1) باستخدام ملقط مع طرف المنحني ومسننة من الحجم المناسب. 2) إجراء استئصال على سطح أملس وجاف. و3) مسرعة تدريجيا حركات دائرية في الاتجاه مع أقل احتكاك. للحصول على نتائج فعالة من الضروري استخدام ملقط المناسبة التي تتميز تلميح منحنية ومسننة (يفضل حجم غيض: الفأر: 0.5 X 0.4 مم؛ الفئران: 2.15 X 1.3 ملم). انحناء يسمح لسهولة الوصول إلى العصب البصري بعد مقلة العين التشرد وضروري لوضع اليد الصحيح عند أداء حركات دائرية. لا ينصح نصائح السلس لأنها تفتقر إلى قبضة اللازمة عندما عقد العصب البصري. الفشل في عقد العصب البصري بشكل صحيح أثناء حركات دائرية النتائج في تمزق الشريان العيني، وسوء مفرزة من العين وبالتالي ضعف التكاثر.لذا فمن المستحسن أن الممارسة الأولى هذه التقنية على الحيوانات الموت الرحيم لتعظيم الاستفادة من التعامل مع ملقط لضمان الرفق بالحيوان القصوى نقيبا الأسلوب في الجسم الحي. ومؤخرا أيضا تم تنفيذ الناجح استئصال العين في الفئران في المختبر باستخدام نفس التقنية باستثناء تحول جسم الحيوان يدويا وحفظ ثابتة ملقط. واحد الحد من هذه التقنية هو أنه ربما يمكن أن يؤدي إلى تلف شبكية العين. ولهذا الأسلوب هو أقل ملاءمة لجمع شبكية العين لأداء الأنسجة 5. وعلاوة على ذلك، فإن أسلوبنا يقتصر على وظيفة العين فتح العصور منذ مقلة العين يحتاج إلى النازحين من المقبس دون إزالة أو قطع الجفون. استئصال العين في الأنواع المختلفة، بما في ذلك القوارض، يتم إجراء روتيني باستخدام الطرق البديلة، والتي غالبا ما تنطوي على إزالة الجفون وقطع العصب البصري 18،23-25. هذه methoس تميل إلى أن تكون أكثر الغازية ويكون لها منحنى التعلم أعلى من تقنية الموضحة هنا. دون الحاجة إلى إزالة أو خياطة الجفون، يتم تصغير وقت الانتعاش بعد الجراحة، مما أدى إلى ارتفاع الرفق بالحيوان والنتائج أكثر استنساخه.

