Saremco Dental Switzerland and Olympus Microsystems France Companies are gratefully acknowledged for their financial support. Saremco Dental is also acknowledged for the generous donation of the dental composites ELS extra low shrinkage. The authors also wish to express their appreciation to Dr Simon Banks from the department of Chemistry (University College London) for his assistance with English revision.

הפרוטוקול מורכב משלושה שלבים עיקריים: השלב הראשון כולל הכנת התמצית מורכבת בתקשורת ובתרבות; החששות השני הראשי פיברובלסטים חניכיים אדם תרבית תאים, הקשר של תאים עם התמציות מורכבות ומכתים תא (HGF); השלב השלישי מורכב מהדמית confocal וניתוח אות הניאון. לרקמות חניכיים לוקחת, הפרוטוקול אושר בעמידה בחקיקה צרפתית, הסכמה מדעת ועדה אתית מקומית. 1. Composite תמציות הכנה השתמש בינוני השתנה Dulbecco נשר (DMEM) כמדיום elution. להבטיח כי היחס בין שטח הפנים של הדגימות והנפח בינוני חילוץ הוא ברמה הנמוכה ביותר של ISO 10993/12 דרישות. ההליך תאר לאחרונה 11 והתווה בקצרה להלן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טופס דגימות כדוריות של מרוכבים שיניים הדפוקים באמצעות אחיזה העידואה. גודל המחזיק 2 מ&quot;מ ברדיוס, שהוא על פי עומק ריפוי מומלץ בדרך כלל בטיפול הקליני בעל פה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן בארות צלחת, כל 1 מיליליטר מכיל של מדיום התרבות (DMEM), עם שילוב של 5% פניצילין / סטרפטומיצין ו 1% מamphotericin אך ללא סרום שור עוברי (FBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות תרופה בתוך מדיום DMEM המכיל גם באמצעות מנורת אור LED עם סנטימטר -2 עוצמת 1,070 mW (λ = 465-475 ננומטר) עבור 40 שניות. ודא שהמרחק בין קצה הריפוי והדגימות הוא בטווח של 0.5 מ&quot;מ. השתמש במצב ריפוי זה כדי לדמות את הקשר הזמני בין שיניים ובמורכבות שיניים הדפוקות. במצב קליני, הקשר מתרחש כאשר המורכב המבריאים ממוקם בחלל הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה דגימות (דגימות מרוכבים DMEM בינוניים) בשעה 37 מעלות צלזיוס מתחת אווירת humidified של 5% CO 2 באוויר. דגירה DMEM בינוני (ללא דגימות מרוכבים) לתאי שליטה באותם תנאים. </li></ol> 2. תרבית תאי HGF, Composite תמציות בדיקה ותאי מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמיחה ותחזוקה של תרביות תאים לבודד fibroblasts חניכיים אנושי מביופסיות רקמת חניכיים בריאה של חולים שצולמו במהלך עקירות אורתודונטי שגרה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטפח fibroblasts חניכיים האנושי בDMEM בנוכחות 10% FBS, 5% פניצילין / סטרפטומיצין ו -1% ב Amphotericin שמרו על תאים על 37 מעלות צלזיוס בחממה במסגרת אווירת humidified של 5% CO 2 באוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים בינוניים מוחלף מדי 3 ימים, ומעבר לכל 5 ימים. לאחר שהגיע confluency, תאי קציר על ידי trypsinization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה תאים ב -90 XG למשך 5 דקות מחדש להשעות אותם במדיום התרבות. ספירת תאים עם דלפק תא כף יד שרביט אוטומטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השעיה תא זרע בצפיפות תאים של 2.5 x 10 4 תאים / מיליליטר במערכת קאמרי שקופיות. לאפשר הדגירה של תאי הלילה בשעה 37 ° C באווירה של 5%. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספת של תמציות מורכבות לתאים בתרבית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המדיה של שתי בארות של חדר שקופיות על ידי 1 מיליליטר של התמציות מורכבות נבדקו (לאחר 24 שעות של דגירה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על שתי בארות הנותרות (תאי בקרה) באותם תנאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה השקופיות קאמריות המכילות ארבע בארות על 37 מעלות צלזיוס בחממה, תחת אווירת humidified של 5% CO 2 באוויר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתמי ניאון השתמש בכתם הרעיל בשידור חי / המת לתאים אוקריוטים על פי הוראות היצרן. הערה: הערכה מספקת assay ניאון שני צבעים מהיר כדי לקבוע יכולת קיום של תאים באוכלוסייה מבוססת על שלמות קרום פלזמה ופעילות אסטראז. הכתם להבחין חי מהתאים שניזוקו זמנית על ידי סימון בירוק-ניאון Calcein-AM ללהצביע על אובדן homodimer-1 (EthD-1) כדי לציין פעילות אסטראז תאית