Saremco Dental Switzerland and Olympus Microsystems France Companies are gratefully acknowledged for their financial support. Saremco Dental is also acknowledged for the generous donation of the dental composites ELS extra low shrinkage. The authors also wish to express their appreciation to Dr Simon Banks from the department of Chemistry (University College London) for his assistance with English revision.

Das Protokoll besteht aus drei Hauptschritten: Der erste Schritt umfasst die Herstellung von Composite-Extrakt in Kulturmedien; Der zweite betrifft die primären humanen Gingivafibroblasten (HGF) Zellkultur, der Kontakt der Zellen mit den Verbundextrakten und Zellfärbung; der dritte Schritt besteht in der konfokalen Abbildung und der Fluoreszenzsignalanalyse. Für Zahnfleischgewebe nehmen, wurde das Protokoll in Übereinstimmung mit Französisch Rechtsvorschriften, informierte Zustimmung und lokalen Ethikkommission genehmigt. 1. Composite Auszüge Vorbereitung Verwenden Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) als Elutionsmittel. Sicherzustellen, dass das Verhältnis zwischen der Oberfläche der Proben und dem Volumen des Extraktionsmediums ist auf der untersten Ebene der Anforderungen der ISO 10993/12. Die Vorgehensweise ist kürzlich beschriebenen 11 und skizziert im Folgenden kurz: <ol><li> Bilden kugelförmige Proben des ungehärteten Dentalkomposit mit einem maßgeschneiderten holdäh. Der Halter Größe 2 mm Radius, die in Übereinstimmung mit den allgemein empfohlen Härtungstiefe in der Mund klinischen Behandlung. </li><li> Vorbereitung Plattenvertiefungen, die jeweils 1 ml Kulturmedium (DMEM) mit 5% Mischung von Penicillin / Streptomycin und 1% Amphotericin aber ohne fötales Rinderserum (FBS). </li><li> Cure Proben innerhalb der Vertiefung mit DMEM-Medium mit einem LED-Lichtlampe mit 1070 mW cm -2 Intensität (λ = 465-475 nm) für 40 sec. Sicherzustellen, dass der Abstand zwischen der Spitze und Aushärtung der Proben in dem Bereich von 0,5 mm. Verwenden Sie diesen Modus, um die Härtung temporären Kontakt zwischen Zahn und dem nicht ausgehärteten Zahnverbund simulieren. In klinischen Situation tritt der Kontakt, wenn der Füllungsverbundstoff in der Mundhöhle platziert. </li><li> Proben (Proben Komposite in DMEM-Medium) bei 37 ° C unter befeuchteter Atmosphäre mit 5% CO 2 in Luft. Inkubieren DMEM-Medium (ohne Mischproben) für Kontrollzellen bei den gleichen Bedingungen. </li></ol> 2. HGF Cell Culture, Composite Auszüge Prüf- und Zellen Färbung <ol><li> Wachstum und die Erhaltung von Zellkulturen Isolieren menschlichen Zahnfleisch Fibroblasten von gesunden Zahnfleischgewebebiopsien von Patienten während der Routinekieferorthopädische Extraktionen gemacht. <ol><li> Kultivieren menschlicher gingivalen Fibroblasten in DMEM in Gegenwart von 10% FBS, 5% Penicillin / Streptomycin und 1% Amphotericin B. Pflegen Zellen bei 37 ° C im Brutschrank unter einer befeuchteten Atmosphäre von 5% CO 2 in Luft. </li><li> Geänderte Medium alle 3 Tage, und Passage-Zellen alle 5 Tage. Nach Erreichen der Konfluenz, Ernte Zellen durch Trypsinierung. </li><li> Zentrifugenzellen bei 90 × g für 5 min und resuspendieren sie in dem Kulturmedium. Graf Zelle mit einem Zepter Hand automatisierten Zellzählers. </li><li> Samenzellsuspension mit einer Zelldichte von 2,5 x 10 4 Zellen / ml in einer Kammer Schiebersystem. Ermöglichen die Inkubation der Zellen über Nacht bei 37 ° C in einer Atmosphäre von 5%. </li></ol></li><li> Zugabe von Verbund Extrakte zu den Zellen in Kultur <ol><li> Ersetzen Sie die Medien aus zwei Vertiefungen der Kammer Rutsche von 1 ml der getesteten Verbund Extrakte (nach 24 h Inkubation). </li><li> Pflegen Sie die restlichen beiden Brunnen (Kontrollzellen) in den gleichen Bedingungen. </li><li> Inkubieren der Kammer Folie mit den vier Vertiefungen bei 37 ° C im Brutschrank unter einer befeuchteten Atmosphäre von 5% CO 2 in Luft. </li></ol></li><li> Fluoreszenzfärbung Verwenden Sie den Live / Dead Zytotoxizität Fleck für eukaryotische Zellen gemäß den Anweisungen des Herstellers. HINWEIS: Der Bausatz bietet eine schnelle Zweifarben-Fluoreszenz-Assays, um die Lebensfähigkeit von Zellen in einer Population basierend auf der Plasmamembranintegrität und Esterase-Aktivität zu bestimmen. Der Fleck Live unterscheiden von beschädigten Zellen durch gleichzeitige Markierung mit grünem fluoreszierenden Calcein-AM zu intrazellulären Esteraseaktivität und rot-fluoreszierende Ethidium Homodimer-1 (EthD-1), um anzuzeigen, Verlust von Membran zeigene Integrität. <ol><li> Vorbereiten einer Arbeitslösung der beiden Färbereagenzien, die 2 &amp; mgr; M Calcein AM und 4 uM EthD-1 (Endkonzentration berichtet für Fibroblasten Färbung zu sein). Hinzufügen der Fleck zu den kultivierten adhärenten Zellen in der Anwesenheit oder Abwesenheit der ausgewählten Verbundextrakten. </li><li> Beachten Sie direkt und schnell die gefärbten Zellpopulationen an der mindestens 15 min nach Färbung und durch den Zeitraffer-Bildgebung. Nicht schleudern und nicht die gefärbten Zellen fixe. </li></ol></li></ol> 3. Konfokale Zeitraffer Bildgebung und Signalanalyse Das verwendete System ist mit vier Diodenlasereinheiten und einer Mehr gefärbten Bildes bis zu vier Fluoreszenzfarbstoffe für jede Probe ausgestattet. Das System kann eine Zuordnung Bild (10-facher Vergrößerung), die einen Überblick über die Testprobe auf dem man sich bewegen kann, um eine Region von Interesse (600X Vergrößerung) zu beobachten gibt zuführen. <ol><li> Zeitraffer-Aufnahme <ol><li> Legen Sie die specimens (enthaltend die Kammer Schieber die gefärbten Proben) auf dem dunklen Raum des konfokalen integrierten Inkubator (37 ° C, 5% CO 2 und feuchter Atmosphäre). </li><li> Wählen Sie die entsprechenden Laser. Verwenden Sie die beiden Laserquellen 473 nm (15 mW) und 559 nm (18 mW) auf Calcein und EthD-1 anzuregen. </li><li> Verwenden Sie ein zwei sequentiellen Modus, um Bilder durch die Leitung Sequenzen ohne Übersprechen in der Bildgebung mit den beiden verwendeten Fluoreszenzfarbstoffe zu erwerben. </li><li> Verwenden Sie einen Detektor mit einer neu entwickelten Spektrum an Bedingungen in Übereinstimmung mit dem Fluoreszenzfarbstoff in der Abtasteinheit automatisch eingestellt. </li><li> Optimierung der Bandbreiten der detektierten Fluoreszenz für jeden Kanal auf das Maximum. Notieren Sie alle Akquisitionen sequentiell um mögliche Übersprechen zu vermeiden. </li><li> Wählen Sie die am besten geeigneten Bilderzeugungsbedingungen auf der Basis der Fluoreszenzfarbstoff Auswahl mit der Erfassungssoftware. </li><li> Erwerben Sie ein Kartenbild, die automatisch von der Mitte in einem Spiralmuster erzeugt wird,mit dem interessierenden Gebiet ist leicht zur genaueren Untersuchung ausgewählt. </li><li> Wählen Beobachtungsmodus. Wählen Sie bis zu fünf Arten von Beobachtungs Modi inklusive Zeitraffer, Z-Stapel, und Multi-Bereich je nach Bedarf. Verwenden Sie eine Kombination von Z-Stapel und Zeitraffer-Modi in der vorliegenden Studie und füllen schnell die Bilderfassung, </li><li> Ändern und schalten den Fluoreszenzfarbstoff. Alternativ überlagern die fluoreszierende und das Licht kontrastreiche Bilder mit einander. Live-Bild zu beobachten mit dem ausgewählten Punkt auf der linken unteren Kartenbildschirm. </li><li> Bestimmen Sie den Imaging-Bereich mit Hilfe der Gestaltung und Zoomfunktionen. Gegebenenfalls wechseln zwischen den Anzeigen für jeden Typ von Fluoreszenz-Farbstoff. HINWEIS: Die in diesem Protokoll verwendete Mikroskop hat die gleiche Funktionalität wie ein Hoch herkömmlichen konfokalen in einem kompakten Design. Das Mikroskop ist mit umgekehrten Wasserimmersionsobjektive, die sich optimal für eine stabile Zeitraffer-Bildgebung an lebenden Zellen mit einer vereinfachten integrierten Inkubator geeignet sind ausgestattet. </li&gt; </ol></li><li> Signalanalyse und Quantifizierung <ol><li> Verwenden Sie die Bildbearbeitungssoftware, um das Fluoreszenzsignal zu quantifizieren. Erhalten fünf Kartenbilder mit dem 10X-Objektiv für beide untersuchten Probe und Zellkontrolle. </li><li> Erhalten 1.024 × 1.024 Pixel normale Bilder, mit einer 0,231 &amp; mgr; m × 0,231 &amp; mgr; m Pixelgröße. Speichern von Bildern als Olympus Format des Bildes (OIF) zur Signalanalyse. Dieses Format ermöglicht die Speicherung verschiedener Parametereinstellungen und Bilder zusammen. Verwenden Sie verschiedene Analysewerkzeuge (Messung der Intensitätsprofil, Intensitätsverhältnis zwischen den beiden verwendeten Kanäle). </li><li> Bewahren Sie die maximale Projektionsbilder als 12 Bit / Pixel TIFF-Dateien. </li><li> Preform statistischen Analysen mit dem R Commander Software. Analysieren Unterschiede mit Einwegvarianzanalyse (ANOVA) mit einer Wiederholungsprüfung. Bericht Ergebnisse als mittlere Standardabweichung (± SD) und die statistische Signifikanz bei p &lt;0,05. </li></ol></li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests, they have nothing to disclose.

