אנו מודים למר ג&#39;ון קרוול ומר טרי Upshall למומחיותם הטכנית וסיוע בצילום וצילום וידאו ב. עבודה זו נתמכה על ידי הפעלת מענקים לJLV מהמכון הקנדי לחקר בריאות והחברה למחקר ופיתוח של ניופאונדלנד ולב ושבץ הקרן של השותפות הקנדית קנדה למענק Catalyst שחזור שבץ. RBR היה נמען של ושבץ מלגת קרן בוגר קית גריפיתס זיכרון לב.

הצהרת אתיקה: כל הניסויים אושרו על ידי האוניברסיטה ממוריאל של ועדת האתיקה הטיפול בבעלי חיים של ניופאונדלנד בהתאם להנחיות של המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים. 1. עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש עכברים בוגרים. במחקר זה, עכברי FVBN זכר בוגר (n = 10) בין 2-4 חודשים היו בשימוש. עכברי בית בשעה 00:12 להפוך מחזור אור-חושך ולספק אוכל מכרסם סטנדרטי וכרצונך מים. </li></ol> 2. חומרים הדרושים לבדיקת הצילינדר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג שולחן עם ראש שקוף לצלם את מבחן הגליל. הממדים של השולחן הם לא רלוונטיים, העליון חייב להיות פרספקס או זכוכית, ושחייב להיות מספיק מקום כדי למקם מראה מתחת לשולחן. זה מאפשר לעכבר להיות צילם מלמטה. השתמש במראה מתחת לשולחן כדי לשקף את התמונה דרך הגליל. כחלופה, להשתמש מצלמה הפוכה, אם זמין. הממדים של שולחן שימוש בפרוטוקול זה הם 54 x 56 x 66.5cm (wxlxh) עם 51 x 51cm העליון (wxl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג מראה. הממדים של מראה שימוש בפרוטוקול זה הם 34 x 58cm (wxl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג צילינדר שקוף / פרספקס לעכבר כדי לבצע ב. הממדים של הגליל בשימוש בפרוטוקול זה הם 17.5cm גבוה, 8.8cm זיהוי, 9.5cm OD עם עובי דופן של 0.35cm. גליל גבוה עשוי להידרש לזני עכבר פעילים יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הגליל על השולחן ולצלם את ההשתקפות במראה להלן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצלמת וידיאו וחצובה נדרשים. להקליט קטעי וידאו בכ 650Kb / s, שכ הוא 190MB לכל 5 דקות של וידאו גליל. ודא שיש לו את המצלמה פונקציונלי זום על מנת להבטיח שהגליל מקיף את כל שדה הראייה. הערה: מצלמת וידיאו שימוש בפרוטוקול זה הוא Sony DCR-SR42, זום אופטי 40X, זום דיגיטלי 2,000x, 680kpix אשר משתמש הגדרה סטנדרטית, interlaced וידאו NTSC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג תוכנה לניתוח - pl תקשורתAyer עם תמיכת וידאו ואפנון מהירות השמעה. נגן המדיה שימוש בפרוטוקול זה הוא v2.1.2 VLC Media Player. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג מחשב עם מערכת הפעלה מסוגלת להריץ את נגן המדיה וצג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסון אלקטרוני עבור קטעי וידאו נדרש. להוריד קטעי וידאו לדיסק קשיח חיצוני או להעתיק אותו על גבי תקליטורי DVD לאחסון לטווח ארוך. הערה: ב190MB לוידאו, 84 מפגשים יתאימו על כרטיס SD GB 16 ו -168 מפגשים יתאימו על כרטיס SD 32GB. בשל inexpensiveness היחסי של תקשורת SD, וחוסר הוודאות בכמה זמן כמה עכברים דורשים כדי להשלים 20 אחוריים, כרטיס 32 GB מומלץ. במחקר הנוכחי, קטעי הווידאו הועתקו מהמצלמה לדיסק קשיח חיצוני 2TB ולאחר מכן recopied על תקליטורי DVD כגיבוי. </li></ol> 3. התקנה ניסיונית של מבחן הצילינדר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדק מראה מתחת לשולחן בזווית של 45 מעלות לשולחן. האם שני סוגריים תמיכה זו באמצעות מצורף לרגלי השולחן לSupport העליון ותחתון של המראה, בהתאמה. מקומות הסוגר מצוינים בצד וצפה בטבלה (איור 1 א) ונוף פנים על השולחן (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים גליל במרכז השולחן. לצייר ארבעה קווים במרחק שווה הגליל שבי יושב על השולחן עם טוש שחור (נוכל), כך שהגליל יכול להיות הרים וחזר לאותו המצב (איור 2). ציורם בחלק התחתון של השולחן השקוף מאפשר השולחן לנקות בין ניסויים בבעלי החיים ללא המסת דיו הסמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את המצלמה וחצובה. לכוון את המצלמה במראה, כך שהתמונה היא מחפשת ישירות דרך הקנה של הגליל. ודא שהקיר הפנימי המלא של הגליל הוא גלוי וללא הפרעה על ידי הבסיס (איור 3). ראה מבט מצד על של ההתקנה, כולל הזווית היחסית של התקנת המצלמה ומראה, מלמעלה (איור 4 א) ומרמה של השולחן, כולל גידול עכבר (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כרטיסי רמיזה לזהות כל עכבר לפני צילומים. ודא שהכרטיסים כוללים בדרך כלל מספר זיהוי לכל עכבר, נקודת הזמן של הבדיקה (לדוגמא., 3 ימים לאחר טיפול) ומועד פגישת צילומים. אינו כולל את קבוצת הטיפול בכרטיס האות כדי להבטיח את הניסוי הוא עיוור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרט בתנאי תאורה פנימיים סטנדרטיים כמו זה ברמה של אור נדרש כדי לראות את תנועות העכבר סביב הגליל בבירור. הערה: אם זמין מצלם בחושך עם מצלמה אור אדומה עשויים להספיק, אולם אחד היה קודם צריך לבדוק אם נגיעות כפה וגורר נראות בבירור לכימות. </li></ol> 4. ביצוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל לצלם. הצג את כרטיס אות העכבר המתאים מול עדשת מצלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את העכבר לתוך הצילינדר מלמעלה הפתוחים מייד לאחר שצילם את כרטיס האות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתחיל לצלם את העכבר. למזער את הרעש בתקופה זו, כמו עכברים עלולים לאבד עניין בחקר אם נבהל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לחלק אחורי העכברים לחקור את הגליל. ללכוד את הווידאו עד העכבר מבצע מינימום של אחוריים עשרים. הערה: אחורית מתרחשת כאשר שני כפות רגליו קדמיות מאבדות מגע עם הרצפה והעכבר עומד על רגליו האחוריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב שולחן וגליל עם תמיסת ניקוי מתאימה בין כל עכבר כדי לטהר ולהסיר ריחות עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפאה היא כאשר עכברים להפסיק לחקור ולהישאר בשקט יושבים על ארבע לכ 5 דקות. אם עכברים להקפיא לפני אחוריים עשרים להתרחש, זה עשוי להיות נחוץ כדי להסיר אותם מהגליל 10-20 דקות לפני חידוש המבחן. אם עכברים לא לבצע אחוריים עשרים, הם יוסרו מן המחקר. הערה: מניסיוננו, עכברים לא צריכה להיות נכללו עקב אי לחקור את הגליל. </li></ol> 5. הערכת מבחן הצילינדר באמצעות Paw גרירהניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנגן את הווידאו בקצב של בין 0.25x ו0.67x מהירות קבועה תלוי כמה מהר את העכבר בוחן את הגליל. להשתמש בנגן מדיה שמציע מהירויות השמעה איטיות יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את המספר הכולל של נגיעות כפה. נגיעות כפה להתרחש כאשר אחורי העכבר (איור 5 א), נוגעים בצד של הגליל (איור 5), לאחר מכן יורדת מסוס עם שני כפות בו זמנית (איור 5 ג) ואדמות (איור 5D). הכפה יכולה או לא יכולה לפנות לקיר הגליל עם כף מלאה, אבל קשר כלשהו עם קיר הגליל חייב להתרחש. להעריך נגיעות כפה על ידי ספירת מספר הפעמים שהעכבר יוצר קשר (לא משנה כמה קצר) עם קיר הגליל עם אחת או את שני כפות רגליו קדמיות עת שעמד על הרגליים האחוריות שלה במהלך אחורי. שים לב שקשר עם קיר הגליל נספר רק כ&quot; מגע כפה &quot;או&quot; כפת גרירה &quot;אם העכבר נמצא בעמדה אחורית - מעמדעל הגפיים האחורי שלה עם שני כפות רגליו קדמיות מעל השולחן. אם העכבר נשאר בעמדת 3 נקודות - שני גפיים אחוריות וכף אחת על השולחן וממשיך לגעת בקיר עם הכפה החופשית - זה לא נחשב כמגע כף. עכברים עשויים אחוריים ולגעת בקיר הגליל עם כף אחת וזה נחשב כמגע כף. הערה: עכבר עשוי גם להזיז את הגוף שלה ברחבי הגליל במהלך אחורי, עושה יותר משני אנשי קשר. מגעים אלה נספרים - אחד לכל מגע בכפו שמאלי ואחד לכל מגע בכפו ימני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את מספר כפה-שאיפות. התנהגות גרירת כפה שונה מנגיעות כפה נורמליות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אנשי