ואדום-ניאון Ethidium של membranשלמות דואר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון עבודה של שני חומרים כימיים כתם המכילים 2 מיקרומטר של Calcein AM ו -4 מיקרומטר EthD-1 (ריכוז סופי דיווח להיות מתאים לצביעת פיברובלסטים). הוסף את הכתם לתאים חסיד התרבית בנוכחותו או היעדריו של התמציות מורכבות נבחרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לאוכלוסיות התאים המוכתמים ישירות ובמהירות ב15 דקות לפחות לאחר מכתים ובאמצעות ההדמיה הזמן לשגות. האם לא צנטריפוגות ולא במחיר המנה עיקרי התאים המוכתמים. </li></ol></li></ol> 3. Confocal זמן פקיעת הדמיה ואיתותי ניתוח המערכת המשמשת מצוידת בארבע יחידות לייזר דיודה ותמונה מוכתמות רב עבור עד ארבעה צבעי ניאון לכל דגימה. המערכת יכולה לבצע תמונת מיפוי (הגדלה 10X) שנותנת סקירה כללית של מדגם הבדיקה על איזה מהם יכולים לנוע להתבונן אזור של עניין (הגדלה 600X). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדמיה זמן לשגות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את יםpecimens (קאמרי השקופית המכילה את הדגימות המוכתמות) בחדר החשוך של החממה המשולבת confocal (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ואווירה לחה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר הלייזרים המתאימים. השתמש במקורות הלייזר שני 473 ננומטר (15 mW) ו559 ננומטר (18 mW) לרגש Calcein וEthD-1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במצב רציף שני לרכוש תמונות באמצעות רצפי קו ללא crosstalk בהדמיה עם שני צבעי הקרינה בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בגלאי עם ספקטרום חדש שפותח כדי להגדיר באופן אוטומטי תנאים בהתאם לצבע פלואורסצנטי ביחידת סריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייעל את רוחבי הפס של הקרינה התגלתה לכל ערוץ למקסימום. השיא של כל הרכישות ברצף כדי להימנע מלדבר צולב פוטנציאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את תנאי ההדמיה המתאימים ביותר לפי בחירת צבע פלואורסצנטי באמצעות תוכנת הרכישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונת מפה שנוצרה באופן אוטומטי מהמרכז בדפוס ספירלה,עם השטח של עניין להיבחר בקלות לבדיקה יסודית יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצב תצפית בחר. בחר עד חמישה סוגים של מצבי תצפית כוללים זמן לשגות, Z-ערימה, ורב-אזור בהתאם לצורך. השתמש בשילוב של Z-ערימה ומצבי הזמן לשגות במחקר הנוכחי ולהשלים במהירות לכידת התמונה, </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות ולהחליף את צבע פלואורסצנטי. לחלופין, כיסוי הניאון ותמונות עם ניגודיות אור אחד עם השני. שים לב תמונה בשידור חי באמצעות הנקודה שנבחרה על מסך המפה השמאלי התחתון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את אזור ההדמיה באמצעות המסגור והתקרבות פונקציות. לחלופין, לעבור בין התצוגות לכל סוג של צבע פלואורסצנטי. הערה: יש מיקרוסקופ שימוש בפרוטוקול זה את אותה פונקציונלי כמו confocal קונבנציונלית גבוהה בעיצוב קומפקטי. מיקרוסקופ מצויד ביעדי מים טבילה הפוכים שבצורה אופטימלית מתאימים להדמית הזמן לשגות יציבה של תאי חיים עם פשוטה חממה מובנה. </li&gt; </ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח אותות וכימות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתוכנת ההדמיה כדי לכמת את אותות הקרינה. השג חמש תמונות המפה במטרה 10X עבור שניהם מדגם ותא השליטה נבדקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השיג 1,024 תמונות רגילות × 1,024 פיקסל, עם גודל פיקסל מיקרומטר 0.231 מיקרומטר × 0.231. אחסון תמונות בפורמט תמונת אולימפוס (OIF) לניתוח אותות. פורמט זה מאפשר לשמור את הגדרות פרמטר שונות ותמונות יחד. השתמש בכלים שונים ניתוח (מדידת פרופיל עוצמה, יחס עוצמה בין שני הערוצים בשימוש). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן תמונות הקרנה מקסימליים כקובצי TIFF 12 סיביות / פיקסל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Preform ניתוחים סטטיסטיים באמצעות תוכנת מפקד R. ניתוח הבדלים באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) עם מבחן חזרה. לדווח על תוצאות סטייה ממוצעת כסטנדרט (± סטיית תקן) ומובהקות בp &lt;0.05. </li></ol></li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests, they have nothing to disclose.