إزالة العين وبالتالي التدمير لا رجعة فيه سطح مستقبلات حسية (الشبكية)، يفرض خسارة كبيرة من المدخلات الحسية على طول المسار البصري. وقد أثبت هذا النموذج في استئصال النظام البصري الأحداث والبالغين لتكون ذات قيمة في فهم التنمية، اللدونة وظيفة المراكز البصرية المختلفة 1-4. يمكن للعواقب الجزيئية الخلوية والفسيولوجية لهذا الحرمان الحسي توفر نظرة ثاقبة كيف تطور طبيعي وينظم وكيف أنشئت الدوائر القشرية مواجهة وتغيير بنيتها ووظيفتها في استجابة لذلك تغيير واسعة النطاق في التجربة. أساليب مختلفة من الحرمان البصرية موجودة وأنهم جميعا لديهم مزايا محددة في البحوث المتعلقة الرؤية. على سبيل المثال تربية الظلام على وجه التحديد يلغي النشاط مدفوعة بصريا إلا أنه لا يؤثر على النشاط العفوي في شبكية العين. visua بالمثل، الغرز غطاء أو بقع العين إزالة منقوشةل إدخال دون إزعاج النشاط العفوي كنها تسمح تغلغل ضوء مشتتة من خلال عيون مغلقة. هذه الأساليب هي انعكاس ولقد ثبت أن تكون ذات قيمة في فهم دور نمط الرؤية وعلى مستوى منخفض ارتباط المدخلات مجهر النحت في الدوائر القشرية خلال تطوير 6-8. في مجال البحوث الزرق، والعصب البصري نموذج سحق في الحيوانات البالغة وقد استخدم على نطاق واسع لأنه يضع الفقدان التدريجي لشبكية العين المدخلات الخلايا العقدية التي تشكل العصب البصري 9،10. على الجهة الأخرى، استئصال، حيث العين وبالتالي تتم إزالة الشبكية تماما وعلى الفور، هو الخيار المناسب من الحرمان عندما يكون الهدف هو إزالة لا رجعة فيه رؤية كل من العفوية ومنقوشة في وقت واحد. أنه يدفع أيضا اختلال النشاط العين القوي التي يمكن أن تعزز إشارة إلى نسبة الضوضاء في دراسات الخرائط النشاط 11،12. مقارنة التغييرات الوظيفية والهيكلية استجابة لاستئصال مع البيئة نظام التشغيل بعد الحرمان بطرق أقل جذرية مثل خياطة غطاء على سبيل المثال، قد فضح أيضا رؤى جديدة في دور النشاط العفوي الشبكية في كلا النوعين التماثل الساكن ومتشابك من اللدونة. استئصال يتسبب في فقدان التأثيرات الغذائية في أهداف الشبكية مباشرة. على سبيل المثال، يتم downregulated مستويات عامل التغذية العصبية بشكل كبير في النواة الركبية الجانبية (LGN) وأكيمة متفوقة من الكبار الفئران منزوعة النواة 13. أنواع الاكسجين التفاعلية، والتي تعمل بوصفها جزيئات رسول التوسط إعادة الهيكلي، تم الكشف أيضا في هياكل تحت القشرية من الفئران الكبار النظام البصري 14. وعلاوة على ذلك، دبيقي وتفعيل astroglial عبر مختلف هياكل تحت القشرية الهدف البصرية في الماوس تحدث في فترة زمنية محددة بعد استئصال أسبوع واحد 15. معا، نتائج إزالة التدفعات الواردة في الاستجابات البصرية تحت القشرية مختلفة في الدبقية، المستوى الهيكلي والجزيئي. على الرغم من هذه تحت القشرةآثار، فإنه لا توريط بالضرورة آثار على مستوى القشرية 16. الجدير بالذكر، اللدونة القشرية عبر الوسائط، بما في ذلك التعديلات في المناطق الحسية الأخرى إلى جانب تعزيز المدخلات غير البصرية إلى القشرة البصرية المحرومة تحدث بعد كل من أحادي (ME) 3،4،17،18 ومجهر (BE) 1،17 استئصال. وبصرف النظر عن المساهمة في علم الأعصاب البصرية، استئصال كنوع من إزالة التدفعات الواردة يمكن استخدامها لدراسة التوازن بين 19 اعصاب والاعصاب 20-22 خصائص الجهاز العصبي المركزي. ووصف إجراءات مختلفة لأداء استئصال بالفعل في الأدب. منهجيات معينة في الجسم الحي ME في الجرذان والفئران هي أقل وضوحا بسبب باجتزاء غير الضروري للعضلات والأنسجة المدارية 23-25. منشورات أخرى مثل ماهاجان وآخرون (2011) 5 توفر بروتوكول مفصل باستخدام<html> تشريح حادة لمجموعة عالية الإنتاجية من العيون لدراسة الارتباط الوراثي، النمط الظاهري، من المحتمل بعد الوفاة. لهذا الغرض، وطريقة مريحة وسريعة. ومع ذلك، وهذه الطريقة أقل ملاءمة لفي الجسم الحي استئصال عندما يختار واحدة لدراسة مسار البصري وارد بعد استئصال (في الحيوانات الحية) بدلا من العين نفسها. في مثل هذا الوضع، وبقاء بعد استئصال هو من أهمية كبيرة. أيضا، الحد الأدنى من الضرر في الجسم الحي والمحافظة على العصب البصري والنسيج المدارية غير مواتية. هنا، نقدم طريقة استئصال بديل، أكثر مماثلة لتلك التي وصفها Faguet وآخرون (2008) 26، التي توفر خصائص معينة مفيدة: أنه يرتبط مع انتعاش سريع بعد الجراحة ويتميز التعلم عتبة منخفضة جدا للباحثين. بشكل عام، أساليب مختلفة مكملة اعتمادا على محور البحوث اللاحقة: مورفولوجيا العين أو المسار البصري البحوث. ve_content &quot;&gt; باختصار، قلع يمكن تطبيقها من البحوث التحقيقات في الرؤية نحو التماثل الساكن وعبر الوسائط اللدونة الدماغ، والخصائص استجابة الدبقية، والاستقرار محور عصبي. في هذه المقالة تصور، علينا أن نظهر وسيلة عملية وموثوق بها لفي الجسم الحي في استئصال العين الماوس.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td>
			<td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td>
			<td>BE-V136516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td>
			<td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td>
			<td>BE-V151742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td>
			<td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td>
			<td>BE-V153352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment (Fucithalmic)</td>
			<td>Leo Pharma nv-sa</td>
			<td>BE 144654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps - Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic cotton wool</td>
			<td>Qualiphar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Other hemostatic agents are equally suitable (e.g. Viscostat, #649, Ultradent Products)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