Biokompatibilität Materialverhalten ist die Voraussetzung Parameter auf, bevor die medizinische Verwendung bewertet werden. Internationale Standards decken Medizin ISO 10993 33 und speziell Dentalmaterialien ISO 7405 34. Das Fehlen der toxischen Wirkungen auf die umliegenden Zellen ist der Schlüssel Norm in der Biokompatibilität Auswertung solcher Materialien. Deshalb Zytotoxizitätstests hat eine solche Bedeutung bei der Beurteilung der Dentalmaterial Biokompatibilität 35-37. Das ISO vorgeschlagenen Prüfverfahren könnte man auf die Stoffwechselaktivität oder Membranintegrität basieren. Ausgewählte Endpunkte sollten spezielle Bedingungen für das Ranking schädliche Wirkungen durch ein Testmaterial, um die Zeit und die Kosten für die Beurteilung Assays zu minimieren induzierte folgen. Die aktuelle Methode der Untersuchung (3D konfokale Zeitraffer Bildgebung) ist Membran Integrität. Die Zytotoxizität Auswertung über diesen Endpunkt scheint ein wertvoller Marker von Zell biocompa seinträglichkeit mit getesteten Materialien und es ist auch ISO zugelassen Endpunkt. In vitro-Tests wurden entwickelt, um zu bestimmen, wie eine Materialprobe einen bestimmten Zelltyp betrifft. Die kolorimetrische MTT-Assay wurde ursprünglich von Mossman (1983) als eine nützliche Methode für die Messung der in vitro-Zytotoxizität und Zellproliferation beschrieben. Der MTT-Test basiert auf der Umwandlung von Tetrazoliumsalz in Formazan-Kristallen durch aktive Zellen, die mitochondriale Aktivität bestimmt basierend. Dies kann durch Überlebensrate 38 übersetzt werden. Gupta und Mitarbeiter berichteten, dass der MTT-Test ist der am weitesten verbreitete Methode zur Messung der Zytotoxizität Verbundharze. Succinsäure-Dehydrogenase und alkalischer Phosphatase Reaktionen wurden auch für den gleichen Zweck verwendet worden 39. Doch das Schicksal Zellen kann nicht gefolgt werden, da der MTT-Test erfordert die Zellen an jedem Messzeitpunkt zu töten. Um stärker in der aktuellen Studie überwachen das Verhalten der gefärbten Zellen, direct Beobachtung von lebenden Zellen durchgeführt wurde, dank Zeitraffer CLSM Bildgebung kombiniert mit einem kurzen Protokoll Färbung, automatisierte Bildanalyse und Fluoreszenzsignal Quantifizierung. Dentalkomposite kommen in engen Kontakt mit Mundgewebe, insbesondere Zahnfleisch und Pulpa Zellen. 41 - Fibroblasten würde das Ziel der Bauteile aus diesen Verbundmaterialien Füllungs 40 freigegeben werden. Außerdem haben mehrere Studien berichtet, dass immortalisierte Zellen und primäre Zellen können unterschiedliche zelluläre Reaktionen in Kontakt mit Biomaterialien haben. Primäre Zellen erwiesen sich als besser geeignet, um Biomaterialien Effekte 42 beurteilen zu können. Dies erklärt die Verwendung von primären menschlichen gingivalen Fibroblasten als Zellmodell für die Bewertung der Cytotoxizität der getesteten Zahnverbundmaterial in der vorliegenden Studie. Die Toxizitätspotenzial der freigesetzten Stoffe aus Dentalkomposit wurde vielfach untersucht 43-44. Um zu beurteilen, ter zytotoxisches Potential von Materialien könnten zwei Kontaktmodell Zellen durchgeführt werden. Im direkten Kontakt Modellsystem das Material direkt mit den Zielzellen gebracht, während bei der indirekten Kontaktsystem, Zielzellen in Kontakt mit Eluate aus biologischen Medien. In der klinischen Anwendung und für restaurative Verfahren, sind Dentalkomposit in indirekten Kontakt mit Zahnfleischgewebe platziert. Aus diesem Grund wurde die aktuelle Versuchsprotokoll auf dem indirekten Kontaktsystem mit menschlichen gingivalen Fibroblasten (Zellen in Gegenwart der getesteten Verbundextrakte) konzentriert. Wie zuvor von Dahl und Mitarbeiter berichteten, wurden Zytotoxizität Antworten als schwere (&lt;30%), mittel (30-60%), gering (60-90%) oder nicht-zytotoxischen (&gt; 90%), bezogen auf die Aktivität in bezug auf Platz Werte für die Steuerelemente 45 erhalten. Daher wird gemäß der Rangliste und im Lichte der erzielten Ergebnisse (Tabelle 1), Composite ELS zusätzliche geringe Schrumpfung könnte als ver sortiert werdeny leicht zytotoxische und zeigten vergleichbare Verhalten an Zellen während des gesamten Zeitablauf Zeitraum steuern. Mit dem exakt gleichen Untersuchungsmethode konnten die Ergebnisse dieser Studie mit denen von einer kürzlich veröffentlichten Studie verglichen werden. Die ELS zusätzliche geringe Schrumpfung Verbund demonstriert überlegene Biokompatibilität im Vergleich zu den beiden zuvor getesteten Komposite für die gleiche klinische Anwendung, die die direkte Wiederherstellung 11 verwendet wird. Weitere Studien sind noch notwendig, um vollständigere Vergleich zu etablieren. Bei der Entscheidung, welche Zytotoxizitätstest für einen bestimmten Endpunkt Beurteilung genehmigen, ist es wichtig, um die Vorteile und Grenzen der einzelnen Assay zu verstehen. Der Hauptzweck der konfokalen Abbildung ist, um eine 3-D-Architektur von Zellen und Organen zu erreichen. Die Technik ist in der Lage, nicht nur einer Probenoberfläche, sondern auch seine Untergrund offenbaren. Das hier beschriebene Protokoll unterstreicht die Verwendung von 3D-CLSM Zeitraffer konfokale Bildgebung, als Sensitive Methode, um die in vitro Biokompatibilität Verhalten eines Dentalverbund bewerten. Um jedoch die Einschränkungen in dieser Arbeit begegnet zu vermeiden, Anti-Vibrations-Arbeitsstationen könnten, um stabiler und länger Zeitraffer Bildgebung ermöglichen verwendet werden; Die Tischplatte kann die verwendete konfokalen Systems von den nachteiligen Wirkungen zu isolieren, daß Schwingungen im Labor verursachen. Weiterhin Materialien in der Mundhöhle verwendet werden, sollten im Idealfall unschädlich für die Zahnfleischgewebe sein und sollten keine Stoffe, die systemische Toxizität verursachen könnten. In Übereinstimmung mit der Methodik und den aus dem aktuellen Studie erhaltenen Ergebnissen kann gefolgert werden, daß die getesteten Verbund (ELS extra low shrinkage) ist in den vorliegenden experimentellen Bedingungen nicht zytotoxisch sein. Da der CLSM Verfahren feinfühlig die Anfangsrate der lebensfähigen Zellen zu geben, könnten andere Möglichkeiten vorgesehen werden, um mehrere Endpunkte beurteilen. Insbesondere, wie es wurde kürzlich berichtet, dass Verbund Monomere beeinflussen Zellen through reaktive Sauerstoffspezies (ROS) 46- 48, sind weitere Untersuchungen notwendig, um Zusammenhänge zu beurteilen, wenn eine zwischen Zytotoxizität Signalnetzwerke und ROS-Produktion. Die Zukunft Protokoll könnte so gestaltet werden, gleichzeitig auszuwerten ROS-Produktion (H 2 O 2 und / oder O 2 - Färbung) und Zytotoxizität Verhältnis (Live / Dead-Färbung) mit Zeitraffer CLSM Bildgebung.