חומר Biocompatibility התנהגות היא פרמטר התנאי ביותר כדי להיות מוערך לפני שימוש רפואי. סטנדרטים בינלאומיים לכסות ISO מכשור הרפואית 10993 33 ובמיוחד חומרים דנטליים ISO 7405 34. היעדר ההשפעות הרעילות לתאים הסמוכים הוא הנורמה המרכזית בהערכת ההתאמה הביולוגית של חומרים אלו. זו הסיבה שהבדיקות רעילות יש חשיבות כה רבה בהערכת ההתאמה ביולוגית חומר שיניים 35-37. ISO הציעה שיטות בדיקה יכולות להיות מבוססות על פעילות חילוף חומרים או שלמות קרום. נקודות קצה שנבחר צריכה לעקוב תנאים ספציפיים לדירוג תופעות לוואי שנגרמו על ידי חומר למבחן על מנת לצמצם את הזמן והעלות של מבחני ההערכה. השיטה הנוכחית של חקירה (ההדמיה הזמן לשגות confocal 3D) היא שלמות קרום מבוססת. נראה ההערכה הרעילה באמצעות נקודת קצה זו להיות סמן חשוב של biocompa התאtibility עם חומרים שנבדקו והיא גם ISO אישרה נקודת סיום. במבחנה בדיקות נועדו לקבוע כיצד מדגם חומרי משפיע על סוג תא מסוים. Assay MTT colorimetric תואר לראשונה על ידי Mossman (1983) כשיטת שימושית למדידה רעילה במבחנה וחלוקה של תאים. מבחן MTT מבוסס על המרה של מלח tetrazolium לגבישי formazan על ידי תאים פעילים, הקובעת את פעילות של המיטוכונדריה. זה יכול להיות מתורגם על ידי שיעור כדאיות 38. גופטה ומשתפי פעולה דיווחו כי מבחן MTT הוא השיטה הנפוצה ביותר למדידה רעילה של רפי מרוכבים. dehydrogenase Succinic ותגובות phosphatase אלקליין יש גם שימשו לאותה המטרה 39. עם זאת, לא יכולים להיות אחרי תאי הגורל עד, מאז assay MTT דורש הריגת התאים בכל נקודת זמן מדידה. על מנת לפקח באופן הדוק יותר את התנהגותם של התאים המוכתמים במחקר הנוכחי, דיתצפית rect של תאי חיים בוצעה, הודות להדמית CLSM זמן לשגות בשילוב עם צביעה קצרה פרוטוקול, ניתוח תמונה אוטומטי וכימות אות ניאון. מרוכבים שיניים באים במגע קרוב עם רקמות פה, ובעיקר תאי חניכיים וpulpal. Fibroblasts יהיה היעד של רכיבים שוחררו מחומרים מרוכבים המשקמים אלה 40-41. יתר על כן, מספר מחקרים דיווחו כי ייתכן שיש לי תאים הונצחו ותאים ראשוניים תגובות תאיות שונות במגע עם ביו-חומרים. תאים ראשוניים נמצאו מתאים יותר כדי להעריך השפעות בביו-חומרי 42. זה מסביר את השימוש בתאי פיברובלסטים חניכיים אנושיים ראשוניים כמודל תא להערכה רעילה של מורכב שיניים שנבדק במחקר הנוכחי. פוטנציאל הרעילות של חומרים מרוכבים שוחררו משיניים נחקר באופן נרחב 43-44. על מנת להעריך tהוא רעיל לתאי פוטנציאל של חומרים, שני תאי מודל קשר יכולים להתבצע. במערכת מודל מגע הישירה החומר המונח ישירות עם תאי מטרה ואילו במערכת הקשר העקיפה, לתקוף תאים נמצאים בקשר עם elutes מתקשורת ביולוגית. ביישומים קליניים ולהליכי שיקום, המורכב דנטאליים במגע עקיף עם רקמות חניכיים. מסיבה זו, פרוטוקול הניסוי הנוכחי התמקד בקשר העקיפה עם המערכת fibroblasts חניכיים האנושית (תאים בנוכחות של התמציות מורכבות נבדקו). כפי שדווח בעבר על ידי דאל ומשתפי פעולה, תגובות רעילות דורגו כחמור (&lt;30%), בינוני (30-60%), קל (60-90%) או שאינם רעיל לתאים (&gt; 90%) המבוססים על הפעילות ביחס ל ערכים שהתקבלו עבור הפקדים 45. לכן, על פי דירוג זה ולאור התוצאות שהושגו (טבלת 1), הצטמקות נוספת נמוכה ELS מורכב יכולה להיות מדורגת כVery מעט ציטוטוקסיות והראה התנהגות דומה לשלוט תאים בתקופת הזמן לשגות כל. שימוש בדיוק באותה שיטת החקירה, התוצאות של מחקר זה יכול להיות בהשוואה לאלו של מחקר שפורסם לאחרונה. מורכב ההתכווצות נמוכה נוספת ELS הפגין התאמה ביולוגית טובה יותר בהשוואה לשני רוכבים שנבדקו בעבר המשמשים לאותה יישום קליני שהוא השיקום הישיר 11. מחקרים נוספים עדיין נדרשים להקמת השוואה מלאה יותר. כאשר מחליטים שcytotoxicity assay לאשר להערכת נקודות קצה ספציפית, חשוב להבין את היתרונות והמגבלות של כל assay. מטרתה העיקרית של ההדמיה confocal היא להשיג ארכיטקטורת 3-D של תאים ואיברים. הטכניקה היא מסוגלת לחשוף לא רק את פני השטח של דגימה, אבל גם מתחת לפני הקרקע שלה. הפרוטוקול המתואר במסמך זה מדגיש את השימוש בהדמית confocal זמן לשגות 3D CLSM, כSensiשיטה מופרזת להעריך במבחנה biocompatibility התנהגות מורכבת שיניים. עם זאת, על מנת להימנע מהמגבלות נתקלו בעבודה זו, תחנות עבודה נגד רעידות יכולות לשמש כדי לאפשר הדמיה זמן לשגות יותר יציבה ויותר; השולחן יכול לבודד את מערכת confocal משמשת מההשפעות המזיקות שתנודות במעבדה עלולות לגרום. יתר על כן, חומרים לשימוש בחלל הפה אידיאלי צריכה להיות לא מזיק לרקמות חניכיים וצריכים להכיל לא חומרים שעלולים לגרום לרעילות מערכתית. בהתאם למתודולוגיה ששמשה והתוצאות שהתקבלו מהמחקר הנוכחי ניתן להסיק שמורכב נבדק (הצטמקות נוספת נמוכה ELS) אינו רעיל לתאים בתנאי הניסוי הנוכחיים. כשיטת CLSM רגישות יכולה לתת שיעוריו הראשוניים של תאי קיימא, אפשר היו לחזות את אפשרויות אחרות כדי להעריך יותר נקודות קצה. בפרט, כפי שכבר דיווחו לאחרונה כי מונומרים מורכבים משפיעים על תאי through מיני חמצן מגיבים (ROS) 46 48, יש צורך בחקירה נוספת על מנת להעריך מתאמים אם בכלל בין cytotoxicity איתות רשתות וייצור ROS. פרוטוקול העתיד יכול להיות שנועד להעריך את ייצור ROS בו זמנית (H 2 O 2 ו / או O 2 - כתמים) ויחס רעיל (מכתים חי / מת) באמצעות ההדמיה CLSM זמן לשגות.