קשר כפת קיר הגליל עם כף יד פתוחה מלאה (איור 6), היא תיפול לאט מהקיר, לעתים קרובות עם רעד קל. התנועה מתחילה בספרות גרירה על קיר הגליל או בכיוון המדיאלי או כלפי מטה, (איור 6 ג) לפני שנפלתי משם completאיליי (איור 6 ד). אז העכבר יהיה לרדת עם הכפה המושפעת (איור 6-ה) לפני שנחת על ארבע (איור 6F). זה נחשב כפת גרירה וצריך לספור במניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הכפה לא לפנות לקיר הגליל עם כף יד פתוחה באופן מלא, זה יהיה לרעות קיר הגליל עם הספרות שלה לפני שנפל מקיר הגליל. באופן דומה, עכבר עשוי לגרור כפתה כנגד קיר הגליל אך לא לשחרר אותו לחלוטין לפני פירוק. אלה שני נחשבים כפה-גוררת כמו גם נגיעות וצריכה להיחשב כשני במספר נקודות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכפה עלולה גם לגרור לאורך קיר הגליל תוך עכבר בוחן את הגליל. במקרה זה, הכפה תעקוב הפיתול של פלג הגוף העליון של העכבר כפי שהוא בוחן שמאלי או ימני של העמדה המקורית שלו (איור 7 א-ד) לפני פירוק (איור 7E). זו אינה נחשבת כפת גרירה, כפי שהוא תלוי בעכבר באופן אקראי בחירהכיוון לחקור ואינו תלוי שבחצי כדור קליפת המוח נפגע. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Paw-שאיפות באות לידי ביטוי כאחוז מכפה-גורר למספר כולל של נגיעות כפה במהלך. הגעה מספר כפה-שאיפות כאחוז מאנשי קשר כפה כוללת עבור כל forelimb בנפרד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגיעות וכתוצאה מכך כף גרירה לספור ככפת גרירה ומגע בו זמנית. לכן, אם עכבר גורר הכפה בכל פעם שהאנשים הקשר שלו כפת קיר הגליל, אחוז גרירה-הכפה מבוטא 100%. </li></ol> 6. הצעות ניסויי עיצוב נוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער את המשתנים חיצוניים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העכברים באותו הזמן בכל יום בדיקה. בדוק את העכברים במהלך המחזור בעקבותיהם. שמירה על עכברים במחזור הפוך אור 12 שעות מאפשרת ביצועים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים יכולים להיות מסרבים לחקור את הגליל אם הדגיש גם על ידי רעש או סביבת רומן. בדיקת עכברים בחדר שלהם בבעלי החיים החזקות או חדר הם been להכיר עם מפחית את הלחץ. זה יכול להתרחש אם החדר רועש, אם העכבר כבר נדחק לפני כניסת הצילינדר או בשל התרגלות. הערה: בדיקה צריכה להתבצע פעם אחת לפני מניפולציה ניסויית לשמש כקריאה בסיסית. לאחר מניפולציה, ימי בדיקה הם בשיקול דעתו של הנסיין, למרות שזה מומלץ להימנע ממספר מופרז של חשיפות לגליל על פני תקופה קצרה של זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים עלולים להיות ששים אחורי אחרי 6-7 חשיפות לגליל. לצורך המחקר הנוכחי, עכברים נבדקו בגליל עבור הסכום כולל של שבע פעמים, לפני איסכמיה ובימים 1, 3, 7, 14, 21 ו -28 לאחר ניתוח. הערה: במחקר זה השתמשנו בזן FVBN העכבר. בדקנו בעבר C57Bl / 6 עכברים בגליל ונצפתה התנהגות גרירה-כפה הבאה פציעת איסכמי ET-1 (מידע לא מוצג). עכברי C57BL / 6 היו פעילים יותר מעכברי FVBN כאשר גידול ולעתים קרובות קפצו על החישוק של הגליללפני הטיפוס החוצה. יש להשתמש בגלילים גבוהים אם עכברים מנסים להימלט בקפיצה. </li></ol></li></ol> 7. מדידות נפח אנדותלין -1 ניתוח והאוטם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ניתוח אנדותלין -1 ומדידות נפח אוטם על פי פרוטוקולים שפורסמו בעבר 4. כדי למקד את הקורטקס המוטורי forelimb הקדמי, כל עכבר צריך לקבל שלוש ET-1 זריקות בקואורדינטות הבאות: 0.7 (i) anteriorposterior (AP) /1.5 המדיאלי-צדדיים (מיליליטר) / - 1.2 הגבי-הגחון (DV), ( ii) 0.4 AP / 1.25 מיליליטר / - 1.2 DV וכן (iii) 0.1 AP / 1.75 מיליליטר / -1.2 DV 4. </li></ol> 8. ניתוח סטטיסטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח מדידות חוזרים דו-כיוונית של שונות (ANOVA) מומלץ לנתח אחוזים לכפות המושפעות ותושפענה על פני נקודות זמן שונות גרירה-כפה. </li></ol>

