המחברים מבקשים להודות תמיכה טכנית מג&#39;וי יאו וד&quot;ר קארן Alt, כמו גם מימון מNHMRC וNHF.

כל הניסויים מעורבים בעלי חיים אושרו על ידי המחקר הרפואי אלפרד והוועדה חינוך של קריית בעלי החיים אתיקה (E / 1534/2015 / ב &#39;). כל המניפולציות כירורגית בוצעו בהרדמה מלאה והבעלים החיים לא חוו כאב בכל שלב. כל הניסויים המתוארים הנן ללא התאוששות. 1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך רצועות דקות של נייר סינון (1 מ&quot;מ x 2 מ&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרי להכין 2 פתרונות של כלוריד Ferric של 4% (w / v) ו -6% (w / v) מדולל למים ללא יונים. הכן פתרון 6G rhodamine 0.3% ב- PBS, מסונן דרך 0.22 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי חתיכה קטנה (5 מ&quot;מ x 1 סנטימטר) מהפלסטיק הלבן של עטיפת מזרק. </li></ol> 2. גיבוש לפדר עורקיק פקיק נצפה על ידי מיקרוסקופית Intravital <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 10-12 שבועות גבר בן C57Bl / 6 עכבר סוג בר ולהרדים בהתאם בתערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם) למרות שזריקת intraperitoneal. צג עומק ההרדמה על ידי תגובה לבוהן, זנב ו / או קמצוץ עור, תגובתיות מקמצוץ של קרנית וpalpebral, והיעדר תנועת שפם. במידת צורך, להזריק מנה שנייה של קטמין (50 מ&quot;ג / קילוגרם) כדי לשמור על הרדמה של בעלי החיים. החל משחה וטרינר בעיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. מניחים את העכבר בצלחת פטרי קטנה מונחת על כרית חימום המותאמת עד 37 מעלות צלזיוס. הערה: למרות הזרקת IP עלולה לגרום לכאב לבעלי החיים, את משך הזמן של חוסר נוחות זה יהיה (פחות מ -3 שניות) מינימליות. כאב ואי נוחות כרוכה בזריקות יהיו ממוזערות באמצעות כוח אדם מנוסה ומוסמך וגודל מתאים מחט (25 G). בעקבות כל הנהלים, להרדים את כל בעלי החיים באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine אחריו נקע בצוואר רחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע חתך קו האמצע בטן של כ 3 סנטימטר בעור ולחתוך את הצפק בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את העכבר בצד של חיית המחמדצלחת רי, בעדינות exteriorize המעיים שלה והתפשט בזהירות לפדר עם 2 ניצני כותנה להביא כלי מתאים לפני השטח של צלחת פטרי. ייבש היטב עם מגב עדין. הערה: כדי להגביל את תנועתם של כלי mesenteric, papaverine ניתן להשתמש כדי לעכב תנועה פריסטלטית מעיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים את הזנב של העכבר במים חמים כדי להרחיב את כלי להזריק 30 μl של Rhodamine 6G (0.3%) לוריד הזנב של העכבר עם מזרק 29 G לתייג לויקוציטים וטסיות דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צלחת פטרי תחת מיקרוסקופ הפוכה ולהתמקד בעורקיק נבחר באמצעות ערוץ השדה הבהיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים להקה של נייר סינון עם 6% (w נ /) ברזל כלוריד (III) ולהחיל את נייר הסינון על עורקיק עם שני מלקחיים; הראשון להחזיק את נייר הסינון, השני אחת ללחץ אותו בעדינות על השטח של עניין. שים לב היווצרות קריש דם בראשון 10 שניות הבאות בתצהיר של נייר הסינון. הערה: זה די commעל לפגוע בנימי הדם זעירה המוקפת והדיוק של התצהיר של נייר הסינון והלחץ בעדינות לכן חשוב להגביל את הנושא הזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב היווצרות קרישי דם על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי (ערוץ TRITC: עירור שיא 557 ננומטר, ננומטר פליטת 576 שיא), דרך נייר הסינון. שימו לב לויקוציטים במחזור וטסיות דם שנלקחו 6G Rhodamine וצבירתם לפקיק לכן קל