אחד מהסטנדרטים העיקריים צוטטו בהמלצות ISO להגדיר התאמה ביולוגית הוא ההיעדר של רעילות חומר לתאים. מרוכבים שיניים המבוסס על שרף עשויים לשחרר רכיבים ממטריצת השרף, אשר יכול להיות בהתחלה בשל פילמור החלקי, ו / או מאוחר יותר בשל תהליכי פירוק לאורך הזמן 1-4. רכיבים שוחררו אלה באים במגע עם רקמות פה וייתכן שיש לי חסרונות שונים כמו תגובות urticarial והריריות 5, פיתוח של תגובות אלרגיה ורגישות יתר בחולים 6, שינויי מורפולוגיה fibroblasts החניכיים וההפחתה בסוג אני קולגן חלבון 7, דיכוי חיסוני או המרצת מערכת חיסונית בmitogen -driven התפשטות של לימפוציטים מסוג T מטוהר ותאי טחול 8 ונזק ל- DNA בfibroblasts חניכיים האנושי הראשוני, המדגישה 9 פוטנציאל genotoxic. פרמטרים רבים יכולים להשפיע על רעילות מורכבת שיניים כגון צל גomposite, ריפוי האור, את ההרכב הכימי של מונומר השרף, מילוי ואת מידת ההמרה 10 13. מאז פוטנציאל רעיל במבחנה של חומרים ניתן לחזות במצבי vivo ויכול להיות בהשוואה למצבים קליניים על ידי המחקר של כמה נקודות קצה רלוונטיות. Cytotoxicity של חומרים מרוכבים שיניים והרכיבים שלהם נבדקה באופן נרחב באמצעות מערכות תרבית תאי 14- 16. מערכות במבחנה אלו פותחו על מנת להעריך התאמה ביולוגי מרוכבים שיניים בטווח של: צמיחת תאים, ואפופטוזיס התא באמצעות THP-1monocytes כמו תאים 17, רעיל בfibroblasts חניכיים האנושי 18, פוטנציאל דלקתי בHaCaT קרטינוציטים כמו תאים 2, פונקציונלי תא odontoblast- כמו MDPC-23 תאים 19, ירידה של רמות RNA המוחלטת, וגידול משמעותי באינדוקציה של אפופטוזיס על חניכיים אנושיות קרטינוציטים 20 ונזק ל- DNA בתאי חניכיים ופיברובלסטים עיסה 21. מתודולוגיות שונות הציעו לחקור את ההתאמה הביולוגית של חומרים מרוכבים שיניים. מבחני Colorimetric, אשר יש בם צבעי מסוים ומדידות ספיחת אור, להישאר הנפוץ ביותר, בשל הפשטות היחסית שלהם בעלות הנמוכה 22 -26. ניתוח מיקרוסקופית לעומת זאת אור בתדירות גבוהה צורך יותר זמן וכרוך בעלויות גבוהות יותר. עם זאת, יש לי שיטות מיקרוסקופיה אלה כמה יתרונות חשובים. התצפית של מבנה תא נותנת מידע מורחב על השפעות רעילות חוו, ובכך לספק נתונים יותר רלוונטיים ורגישים. בפרט, את ההקדמה של מיקרוסקופיה confocal 27 אפשרה לתצפית של מבנים ביולוגיים עם שיפור רזולוציה צירית בהשוואה למיקרוסקופי הקרינה הדמיה רחב בתחום מסורתי. לפיכך, ההדמיה confocal הפכה לכלי מחקר רב עוצמה בתחומים שונים שלמחקרים רפואיים ומדעיים. בניגוד לשיטות מיקרוסקופיה אלקטרוניות, מיקרוסקופיה confocal הסריקה מציעה את היכולת לחזות מרכיבים שונים של תאים על ידי שילוב של סמני ניאון ספציפיים. רוב קליעים נותבים הספציפיים אלה הם יציבים בסביבה מימית, באופן הגיוני למדידה, זולים ולא רעילים 28, המאפשרים את השימוש בם בקליני, כמו גם מחקרי מעבדה. יתר על כן, ייבוש הדגימה והקיבוע נדרש לניתוח מיקרוסקופי אלקטרוני קונבנציונלי אין צורך להדמית confocal זמן לשגות, רכישה ובכך תלוי זמן אפשר גם על דגימות. בהשוואה להדמיה דו-ממדית, עיקרון ההדמיה confocal מאפשר הדמיה מתחת לפני הקרקע דגימה ושחזור מבנה תלת-ממדים מתמונות העומק שהתקבלו השונות; פרטים אשר תוצאה, יותר מדויקים ומבניים יותר 29, 30. המחקר הנוכחי וידאו הוא דוגמא לשימוש בשלושה ממדי זמן לשגות Confocal סריקת לייזר מיקרוסקופית (3D-CLSM) בשילוב עם תיוג Live / Dead ניאון וכימות אות כשיטת חדשנית. יש הטכניקה שהוצגה במאמר זה יש את היתרון של מה שמאפשר הדמיה הערכה והזמן לשגות רגישה של תאי חיים מבלי לשנות את מבנה התא העריך. אין שלבי הכנה נדרשים לפני ניתוח confocal. בעבר, באותו הצביעה שימשה להערכת הכדאיות של ליבות רקמת עצם ספוגיות בתרבית ביום 31 באך ללא זמן לשגות confocal הבאה. באופן דומה את אותו הליך confocal הזמן לשגות שימש להערכת פעילות בזמן להרוג אריתרומיצין בחיידקים של בוצה משופעלת על פי טיבם גרם 32 באמצעות חיידקים מסוימים לחיות / הכתמה המתה. שיטות אלה הותאמו לאחרונה ומשמשות להשוואת הרעילות של חומרים מרוכבים שיניים בהסתמך על מונומרים methacrylate 11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Olympus Fluoview FV10i&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">O2/Co2 Incubator</td>
			<td style="width:71px;">Pnasonic</td>
			<td style="width:119px;">MCO 5M</td>
			<td>Cell incubation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Live/Dead&#174; Kit</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MP 03224</td>
			<td>Stain&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ELS extra low shrinkage&#174;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Saremco&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Dental composite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D 6046</td>
			<td>Culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1426</td>
			<td>harvesting cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chamber slide system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">14220040X</td>
			<td>Culture chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-001</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">A11-101</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Counter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">00110230TP1</td>
			<td>Cell counting&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal time lapse imaging as an efficient method for the cytocompatibility evaluation of dental composites