<ol><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Kolb, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor-stimulated+generation+of+new+cortical+tissue+and+functional+recovery+after+stroke+damage+to+the+motor+cortex+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Growth factor-stimulated generation of new cortical tissue and functional recovery after stroke damage to the motor cortex of rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 27 (5), 983-997 (2007).</li>
<li>Windle, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+four+different+methods+of+producing+focal+cerebral+ischemia+with+endothelin-1+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat.</a> Exp Neurol. 201 (2), 324-334 (2006).</li>
<li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+Endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A reproducible Endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li>
<li>Tennant, K. A., Jones, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+behavioral+effects+of+endothelin-1+induced+small+cortical+infarcts+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor behavioral effects of endothelin-1 induced small cortical infarcts in C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Methods. 181 (1), 18-26 (2009).</li>
<li>Wang, Y., Jin, K., Greenberg, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+associated+with+endothelin-induced+cortical+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis associated with endothelin-induced cortical infarction in the mouse.</a> Brain Res. 1167, 118-122 (2007).</li>
<li>Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+effective+behavioral+tasks+for+evaluating+sensorimotor+dysfunction+following+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice.</a> J Neurosci Methods. 129 (1), 87-93 (2003).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+functional+recovery+and+the+effects+of+gender%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Exp Neurol. 187 (1), 94-104 (2004).</li>
<li>Clarke, J., Ploughman, M., Corbett, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+qualitative+and+quantitative+analysis+of+skilled+forelimb+reaching+impairment+following+intracerebral+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A qualitative and quantitative analysis of skilled forelimb reaching impairment following intracerebral hemorrhage in rats.</a> Brain Res. , 204-212 (2007).</li>
<li>Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27staircase+test%27%3A+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">The 'staircase test': a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36 (2-3), 219-228 (1991).</li>
<li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+%28Mus+musculus%29+after+a+focal+motor+cortex+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li>
<li>Tennant, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vermicelli+and+capellini+handling+tests%3A+simple+quantitative+measures+of+dexterous+forepaw+function+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The vermicelli and capellini handling tests: simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li>
<li>Clarkson, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPA+receptor-induced+local+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling+mediates+motor+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AMPA receptor-induced local brain-derived neurotrophic factor signaling mediates motor recovery after stroke.</a> J Neurosci. 31 (10), 3766-3775 (2011).</li>
<li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).</li>
</ol>

