עבודה זו נתמכה על ידי המרכז הלאומי de la משוכלל ונדיר Scientifique (UPR3212 חוזה), אוניברסיטת שטרסבורג ועל ידי NARSAD לחוקר צעיר מענק מקרן המוח &amp; Behavior המחקר (לIY). עלויות פרסום נתמכות על ידי רשת Neurex (תכנית Interreg IV העליון הריין).

פרוטוקולים שאושרו על ידי &quot;Comité d&#39;en éthique matière d&#39;הניסויים animale דה שטרסבורג&quot; (CREMEAS). 1. Baseline מדידה של Paw נסיגת ספים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לעכברים להרגיל למתקנים של בעלי החיים ל10 ימים לפחות 2 שבועות לפני ביצוע הליכי הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיל את העכברים להגדרת בדיקות פון פריי ולהליך פון פריי המתוארות בסעיף 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הניתוח, להעריך את סף נסיגת כפה המכני עם חוטי פון פריי כפי שתואר בסעיף 4.3. הערה: חזור על התהליך בימים נפרדים לפחות עד שלושה ערכים ברציפות יציבים מתקבלים לסף נסיגת כפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצה את העכברים לקבוצות ניסוי השונים, כך שקבוצות אלה אינן בתחילה שונים לסף נסיגת כפה. </li></ol> 2. הליך ניתוח לקאף Implantatiעל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את בעלי החיים. הערה: משקל גוף עכבר צריך להיות מעל 20 גרם להליך החדרת שרוול המתואר להלן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיה עם זריקת intraperitoneal של 4 מיליליטר / קילוגרם של תערובת של קטמין (17 מ&quot;ג / מיליליטר) ו xylazine (2.5 מ&quot;ג / מיליליטר) ב0.9% NaCl, המספק -45 דקות של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את היעדר רפלקסים כפה על ידי צביטת כף אחורית עם פינצטה ולבדוק את היעדר רפלקסים העין לוודא כי בעלי החיים הוא בהרדמה מלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את רגל ימין מהברך למפרק הירך באמצעות מכונת גילוח חשמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ג&#39;ל נוזלי העין מגן לעיניים עם מקל אוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה על צידו השמאלי ולמקם את הגפיים אחוריות ממש על כרית קטנה ולשמור על הגפיים אחוריות זכות לכרית עם דבק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את שדה הניתוח עם כלורהקסידין ו70% אתנול באמצעות תחבושת או מקל אוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצא את עצם הירך באמצעות האצבע ולעשותחתך של כ 0.5 סנטימטר, במקביל לעצם הירך וכ 1.5 מ&quot;מ הקדמי לעצם הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את השרירים קרובים לעצם הירך עם שני מקלות autoclaved. הערות: אין לחתוך את השריר. בדרך כלל, את שכבות השרירים להפריד בקלות וללא דימום וגיד הנשה הוא לאחר מכן נראה לעין. במקרה של דימום, יש להשתמש במקל אוזני סטרילי כדי לספוג את הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס שני מקלות autoclaved מתחת לעצב השת לחשוף הסניף הראשי שלה, וללחלח את העצבים עם תמיסה סטרילית פיזיולוגית (0.9% NaCl). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את סעיף 2 מ&quot;מ סטרילי מוכן מראש של צינורות פיצול 20-PE פוליאתילן (שרוול), מזהה 0.38 מ&quot;מ / מ&quot;מ OD 1.09, בעזרת פלדת מקל מחודד ומהדק בולדוג. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את פלדת המקל המחודד לשרוול, שיהיה מעט לפתוח אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הפתיחה לרוחב השרוול, הכנס את בולדוג בקצה אחד של השרוול ומקביל לשרוול. סובב את בולדוג (180 מעלות) כך שהוא יקיים את השרוול על ידיצד שהוא ההפך לפתיחה לרוחב. סגור את בולדוג ולהסיר פלדת המקל המחודד. הערה: הסיבוב נעשה כדי לאפשר מחזיק בשרוול בעמדה מותאמת להחדרה, מהדק בולדוג גם עוזר לשמור על השרוול בחלקו פתוח. הדגם והגודל של מהדק בולדוג הם קריטיים עבור שלב זה של