استئصال أو الاستئصال الجراحي للعين عموما يمكن أن تعتبر نموذجا لإزالة التدفعات الواردة العصبية. أنه يوفر أداة قيمة لدراسة مختلف جوانب البصرية، عبر مشروط واللدونة التنموية إلى جانب النظام البصري الثدييات 1-4. هنا، علينا أن نظهر تقنية أنيقة وبسيطة لإزالة واحدة أو كلتا العينين في الماوس، والتي يتم التحقق من صحة في الفئران من 20 يوما من العمر تصل إلى البالغين. باختصار، يتم استخدام ملقط منحني تطهيرها لكبح العصب البصري وراء العين. بعد ذلك، يتم تنفيذ حركات دائرية لتقليص العصب البصري وإزالة مقلة العين. مزايا هذه التقنية هي استنساخ عالية، والحد الأدنى لعدم وجود نزيف، والانتعاش السريع بعد العمليات الجراحية والتعلم عتبة منخفضة للغاية بالنسبة للمجرب. وبالتالي، كمية كبيرة من الحيوانات يمكن التلاعب بها ومعالجتها مع الحد الأدنى من الجهد. طبيعة تقنية قد يحرض ضرر طفيف لشبكية العين أثناء العملية. هذه الآثار الجانبية يجعل هذه الطريقة مناسبة أقل بالمقارنة مع ماهاجان وآخرون (2011) 5 إذا كان الهدف هو جمع وتحليل أنسجة الشبكية. أيضا، لدينا وسيلة يقتصر على فتح بعد العين الأعمار (الماوس: P10 - 13 فصاعدا) منذ مقلة العين يحتاج إلى النازحين من المقبس دون إزالة الجفون. وقد تم مؤخرا تطبيق في الجسم الحي تقنية استئصال الموضحة في هذه المخطوطة بنجاح مع تعديلات طفيفة في الفئران ويبدو من المفيد دراسة المسار البصري وارد من القوارض بشكل عام.