לזהות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את נייר סינון מלאחר 1 דקות של חשיפה לברזל כלוריד (III) ותמשיך לעקוב אחר ההיווצרות של קרישי הדם. לשטוף את הכלי עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתבונן ולהקליט את היצירה הדינמית של פקיק מודגש עם התיוג של טסיות דם וכדוריות דם לבנות עם 6G Rhodamine. ללכוד התמונות ולמדוד את הגודל של פקיק. תמונות במסמך שהוצג התקבלו עם מיקרוסקופ intravital הפוך, אם כי 4X אובייקטיבי, בערוץ הקרינה TRITC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Following את כל ההליכים, להרדימו באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine אחריו נקע בצוואר רחם. </li></ol> היווצרות פקיק עורקי התרדמה 3. הוערכה על ידי מדידת מהירות זרימת דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 10-12 שבועות גבר בן C57Bl / 6 עכבר ולהרדים בהתאם בתערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם) למרות שזריקת intraperitoneal. החל משחה וטרינר בעיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את העכבר תחת מיקרוסקופ הפעלה באמצעות סרט דביק על רגליים, על כרית חימום המותאמת עד 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך כרית קטנה ממגב אחד והדבק אותה מתחת לראש של העכבר כדי לרומם את הראש מעט. השתמש לולאת חוט עם מלקחיים לניתץ החוטם (להשתמש שיניים העליונות). זה יחשוף את האזור של עורק התרדמה לגישה קלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חתך עמוק 5 מ&quot;מ קטן של העור ישירות מתחת ללסת, עד לעצם החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הפאScia ולבודד בר או עורק תרדמה משותפת שמאל או ימין מעל הסתעפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג בזהירות פינצטה ב- בין העורק והעצב להפריד ביניהם. נא לא להפריע העצב פועל קרוב לעורק והימנע מלגעת יותר מדי של עורק התרדמה או כך גורם נזק לכלי השיט. לבודד את החלק של 5 מ&quot;מ לפחות של העורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את האזור של העורק כראוי עם מגבים כדי למנוע את זה בכל נוזל מפריע לFeCl 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את חתיכת הפלסטיק הלבנה הקטנה מתחת לחלק המבודד של הראש הנפוץ כל כך 3 FeCl לא לספוג ברקמות הסובבות. לשם כך, השתמש במלקחיים שני להביא פיסה לראשונה ואז לאט לאט להחליק את נייר הפלסטיק מתחת לעורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים פיסת נייר סינון עם 4% (w / v) או 6% (w / v) כלוריד Ferric ולמקם אותו בכל רחבי העורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 3 דקות חשיפה, תוריד את נייר הסינון, לשטוף עם PBS ולייבש את האזור wמגבי ה- i. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את זרימת דופלר הבדיקה סביב האונייה באזור הפגוע ולהתחיל להקליט את השינויים בזרימה. בתרדמה המשותפת הבריא של עכברים בוגרים, הזרימה היא בדרך כלל סביב 1 מיליליטר / דקה. זהירות! קשר של החללית עם כלוריד Ferric יפגע בדיקה לכן יש להימנע מכל מגע. הנתונים במסמך זה מוצג התקבלו עם מטר Transonic מערכת בע&quot;מ זרימה, מודול perivascular TS420 מצויד בזרימת בדיקה דופלר ננו 0.5 PBS. הערה: הריכוז של כלוריד Ferric יכול לשנות את קינטיקה של היווצרות קרישי דם וכתוצאה מכך פעמים חסימה שונות. לפיכך, חשיפה ל6% (w / v) כלוריד Ferric נותן חסימה מהר יותר מאשר חשיפה ל4% (w / v) כלוריד Ferric. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות כל הנהלים, להרדים את כל בעלי החיים באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine אחריו נקע בצוואר רחם ולנקות את הבדיקה דופלר בזהירות. </li></ol>