Einer der Hauptstandards in den ISO Empfehlungen angegeben werden, um die Biokompatibilität zu definieren, ist das Fehlen des Materials Zelltoxizität. Zahnärztliches Verbundstoffe können Komponenten aus der Harzmatrix, die zunächst durch teilweise Polymerisation sein können, und / oder später aufgrund von Abbauprozessen im Laufe der Zeit frei 1-4. Diese freigesetzten Komponenten in Kontakt mit oralen Gewebe kommen und kann verschiedene Nachteile wie Urtikaria und Schleimhautreaktionen 5, Entwicklung von Allergien und Überempfindlichkeitsreaktionen bei Patienten 6, Modifikationen Gingivafibroblasten Morphologie und Reduktion auf Kollagen Typ I Protein 7, Immunsuppression oder Immunstimulation auf Mitogen haben -driven Proliferation von gereinigten T-Lymphozyten und Milzzellen 8 und DNA-Schäden in primären humanen gingivalen Fibroblasten, die deren gentoxische Potenzial 9 unterstreicht. Viele Parameter können Dentalverbund Toxizität, wie der Farbton der c auswirkenomposite der Lichthärtung, die chemische Zusammensetzung des Harzes Monomer, dem Füllstoff und der Umwandlungsgrad 10- 13. Da in vitro toxische Potential der Materialien können in vivo Situationen vorherzusagen und kann zu klinischen Situationen, die von der Untersuchung einiger relevanter Endpunkte verglichen werden. Die Zytotoxizität von dentalen Kompositen und deren Komponenten wurden weitgehend unter Verwendung von Zellkultursystemen 14- 16 ausgewertet. Diese in vitro-Systeme entwickelt worden, um Dentalkompositen Biokompatibilität in der Bezeichnung der Beurteilung: Zellwachstum und Apoptose mit THP-1monocytes wie Zellen 17, Cytotoxizität in menschlichen Gingivafibroblasten 18, Entzündungspotential in HaCaT Keratinozyten wie Zellen 2, die Zellfunktionalität odontoblast- wie MDPC-23-Zellen 19, Reduzierung der Gesamt-RNA Levels und signifikante Erhöhung der Induktion der Apoptose auf die menschliche Zahnfleisch Keratinozyten 20 undDNA-Schäden auf gingivalen und Zellstoff-Fibroblasten-Zellen 21. Verschiedene Methoden werden vorgeschlagen, um die Biokompatibilität von dentalen Kompositen zu untersuchen. Kolorimetrische Assays, die spezifische Farbstoffe und Licht Adsorption Messungen beinhalten, bleiben die am häufigsten verwendet wird, die aufgrund ihrer relativen Einfachheit und niedrige Kosten 22- 26. Mikroskopie Analyse durch Lichtkontrast verbraucht häufig mehr Zeit und verursacht höhere Kosten. Jedoch haben diese Mikroskopietechniken einige wichtige Vorteile. Die Beobachtung der Zellstruktur gibt erweiterte Informationen über erfahrene toxischen Wirkungen, wodurch relevanter und sensiblen Daten. Insbesondere wurde die Einführung von Konfokalmikroskopie 27 für die Beobachtung von biologischen Strukturen mit einer Verbesserung axiale Auflösung im Vergleich zu herkömmlichen Weitfeldabbildungsfluoreszenzmikroskopen erlaubt. Daher hat konfokale Bildgebung zu einem mächtigen Ermittlungswerkzeug in verschiedenen Bereichen derMedizin und Wissenschaft Forschungen. Im Gegensatz zu elektronischen Mikroskopie-Techniken bietet konfokalen Rastermikroskopie in der Lage, verschiedene Komponenten der Zellen durch Einbau von speziellen Fluoreszenzmarker zu visualisieren. Die meisten dieser spezifischen Tracer in einer wäßrigen Umgebung stabil ist, sinnvoll meßbar, kostengünstig und ungiftig 28, so dass ihre Verwendung in der klinischen als auch Laborforschungsstudien. Außerdem ist nicht zu Zeitraffer konfokale Bildgebung notwendig die Probe Trocknung und Fixierung für herkömmliche Elektronenmikroskopie-Analyse erforderlich ist, ist somit zeitabhängigen Erfassungs auch an Proben. Verglichen mit dem zweidimensionalen Bilderzeugungs der konfokalen Abbildungsprinzip ermöglicht eine Probenuntergrund Visualisierung und die dreidimensionale Struktur Rekonstruktion der verschiedenen erhaltenen Tiefenbilder; das dazu führen, präziser und strukturelle Details 29, 30. Die vorliegende Videostudie ist ein Beispiel für die Verwendung von dreidimensionalen Zeitraffer-Confocal Laser Scanning Mikroskopie (3D-CLSM), kombiniert mit Live / Dead Fluoreszenzmarkierung und Signal Quantifizierung als innovative Methode. Die in diesem Papier vorgestellte Technik hat den Vorteil, dass empfindliche Auswertung und Zeitraffer-Imaging lebender Zellen ohne Änderung der veranlagten Zellstruktur. Keine Vorbereitungsschritte vor konfokale Analyse erforderlich. Zuvor wurde die gleiche Färbung zur Beurteilung der Lebensfähigkeit der kultivierten Spongiosa Kerne 31 aber ohne konfokale Zeitraffer folgenden verwendet. Ebenso die gleiche Zeitraffer konfokalen Verfahren wurde verwendet, um Erythromycin Zeit-kill-Aktivität zu bewerten in Bakterien von Belebtschlamm nach ihren Gram Typ 32 mit einem spezifischen Bakterien lebend / tot-Färbung. Diese Methoden wurden kürzlich angepaßt und verwendet, um die Toxizität von Dentalverbundwerkstoffen auf Basis von Methacrylat-Monomeren, 11 zu vergleichen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Olympus Fluoview FV10i&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">O2/Co2 Incubator</td>
			<td style="width:71px;">Pnasonic</td>
			<td style="width:119px;">MCO 5M</td>
			<td>Cell incubation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Live/Dead&#174; Kit</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MP 03224</td>
			<td>Stain&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ELS extra low shrinkage&#174;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Saremco&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Dental composite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D 6046</td>
			<td>Culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1426</td>
			<td>harvesting cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chamber slide system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">14220040X</td>
			<td>Culture chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-001</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">A11-101</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Counter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">00110230TP1</td>
			<td>Cell counting&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal time lapse imaging as an efficient method for the cytocompatibility evaluation of dental composites