ويوضح الشكل 1 إزالة ناجحة من العين باستخدام بروتوكول صفها ويتميز عدم وجود نزيف أو أي ضرر مادي واضح للأنسجة المدارية أو محجر العين (أرقام 1A، 1B). وعلاوة على ذلك، العين إزالة القرنية لديها على نحو سلس، المشيمية والأقراص الضوئية، إرشادية لكرة سليمة تماما (الشكل 1C). منذ بروتوكول لدينا يشمل لقط من العصب البصري وراء العين وتحول الميكانيكي، العصب البصري للعين إزالتها هو ضيق في قاعدة شبكية العين (الشكل 1D). أداء نتائج الإجراء الموضح في العصب البصري نظيف قطع دون أي ضرر للمنطقة المحيطة الدماغ (الشكل 1E). استئصال أحادي، إلى جانب رسم الخرائط النشاط (الشكل 2)، ويسمح احد لتحديد بحدة المناطق المدخلات وظيفية أو العين المحددة في المقابل visuaلتر من القشرة الماوس 12،27 أو الأعمدة هيمنة حتى العين في الثدييات العليا مثل القردة 28. في التجارب على الفئران، وإزالة واحد (ME) أو كلتا العينين (BE) جنبا إلى جنب مع التحفيز البصري المستهدفة والكشف عن zif268 مرنا أو ج فو مستويات التعبير البروتين تم تطبيق لكشف تنشيط الخلايا العصبية الإقليمي في القشرة البصرية 12،27 . على النقيض من الضوابط حفز بصريا (الشكل 2A)، أظهرت الفئران BE النشاط القاعدي في القشرة البصرية بسبب استكمال نقص المدخلات البصرية (الشكل 2B). على هذا النحو، تم الكشف عن الحدود بين القشرة البصرية مع غير المرئية (أي القشرة الحسية الجسدية في مزيد من الفروع الأمامية والقشرة السمعية في أكثر أقسام الخلفي). نتائج ME الفئران مع فترة بقاء أسبوع واحد تصور المناطق العين مدخلات معينة في القشرة البصرية المقابل. كانت المنطقتين مدفوعة monocularly قاصر النشاط وتقع ميدي<html> القاعدة والجانبية للمنطقة المركزية مجهر (الشكل 2C). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> الرقم 1. التقييم النوعي للدولة بعد استئصال للمحجر العين، والعين وإزالة العصب البصري. بعد إزالة العين مع ملقط المنحنية (A) لوحظ عدم وجود نزيف أو تلف في محجر العين (B). العين إزالتها سليمة تماما كما يتجلى في مظهر طبيعي من القرنية والمشيمية (C، D). مقيدة العصب البصري في القرص البصري حيث يترك العين (D). فحص الجزء البطني من الدماغ يكشف العصب البصري قطع نظيفة (النجمة) وضرر واضح لهياكل أخرى (E). أشرطة النطاق في C، D: 1 مم. شريط النطاق في E: 5 ملم. A: الأمامية. L: الأيسر. P: الخلفية. R: الحق. &quot;jove_content&quot; FO: المحافظة على together.within الصفحات = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الشكل 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig2highres.jpg" width="500" /> الشكل 2. التقسيمات محددة العين المدخلات وظيفية في الماوس القشرة البصرية كما يتضح من استئصال. الخطوط السوداء والرمادية التي تربط بين العيون والقشرة تمثل المعبر من خلال afferents شبكية العين والمناطق مدخلات محددة. هو تصور النشاط العصبي في أقسام الاكليلية السيطرة (A)، BE (B)، وME (C) الفئران عن طريق المشعة الموقع التهجين (ISH) في لzif268 (مقياس الرمادية) حول مستوى Bregma -3.40 ملم. في الحيوانات التحكم (A)، القشرة البصرية في كل من نصفي الكرة الأرضية تعبر عن النشاط المرتفع التالية التحفيز البصري. عندما يتم اجتثاث أحدهما أو كلاهما العين (ق)، انخفاضا واضحا في إشارة النشاط مرئيا في المناطق القشرية حرم المقابلة. Monocularly منزوعة النواة (C) الفئران تظهر منطقة تشغيل إشارات عاليةvity في منطقة مجهر من القشرة البصرية محاطة إشارة انخفضت في المناطق أحادي المقابل للعين التي تمت إزالتها. شريط النطاق: 2 مم. أعيد طبعها بإذن من بروكسل فان وآخرون 12.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

توفر إزالة العيون، وتسمى أيضا استئصال، استراتيجية مفيدة لدراسة جوانب البصرية، عبر مشروط، واللدونة التنموية على طول الجهاز البصري الثدييات لأنه يدفع رجعة فيه جزئي (أحادي) أو كاملة (مجهر) فقدان البصر. نحن هنا وصف نهج تكرار للغاية ومباشر على أداء في الجسم الحي استئصال.

وهناك طريقة استنساخه للغاية ومباشرة إلى تنفيذ<em&gt; في فيفو</em&gt; قلع العين في الفأر بعد فتح العين

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.1K Views.  KU Leuven - University of Leuven.  توفر إزالة العيون، وتسمى أيضا استئصال، استراتيجية مفيدة لدراسة جوانب البصرية، عبر مشروط، واللدونة التنموية على طول الجهاز البصري الثدييات لأنه يدفع رجعة فيه جزئي (أحادي) أو كاملة (مجهر) فقدان البصر. نحن هنا وصف نهج تكرار للغاية ومباشر على ?...