יש הסופרים לא אינטרסים כלכליים מתחרים.

נקודות מפתח להקמה כאשר כימות גרירה-כפת התנהגות במבחן הגליל שעוקבים: i) לכמת את מספר הכפה-גורר לעומת נגיעות כפה כוללת עבור כל כפה לפני פגיעה מוחית להקים בסיס; ii) לכמת את מספר כפה-שאיפות לעומת נגיעות כפה כוללת עבור כל כפה הבאה פציעת איסכמי; וiii) להפלות בין כפת גרירה והתנוע?...

המטרה של אסטרטגיות התחדשות עצביות היא להדגים שני תיקון רקמות והחלמה תפקודית. התאוששות תפקודית מוערכת בדרך כלל עם בדיקות התנהגותיות המודדות גירעונות תפקודיים, במקרה זה כרוך בכישורים מוטוריים הקשורים לפגיעה באזורים הספציפיים במוח. פגיעה מוחית טראומטית או נזק איסכמי לאזור forelimb הסנסורית של הקליפה ניתן להדגים על ידי מספר הבדיקות התנהגותיות. מבחן אחד כזה, במבחן הגליל נעשה שימוש נרחב בחולדות להעריך גירעונות תפקודיים בפעילות forelimb 1. יש מבחן עלות הקמה נמוכה הדורשת רק צילינדר, מצלמה ושולחן עם ראש שקוף. זה קל לניהול כפי שהוא מבוסס על התנהגות הגישוש הטבעית של מכרסמים, כך שלפני אימון ומניעת מזון או תגמולים אינם נדרשים. למרות יתרונות רבים אלה, מבחן הגליל מנוצל תחת להעריך גירעונות forelimb בעכברים הבאים פציעות מוקד לים forelimbensorimotor קליפה, שאנו מייחסים לניתוח התנהגות עכבר במבחן הגליל. הסימטריה forelimb היא המדד הקלאסי של ניתוח לבדיקת הצילינדר. כאשר הניחו בגליל, מכרסמים באופן טבעי לחקור את הקירות של הגליל על ידי גידול על הגפיים האחורי שלהם ולגעת בקירות הצילינדר בכפות forelimb לאיזון יציבה. מספר נגיעות כפה עם הקיר אחד עם forelimb הוא לכמת בקלות על ידי צילומי מכרסמים במהלך חקירה זו של הגליל. הסימטריה forelimb מתרחשת כאשר כפת forelimb המושפעת עושה פחות נגיעות בקיר מכפת forelimb מושפעת ומעידה על נזק לקליפת המוח הסנסורית הנגדית. בחולדות, זריקות תוך-המוחיית של סוכן vasoconstrictive, אנדותלין (ET-1), לקליפת המוח הסנסורית forelimb גורם נגע איסכמי מוקדי שתוצאת גירעונות התנהגות בforelimb הנגדי. גירעונות בשימוש forelimb נגדי מזוהים בקלות שינויים בForelimb חוסר סימטריה במבחן הגליל בחולדות 1-3. בניגוד לחולדות עם זאת, שינויים בסימטרית forelimb משתנים ופחות עקביים בעכברים הבאים זריקות ET-1 דומה 4-6. כאן אנו מדגימים ניתוח רומן של forelimb התנהגות במבחן הגליל - ניתוח של גרירה-כפת התנהגות. הראינו בעבר כי ניתוח גרירה-כפה הוא מדד רגיש יותר לנזק לקליפת המוח הסנסורית forelimb בעכברים מאשר ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי ולכן חל על מגוון רחב של דגמי פציעת קליפת המוח מוקד. בדיקה של כמה אנשי הקשר בכפו קיר הצילינדר הבאים נזק איסכמי לקליפת המוח הסנסורית forelimb חשף התנהגות רומן בעכברים - כפה-גרירת 4. גרירת כפה מתרחשת כאשר עכבר עומד על רגליו האחוריות כדי לחקור את קיר הגליל אז גורר את כפתה המושפעת (קונטרה-lesional) לאורך קיר הגליל לכיוון קו האמצע שלה או את הקיר בזמן שבכפו לא נפגע מספקת תמיכה יציבה על הקיר. Paw-גורר לעתים רחוקות מתרחש בעכברים ללא כל פגע לכן את המראה של כף גרירה הוא אינדיקטור חיובי של פגיעה בקליפת המוח הסנסורית forelimb 4. יש לנו לכמת בעבר גרירה-כפת התנהגות בעכברים הבאה ET-1 נזק איסכמי לקליפת המוח הסנסורית forelimb והראו שנגרמה התנהגות גרירה-כפה בעכברים עד שבועיים שבץ-פוסט 4. כאן אנו מראים כי גרירה-כפת ההתנהגות מתמשכת עד שבץ-פוסט ארבעה שבועות. ניתוח של גרירה-כפת התנהגות מספק כלי חדשני ורגיש להערכת נזק איסכמי מוקד לקליפת המוח הסנסורית forelimb בעכברים. ההגדרה שלה זולה, קל ממשל ובקיע להפוך את זה לכלי פשוט, עדיין שימושי כדי להעריך במהירות את גירעונות התנהגות forelimb בעכברים.

<table><tbody><tr><td>Plexi-glass cylinder</td><td></td><td></td><td>17.5 cm high, 9.5 cm outer diameter, 8.8 cm inner diameter, wall thickness 0.35 cm (or 3.5 mm)</td></tr><tr><td>viewing table</td><td></td><td></td><td>54x56x66.5 cm (width x length x height), top of table is a 51x51 cm sheet of plexiglass.</td></tr><tr><td>mirror</td><td></td><td></td><td>34x58 cm mirror</td></tr><tr><td>video camera</td><td>Sony</td><td>DCR-SR42</td><td>Video camera with onboard storage, SD functionality, 40x optical zoom</td></tr><tr><td>computer</td><td>Dell</td><td>Optiplex 760</td><td>Processor: Intel, 3.0 GHz, Memory 4.00GB (RAM)&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>computer monitor</td><td>Samsung</td><td>S22C350H</td><td></td></tr><tr><td>Excel (Microsoft Office Professional Plus)</td><td>Microsoft</td><td>v14.0.7106.5003</td><td></td></tr><tr><td>VLC Media Player</td><td>Video LAN</td><td>v2.1.2</td><td>Media player with playback speed modulation and video support</td></tr><tr><td>External Hard Drive</td><td>Western Digital</td><td>WDBAAU0020HBK-01</td><td>2 TB</td></tr></tbody></table>