Es ist allgemein anerkannt, dass in vitro Zellmaterial Wechselwirkung ein nützliches Kriterium bei der Bewertung der Biokompatibilität Dentalmaterial ist. Das Ziel dieser Studie war es, 3D CLSM Zeitraffer konfokale Bildgebung verwenden, um die in vitro Biokompatibilität von dentalen Kompositen beurteilen. Dieses Verfahren liefert eine genaue und empfindliche Anzeige der Lebendzellrate in Kontakt mit Zahnverbundextrakten. Die ELS zusätzliche geringe Schrumpfung, ein Dentalverbund für direkte Restauration verwendet, wurde als Beispiel genommen worden. In vitro Beurteilung am kultivierten primären humanen gingivalen Fibroblasten mit Live / Dead-Färbung durchgeführt. Die Bilder wurden mit dem konfokalen FV10i biologischen invertierten Systems erhalten und mit der FV10-ASW 3.1 Software analysiert. Die Bildanalyse zeigte eine sehr geringe Zytotoxizität in Gegenwart der getesteten Verbund nach 5 Stunden im Zeitraffer. Eine leichte Abnahme der Lebensfähigkeit der Zellen wurde in Kontakt mit der getesteten Verbund Extrakte Vergleichbarkeit gezeigtened zu Kontrollzellen. Die Ergebnisse unterstrich die Verwendung von 3D-CLSM Zeitraffer Bildgebung als empfindliche Methode, um die Biokompatibilität Verhalten Dentalkomposite qualitativ und quantitativ zu bewerten.