ההליך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לי הנסיין שני להחזיק את שני מקלות בעצב ובעדינות להפריד את המקלות כדי להקל על הגישה לקטע של עצב השת שאורכו כ -4 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את שרוול 2 מ&quot;מ סביב הסניף הראשי של העצב השת, החל על ידי הוספת חלק מהשרוול, כי הוא דיסטלי לבולדוג סביב החלק של העצב שהוא הפרוקסימלי לירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את השרוול בעדינות על ידי הפעלת לחץ על שני צדדים הדיסטלי שלה עם צבת, ללא סחיטה או שינוי הצורה של הצינור. הפעל את השרוול כדי לוודא שהוא סגור בצורה נכונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפרת את שנינות שכבת עור המגולחתקשרים כירורגית שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בצד השמאלי שלה בכלוב בבית נקי. שמור אותו תחת מנורת החום עד שהעכבר הוא ער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף מים נוספים ולהציב כמה אוכל ישירות בכלוב בבית. </li></ol> 3. הליך ניתוח לבקרת Sham <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את אותו הליך הניתוח כפי שתואר לעיל מהשלב 2.1 לשלב 2.9, ולאחר מכן פעל בצעדים 2.15-2.17. לבקרות אחיזת עיניים, להשמיט את הצעדים 2.10-2.14 כי רק דאגה החדרת השרוול. </li></ol> 4. פון פריי בדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכברים בקופסות ברורות בודדות (7 ס&quot;מ X 9 ס&quot;מ X 7 ס&quot;מ) עם חורים, על צלחת מחוררת גבוהה של נירוסטה חלקה (MX 1 50 סנטימטר, 5 נקבי מעגל מ&quot;מ עם 2.5 מ&quot;מ בין גבולות ניקוב). הערה: עד 12 עכברים ניתן לבדוק במקביל על זה הגדרה. ניתן לבדוק בעלי חיים המופעלים ביום שלאחר הניתוח. עם זאת, 3 ימים של התאוששות מומלצים לצמצם את רגישות יתר לאחר הניתוח נצפה בבקרות אחיזת עיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לבעלים החיים כדי להרגיל ל15 דקות לפני הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את חוטי פון פריי אל פני השטח הפלנטרי של כל כף רגל אחורית בסדרה של כוחות עולים. הערות: חוטי פון פריי הם שערות פלסטיק בקטרים ​​מכוילים. הם ארוכים 5 ס&quot;מ והם קבועים באפליקטורים החזיק ביד. המהירות של יישום נימה, את מידת כיפוף ואת משך הזמן של היישום יכולה להשפיע על ערכי הסף שמתקבלים בבדיקה זו 3. בהליך הנוכחי בעכברים, החוטים המשמשים לרוב הם 0.16, 0.4, 0.6, 1, 1.4, 2, 4, 6, 8, ו10 גרם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את נימה שנבחרה אל פני השטח הפלנטרי של כף רגל השמאל עד לנימה פשוט מתכופפת. לחזור על התהליך שלושה עד חמש פעמים ברציפות, ולאחר מכן לעשות את אותו הדבר לכפה הימנית. ברגע שהנימה נבדקה בשני כפות, לבדוק את החיה הבאה. הערות: יש להימנע מגבולות לרוחב כף שיכולה להיות רגישים יותר. התגובה הצפויה היא כפהנסיגה, רתיעה פתאומית או ליקוק כפות. קחו למשל את התגובה כחיובית אם לפחות שלוש תגובות צפויות הם נצפו מתוך חמישה ניסויים. כפה נתון תמיד נבדקה שלוש פעמים, אבל את התגובה הרביעית והחמישיים הניסויים נעשים רק אם 1 או 2 (ים) הייתה (היו) שנצפה במהלך שלושת המבחנים הראשונים. בעכברי C57BL/6J, להתחיל בדיקות טרום ניתוח עם נימה 1.4 גרם. לאחר ניתוח, להתחיל את הבדיקות עם נימה 0.4 גרם. אם תשובה חיובית הוא ציין עם נימה בדקה הראשונה, לבדוק את החוט בכוח נמוך יותר (במקום גדול יותר) בכל צעד של 4.3.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל את אותו חוט לבעלי החיים הבאים על פי הנוהל 4.3.1. ברגע שכל בעלי החיים שנבדקו, להתחיל שוב על החיה הראשונה עם נימה הבאה של כוח גדול יותר. חזור על התהליך עד שכל העכברים לתת תשובה חיובית. הערות: מבחן כל חיה עד שני חוטים ברציפות לתת תשובה חיובית. קחו למשל את ערך גרם של חוט הלהט הנמוך שנתן תשובה חיובית כשנינות כפהסף hdrawal לחיה הזו. </li></ol></li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