paw-dragging: a novel, sensitive analysis of the mouse cylinder test

מבחן הגליל משמש באופן שגרתי כדי לחזות נזק איסכמי מוקד לקליפת המוח המוטורי forelimb במכרסמים. כאשר הניחו בגליל, מכרסמים לחקור על ידי גידול ולגעת בקירות של הגליל בכפות forelimb לתמיכה ביציבה. בעקבות פציעת איסכמי לקליפת המוח הסנסורית forelimb, חולדות להסתמך יותר בכבדות על כפת forelimb המושפעת לתמיכה ביציבה וכתוצאה מכך פחות נגיעות בכפה המושפעת שנקראת סימטריה forelimb. לעומת זאת, נזק איסכמי מוקדי במוח העכבר לא מצליח לגרום לגירעונות עקביים דומים בסימטרית forelimb. בעוד גירעונות הסימטריה forelimb הם נצפו לעתים רחוקות, עכברים אין להפגין התנהגות פוסט שבץ רומן נקרא &quot;כפת גרירת&quot;. Paw גרירת היא הנטייה לעכבר כדי לגרור כפתה המושפעת לאורך קיר הצילינדר ולא ישירות מלדחוף את הקיר כאשר פירוק מאחורי לעמדת ארבעה רגליים. אנחנו הוכחנו בעבר שהתנהגות גרירת כפה היא רגישה מאוד לפציעות איסכמי בקליפת המוח קטנות לקליפת המוח המוטורי forelimb. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט לניתוח גרירה-כפה. אנו מגדירים מה היא כפת גרירה ולהדגים כיצד לכמת גרירה-כפת התנהגות. מבחן הגליל הוא בדיקה פשוטה ולא יקרה לניהול ואינו דורש מראש הכשרה או אסטרטגיות מניעת מזון. בשימוש בניתוח גרירה-כפה עם מבחן הגליל, זה ממלא נישה לניבוי פציעות איסכמי קליפת המוח כגון photothrombosis ואנדותלין-1 (ET-1) איסכמיה -induced - שני דגמים שהולכים וגוברים בפופולריות ולייצר פציעות מוקדי קטנות יותר מחסימת עורק המוח אמצעית. לבסוף, מדידת גרירה-כפת התנהגות במבחן הגליל תאפשר מחקרים של החלמה תפקודית לאחר פגיעה בקליפת המוח באמצעות עוקבה רחבה של זני עכבר מהונדסים שבי ניתוח הסימטריה forelimb קודם לא הצליח לזהות את גירעונות עקביים.

אנחנו הוכחנו בעבר כי התנהגות גרירה-כפה מופיעה הבאה פציעת איסכמי מוקד לקליפת המוח הסנסורית forelimb והוא אינדיקטור חיובי של נזק 4. זריקות תוך-המוחיית של ET-1 לקליפת המוח הסנסורית forelimb שמשו כדי לגרום לפגיעת איסכמית (איור 8 א &#39;, ב&#39;). מחקר זה בדק האם גרירה-כפת ה?...

Watch this Scientific Journal Video about Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test at JoVE.com

Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי של מבחן הגליל משמש באופן שגרתי כדי להעריך גירעונות התנהגות בחולדות הבאים פגיעה מוחית או שבץ; עם זאת, זה לא מצליח לזהות את הגירעונות עקביים בעכברים. מחקר זה מוכיח כי כימות כפת גרירת התנהגות הוא ניתוח רגיש יותר של פגיעה מוחית בעכברים.

Paw-גרירה: רומן, ניתוח רגיש של מבחן צילינדר העכבר

The cylinder test is routinely used to predict focal ischemic damage to the forelimb motor cortex in rodents. When placed in the cylinder, rodents explore ...

paw-dragging-a-novel-sensitive-analysis-of-the-mouse-cylinder-test

Research

JoVE Journal

Behavior

23.5K Views.  Memorial University of Newfoundland.  ניתוח הסימטריה forelimb הקלאסי של מבחן הגליל משמש באופן שגרתי כדי להעריך גירעונות התנהגות בחולדות הבאים פגיעה מוחית או שבץ; עם זאת, זה לא מצליח לזהות את הגירעונות עקביים בעכברים. מחקר זה מוכיח כי כימות כפת גרירת התנהגות הוא ניתוח רגיש יותר של פ?...