Abbildung 1 zeigt einen Überblick über die Live / Dead gefärbten Zellen erhaltenen Mapping Bilder (10X-Objektiv) sowohl für Steuerungs- und Zellen auf die getesteten Verbund Extrakte (ELS Klein Schrumpfung) ausgesetzt. Die dreidimensionale Struktur der Zellen konnte bei der Vergrößerung 600X visualisiert werden. Visualisierung der Zellen, die in der Steuerkammer und der Zellen in der Kammer in Gegenwart der getesteten Verbund Extrakte gesammelt gesammelt, in Abbildung 2 dargestellt. Die maximale Vorsprung (Ziel 60X) zeigt das Schicksal von ausgewählten Zellpopulationen zu Beginn der Zeitablauf (bei 15 min) und am Ende des Zeitablaufperiode (5 h). Fünfzig sieben Stapel von Bildern (xyzt mod-Scan, 39 Bilder pro Stapel, Voxel-Tiefe 1,00 um) wurden in dieser Zeit erhalten. Ein leichter Rückgang im grünen Fluoreszenzsignal und sehr leichte Variation in der rot fluoreszierenden wurden in exponierten Zellen erhalten. Keine signifikante Veränderung wurde zur Kontrolle beobachtetZellen. Verbund Extrakte exponierten Zellen angenommen ähnliche Spindelmorphologie zu Kontrollzellen; Morphologie wurde bei diesen Versuchsbedingungen verändert (obwohl die grüne Signalabnahme und die rote Signalzunahme in Gegenwart der getesteten Verbund). Die Bildanalyse wurde an fünf ausgewählten verschiedenen Bildstapeln entsprechend unterschiedlichen Zellpopulationen aus den erhaltenen Bildern für die getestete Verbundgeführt, verglichen mit negativen Kontrollzellen sowohl für grüne und rote Signal. Das Intensitätsprofil der gefärbten Zellen ist in 3 dargestellt; Die grünen und roten Signal Entwicklung der Zellen in Kontakt mit der getesteten Verbund war vergleichbar mit denjenigen von Kontrollzellen. Calcein und EthD-1 Fluoreszenzemissionsintensitäten wurden auf Kontrollzellen und Verbund exponierten Zellen gemessen. Die Messung wurde in einstündigen Intervallen für bis zu fünf Stunden durchgeführt. Das grün / rote Fluoreszenz-Verhältnis (basierend auf integrierten Intensitäten des grünen 495-515 nm und Rot 620-650 nm Signale) Wurde während der Zeitraffer-Zeitraum berechnet. Die Lebensfähigkeit Verhältnissen für die Kontroll und exponierten Zellen ELS extra low shrinkage Extrakte werden in der T 1 in der Lage dargestellt ist. In der Gegenwart der getesteten Verbund wurde der Prozentsatz an lebenden Zellen gefunden, daß etwas von 100% auf 93,9% nach 1 h zu verringern Kontakt. Signifikanter Unterschied zwischen dem getesteten Composite und der Negativkontrolle (Zellen ohne Verbundextrakte) nach 5 h der angegebenen Zeitraffer Zeitraum beobachtet. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig1highres.jpg" /> Abbildung 1: Übersicht Bild Kartierung zeigte in Gegenwart von Verbund Extrakte (ELS Klein Schrumpfung) zu Beginn des Zeitrafferperiode (t = 15 min) gefärbten Zellen bei Objektiv 10x, (A) Kontrollzellen und (B-Zellen). Grünflächen sind lebende Zellen und roten Bereiche sind beschädigte Zellen. HierinVersuchsbedingungen, keine Veränderung (sowohl für grüne und rote Fluoreszenz) wurde für Composites exponierten Zellen beobachtet, verglichen mit negativen Kontrollzellen. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/51949/51949fig2highres.jpg" /> Abbildung 2: CLSM-Bilder am Ziel 60X einer Zellpopulation aus (A) Steuerkammer und (B) zusammengesetzte Extrakte Kammer in dem Anfang und dem Ende der Belichtung Zeitrafferperiode (I: 15 min und II: 5 h zuge ). Grünflächen sind lebende Zellen und roten Bereiche sind beschädigte Zellen. Das Panel der Bilder zeigte geringfügige Änderung der Intensitätssignal (leichte Abnahme der Grün-Signal und sehr leichten Anstieg der Rote). In Gegenwart von Verbund Extrakte wurden keine Veränderungen der Zellmorphologie beobachtet; aussetzen Zellen behielten ihre spindelförmige und fibroblastische Morphologie als Kontrollzellen. Abbildung 3: Linienprofil im Zeitraffer-Mikroskopie beobachtet Zellen (A) Kontrollzellen (B) Composite-Extrakte exponierten Zellen, (I) bei 15 min und (II) bei 5 Std.. Keine sichtbare Veränderung der Grün-Signal evolution in Gegenwart der getesteten Verbund ungeachtet der Zeitkontakt. Allerdings wurde eine leichte Zunahme des roten Signals in der Gegenwart von Verbund nach 5 h von Kontakt beobachtet. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> Kontaktzeit (Stunde) </td><td colspan="5"> Die Lebensfähigkeit der Zellen (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> Kontrollzellen </td><td> 100 </td><td> 100 </td><td> 100 &lt;/ Td&gt; <td> 100 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> ELS zusätzliche geringe Schrumpfung ® </td><td> 93,9 ± 7 </td><td> 91,3 ± 5 * </td><td> 89,5 ± 3 * </td><td> 87,6 ± 2 * </td><td> 87,7 ± 3 * </td></tr></tbody></table> Tabelle 1:. Rate lebender Zellen HGF evolution nach 1, 2, 3, 4 und 5 Stunden der Berührung mit der Verbund Extrakte Lebensfähigkeit der Zellen wurde durch Anfärben mit der Live / Dead Zytotoxizität Kit getestet. Die Daten zeigen Mittelwerte ± SD von fünf Bildern stapelt Analyse. Werte sind signifikant verschieden von den Kontrollzellen bei p &lt;0,05.