זה מקובל כי אינטראקציה בחומר תא מבחנה הוא קריטריון שימושי בהערכת ההתאמה ביולוגית חומר שיניים. מטרת המחקר הייתה להשתמש בהדמית confocal זמן לשגות 3D CLSM להעריך את ההתאמה הביולוגית במבחנה של חומרים מרוכבים שיניים. שיטה זו מספקת אינדיקציה מדויקת ורגישה של שיעור תאי קיימא במגע עם תמציות מורכבות שיניים. הצטמקות נוספת הנמוכה ELS, מורכב שיניים המשמשים לשיקום ישיר, נלקחה כדוגמא. הערכה במבחנה בוצעה על תאים בתרבית ראשוניים אנושי חניכיים פיברובלסטים באמצעות מכתים חי / מת. תמונות התקבלו עם המערכת הביולוגית confocal FV10i ההפוכה וניתחו עם תוכנת FV10-ASW 3.1. ניתוח תמונה הראה רעיל מאוד קל בנוכחות מורכבת נבדק לאחר 5 שעות של הזמן לשגות. ירידה קלה של כדאיות תא הוצגה במגע עם compar התמציות המורכב נבדקעורך לשלוט תאים. הממצאים מדגישים את השימוש בהדמית הזמן לשגות 3D CLSM כשיטה רגישה איכותי וכמותית להעריך את ההתאמה הביולוגית ההתנהגות של חומרים מרוכבים שיניים.