המודל &quot;השרוול&quot; פותח בתחילה בחולדות כדי להשיג פגיעת התכווצות כרונית סטנדרטית ולשעתק עם ההשתלה של אזיקים רבים ברחבי העצב השת 6. לאחר מכן הוא עבר שינוי כדי להשתיל שרוול אחד 7,8, למרות שחלק מקבוצות המחקר עדיין להשתמש בהכנסת שרוול מספר 19-22. לאחר מכן הוא הותאם לעכברי 9,23, שפתחו את האפשרות להשתמש בבעלי חיים מהונדסים. השרוול הוא בדרך כלל ארוך 2 מ&quot;מ, אך אורכים אחרים יש גם שימשו בחולדות 22. צינורות פוליאתילן תלויים במינים: PE-20 בעכברים 9, ו-PE-60 24,25 או PE-90 7,8,26,27 בחולדות. אלודיניה מכאנית נמדדת עם שערות פון פריי. בבדיקה זו, הערכים מוחלטים לערכי סף נסיגת כפה עשויים להיות תלויים במשטח שעליו עומד בעלי החיים 28 או על משך הזמן של נימה כיפוף 3, אך גורמים אלה לאלהשפיע על זיהוי של אלודיניה נוירופתי. מודל &quot;השרוול&quot; הוא עניין למחקר של מנגנוני כאב נוירופתי. זה היה בשימוש ללמוד שינויים מורפולוגיים בסיבי myelinated וunmyelinated 6,29, ושינויים תפקודיים בעצב סנסורי, afferents הראשונית ותאי עצב בעמוד השדרה 19,21,22,30-35. זה אפשר הפגנה כי הפעלת גליה ושינוי מרכזי בשיפוע אניון העצבי להשתתף בשינויים בפעילות ובתגובות של נוירונים nociceptive השדרה ובאלודיניה נוירופתי 24,36-38. ההשפעה של קולטני גלוטמט 7,39-41, של קולטנים אופיואידים 16,42-45 ושל קולטנים ניקוטינית 46 הייתה גם למדה במודל זה. עניין נוסף של המודל הוא את תגובתה לטיפולים השוטפים בכאב עצבי, כלומר., gabapentinoids ותרופות נוגדות דיכאון. בדומה לתצפיות קליניות: gabapentinoids להציג שניn פעולה אקוטית לטווח קצרה במשככי כאבים במינון גבוה ועכב ספגה פעולה להקלה שהוא ציין לאחר כמה ימים של טיפול, תרופות טריציקליות וספיגה חוזרת של סרוטונין ונוראדרנלין יש מעכבים שום אפקט משכך כאבים חריפים במינון רלוונטי אבל הם מציגים עכבו נגרמו להקלה פעולה שדורשת 1 עד 2 שבועות של טיפול, ופלואוקסטין מעכבי הספיגה החוזרת של סרוטונין אינה יעילה 16. המודל הוא אפוא ראוי ללמוד את המנגנון המולקולרי שבבסיס טיפולים אלה 16-18,44,45,47, אשר עשויים לחשוף את המטרות טיפוליות חדשות לבדיקה בחולים 48-51. לבסוף, המודל גם מאפשר הלימוד של השלכות anxiodepressive בכאב עצבי. מבחינה קלינית, תוצאות אלה משפיעות על כשליש מחולי כאב נוירופתי אך preclinically פחות למדו מההיבטים חושיים של כאב. במודל זה, התפתחות כמו חרדה והדיכאון תלוי זמןפנוטיפים כמו sive-נוכח 52 והמנגנון הקשור ובכך ניתן לטפל. האזיקים תקניים ונהלים במודל של עכברים זה בכאב עצבי לגרום השתנות interindividual נמוכות לאלודיניה מכאנית. האפשרות להשתמש בבעלי חיים מהונדסים גנטי 17,18,44-47,52, אלודיניה לטווח הארוכה, התגובה לטיפולים בשימוש קלינית ואת הפיתוח של סימפטומים anxiodepressive תלוי הזמן להפוך את המודל הזה מתאים ללימוד ההיבטים השונים ו השלכות של כאב נוירופתי והטיפולים שלה, שכבר הביאו מידע רב ערך בתחום זה של מחקר.