<ol>
	<li>Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+in+vivo+models+of+thrombosis+to+the+discovery+and+development+of+novel+antithrombotic+agents.">Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).</li><li>Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+utility+of+animal+models+in+the+preclinical+study+of+interventions+to+prevent+human+coronary+artery+restenosis:+analysis+and+recommendations.+On+behalf+of+the+Subcommittee+on+Animal,+Cellular+and+Molecular+Models+of+Thrombosis+and+Haemostasis+of+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+International+Society+on+Thrombosis+and+Haemostasis.">The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.</a> Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).</li><li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+thrombosis+models.">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).</li><li>Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+thrombus+formation+in+murine+models.">In vivo thrombus formation in murine models.</a> Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).</li><li>Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+thrombus+formation.">Mechanisms of thrombus formation.</a> N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).</li><li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG,+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome.">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).</li><li>Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+endothelial+injury+in+the+mouse+as+a+screening+model+for+inhibitors+of+vascular+intimal+thickening.">Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).</li><li>Rosen, E. D., Raymond, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi.">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).</li><li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride.">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).</li><li>Eckly, A., Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis.">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).</li><li>Darbousset, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+neutrophils+in+thrombus+formation+in+living+mice.">Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice.</a> Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).</li><li>Denis, C., Methia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+severe+von+Willebrand+disease:+defects+in+hemostasis+and+thrombosis).">A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).</li><li>Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+single-chain+antibody-targeted+microbubbles+for+molecular+ultrasound+imaging+of+thrombosis:+validation+of+a+unique+noninvasive+method+for+rapid+and+sensitive+detection+of+thrombi+and+monitoring+of+success+or+failure+of+thrombolysis+in+mice.">Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice.</a> Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).</li><li>Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -. Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+ferric+chloride-induced+vena+cava+thrombosis:+evidence+for+effect+of+potato+carboxypeptidase+inhibitor.">Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor.</a> J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).</li><li>Karatas, H., Erdener, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl(3)+application:+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies.">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).</li><li>Jirouskov&#225;, M., Chereshnev, I., V&#228;&#228;n&#228;nen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+blockade+or+mutation+of+the+fibrinogen+gamma-chain+C-terminus+is+more+effective+in+inhibiting+murine+arterial+thrombus+formation+than+complete+absence+of+fibrinogen.">Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen.</a> Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).</li><li>Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoprotein+VI-dependent+and+-independent+pathways+of+thrombus+formation+in+vivo.">Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo.</a> Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).</li><li>Navarrete, A. -. M., Casari, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+to+characterize+the+antithrombotic+effect+of+molecules+targeting+human+von+Willebrand+factor.">A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor.</a> Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).