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Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

Die am besten untersuchten Aspekt der Biokompatibilität von dentalen Kompositen ist ihre Zytotoxizität 3D CLSM Zeitraffer Bildgebung in Kombination mit Fluoreszenzsignal Quantifizierung ermöglicht sensible Auswertung des Zellschicksals im Laufe der Zeit. Unter Verwendung dieser Methode könnte ein effizientes Werkzeug, um den cytocompatibility von dentalen Kompositen beurteilen.

Konfokale Zeitraffer Imaging als eine effiziente Methode für die Bewertung der Cytocompatibility Dental Composites

It is generally accepted that in vitro cell material interaction is a useful criterion in the evaluation of dental material biocompatibility. The ...

confocal-time-lapse-imaging-as-an-efficient-method-for

Research

JoVE Journal

Medicine

13.4K Aufrufe.  UMR CNRS 5615, Université Lyon1.  Die am besten untersuchten Aspekt der Biokompatibilität von dentalen Kompositen ist ihre Zytotoxizität 3D CLSM Zeitraffer Bildgebung in Kombination mit Fluoreszenzsignal Quantifizierung ermöglicht sensible Auswertung des Zellschicksals im Laufe der Zeit. Unter Verwendung dieser Methode könnte ein effizientes Werkzeug, um den cytocompatibility von dentalen Kompositen beurteilen. 

Serie: Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Evaluation von Nanopartikel-Aufnahme in Tumoren in Echtzeit über Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Forschung

Medizin

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from different genetically engineered mouse models of breast cancer. For example, time between cell divisions (cell lifetimes), apoptotic cell numbers, evolution of morphological changes, and mechanism of colony formation can be quantified and compared in cells carrying specific genetic lesions. Primary mammary epithelial cell cultures are generated from mammary glands without palpable tumor. Glands are carefully resected with clear separation from adjacent muscle, lymph nodes are removed, and single-cell suspensions of enriched mammary epithelial cells are generated by mincing mammary tissue followed by enzymatic dissociation and filtration. Single-cell suspensions are plated and placed directly under a microscope within an incubator chamber for live-cell imaging. Sixteen 650 &mu;m x 700 &mu;m fields in a 4x4 configuration from each well of a 6-well plate are imaged every 15 min for 5 days. Time-lapse images are examined directly to measure cellular behaviors that can include mechanism and frequency of cell colony formation within the first 24 hr of plating the cells (aggregation versus cell proliferation), incidence of apoptosis, and phasing of morphological changes. Single-cell tracking is used to generate cell fate maps for measurement of individual cell lifetimes and investigation of cell division patterns. Quantitative data are statistically analyzed to assess for significant differences in behavior correlated with specific genetic lesions.

Time-lapse imaging is used to assess behavior of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer risk to determine if there are correlations between specific behavioral parameters and distinct genetic lesions.

Zeitraffer-Imaging of Primary Präkanzeröse Brustepithelzellen aus gentechnisch veränderten Mausmodellen der Breast Cancer Abgeleitet

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

Das<em&gt; In Ovo</em&gt; Chick Chorioallantoismembran (CAM) Assay als effiziente Xenograftmodell des hepatozellulären Karzinoms

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

This article presents a rapid and simple method for administering bleomycin directly into the mouse trachea via intubation. Key advantages of this method are that it is highly reproducible, easy to master, and does not require specialized equipment or lengthy recovery times.

Ein verbessertes Verfahren zur schnellen Intubation der Luftröhre in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Extended Time-lapse Intravital Imaging of Real-time Multicellular Dynamics in the Tumor Microenvironment

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and metastasis. Multicellular interactions in the tumor microenvironment can lead to transient events including directional tumor cell motility and vascular permeability. Quantification of tumor vascular permeability has frequently used end-point experiments to measure extravasation of vascular dyes. However, due to the transient nature of multicellular interactions and vascular permeability, the kinetics of these dynamic events cannot be discerned. By labeling cells and vasculature with injectable dyes or fluorescent proteins, high-resolution time-lapse intravital microscopy has allowed the direct, real-time visualization of transient events in the tumor microenvironment. Here we describe a method for using multiphoton microscopy to perform extended intravital imaging in live mice to directly visualize multicellular dynamics in the tumor microenvironment. This method details cellular labeling strategies, the surgical preparation of a mammary skin flap, the administration of injectable dyes or proteins by tail vein catheter and the acquisition of time-lapse images. The time-lapse sequences obtained from this method facilitate the visualization and quantitation of the kinetics of cellular events of motility and vascular permeability in the tumor microenvironment.

This protocol describes the use of multiphoton microscopy to perform extended time-lapse imaging of multicellular interactions in real time, in vivo at single cell resolution.