איור 1 הראה סקירה של תאי חיים / המתים המוכתמים בתמונות שהושגו מיפוי (אובייקטיבי 10X) לשליטה ותאים שנחשפו לתמציות נבדקו מרוכבים (הצטמקות נוספת נמוכה ELS). המבנה התל ממדים של התאים יכול להיות דמיין ב600X ההגדלה. ויזואליזציה של תאים שנאספו בחדר הבקרה ושל תאים שנאספו בתא בנוכחות התמציות מורכבות נבדקו מוצגת באיור 2. ההקרנה המקסימלי (60x האובייקטיבי) מציגה את גורלו של אוכלוסיות תאים שנבחרו בתחילת הזמן לשגות (ב 15 דקות) ובסיומה של תקופת הזמן לשגות (5 שעות). חמישים ושבע ערימות של תמונות (סריקת mod xyzt, 39 תמונות לערימות, voxel מעמיק 1.00 מיקרומטר) התקבלו בתקופה זו. ירידה קלה באות הניאון הירוקה ווריאציה קלה מאוד בניאון האדום התקבלו בתאים שנחשפו. אין שונה משמעותי נצפה לשליטהתאים. תאי תמציות נחשפו Composite להניח מורפולוגיה ציר דומה לשליטה בתאים; מורפולוגיה לא שונה בתנאי ניסוי אלה (על אף הירידה הירוקה אות ועליית האות האדומה בנוכחות מורכבת נבדק). ניתוח תמונה בוצע על חמש ערימות תמונה שונות שנבחרו המתאימות לאוכלוסיות תאים שונות מהתמונות שהתקבלו עבור מרוכבים נבדקו בהשוואה לתאי ביקורת שליליות לאות הן ירוקה ואדום. פרופיל העצמה של תאים צבעוניים מתואר באיור 3; האבולוציה האות הירוקה ואדומה של התאים במגע עם מרוכבים נבדקו הייתה דומה לאלה של תאי שליטה. עוצמות פליטת הקרינה calcein וEthD-1 נמדדו על תאי בקרה ועל תאים שנחשפו מורכבים. המדידה נעשתה במרווחי שעה אחת עד חמש שעות. היחס הירוק / אדום הקרינה (המבוסס על עוצמות משולבות של ננומטר 495-515 הירוק ואותות ננומטר אדומים 620-650) חושב בתקופת הזמן לשגות. יחסי הכדאיות לבקרה ותאים שנחשפו לתמציות הצטמקות נוספת נמוכה ELS מוצגים בT מסוגל 1. בנוכחות מורכבת נבדק, אחוז התאים חיים נמצא ירידה קלה מ -100% ל 93.9% לאחר שעה 1 של ליצירת קשר. נצפה הבדל משמעותי בין מרוכבים נבדק והבקרה השלילית (תאים ללא כל תמציות מורכבות) לאחר 5 שעות של תקופת הזמן לשגות המצוינת. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig1highres.jpg" /> איור 1: סקירה כללית של תמונת מיפוי הראה מוכתמת תאים ב10X האובייקטיבי, (א) בתאי בקרה ותאים (ב &#39;) בנוכחות של תמציות מורכבות (הצטמקות נוספת נמוכה ELS) בתחילת תקופת הזמן לשגות (t = 15 דקות). שטחים ירוקים הם תאי חיים ואזורים אדומים הם תאים פגומים. בזה<html> תנאי ניסוי, אין שונה (לשניהם הקרינה הירוקה ואדום) נצפו לתאי חומרים מרוכבים נחשפו בהשוואה לתאי ביקורת שליליות. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig2highres.jpg" /> איור 2: תמונות CLSM ב60x האובייקטיבי של אוכלוסיית תאים מ() חדר בקרה וחדר תמציות מורכבות (ב) בתחילה ובתום תקופת הזמן לשגות חשיפה (אני: 15 דקות ושניות: שעה 5, בהתאמה ). שטחים ירוקים הם תאי חיים ואזורים אדומים הם תאים פגומים. הפנל של התמונות הראה שינוי קל באות העצמה (ירידה קלה באות הירוקה ועלייה קלה מאוד באדום אחד). אין שינויי מורפולוגיה של תאים נצפו בנוכחות של תמציות מורכבות; חושף את התאים נשמרו מורפולוגיה הציר בצורה וfibroblastic כתאי שליטה. gether.within עמודים = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig3highres.jpg" /> איור 3: פרופיל קו של תאים שנצפו במיקרוסקופיה זמן לשגות תאי בקרה (א) (ב) תאי תמציות Composite חשופים, (אני) ב 15 דקות ו( II) בשעה 5 שעות.. אין שונה נראה לעין באבולוציה האות הירוקה בנוכחות מורכבת נבדק קשר זמן המגע. עם זאת, עלייה קלה של האות האדומה נצפתה בנוכחות מורכבת לאחר 5 שעות של מגע. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td rowspan="2"> זמן מגע (שעה) </td><td colspan="5"> כדאיויות תא (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> תאי בקרה </td><td> 100 </td><td> 100 </td><td> 100 &lt;/ Td&gt; <td> 100 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> הצטמקות נוספת נמוכה ELS ® </td><td> 93.9 ± 7 </td><td> 91.3 ± 5 * </td><td> 89.5 ± 3 * </td><td> 87.6 ± 2 * </td><td> 87.7 ± 3 * </td></tr></tbody></table> טבלה 1:. קצב אבולוצית תאי HGF החי לאחר 1, 2, 3, 4 ו -5 שעות של מגע עם תמציות מורכבות כדאיות תא הייתה assayed על ידי צביעה באמצעות ערכת cytotoxicity Live / Dead. הנתונים מראים ערכים ממוצעים ± SD של חמש תמונות ערימות ניתוח. ערכים הם שונים באופן משמעותי מתאי שליטה בp &lt;0.05.