</li><li>Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation+and+ADAMTS13-dependent+modulation+of+disease+severity+in+a+mouse+model+for+von+Willebrand+disease+type+2B.">Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B.</a> Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).</li><li>Lamrani, L., Lacout, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemostatic+disorders+in+a+JAK2V617F-driven+mouse+model+of+myeloproliferative+neoplasm.">Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm.</a> Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).</li><li>Zhang, Y., Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+platelet+activation+and+thrombosis+in+transgenic+mice+expressing+constitutively+active+P2Y12.">Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12.</a> J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).</li><li>Sch&#228;fer, K., Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+mechanisms+of+increased+luminal+stenosis+after+arterial+injury+in+mice+deficient+for+urokinase-+or+tissue-type+plasminogen+activator.">Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator.</a> Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).</li><li>Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+effective+and+safe+thrombolysis+and+thromboprophylaxis:+preclinical+testing+of+a+novel+antibody-targeted+recombinant+plasminogen+activator+directed+against+activated+platelets.">Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets.</a> Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).</li><li>Decrem, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ir-CPI,+a+coagulation+contact+phase+inhibitor+from+the+tick+Ixodes+ricinus,+inhibits+thrombus+formation+without+impairing+hemostasis.">Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis.</a> J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).</li><li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmolaris,+a+novel+factor+XIa+anticoagulant+from+the+salivary+gland+of+the+vampire+bat+(Desmodus+rotundus)+inhibits+inflammation+and+thrombosis+in+vivo.">Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo.</a> Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).</li><li>Lei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anfibatide,+a+novel+GPIb+complex+antagonist,+inhibits+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+in+vitro+and+in+vivo+in+murine+models+of+thrombosis.">Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis.</a> Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).</li><li>Waisberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+infection+induces+expression+of+a+mosquito+salivary+protein+(Agaphelin)+that+targets+neutrophil+function+and+inhibits+thrombosis+without+impairing+hemostasis.">Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis.</a> PLoS Pathog. 10 (9), e1004338 (2014).</li><li>Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+standardization+of+the+murine+ferric+chloride-induced+carotid+arterial+thrombosis+model.">Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model.</a> J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).</li><li>Wang, X., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+murine+model+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+for+thrombosis+research.">An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research.</a> Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).</li><li>Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transendothelial+migration+of+ferric+ion+in+FeCl3+injured+murine+common+carotid+artery.">Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery.</a> Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).</li><li>Bonnard, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+mimetic+polysaccharide+microparticles+tracked+in+vivo+on+activated+endothelium+and+in+abdominal+aortic+aneurysm.">Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).</li><li>Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+dorsal+skinfold+chamber+as+a+model+for+the+study+of+thrombolysis+by+intravital+microscopy.">The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy.</a> Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).</li><li>Konstantinides, S., Sch&#228;fer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+its+cofactor+vitronectin+stabilize+arterial+thrombi+after+vascular+injury+in+mice.">Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice.</a> Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).</li><li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury:+A+model+of+redox+pathology.">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