Video: Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

Assessment of Sensorimotor Function in Mouse Models of Parkinson's Disease

Sensitive and reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of potential therapeutic treatments in preclinical trials for many neurodegenerative diseases. In Parkinson's disease, sensorimotor tests sensitive to varying degrees of nigrostriatal dysfunction are fundamental for testing the efficacy of potential therapeutics. Reliable and quite elegant sensorimotor measures exist for rats, however many of these tests measure sensorimotor asymmetry within the rat and are not entirely suitable for the newer genetic mouse models of PD. We have put together a battery of sensorimotor tests inspired by the sensitive tests in rats and adapted for mice. The test battery highlighted in this study is chosen for a) its sensitivity in a wide variety of mouse models of PD, b) its ease in implementing into a study, and c) its low expense. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of PD as well as in testing potential disease-modifying therapies.

In Parkinson's disease and movement disorders in general, sensitive and reliable behavioral assays are essential for testing novel potential therapeutics. Here, we describe a manageable battery of sensorimotor tests for mice that are sensitive to varying degrees of injury to the nigrostriatal system and useful for preclinical studies.

הערכת התפקוד הסנסורית בעכברי מודל של מחלת פרקינסון

Sensitive and  reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of  potential therapeutic treatments in preclinical trials for many  ...

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

אטריה ו בדיקות Capellini טיפול: מדדים כמותיים פשוט פונקציה של מיומנות בכפו אצל חולדות ועכברים

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Neuroscience

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in injured sensory neurons and along the entire nociceptive pathway within the central nervous system. It is usually chronic and challenging to treat. In order to study neuropathic pain and its treatments, different models have been developed in rodents. These models derive from known etiologies, thus reproducing peripheral nerve injuries, central injuries, and metabolic-, infectious- or chemotherapy-related neuropathies. Murine models of peripheral nerve injury often target the sciatic nerve which is easy to access and allows nociceptive tests on the hind paw. These models rely on a compression and/or a section. Here, the detailed surgery procedure for the &#34;cuff model&#34; of neuropathic pain in mice is described. In this model, a cuff of PE-20 polyethylene tubing of standardized length (2 mm) is unilaterally implanted around the main branch of the sciatic nerve. It induces a long-lasting mechanical allodynia, i.e., a nociceptive response to a normally non-nociceptive stimulus that can be evaluated by using von Frey filaments. Besides the detailed surgery and testing procedures, the interest of this model for the study of neuropathic pain mechanism, for the study of neuropathic pain sensory and anxiodepressive aspects, and for the study of neuropathic pain treatments are also discussed.

Neuropathic pain is a consequence of a lesion or disease affecting the somatosensory system. The &#8220;cuff model&#8221; of neuropathic pain in mice consists of the implantation of a polyethylene cuff around the main branch of the sciatic nerve. Mechanical allodynia is tested using von Frey filaments.

דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

Medicine

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain perception in rodents. Withdrawal thresholds can be measured first at baseline and then following drug, venom, injury, allergen,&#160;or otherwise evoked inflammation by applying an accurate force on very specific areas of the skin. An electronic von Frey apparatus allows precise assessment of mouse hind paw withdrawal thresholds that are not limited by the available filament sizes in contrast to classical von Frey measurements. The ease and rapidity of measurements allow for incorporation of assessment of tactile sensitivity outcomes in diverse models of rapid-onset inflammatory and neuropathic pain as multiple measurements can be taken within a short time period. Experimental measurements for individual rodent subjects can be internally controlled against individual baseline responses and exclusion criteria easily established to standardize baseline responses within and across experimental groups. Thus, measurements using an electronic von Frey apparatus represent a useful modification of the well-established classical von Frey filament-based assays for rodent mechanical allodynia that may also be applied to other nonhuman mammalian models.

Electronic von Frey measurements are an effective and improved alternative to classical von Frey filaments, as they allow rapid and precise measurement of changes in rodent mechanical withdrawal thresholds to continuously applied pressure stimuli before and after an inflammatory event.

מדידת שינויים במגע רגישות בכף הרגל האחורית של עכברים באמצעות מנגנון אלקטרוני פון פריי

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid induction of a persisting back pain model in mice are provided here using an injection of urokinase-type plasminogen activator (urokinase), a serine protease present in humans and other animals. The methodology for induction of persisting lower back pain in mice involves a simple injection of urokinase along the ligamentous insertion region of the lumbar spine. The urokinase inflammatory agent activates plasminogen to plasmin. Typically, the model can be induced within 10 min and hypersensitivity persists for at least 8 weeks.
Hypersensitivity, gait disturbance, and other standard anxiety- and depression-like measures can be tested in the persisting model.&#160;Back pain is the most prevalent type of pain. To improve awareness of back pain, the International Association for the Study of Pain (IASP) named 2021 the &#34;Global Year about Back Pain&#34; and 2022 the &#34;Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.&#34; One limitation of the therapeutic advancement of pain therapeutics is the lack of suitable models for testing persistent and chronic pain. The&#160;features of this model&#160;are suitable for testing potential therapeutics aimed at the reduction of back pain and its ancillary characteristics, contributing to IASP&#39;s naming 2022 as the Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.