כאב נוירופטי הוא בדרך כלל כרוני, והוא נוצר כתוצאה מפגיעה או מחלה הפוגעת במערכת החושית. שינויי הסתגלותי בעצב סנסורי פצוע ולאורך מסלול nociceptive השלם בתוך מערכת העצבים המרכזית להשתתף בתסמונת מורכבת זו. מודלים שונים פותחו במכרסמים לחקר כאב נוירופתי והטיפולים שלה 1-3. בהתבסס על בעלות אטיולוגיה ידועה, המודלים של מטרת כאב נוירופתי במחקו polyneuropathy נצפה בסוכרת, הפציעות לעצבים היקפיים, הפציעות המרכזיות, העצב המשולש, נוירופתיה רצופה לכימותרפיה, עצבי פוסט herpetic, וכו &#39;מודלים שונים של פגיעה עצבית היקפית במכרסמים להתמקד בעצב השת. מודלים אלה תלויים בדחיסה ו / או במקטע של עצב זה. ואכן, העצב השת מאפשר ניתוח קל יחסית ומאפשר לבדיקות המבוססות על רפלקסים נסיגת כפה. מוdels של דחיסת עצב כרונית כולל לדוגמא: פציעה הכרונית התכווצות (CCI) 4,5, עצב השת אוזקים 6-9, קשירה החלקית השת עצב (PSL) 10, קשירת השדרה העצב (SNL) 11, או נפוצה קשירת עצב peroneal 12. מודלים המכונים &quot;פגיעה חסכה עצבים&quot; (SNI) גם נמצאים בשימוש נרחב. הם מורכבים מקשירה וaxotomy של שתיים מתוך שלושה סניפי המסוף של העצב השת הדוקים, ואילו הסניף השלישי נותר בשלמותה 13-15. המודלים השונים של כאב נוירופתי, הממקדים את העצב השת, לגרום לאלודיניה מכאנית כרונית (תגובת nociceptive לבדרך כלל גירוי שאינו nociceptive) על כף הרגל האחורית הפצועה. הנה, את הליך הניתוח מפורט עבור &quot;מודל השרוול&quot; בכאב עצבי בעכברים הוא תאר. זה מורכב בהשתלה של שרוול פוליאתילן סביב הסניף הראשי של העצב השת 6-9. השימוש בדואר של סיבי פון פריי מתוארים גם. סיבים אלה מאפשרים הערכת אלודיניה מכאנית אשר היא סימפטום nociceptive לאורך זמן הווה במודל זה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:633px;" width="633">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:111px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PE-20 polyethylene tubing</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>PY2-59-8323</td>
			<td>Splitted before surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketamine</td>
			<td>Centravet</td>
			<td>IMA004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xylazine HCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X1251</td>
			<td>Freshly prepared before surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ocry-gel</td>
			<td>Centravet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plier</td>
			<td>FST</td>
			<td>11003-12</td>
			<td>52.5 mm straight</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bulldog clamp</td>
			<td>FST</td>
			<td>p130 18038-45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Perforated plate</td>
			<td>CTTM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">von Frey filaments</td>
			<td>Bioseb</td>
			<td>NC-12775</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the sciatic nerve cuffing model of neuropathic pain in mice

כאב נוירופטי נובע כתוצאה מנגע או מחלה הפוגעת במערכת החושית. תוצאות תסמונת זו משינויי הסתגלותי בעצב סנסורי פצוע ולאורך מסלול nociceptive השלם בתוך מערכת העצבים המרכזית. זה בדרך כלל כרוני ומאתגר לטיפול. על מנת ללמוד בכאב נוירופתי והטיפולים שלה, מודלים שונים פותחו במכרסמים. מודלים אלה נובעים מבעלות אטיולוגיה ידועה, ובכך מתרבים פציעות היקפי עצבים, פציעות מרכזיות, וחילוף חומרים, נוירופתיה זיהומיות או הקשורות לכימותרפיה. מודלים עכבריים של פגיעה עצבית היקפית לעתים קרובות למקד את גיד הנשה אשר קל לגישה ומאפשר בדיקות nociceptive בכף הרגל האחורית. מודלים אלה מסתמכים על דחיסה ו / או סעיף. הנה, את הליך הניתוח מפורט עבור &quot;מודל השרוול&quot; בכאב עצבי בעכברים הוא תאר. במודל זה, שרוול של צינורות פוליאתילן PE-20 באורך סטנדרטי (2 מ&quot;מ) הוא באופן חד צדדי implanted סביב הסניף הראשי של העצב השת. זה גורם אלודיניה מכאנית לטווח ארוך, כלומר., תגובת nociceptive לגירוי בדרך כלל אינו nociceptive שיכול להיות מוערך על ידי שימוש בחוטי פון פריי. חוץ מהניתוחים ובדיקות מפורטים, העניין של מודל זה לחקר מנגנון עצבי של כאב, לחקר כאב נוירופתי היבטים חושיים וanxiodepressive, ולמחקר של טיפולים בכאב נוירופתי גם דן.