Video: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing : طريقة بسيطة لالتنميط الجيني دقيقة

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

التحقق من صحة نموذج الفأر لعرقلة ينك مجمعات بطريقة خلية محددة

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

عزل الترشيح من الأحماض النووية: وبسيطة وسريعة استخراج الحمض النووي الطريقة

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a versatile analytical tool for characterizing viscoelastic mechanical properties for a variety of materials ranging from hard (plastic, glass, metal, etc.) surfaces to cells on any substrate. It has been widely used to measure the stiffness of cells, but less frequently used to measure the stiffness of aortas. In this paper, we will describe the procedures for using AFM in contact mode to measure the ex vivo elastic modulus of unloaded mouse arteries. We describe our procedure for isolation of mouse aortas, and then provide detailed information for the AFM analysis. This includes step-by-step instructions for alignment of the laser beam, calibration of the spring constant and deflection sensitivity of the AFM probe, and acquisition of force curves. We also provide a detailed protocol for data analysis of the force curves.

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

We present detailed protocols for isolation of aortas from mouse and measurement of their elastic modulus using atomic force microscopy.

قياس صلابة من<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; ماوس Aortas باستخدام مجهر القوة الذرية

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet infusion is far from ideal and therefore, the omentum is re-emerging as a potentially valuable site for islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and the implantation of the islets to the diabetic recipients. Transplantation to the omentum requires surgical steps that can be better demonstrated visually. Here, the detailed steps for this procedure are presented. Two methods of mixing the isolated islets with hydrogel before placing the mixture into the omental pouch of diabetic mice are described here. Different hydrogels are used for the different conditions. Blood glucose levels of diabetic mouse recipients of syngeneic islets in the omentum were monitored for up to 35 days. Some animals were sacrificed after 14 days to perform immuno-histochemical analysis. This pre-clinical transplantation approach can be used as preliminary data leading up to translation to clinical transplantation.

A method for the omental transplantation of islets in a mouse is introduced. The isolated islets are mixed with hydrogel and the mixture is placed into the omental pouch of a diabetic mouse. Then, the blood glucose is monitored, and immuno-histochemical analysis is performed.

طريقة لزرع جزيرة ليلى إلى الثرب في الماوس

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to understand the pathophysiology of ocular diseases because of their similarities with human anatomy and physiology. Alterations in the retinal pigment epithelium (RPE), including changes in morphology and function, are common features shared by many ocular disorders. However, successful isolation and culture of primary mouse RPE cells is very challenging. This paper is an updated audiovisual version of the protocol previously published by Fernandez-Godino et al. in 2016 to efficiently isolate and culture primary mouse RPE cells. This method is highly reproducible and results in robust cultures of highly polarized and pigmented RPE monolayers that can be maintained for several weeks on Transwells. This model opens new avenues for the study of the molecular and cellular mechanisms underlying eye diseases. Moreover, it provides a platform to test therapeutic approaches that can be used to treat important eye diseases with unmet medical needs, including inherited retinal disorders and macular degenerations.

This protocol, which was originally reported by Fernandez-Godino et al. in 20161, describes a method to efficiently isolate and culture mouse RPE cells, which form a functional and polarized RPE monolayer within one week on Transwell plates. The procedure takes approximately 3 hours.

تشريح فعال وثقافة الخلايا الظهارية صبغة الفأر الأولية

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative sparsity of information about C. elegans in its natural context comes from the challenges involved in the identification of the small nematode in nature. Despite these challenges, an increasing focus on the ecology of C. elegans has caused a wealth of new information regarding its life outside of the laboratory. The intensified search for C. elegans in nature has contributed to the discovery of many new Caenorhabditis species and revealed that congeneric nematodes frequently cohabitate in the wild, where they feed on microbial blooms associated with rotting plant material. The identification of new species has also revealed that the androdioecious mating system of males and self-fertilizing hermaphrodites has evolved three times independently within Caenorhabditis. The other two selfing species, C. briggsae and C. tropicalis, share the experimental advantages of C. elegans and have enabled comparative studies into the mechanistic basis of important traits, including self-fertilization. Despite these advances, much remains to be learned about the ecology and natural diversity of these important species. For example, we still lack functional information for many of their genes, which might only be attained through an understanding of their natural ecology. To facilitate ecological research of selfing Caenorhabditis nematodes, we developed a highly scalable method to collect nematodes from the wild. Our method makes use of mobile data collection platforms, cloud-based databases, and the R software environment to enhance researchers&#39; ability to collect nematodes from the wild, record associated ecological data, and identify wild nematodes using molecular barcodes.