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites at JoVE.com

Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

ההיבט הנחקר ביותר של ההתאמה הביולוגית של חומרים מרוכבים שיניים הוא ההדמיה שלהם הרעילה 3D CLSM זמן לשגות בשילוב עם כימות אות ניאון מאפשרת הערכה רגישה של גורל התא לאורך זמן. ניצול שיטה זו יכול להיות כלי יעיל להערכת cytocompatibility של חומרים מרוכבים שיניים.

ההדמיה confocal זמן הפקיעה הוא אמצעי יעיל להערכת Cytocompatibility מרוכבי שיניים

It is generally accepted that in vitro cell material interaction is a useful criterion in the evaluation of dental material biocompatibility. The ...

confocal-time-lapse-imaging-as-an-efficient-method-for

Research

JoVE Journal

Medicine

13.4K Views.  UMR CNRS 5615, Université Lyon1.  ההיבט הנחקר ביותר של ההתאמה הביולוגית של חומרים מרוכבים שיניים הוא ההדמיה שלהם הרעילה 3D CLSM זמן לשגות בשילוב עם כימות אות ניאון מאפשרת הערכה רגישה של גורל התא לאורך זמן. ניצול שיטה זו יכול להיות כלי יעיל להערכת cytocompatibility של חומרים מרוכבים שי...

Video: Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

הערכה של ספיגת nanoparticle ב גידולים בזמן אמת באמצעות הדמיה Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from different genetically engineered mouse models of breast cancer. For example, time between cell divisions (cell lifetimes), apoptotic cell numbers, evolution of morphological changes, and mechanism of colony formation can be quantified and compared in cells carrying specific genetic lesions. Primary mammary epithelial cell cultures are generated from mammary glands without palpable tumor. Glands are carefully resected with clear separation from adjacent muscle, lymph nodes are removed, and single-cell suspensions of enriched mammary epithelial cells are generated by mincing mammary tissue followed by enzymatic dissociation and filtration. Single-cell suspensions are plated and placed directly under a microscope within an incubator chamber for live-cell imaging. Sixteen 650 &mu;m x 700 &mu;m fields in a 4x4 configuration from each well of a 6-well plate are imaged every 15 min for 5 days. Time-lapse images are examined directly to measure cellular behaviors that can include mechanism and frequency of cell colony formation within the first 24 hr of plating the cells (aggregation versus cell proliferation), incidence of apoptosis, and phasing of morphological changes. Single-cell tracking is used to generate cell fate maps for measurement of individual cell lifetimes and investigation of cell division patterns. Quantitative data are statistically analyzed to assess for significant differences in behavior correlated with specific genetic lesions.

Time-lapse imaging is used to assess behavior of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer risk to determine if there are correlations between specific behavioral parameters and distinct genetic lesions.

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

<em&gt; באוב</emAssay&gt; אפרוח chorioallantoic ממברנה (CAM) כמודל xenograft יעיל של Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

This article presents a rapid and simple method for administering bleomycin directly into the mouse trachea via intubation. Key advantages of this method are that it is highly reproducible, easy to master, and does not require specialized equipment or lengthy recovery times.

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Extended Time-lapse Intravital Imaging of Real-time Multicellular Dynamics in the Tumor Microenvironment

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and metastasis. Multicellular interactions in the tumor microenvironment can lead to transient events including directional tumor cell motility and vascular permeability. Quantification of tumor vascular permeability has frequently used end-point experiments to measure extravasation of vascular dyes. However, due to the transient nature of multicellular interactions and vascular permeability, the kinetics of these dynamic events cannot be discerned. By labeling cells and vasculature with injectable dyes or fluorescent proteins, high-resolution time-lapse intravital microscopy has allowed the direct, real-time visualization of transient events in the tumor microenvironment. Here we describe a method for using multiphoton microscopy to perform extended intravital imaging in live mice to directly visualize multicellular dynamics in the tumor microenvironment. This method details cellular labeling strategies, the surgical preparation of a mammary skin flap, the administration of injectable dyes or proteins by tail vein catheter and the acquisition of time-lapse images. The time-lapse sequences obtained from this method facilitate the visualization and quantitation of the kinetics of cellular events of motility and vascular permeability in the tumor microenvironment.

This protocol describes the use of multiphoton microscopy to perform extended time-lapse imaging of multicellular interactions in real time, in vivo at single cell resolution.

זמן לשגות Extended הדמיה Intravital של Dynamics תאיים בזמן אמת ב microenvironment הגידול

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle screws after spinal surgery, which is a serious concern. To address this problem, diverse types of pedicle screws have been examined to identify those with good fixation strength and osseointegration in spine bone. The porcine spine is a good alternative for the human spine in the evaluation of pedicle screws due to the anatomical size, mechanical characteristics, and cost. Although several studies have reported that pedicle screws are efficient in the porcine model, no study has described detailed protocols for the evaluation of a pedicle screw using the porcine model. Here, we describe a detailed method for evaluating transpedicular screws using an in vivo porcine lumbar spine model. The technical details for anesthesia, spine surgery, and harvest provided here will facilitate with the evaluation of the transpedicular screw fixation model.