הנתונים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM. ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות ניתוח רב גורם של שונות (ANOVA) או מבחני t מזווגים בהתאם לעיצוב ניסיוני. לניתוחים אלו, קבוצות ניתוח הדמה וחפת וכן תמיסת מלח לעומת טיפולים תרופתיים נחשבו כגורמים בין הקבוצות. בעת צורך, ניתוחים חוזרים ונשנים מידה שימשו לנתונים כמובן זמן. השוואות post hoc-בוצעו באמצעות מבחן דאנקן. מובהקות סטטיסטיים נחשבת בעמ &#39;&lt;0.05. בעת השימוש בהליכים המתוארים לעיל, תוצאות השתלת השרוול באלודיניה ipsilateral כפי שמודגמים באיור 1. ברגע שהעכבר רגיל להליך הבדיקה, ערכי סף נסיגת כפה במבחן פון פריי יישארו יציבים לאורך זמן והם אינו מושפע מההליך הכירורגי כשלעצמה, כפי שמודגם בבעלי חיים שאם. זה צריך עם זאת להיותיצוין, כי אלודיניה לאחר ניתוח חולף בדרך כלל ניתן שנצפתה בעכברים שאם. כאשר אלודיניה זה נוכח, תגובת נסיגת הכפה חוזרת לבסיס לאחר כמה ימים לאחר ניתוח. בעכברי חפת, אלודיניה ipsilateral הוא כבר נמצא בניתוח שלאחר הימים הראשונים ונשמרה במשך יותר מ 2 חודשים (ראו 9, ואיור 1; F8, 344 = 29.5, p &lt;0.001). אלודיניה-Induced השרוול נשארה ipsilateral בעכברי C57BL/6J כאשר הוא נמדד על ידי בדיקת פון פריי כפי שתואר לעיל, אבל בתנאים אחרים נוכחות של אלודיניה על הכף הנגדית יכולה להיות גם ציינה 8. הערכים מוחלטים לנקודת התחלה הם בדרך כלל בין 4 ל 6 גרם בעכברי C57BL/6J, אבל פרוטוקול הבדיקה עשוי להשפיע על ערכים אלה. תרופות נוגדות דיכאון טריציקליות הם בין טיפולי קו הראשון קליניים לכאב נוירופתי. במודל זה, r nortriptyline התרופה נוגד דיכאון טריציקליות (5 מ&quot;ג / קילוגרם, intraperitoneal, פעמיים ביום)elieves אלודיניה נוירופתי לאחר כ -2 שבועות של טיפול, כפי שמודגם באיור 2 (F7, 91 = 15.3, p &lt;0.001; שלאחר מעשה: (CuffNor = Sham)&gt; CuffSal בp &lt;0.001 בימים 29-34). במינון זה, שום פעולת משכך כאבים חריפה של תרופות נוגדות דיכאון הוא ציין 16,17. כדי לחקות את ההקלה בכאב המתמשכת שקיימות בחולים שנטל תרופות מסוג זה, ניתן לבדוק את העכברים לפני מתן התרופה בבוקר ולא אחרי. הליך כזה מאפשר הערכה של השפעה לטווח ארוך על ידי דרוכה ימים קודמים של טיפול. במקרה זה, זה דורש 1 עד 2 שבועות של טיפול כדי לבחון הקלה מתמשכת של אלודיניה נוירופתי. כאשר הטיפול נקטע, הישנות נשמרת בדרך כלל בתוך 3 עד 4 ימים 18. לצד כמה תרופות נוגדות דיכאון, gabapentinoids הם הטיפולים ראשון הברירה האחרות לכאב נוירופתי. יש gabapentin פעולת משכך כאבים אקוטית וחולפת במודל זה 16, אבל זה גם מציג לון מתעכב ו<html> פעולת antiallodynic כאשר בודק את בעלי החיים בכל יום לפני מתן התרופה (p &lt;0.001 איור 3) שנמשך-g. פעולה זו היא מהירה יותר מאשר בתרופות נוגדות דיכאון. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> ספי נסיגת כפת איור 1. מכאני במודל השרוול בכאב עצבי בעכברים. עכברי C57BL/6J זכר מבוגרים היו מורגלים להליך פון פריי עד בסיס יציב הושג (הבסיס מיוצג בשלב 0 בגרף). שני כפות נבדקו. עכברי קאף להציג אלודיניה מכאנית ipsilateral כהראה על ידי הספים הורידו נסיגת כפה (n = 10 לכל קבוצה). &quot;/&gt; Tp_upload/51608/51608fig2.jpg פעולת antiallodynic איור 2. מושהה של תרופות נוגדות דיכאון טריציקליות. אחרי שבועיים שלאחר ניתוח, עכברים קיבלו טיפול intraperitoneal פעמיים ביום (בוקר וערב) עם או NaCl 0.9% או 5 מ&quot;ג / hydrochloride nortriptyline קילוגרם (n = 5 או 6 לכל קבוצה ). מבחן פון פריי נעשה לפני הטיפול בבוקר. עם הליך זה, פעולת antiallodynic מאוחרת של nortriptyline הוא ציין, שדורש סביב 12 ימים של טיפול. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> איור 3. פעולת Antiallodynic של gabapentinoid. אחרי שלושה שבועות שלאחר ניתוח, עכברים קיבלו טיפול intraperitoneal פעמיים ביום (בוקר וערב) עם או NaCl 0.9% או 10 מ&quot;ג / קילוגרם gabapentin (n = 5 לכל קבוצה). מבחן פון פריי נעשה לפני פינוק בוקרment. עם הליך זה, פעולת antiallodynic מתעכבת ומתמשכת של gabapentin הוא ציין. הנתונים מוצגים לפני תחילת הטיפולים וביום ה -6 של טיפולים.