המודל פקקת כלוריד מושרה הברזל הוא כלי מחקר מעולה. כפי שניתן לראות במחקר זה, זה מאוד קל ליישום וכאשר משתמש בו בשילוב עם מיקרוסקופיה intravital או flowmeter דופלר, הוא מספק ניטור בזמן אמת טוב של היווצרות קריש דם. התאמת חשיפת הזמן והריכוז של FeCl 3, היא מציעה גם את האפשרות לייצר ...

המחקר של המנגנונים מעורבים בהתפתחות פקקת וההערכה האפקטיביות של תרופות אנטי-טרומבוטיים דורש מבוסס היטב מודלים של בעלי חיים ניסיוניים. המודלים של בעלי חיים גדולים היו הראשון שהשתמש בכפי שהם מספקים כלי גדול יותר דומה לבני אדם מאשר מכרסמים 1. עם זאת, עלות גבוהה, המתקנים הגדולים יותר הנדרשים והקושי בלתמרן אותם מבחינה גנטית חסרונות עיקריים לשימוש בם ובעלי חיים גדולים כיום מוגבלים למחקרים פרה-קליניים מאוחר פעם אחת בדיקות ראשוניות על מכרסמים נתנו תוצאות חד משמעיות 2. עם זמינות רחבה של זנים מהונדסים ונוקאאוט וגודלם הקטן שממזער את כמות התרופות נוגדות נדרשות לבדיקת in vivo, עכברים משמשים בעיקר למחקר פקקת. לכן, מספר דגמים של הפרעות טרומבוטיים פותחו בעכברים 3. מודלים פקקת הוקמו רבים לשבש את intimשכבה של קיר הכלי, ואחריו את החשיפה של מטריקס אנדותל המשנה לזרימת הדם וגורמת להיווצרות של קרישי דם 4. Thrombi יכול לנבוע מהחשיפה של קולגן אשר מפעילה הפעלת טסיות דם ו / או מהחשיפה של גורם רקמות אשר מפעילה את מפל הקרישה 5. כמה טכניקות אז מועסקות להשיג פגיעת הכלי הראשונית. פייראנג&#39;לי et al. פיתחה מודל הפרעה מכאני עם כלי מייקרו על וריד הירך 6. Kikushi et al. תאר מודל אשר מורכב בממשל של מתחם תגובתי תמונה (רוז בנגל) שמצטבר בbilayer השומנים של תאי האנדותל ואחרי העירור הספציפי של קיר הכלי של עניין עם אור הירוק (540 ננומטר) 7. הפגיעה יכולה גם להיגרם על ידי תאורת לייזר דופק קצרה בעוצמה גבוהה 8. טכניקה נוספת שהוקמה בראשית העורק הראשי של חולדותמורכב ביישום המקומי של כלוריד Ferric (FeCl 3) 9. במקרה זה, את תוצאות denudation כלי מפני רדיקלים חופשיים הנוצרים על ידי FeCl 3 שגורמת חמצון של שומנים והרס של תאי האנדותל 10. הפציעה גורמת ביטוי של מספר מולקולות הידבקות מפעילות הידבקות טסיות דם וצבירה, כמו גם גיוס לויקוציטים. הוכח כי כדוריות דם לבנות, במיוחד נויטרופילים, לשחק תפקיד מכריע בהפעלה של מפל קרישת דם המוביל אל פקקת 11. שיטה זו מתאימה גם לשחזר את מפל הקרישה; חוקרים חייבים לזכור כי, במודל עכבר זה, פקקת מושרה בדרך כלל בכלי בריאים ואילו פקקת בבני האדם מתרחש בעיקר בלמשל חולה. כלי טרשת עורקים. כמודל זה הוא פשוט מאוד ליישום, והוא גם יעיל בעכברים, שהוא עכשיו המצב פקקת משמש בעיקרl לבעלי חיים קטנים במחקרי vivo. בנוסף, טכניקה זו מציעה את האפשרות לגרום להיווצרות thrombi במגוון רחב של כלים. כלי יעד יכולים להיות עורקים או ורידים בקוטר גדול (תרדמה, וריד הירך, נבוב) או בקוטר קטן (לפדר, Cremaster) 12-14. לאחרונה, זה היה בשימוש גם בעורק המוח האמצעי הפרוקסימלי לפתח מודל של שבץ 15. ההיווצרות פקקת אפשר לראות ישירות על ידי מיקרוסקופ intravital לאחר תיוג הניאון של טסיות דם וכדוריות דם לבנות או פיקוח על ידי מדידת זרימת דם הירידה בבדיקת טמפרטורה או 12,16,17 בדיקה דופלר. מספר פרמטרים כגון זמן חסימה, זמן היווצרות קריש דם או גודל פקיק יכולים אז להיחקר. ההבדלים הפיסיולוגיים בין כלי חקרו תוצאה בוריאציות משמעותיות בthrombi הושג. לכן, חוקרים בדרך כלל לבחור את כלי היעד על פי הפרמטרים שהם רוצים measuמחדש ו / או המחלה הגדרה שהם רוצים לחקור. בדרך כלל, המודל על העורק הראשי הוא רלוונטי יותר עבור מחקר על atherothrombosis הקשורים לאוטם שריר לב או שבץ ואילו מחקרים על הווריד הנבוב רלוונטיים יותר עבור מחקר על פקקת ורידים עמוקים. הנגישות של כלי השונים גם קובעת את השיטה המשמשת למדידת צמיחת פקיק. לדוגמא, כלי mesenteric קלים לגשת עושה מודל זה גם מתאים לתצפית מיקרוסקופית intravital והמחקר של הדינמיקה של היווצרות קריש דם. עורק התרדמה הוא פחות נגיש אבל גדול יותר מדידות זרימת דם ומאפשרים ומספק מודל מצוין ללמוד פקקת אוטם. המודל פקקת מושרה כלוריד Ferric סיפק התקדמות אדירה בהבנת הפתולוגיה זה. זה כבר נעשה שימוש במחקרים רבים המתמקדים בתפקיד של גורם פון Willebrand בהיווצרות פקקת 18,19. בשילוב עם מודי גנטייםטכניקות