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

This protocol can be used to perform large-scale ecological surveys of selfing Caenorhabditis nematodes. The primary advantage of this method is the efficient organization and analysis of ecological and molecular data associated with the nematodes collected from nature.

نهج قابل للتطوير للغاية لإجراء مسوحات بيئية للديدان الخيطية Caenorhabditis الذاتية

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative ...

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin that is secreted by conjunctival goblet cells (CGCs) onto the ocular surface contributes to multiple ocular surface diseases. The elimination of exogenous sex hormones is essential to obtain consistent results during in vitro study of sex-based differences in CGCs. This paper describes a method to minimize the presence of exogenous hormones in the study of sex-based differences in CGCs while maintaining their physiological function. CGCs from postmortem human donors of both sexes were cultured from pieces of the conjunctiva in RPMI medium with 10% fetal bovine serum (FBS) (referred to as the complete medium) until confluency. Nearly 48 h before the start of the experiments, CGCs were transferred to RPMI medium without phenol red or FBS but with 1% BSA (referred to as phenol-red-free medium). The normal cellular function was studied by measuring the increase in intracellular [Ca2+] ([Ca2+]i) after carbachol (Cch, 1 x 10-4 M) stimulation using fura 2/acetoxymethyl (AM) microscopy. The result shows that CGCs maintained normal function in the phenol-red-free media after 48 h. No significant difference in [Ca2+]i response was observed between phenol red-free RPMI medium and complete medium upon Cch stimulation. Therefore, we recommend using the phenol-red free RPMI medium with 1% BSA to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of CGCs in the study of sex-based differences.

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Phenol red-free/fetal bovine serum-free medium is a better option than advanced RPMI to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of conjunctival goblet cells in the study of sex-based differences.

في المختبر طريقة لدراسة الاختلافات الجنسية في الخلايا الكأسية الملتحمة

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin ...

نمذجة وتحليل تنكس الشبكية

LipidUNet-Machine Learning-Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of hexagonal cells located at the back of the eye. It provides nourishment and support to photoreceptors and choroidal capillaries, performs phagocytosis of photoreceptor outer segments (POS), and secretes cytokines in a polarized manner for maintaining the homeostasis of the outer retina. Dysfunctional RPE, caused by mutations, aging, and environmental factors, results in the degeneration of other retinal layers and causes vision loss. A hallmark phenotypic feature of degenerating RPE is intra and sub-cellular lipid-rich deposits. These deposits are a common phenotype across different retinal degenerative diseases. To reproduce the lipid deposit phenotype of monogenic retinal degenerations in vitro, induced pluripotent stem cell-derived RPE (iRPE) was generated from patients&#39; fibroblasts. Cell lines generated from patients with Stargardt and Late-onset retinal degeneration (L-ORD) disease were fed with POS for 7 days to replicate RPE physiological function, which caused POS phagocytosis-induced pathology in these diseases. To generate a model for age-related macular degeneration (AMD), a polygenic disease associated with alternate complement activation, iRPE was challenged with alternate complement anaphylatoxins. The intra and sub-cellular lipid deposits were characterized using Nile Red, boron-dipyrromethene (BODIPY), and apolipoprotein E (APOE). To quantify the density of lipid deposits, a machine learning-based software, LipidUNet, was developed. The software was trained on maximum-intensity projection images of iRPE on culture surfaces. In the future, it will be trained to analyze three-dimensional (3D) images and quantify the volume of lipid droplets. The LipidUNet software will be a valuable resource for discovering drugs that decrease lipid accumulation in disease models.

تسليط الضوء على المؤلف: كشف التسبب في الضمور البقعي المرتبط بالعمر واكتشاف العلاجات المحتملة 

Degenerative eye diseases that affect the retinal pigment epithelium layer of the eye have monogenic and polygenic origins. Several disease models and a software application, LipidUNet, have been developed to study mechanisms of disease, as well as potential therapeutic interventions.