Watch this Scientific Journal Video about The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice at JoVE.com

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

כאב נוירופטי הוא תוצאה של פגיעה או מחלה המשפיעה על מערכת החושית. &quot;מודל השרוול&quot; בכאב עצבי בעכברים מורכב מההשתלה של שרוול פוליאתילן סביב הסניף הראשי של העצב השת. אלודיניה מכאנית נבדקה באמצעות חוטי פון פריי.

דגם השת עצב איזוק של כאב נוירופתי בעכברים

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

47.8K Views.  Centre National de la Recherche Scientifique.  כאב נוירופטי הוא תוצאה של פגיעה או מחלה המשפיעה על מערכת החושית. "מודל השרוול" בכאב עצבי בעכברים מורכב מההשתלה של שרוול פוליאתילן סביב הסניף הראשי של העצב השת. אלודיניה מכאנית נבדקה באמצעות חוטי פון פריי. 

Video: The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared nerve injury (SNI) model induces symptoms of neuropathic pain such as mechanical allodynia i.e. pain due to tactile stimuli that do not normally provoke a painful response [1]. 
The SNI mouse model involves ligation of two of the three branches of the sciatic nerve (the tibial nerve and the common peroneal nerve), while the sural nerve is left intact [2]. The lesion results in marked hypersensitivity in the lateral area of the paw, which is innervated by the spared sural nerve. The non-operated side of the mouse can be used as a control. The advantages of the SNI model are the robustness of the response and that it doesn&#x2019;t require expert microsurgical skills.
The threshold for mechanical pain response is determined by testing with von Frey filaments of increasing bending force, which are repetitively pressed against the lateral area of the paw [3], [4]. A positive pain reaction is defined as sudden paw withdrawal, flinching and/or paw licking induced by the filament. A positive response in three out of five repetitive stimuli is defined as the pain threshold. 
As demonstrated in the video protocol, C57BL/6 mice experience profound allodynia as early as the day following surgery and maintain this for several weeks.

The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

The Spared Nerve Injury animal model is described here as a mouse model of peripheral neuropathic pain following partial denervation of the sciatic nerve by lesioning the tibial and common peroneal nerve branches, leaving the remaining sural nerve intact. Behavioral modification resulting from mechanical allodynia is quantified by von Frey filaments.