שינוי מקום, זה אפשר זיהוי של גן ספציפי רב המעורב בהפרעות טרומבוטיים. Lamrani et al. למשל הראה כי נוק-בגן JAK2 V617F קשור היווצרות מואצת של קריש יציב 20. ג&#39;אנג et al. חקרו את המשמעות הפיזיולוגית של הקולטן טסיות דם P2Y12 והוכיח כי עכברים הטרנסגניים ביתר במיוחד קולטן זה בטסיות דם בלבד, מוצגים במערך פקיק יותר מהיר ויציב בעורק mesenteric נפצע עם FeCl 3 21. התפקיד המכריע של activator plasminogen רקמות מהסוג (tPA) וactivator האוריקינאז הסוג plasminogen (UPA) בתהליך פירוק הפיברין גם נחקר בשיטה זו 22. יתר על כן מודל זה גם מספק דרך פשוטה ומדויקת של בדיקת יכולות Fibrinolytic של תרופות רבות רומן in vivo. לדוגמא, וואנג ואח &#39;. השתמש במודל זה עבור האימות פרה דואר של activator plasminogen רקומביננטי רומן הממוקד נגד טסיות הופעלו 23. שיטה זו אפשרה גם את האימות של חלבונים טיפוליים מבודדים מהרוק של קרציות, עטלפי ערפד, ויתושים או מהארס של נחשים עם זיהוי ספציפי של היעד 24-27. דוגמאות אלה ממחישות את הרבגוניות של מודל כלוריד Ferric. במאמר זה, נתמקד בשתי שיטות וללמוד פקקת ברזל כלוריד מושרה בשני סוג כלי שונה; כלי mesenteric ועורק הראשי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Whatman chromatography paper</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>3030917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (III) chloride 40 % (w/v)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>24212.298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine 6G</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R4127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope&#160;</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital black-and-white camera&#160;</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XM10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doppler flowmeter</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>TS420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nano-doppler flow probe</td>
			<td>Transonic</td>
			<td>0.5 PBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hospira&#160;</td>
			<td>0409-2051-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (Rampun)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>75313&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe (29 G)</td>
			<td>BD Ultra-Fine</td>
			<td>326103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicators</td>
			<td>BSN medical</td>
			<td>211827A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynek dysilk sutures</td>
			<td>Dynek Pty Ltd</td>
			<td>CS30100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco life technologies</td>
			<td>21600-069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Kirchner</td>
			<td>T60</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ferric chloride-induced thrombosis mouse model on carotid artery and mesentery vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric chloride injury is now a well-established technique to rapidly and accurately induce the formation of thrombi in exposed veins or artery of small and large diameter. This model has played a key role in the study of the pathophysiology of thrombosis, in the discovery and validation of novel antithrombotic drugs and in the understanding of the mechanism of action of these new agents. Here, the implementation of this technique on a mesenteric vessel and carotid artery in mice is presented. The method describes how to label circulating leukocytes and platelets with a fluorescent dye and to observe, by intravital microscopy on the exposed mesentery, their accumulation at the injured vessel wall which leads to the formation of a thrombus. On the carotid artery, the occlusion caused by the clot formation is measured by monitoring the blood flow with a Doppler probe.