Erweiterte Zeitraffer-Intravital Imaging von Echtzeit-Vielzellige Dynamics im Tumormikromilieu

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle screws after spinal surgery, which is a serious concern. To address this problem, diverse types of pedicle screws have been examined to identify those with good fixation strength and osseointegration in spine bone. The porcine spine is a good alternative for the human spine in the evaluation of pedicle screws due to the anatomical size, mechanical characteristics, and cost. Although several studies have reported that pedicle screws are efficient in the porcine model, no study has described detailed protocols for the evaluation of a pedicle screw using the porcine model. Here, we describe a detailed method for evaluating transpedicular screws using an in vivo porcine lumbar spine model. The technical details for anesthesia, spine surgery, and harvest provided here will facilitate with the evaluation of the transpedicular screw fixation model.

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Here, we introduce a method to evaluate transpedicular screws by using an in vivo porcine lumbar spine model.

Eine Anästhesie, Chirurgie und Ernteverfahren zur Bewertung von transpedikulären Schrauben mit einem<em&gt; In vivo</em&gt; Schwein Lendenwirbelsäule Modell

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking (TXL) for Myopia

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy include photochemical cross-linking and tissue cross-linking (TXL) methods. Such methods for inducing mechanical tissue property changes are being employed to the cornea in corneal thinning (mechanically weakened) disorders such as keratoconus as well as the sclera in progressive myopia, where thinning and weakening of the posterior sclera occurs and likely contributes to axial elongation. The primary target proteins for such tissue strengthening are fibrillar collagens which constitute the great majority of dry weight proteins in the cornea and sclera. Fortuitously, fibrillar collagens are the main source of second harmonic generation signals in the tissue extracellular space. Therefore, modifications of the collagen proteins, such as those induced through cross-linking therapies, could potentially be detected and quantitated through the use of second harmonic generation microscopy (SHGM). Monitoring SHGM signals through the use of a laser scanning microscopy system coupled with an infrared excitation light source is an exciting modern imaging method that is enjoying widespread usage in the biomedical sciences. Thus, the present study was undertaken in order to evaluate the use of SHGM microscopy as a means to measure induced cross-linking effects in ex vivo rabbit sclera, following an injection of a chemical cross-linking agent into the sub-Tenon&#39;s space (sT), an injection approach that is standard practice for causing ocular anesthesia during ophthalmologic clinical procedures. The chemical cross-linking agent, sodium hydroxymethylglycinate (SMG), is from a class of cosmetic preservatives known as formaldehyde releasing agents (FARs). Scleral changes following reaction with SMG resulted in increases in SHG signals and correlated with shifts in thermal denaturation temperature, a standard method for evaluating induced tissue cross-linking effects.

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia

This protocol describes techniques for evaluating chemical cross-linking of the rabbit sclera using&#160;second harmonic generation imaging and differential scanning calorimetry.

Zweite harmonische Generation Signale in Kaninchen Sklera als Instrument für die Bewertung des therapeutischen Gewebes Vernetzung (TXL) für Kurzsichtigkeit

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Vene subclavia Punktion als eine Alternative Methode zur Probe Blutentnahme bei Ratten

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

In vitro Time-lapse Live-Cell Imaging to Explore Cell Migration toward the Organ of Corti

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after co-culture with cochlear epithelium. The organ of Corti was immobilized on a plastic coverslip by pressing a portion of the Reissner's membrane generated during the dissection. MSCs confined by a glass cylinder migrated toward cochlear epithelium when the cylinder was removed. Their predominant localization was observed in the modiolus of the organ of Corti, aligned in a direction similarly to that of the nerve fibers. However, some MSCs were localized in the limbus area and showed a horizontally elongated shape. In addition, migration into the hair cell area was increased, and the morphology of the MSCs changed to various forms after kanamycin treatment. In conclusion, the results of this study indicate that the coculture of MSCs with cochlear epithelium will be useful for the development of therapeutics via cell transplantation and for studies of cell regeneration that can examine various conditions and factors.

In this study, we present a real-time imaging method using confocal microscopy to observe cells moving toward damaged tissue by ex vivo incubation with the cochlear epithelium containing the organ of Corti.

In vitro Time-lapse Live-Cell Imaging zur Erforschung der Zellmigration zum Organ von Corti

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, pulpitis or apical periodontitis may develop in the long term. Root canal treatment of teeth with severe PCO and pulpal or periapical pathosis is challenging for general practitioners and even for well-equipped endodontic specialists. To ensure detection of the calcified root canal and avoid excessive loss of tooth structure or root perforation, static navigation using templates ("Guided Endodontics") was introduced a few years ago. The general workflow includes three-dimensional imaging using cone-beam computed tomography (CBCT), a digital surface scan, and superimposition of both in a planning software. This is followed by virtual planning of the access cavity and the design of a template that will guide the drill to the desired target point. To do this, a true-to-scale virtual image of the drill must be placed in a way that the tip of the drill reaches the orifice of the calcified root canal. Once the template has been fabricated using computer-aided design and computer-aided manufacturing (CAD/CAM) or a 3D printer, guided preparation of the access cavity can be performed clinically. For research purposes, a postoperative CBCT image can be used to quantify the accuracy of the access cavity performed. This work aims to present the technique of static guided endodontics from imaging to clinical implementation.

Guided endodontics describes a template-aided approach for access cavity preparation. The procedure requires cone-beam computed tomography and a surface scan to produce a template. An incorporated sleeve guides the drill to the target point. This allows the preparation of minimally invasive endodontic access cavities in calcified teeth.

Geführte Endodontie: Dreidimensionale Planung und schablonengestützte Vorbereitung endodontischer Zugangskavitäten

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...