פגיעה ניצלו עצב (SNI) דגם Allodynia מכונות המושרה עכברים

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of the population1,2. Symptoms include spontaneous (tingling, burning, electric-shock like) pain, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (pain resulting from normally non-painful stimuli) and hyperalgesia (an increased response to painful stimuli). The sensory symptoms are co-morbid with behavioural disabilities, such as insomnia and depression. To study chronic neuropathic pain several animal models mimicking peripheral nerve injury have been developed, one of the most widely used is Bennett and Xie's (1988) unilateral sciatic nerve chronic constriction injury (CCI)3 (Figure 1). Here we present a method for performing CCI and testing pain hypersensitivity.
CCI is performed under anaesthesia, with the sciatic nerve on one side exposed by making a skin incision, and cutting through the connective tissue between the gluteus superficialis and biceps femoris muscles. Four chromic gut ligatures are tied loosely around the sciatic nerve at 1 mm intervals, to just occlude but not arrest epineural blood flow. The wound is closed with sutures in the muscle and staples in the skin. The animal is then allowed to recover from surgery for 24 hrs before pain hypersensitivity testing begins.
For behavioural testing, rats are placed into the testing apparatus and are allowed to habituate to the testing procedure. The area tested is the mid-plantar surface of the hindpaw (Figure 2), which falls within the sciatic nerve distribution. Mechanical withdrawal threshold is assessed by mechanically stimulating both injured and uninjured hindpaws using an electronic dynamic plantar von Frey aesthesiometer or manual von Frey hairs4. The mechanical withdrawal threshold is the maximum pressure exerted (in grams) that triggers paw withdrawal. For measurement of thermal withdrawal latency, first described by Hargreaves et al (1988), the hindpaw is exposed to a beam of radiant heat through a transparent glass surface using a plantar analgesia meter5,6. The withdrawal latency to the heat stimulus is recorded as the time for paw withdrawal in both injured and uninjured hindpaws. Following CCI, mechanical withdrawal threshold, as well as thermal withdrawal latency in the injured paw are both significantly reduced, compared to baseline measurements and the uninjured paw (Figure 3). The CCI model of peripheral nerve injury combined with pain hypersensitivity testing provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to modify chronic neuropathic pain. In our laboratory, we utilise CCI alongside thermal and mechanical sensitivity of the hindpaws to investigate the role of neuro-immune interactions in the pathogenesis and treatment of neuropathic pain.

Due to the simplicity of surgery and the robust behavioural outcome, chronic constriction of the sciatic nerve is one of the pre-eminent animal models of neuropathic pain. Within 24 hrs following surgery, pain hypersensitivity is established and can be quantitatively measured using a von Frey aesthesiometer (mechanical test) and plantar analgesia meter (thermal test).

היצרות כרונית של העצב Sciatic ואת רגישות יתר לכאב בדיקה אצל חולדות

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of ...

Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim) for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. It has been extensively used in various clinical settings. Based upon recent discoveries related to the systemic effects of voluntary breathing and intrinsic physiological interactions among systems during voluntary breathing, a new EStim protocol, Breathing-controlled Electrical Stimulation (BreEStim), has been developed to augment the effects of electrical stimulation. In BreEStim, a single-pulse electrical stimulus is triggered and delivered to the target area when the airflow rate of an isolated voluntary inspiration reaches the threshold. BreEStim integrates intrinsic physiological interactions that are activated during voluntary breathing and has demonstrated excellent clinical efficacy. Two representative applications of BreEStim are reported with detailed protocols: management of post-stroke finger flexor spasticity and neuropathic pain in spinal cord injury.

Breathing-controlled Electrical Stimulation BreEStim for Management of Neuropathic Pain and Spasticity

The purpose is to present a new method, breathing-control electrical stimulation (BreEStim) for management of neuropathic pain and spasticity.

גירוי נשימה מבוקרת חשמל (BreEStim) לטיפול בכאב נוירופתי וספסטיות

Electrical stimulation (EStim) refers to the application of electrical current to muscles or nerves in order to achieve functional and therapeutic goals. ...

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

חיתוך רוחב עצב הטיביאלי - מודל סטנדרטי לניוון שרירים שלד מושרה denervation בעכברים

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

תגובות שתן בשלפוחית ​​השתן ההתנפחות העוררת Visceromotor כמודל לשלפוחית ​​שתן כאב בעכברים

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and either cut or crush it to induce peripheral nerve injury. Advantages of this surgery are its simplicity, high reproducibility, and the lack of effect on vital functions or mobility from the subsequent facial paralysis, thus resulting in a relatively mild surgical outcome compared to other nerve injury models. A major advantage of using a cranial nerve injury model is that the motoneurons reside in a relatively homogenous population in the facial motor nucleus in the pons, simplifying the study of the motoneuron cell bodies. Because of the symmetrical nature of facial nerve innervation and the lack of crosstalk between the facial motor nuclei, the operation can be performed unilaterally with the unaxotomized side serving as a paired internal control. A variety of analyses can be performed postoperatively to assess the physiologic response, details of which are beyond the scope of this article. For example, recovery of muscle function can serve as a behavioral marker for reinnervation, or the motoneurons can be quantified to measure cell survival. Additionally, the motoneurons can be accurately captured using laser microdissection for molecular analysis. Because the facial nerve axotomy is minimally invasive and well tolerated, it can be utilized on a wide variety of genetically modified mice. Also, this surgery model can be used to analyze the effectiveness of peripheral nerve injury treatments. Facial nerve injury provides a means for investigating not only motoneurons, but also the responses of the central and peripheral glial microenvironment, immune system, and target musculature. The facial nerve injury model is a widely accepted peripheral nerve injury model that serves as a powerful tool for studying nerve injury and regeneration.