תצפית הניאון המיקרוסקופית Intravital של לפדר תגלה ההצטברות של Rhodamine 6G כותרת טסיות דם וכדוריות דם לבנות לאורך קיר הכלי נפגע FeCl 3. ההיווצרות ההדרגתית של פקיק חלקי מנוטרת בכלי 200 מיקרומטר לפדר (איור 1). פקיק מופיע לאט וברור לזיהוי אחרי דקות הראשונות של חשיפה לFeCl <...

Watch this Scientific Journal Video about Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel at JoVE.com

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

The FeCl3 induced thrombosis model in mice is described herein. A method to monitor thrombus growth by intravital microscopy observation on a mesenteric vessel and by blood flow measurement in the carotid artery is presented.

פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

ferric-chloride-induced-thrombosis-mouse-model-on-carotid-artery

Research

JoVE Journal

Medicine

17.3K Views.  Baker IDI Heart and Diabetes Institute. The FeCl3 induced thrombosis model in mice is described herein. A method to monitor thrombus growth by intravital microscopy observation on a mesenteric vessel and by blood flow measurement in the carotid artery is presented.

Video: Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified version of carotid partial ligation methods [1,2] to show that it acutely induces low and oscillatory flow conditions, two key characteristics of disturbed flow, in the mouse common carotid artery. Using this model, we have provided direct evidence that disturbed flow indeed leads to rapid and robust atherosclerosis development in Apolipoprotein E knockout mouse [3]. We also developed a method of endothelial RNA preparation with high purity from the mouse carotid intima [3]. Using this mouse model and method, we found that partial ligation causes endothelial dysfunction in a week, followed by robust and rapid atheroma formation in two weeks in a hyperlipidemic mouse model along with features of complex lesion formation such as intraplaque neovascularization by four weeks. This rapid in vivo model and the endothelial RNA preparation method could be used to determine molecular mechanisms underlying flow-dependent regulation of vascular biology and diseases. Also, it could be used to test various therapeutic interventions targeting endothelial dysfunction and atherosclerosis in considerably reduced study duration.

This describes a partial carotid ligation surgery, which causes disturbed flow conditions and subsequent atherosclerosis development (in two weeks) with intraplaque neo-vascularization (in four weeks) in the mouse common carotid artery. We also describe a novel method of RNA isolation from the carotid intima, providing high purity endothelial RNA.

המודל של טרשת עורקים Flow-induced מופרע על העורק הראשי עכבר ידי קשירת חלקי שיטה פשוטה של ​​בידוד RNA מן התרדמה האנדותל

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Despite the considerable progress made in the stent development in the last decades, cardiovascular diseases remain the main cause of death in western countries. Beside the benefits offered by the development of different drug-eluting stents, the coronary revascularization bears also the life-threatening risks of in-stent thrombosis and restenosis. Research on new therapeutic strategies is impaired by the lack of appropriate methods to study stent implantation and restenosis processes. Here, we describe a rapid and accessible procedure of stent implantation in mouse carotid artery, which offers the possibility to study in a convenient way the molecular mechanisms of vessel remodeling and the effects of different drug coatings.

A model of stent implantation in mouse carotid artery is described. Compared to other similar methods, this procedure is very rapid, simple and accessible, offering the possibility to study in a convenient way the vascular wall reaction to different drug-eluting stents and the molecular mechanisms of restenosis.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and cellular mechanisms involved in vascular smooth muscle dedifferentiation, neointima formation and vascular remodeling. Male Sprague-Dawley rats are the most frequently employed animals for this model. Female rats are not preferred as female hormones are protective against vascular diseases and thus introduce a variation into this procedure. The left carotid is typically injured with the right carotid serving as a negative control. Left carotid injury is caused by the inflated balloon that denudes the endothelium and distends the vessel wall. Following injury, potential therapeutic strategies such as the use of pharmacological compounds and either gene or shRNA transfer can be evaluated. Typically for gene or shRNA transfer, the injured section of the vessel lumen is locally transduced for 30 min with viral particles encoding either a protein or shRNA for delivery and expression in the injured vessel wall. Neointimal thickening representing proliferative vascular smooth muscle cells usually peaks at 2 weeks after injury. Vessels are mostly harvested at this time point for cellular and molecular analysis of cell signaling pathways as well as gene and protein expression. Vessels can also be harvested at earlier time points to determine the onset of expression and/or activation of a specific protein or pathway, depending on the experimental aims intended. Vessels can be characterized and evaluated using histological staining, immunohistochemistry, protein/mRNA assays, and activity assays. The intact right carotid artery from the same animal is an ideal internal control. Injury-induced changes in molecular and cellular parameters can be evaluated by comparing the injured artery to the internal right control artery. Likewise, therapeutic modalities can be evaluated by comparing the injured and treated artery to the control injured only artery.

This protocol uses a balloon catheter to cause an intraluminal injury on the rat carotid artery and henceforth elicit neointimal hyperplasia. This is a well-established model for studying the mechanisms of vascular remodeling in response to injury. It is also widely used to determine the validity of potential therapeutic approaches.