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Here, we introduce a method to evaluate transpedicular screws by using an in vivo porcine lumbar spine model.

הרדמה, ניתוח, שיטת הקציר להערכת ברגים transpedicular באמצעות<em&gt; בויבו</em&gt; חור שדרה מותני

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking (TXL) for Myopia

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy include photochemical cross-linking and tissue cross-linking (TXL) methods. Such methods for inducing mechanical tissue property changes are being employed to the cornea in corneal thinning (mechanically weakened) disorders such as keratoconus as well as the sclera in progressive myopia, where thinning and weakening of the posterior sclera occurs and likely contributes to axial elongation. The primary target proteins for such tissue strengthening are fibrillar collagens which constitute the great majority of dry weight proteins in the cornea and sclera. Fortuitously, fibrillar collagens are the main source of second harmonic generation signals in the tissue extracellular space. Therefore, modifications of the collagen proteins, such as those induced through cross-linking therapies, could potentially be detected and quantitated through the use of second harmonic generation microscopy (SHGM). Monitoring SHGM signals through the use of a laser scanning microscopy system coupled with an infrared excitation light source is an exciting modern imaging method that is enjoying widespread usage in the biomedical sciences. Thus, the present study was undertaken in order to evaluate the use of SHGM microscopy as a means to measure induced cross-linking effects in ex vivo rabbit sclera, following an injection of a chemical cross-linking agent into the sub-Tenon&#39;s space (sT), an injection approach that is standard practice for causing ocular anesthesia during ophthalmologic clinical procedures. The chemical cross-linking agent, sodium hydroxymethylglycinate (SMG), is from a class of cosmetic preservatives known as formaldehyde releasing agents (FARs). Scleral changes following reaction with SMG resulted in increases in SHG signals and correlated with shifts in thermal denaturation temperature, a standard method for evaluating induced tissue cross-linking effects.

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia

This protocol describes techniques for evaluating chemical cross-linking of the rabbit sclera using&#160;second harmonic generation imaging and differential scanning calorimetry.

השני דור הרמונית אותות ב הארנב בסקלרה ככלי להערכה של רקמות טיפולית cross-linking של קוצר ראייה (TXL)

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

In vitro Time-lapse Live-Cell Imaging to Explore Cell Migration toward the Organ of Corti

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after co-culture with cochlear epithelium. The organ of Corti was immobilized on a plastic coverslip by pressing a portion of the Reissner's membrane generated during the dissection. MSCs confined by a glass cylinder migrated toward cochlear epithelium when the cylinder was removed. Their predominant localization was observed in the modiolus of the organ of Corti, aligned in a direction similarly to that of the nerve fibers. However, some MSCs were localized in the limbus area and showed a horizontally elongated shape. In addition, migration into the hair cell area was increased, and the morphology of the MSCs changed to various forms after kanamycin treatment. In conclusion, the results of this study indicate that the coculture of MSCs with cochlear epithelium will be useful for the development of therapeutics via cell transplantation and for studies of cell regeneration that can examine various conditions and factors.

In this study, we present a real-time imaging method using confocal microscopy to observe cells moving toward damaged tissue by ex vivo incubation with the cochlear epithelium containing the organ of Corti.

הפריה זמן לשגות הדמיה תא חי כדי לחקור את העברת תאים לכיוון האיבר של קורטי

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, pulpitis or apical periodontitis may develop in the long term. Root canal treatment of teeth with severe PCO and pulpal or periapical pathosis is challenging for general practitioners and even for well-equipped endodontic specialists. To ensure detection of the calcified root canal and avoid excessive loss of tooth structure or root perforation, static navigation using templates ("Guided Endodontics") was introduced a few years ago. The general workflow includes three-dimensional imaging using cone-beam computed tomography (CBCT), a digital surface scan, and superimposition of both in a planning software. This is followed by virtual planning of the access cavity and the design of a template that will guide the drill to the desired target point. To do this, a true-to-scale virtual image of the drill must be placed in a way that the tip of the drill reaches the orifice of the calcified root canal. Once the template has been fabricated using computer-aided design and computer-aided manufacturing (CAD/CAM) or a 3D printer, guided preparation of the access cavity can be performed clinically. For research purposes, a postoperative CBCT image can be used to quantify the accuracy of the access cavity performed. This work aims to present the technique of static guided endodontics from imaging to clinical implementation.

Guided endodontics describes a template-aided approach for access cavity preparation. The procedure requires cone-beam computed tomography and a surface scan to produce a template. An incorporated sleeve guides the drill to the target point. This allows the preparation of minimally invasive endodontic access cavities in calcified teeth.

אנדודונטיה מודרכת: תכנון תלת מימדי והכנת חללי גישה אנדודונטיים בעזרת תבנית

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...