Methods for simple, rapid induction of a back pain model in mice are provided here using an intraligament injection of urinary plasminogen activator.

מודל כאב גב עכבר הנגרם על ידי מפעיל אורוקינאז

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some disadvantages such as subjective data and the requirement of a skilled, experienced experimenter. To date, a variety of modifications have improved the von Frey method, but it still has a few limitations. Recent reports have suggested that gait analysis produces more accurate and objective data from the neuropathic animals. This protocol demonstrates how to perform the automated gait analysis to determine the degree of neuropathic pain in mice. After several days of acclimation, the mice were allowed to walk freely on the glass floor to illuminate footprints. Then, quantification of the footprints and gait were performed through video clips with automatic analysis of various walking parameters, such as area of paw print, swing time, angle of paw, etc.
The main purpose of this study is to describe the methodology of automated gait analysis and briefly compare it with data from the classical sensory test using von Frey filament.

The precise assessment of pain response in a neuropathic animal model is critical to investigate the pathophysiology of pain diseases and develop new analgesics. We present a sensitive and objective method to determine the sensory function of the rodent hind paw by an automated gait analysis system.

אוטומטיות והרצתי ניתוח אצל עכברים עם פציעה כרונית הכיווץ

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some ...

Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to degeneration and injury of small-diameter sensory neurons, referred to as small fiber neuropathy. Present animal models of small fiber neuropathy affect both large- and small-diameter sensory fibers and thus create a neuropathology too complex to properly assess the effects of injured small-diameter sensory fibers. Therefore, it is necessary to develop an experimental model of pure small fiber neuropathy to adequately examine these issues. This protocol describes an experimental model of small fiber neuropathy specifically affecting small-diameter sensory nerves with resiniferatoxin (RTX), an ultrapotent agonist of transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), through a single dose of intraperitoneal injection, referred to as RTX neuropathy. This RTX neuropathy showed pathological manifestations and behavioral abnormalities that mimic the clinical characteristics of patients with small fiber neuropathy, including intraepidermal nerve fiber (IENF) degeneration, specifically injury in small-diameter neurons, and induction of thermal hypoalgesia and mechanical allodynia. This protocol tested three doses of RTX (200, 50, and 10 &#181;g/kg, respectively) and concluded that a critical dose of RTX (50 &#181;g/kg) is required for the development of typical small fiber neuropathy manifestations, and prepared a modified immunostaining procedure to investigate IENF degeneration and neuronal soma injury. The modified procedure is fast, systematic, and economic. Behavioral evaluation of neuropathic pain is critical to reveal the function of small-diameter sensory nerves. The evaluation of mechanical thresholds in experimental rodents is particularly challenging and this protocol describes a customized metal mesh that is suitable for this type of assessment in rodents. In summary, RTX neuropathy is a new and easily established experimental model to evaluate the molecular significance and intervention underlying neuropathic pain for the development of therapeutic agents.

This study establishes an experimental model of pure small fiber neuropathy with resiniferatoxin (RTX). A unique dose of RTX (50 &#181;g/kg) is optimal for developing a small fiber neuropathy model that mimics patient characteristics and could help investigate the nociceptive molecular significance underlying neuropathic pain.

הקמת מודל העכבר של נוירופתיה סיבים קטנים טהור עם אגוניסט Ultrapotent פוטנציאלי קולטן ארעי Vanilloid סוג 1

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

Development of Recombinant Proteins to Treat Chronic Pain

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates for treating debilitating pain conditions due to their capacity to regulate aberrant neuro-immune interactions. However, physiologically they work in a network of various cytokines, and therefore their therapeutic effect may not be optimal when used as stand-alone drugs. To overcome this limitation, we developed a fusion protein of the anti-inflammatory cytokines IL4 and IL10. Here, we describe the methods for production and quality control of IL4-10 recombinant fusion protein and we test the effectiveness of the IL4-10 fusion protein to resolve pain in a mouse model of persistent inflammatory pain.

In this paper we provide details for the methods of production and quality control of an IL4-10 recombinant fusion protein. We also show how to test the effectiveness of this protein to resolve pain in a mouse model of inflammatory pain.

פיתוח חומרים לטיפול בכאב כרוני

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...