כלי דם בלון פגיעה וIntraluminal מנהל בעורקי תרדמת העכברוש

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

פציעת בלון עכברוש ראש דגם כדי לבדוק Therapeutics שיפוץ אנטי-וסקולרית

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, diabetes, obesity, cancer and chronic autoimmune rheumatologic disorders. Thrombi are the cause of most heart attacks, strokes and extremity loss, making thrombosis an extremely important public health problem. Since these thrombi stem from inappropriate platelet activation and subsequent coagulation, targeting these systems therapeutically has important clinical significance for developing safer treatments. Due to the complexities of the hemostatic system, in vitro experiments cannot replicate the blood-to-vessel wall interactions; therefore, in vivo studies are critical to understand pathological mechanisms of thrombus formation. To this end, various thrombosis models have been developed in mice. Among them, ferric chloride (FeCl3) induced vascular injury is a widely used model of occlusive thrombosis that reports platelet activation and aggregation in the context of an aseptic closed vascular system. This model is based on redox-induced endothelial cell injury, which is simple and sensitive to both anticoagulant and anti-platelets drugs. The time required for the development of a thrombus that occludes blood flow gives a quantitative measure of vascular injury, platelet activation and aggregation that is relevant to thrombotic diseases. We have significantly refined this FeCl3-induced vascular thrombosis model, which makes the data highly reproducible with minimal variation. Here we describe the model and present representative data from several experimental set-ups that demonstrate the utility of this model in thrombosis research.

We report a refined procedure of the ferric chloride (FeCl3)-induced thrombosis models on carotid and mesenteric artery as well as vein, characterized efficiently using intravital microscopy to monitor time to occlusive thrombi formation.

מי כלוריד-induced Ferric מודלים פקקת Murine

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, ...

Phase Contrast Magnetic Resonance Imaging in the Rat Common Carotid Artery

Phase contrast magnetic resonance imaging (PC-MRI) is a noninvasive approach that can quantify flow-related parameters such as blood flow. Previous studies have shown that abnormal blood flow may be associated with systemic vascular risk. Thus, PC-MRI can facilitate the translation of data obtained from animal models of cardiovascular diseases to pertinent clinical investigations. In this report, we describe the procedure for measuring blood flow in the common carotid artery (CCA) of rats using cine-gated PC-MRI and discuss relevant analysis methods. This procedure can be performed in a live, anesthetized animal and does not require euthanasia after the procedure. The proposed scanning parameters yield repeatable measurements for blood flow, indicating excellent reproducibility of the results. The PC-MRI procedure described in this article can be used for pharmacological testing, pathophysiological assessment, and cerebral hemodynamics evaluation.

The overall goal of this procedure is to measure the blood flow in the rat common carotid artery by using noninvasive phase contrast magnetic resonance imaging.

שלב ניגודיות תהודה מגנטית בעורק החולדה נפוצים

Phase contrast magnetic resonance imaging (PC-MRI) is a noninvasive approach that can quantify flow-related parameters such as blood flow. Previous ...

Ferric Chloride-induced Canine Carotid Artery Thrombosis: A Large Animal Model of Vascular Injury

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, we have translated a vascular injury model from a small animal into a large animal (canine), with slight modifications that can be used for pre-clinical screening of prophylactic and thrombolytic agents. In addition to the surgical methods, the modified protocol describes the step-by-step methods to assess carotid artery canalization by angiography, detailed instructions to process both the brain and carotid artery for histological analysis to verify carotid canalization and cerebral hemorrhage, and specific parameters to complete an assessment of downstream thromboembolic events by utilizing magnetic resonance imaging (MRI). In addition, specific procedural changes from the previously well-established small animal model necessary to translate into a large animal (canine) vascular injury are discussed.

Here, we present the modifications necessary to a well characterized and commonly used small animal ferric chloride-induced (FeCl3) carotid artery injury model for use in a large animal vascular injury model. The resulting model can be utilized for pre-clinical trial assessment of both prophylactic and thrombolytic pharmacological and mechanical interventions.

פקקת הברזל ותחמוצת כלוריד-induced הכלבי העורק הראשי: דגם בעל חיים גדול של פגיעה בכלי הדם

Occlusive arterial thrombosis leading to cerebral ischemic stroke and myocardial infarction contributes to ~13 million deaths every year globally. Here, ...