We present a surgical protocol detailing how to perform a cut or crush axotomy on the facial nerve in the mouse. The facial nerve axotomy can be employed to study the physiological response to nerve injury and test therapeutic techniques.

Axotomy פנים עצב של עכברים: דגם לחקר תגובת Motoneuron לפגיעה

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to Study Trigeminal Neuropathic Pain

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral procedures to study trigeminal neuropathic pain in rats. To meet the specificity of trigeminal neuropathic pain syndromes, the infraorbital nerve (IoN) is subjected to a chronic constriction injury (CCI) by loosely ligating the nerve. An intra-orbital approach is presented here to expose and ligate the IoN in the orbital cavity. After IoN ligation, rats exhibit changes in spontaneous behavior and in response to von Frey hair stimulation that are indicative of persistent pain and mechanical allodynia. Two phases can be defined in the development of the behavioral changes. During the first week following IoN-CCI (phase 1), rats show an increased and asymmetric face grooming activity, i.e., with face wash strokes primarily directed to the nerve-injured IoN territory. A distinction is made between face grooming behavior that is part of a more general body grooming behavior, which remains largely unaffected by IoN-CCI, and face grooming that is neither preceded nor followed by body grooming, which is significantly increased after IoN-CCI. During this period, responsiveness to mechanical stimulation of the IoN territory is reduced. This hyporesponsiveness is abruptly replaced by an extreme hyperresponsiveness whereby even very weak stimulus intensities provoke nocifensive behavior (phase 2). The phenomenological similarities between these behavioral alterations and reported signs of facial pain (i.e., responses to noxious stimulation of the face) suggest the presence of dysesthesia/paresthesia and mechanical allodynia in the ligated IoN territory.

Chronic Constriction Injury of the Rat&#039;s Infraorbital Nerve IoN-CCI to Study Trigeminal Neuropathic Pain

This manuscript describes a rodent model to study trigeminal neuropathic pain. The methods described include surgical procedures to perform a chronic constriction injury of the rat&#8217;s infraorbital nerve and the post-surgical behavioral tests to measure the changes in spontaneous and evoked behavior that are indicative of persistent pain and allodynia.

התכווצות פציעה כרונית של עצב Infraorbital של העכברוש (יון-CCI) לחקר trigeminal נוירופתי כאב

Animal models are important tools to study the pathophysiology and pharmacology of neuropathic pain. This manuscript describes the surgical and behavioral ...

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

Subcutaneous Trigeminal Nerve Field Stimulation for Refractory Facial Pain

Chronic or neuropathic trigeminal facial pain can be challenging to treat. Neurosurgical procedures should be applied when conservative treatment fails. Neuromodulation techniques for chronic facial pain include deep brain stimulation and motor cortex stimulation, which are complex to perform. Subcutaneous nerve field stimulation is certified for chronic back pain and is the least invasive form of neuromodulation. We applied this technique to treat chronic and neuropathic trigeminal pain as an individual therapy concept. First, trial stimulation is performed. Subcutaneous leads are placed in the painful trigeminal dermatome under local anesthesia. The leads are connected to an external neurostimulator that applies constant stimulation. Patients undergo a 12 day outpatient trial to assess the effect of the stimulation. Electrodes are removed after the trial. If the patient reports pain reduction of at least 50% in intensity and/or attack frequency, a reduction in medication or increase in quality of life, permanent implantation is scheduled. New electrodes are implanted under general anesthesia and are subcutaneously tunneled to an infraclavicular internal pulse generator. Patients are able to turn stimulation on and off and to increase or decrease the stimulation amplitude as needed.
This technique represents a minimal invasive alternative to other more invasive means of neuromodulation for trigeminal pain such as motor cortex stimulation or deep brain stimulation.

Treating chronic or neuropathic facial pain can be challenging when medical or standard treatment fails. Subcutaneous nerve field stimulation is the least invasive form of neuromodulation and is used for chronic back pain. We applied this technology to treat chronic and neuropathic trigeminal facial pain.

תת עורית גידולי שדה העצבים עבור כאב פנים עקשן

Chronic or neuropathic trigeminal facial pain can be challenging to treat. Neurosurgical procedures should be applied when conservative treatment fails. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...