המחברים מודים לדן Firl, כריס קורבט וג&#39;סי Denson, PhD. מימון ניתן על ידי NIH NINDS R01 NS060765 לSR, P30 Cobre תכנית הפיילוט לLJ ותכנית חתימת בריאות הילד לLJ באוניברסיטת ניו מקסיקו.

מוסדי טיפול ושימוש בועדות בבית החולים לילדים בבוסטון וגם באוניברסיטת ניו מקסיקו למדעי בריאות המרכז אישרו את כל הפרוצדורות. הערה: לפני תחילת ההליך, החותם, לעקר וחיטוי כל מכשירי הניתוח ווילאות כירורגי. בנוסף, להכין תרופות לאחר ניתוח בבקבוקונים סטריליים כולל bipivucaine 0.125% ו 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות. גם להכין את פתרון lipopolysaccharide (LPS) סטרילי: 0.04 מ&quot;ג / מיליליטר LPS (0111: B4) בתמיסת מלח סטרילית מכילה לדלל צבע הכחול של אוון. 1. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה בחולדת ספראג Dawley עוברית יום 18 (E18) בהריון בתערובת של 3% חנקן isoflurane מאוזן 70% וחמצן 30%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עכברוש מתא האינדוקציה ולמקם את פרקדן החולדה על שמיכת מים במחזור עטופה כירורגית נקבעה על 37 מעלות צלזיוס. העבר את ההרדמה לחרטום ולהפחית isofluraרמת ne עד 2%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להחיל משחת עיניים לכל עין כדי למנוע התייבשות של קרנית. במהלך ההליך לפקח ללא הרף טמפרטורה, קצב נשימה וקצב לב של החיה. הפיסיולוגיה של האם צריכה להישאר יציבה לאורך כל ההליך. </li></ol> 2. הכנת כירורגי וליטוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוצץ חיה קטן באמצעות להסיר את כל השיער באזור הבטן התחתון. לגלח בתבנית מלבנית בזהירות כדי למנוע שסחבו את הפטמות או יצירת פריחה גילוח שיכול להיות מעצבן לסיעוד בעתיד של גורים שנולדו בשידור חי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את עור בטן לסירוגין יישום של לשפשף אתנול povidone- יוד ו -70% עם צמר גפן סטרילי. חזור על השיחים כך שpovidone- יוד ו -70% אתנול הוא כל מיושם 3x לסירוגין אופנה. בואו יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר עומק ההרדמה באמצעות היעדר רפלקס הבוהן קמצוץ. בהיעדר רפלקס וגירויים כאב, להפחית את רמת isoflurane עד 1%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במגבות ניתוח סטרילי,לעטוף את החיה. דואג למקם את הווילאות בזווית מתאימה כזה שהם למקסם את כמות השקיה הנוזל הם סופגים, ואינם חוסמים את זרימת דם לקרני הרחם. </li></ol> 3. הבטן laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל לעשות חתך קו האמצע 3 סנטימטר בעור הבטן מוכן. בבוטות לנתח את שכבת העור מfascia הבטן עם מספריים. בעזרת מלקחיים ומספריים כירורגיות, לרומם את שכבת fascial הבטן ולעשות חתך של alba Linea avascular כדי לקבל גישה לחלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים תחבושות על הצד החיצוני של החתך ולהרטיב עם תמיסת מלח סטרילית. בעזרת מלקחיים בוטים ולחץ חיצוני על הבטן, להסיר בעדינות את קרן הרחם מחלל הצפק ולארגן בגזה הלחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להימנע מהסתבכות בזהירות וקשר עם מעיים. לארגן עוברים באמצעות מלקחיים על ידי יצירת קשר רקמת השריר רק בין שקים מי שפיר הבודדים.לחשוף ולבודד את עורקי רחם 4 באמצעות נתיחה בוטה. יש להקפיד לנתח את עורקי רחם: הערה. רקמה וכלי מקיף את עצמם מאוד עדינים. נזק לכלי אימהיים יכול לגרום לדימום, ובמקרים חמורים, מוות עוברי ואימהי. </li></ol> 4. מיקום של קליפים מפרצת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח קליפ פרצה G עכברוש 30 בכל עורק רחם. להבטיח הפסקת זרימת דם, כוללים הפרוקסימלי וקטניות דיסטלי, ומחשיך של כלי הרחם כולל שליות נפרדות. לכסות את הקרניים חשופות ותחום כירורגית כל עם גזה ולהשקות עם תמיסת מלח סטרילית. דואג לשמור על השדה לח עם השקיה בערך כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 60 דקות, להסיר את הגזה ולהשקות את השדה. ודא שקרן הרחם והכולים טבולה במידה מספקת להסרת סרטון מוצלחת. הוצא בעדינות כל קליפ פרצה באמצעות מלקחיים. יש להיזהר שלא לגרום לטראומה לכלי השיט, ושימורשלמות רקמות עין במהלך ההסרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביסודיות להשקות את קרן הרחם ושדה, דואג להסיר כל אשכולות תועים של גזה מהצ&#39;קים מי השפיר. </li></ol> 5. הזרקה של lipopolysaccharide לשפיר Sacs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבסיסו של כל שק מי שפיר בודד, רק קדמי לצלחת השליה, להזריק של LPS (4 מיקרוגרם / שק) עם הצבע הכחול של אוון בדילול 100 μl למי שפיר. שימוש במלקחיים בוטים לייצב ולסובב כל שק מי שפיר למיקום אופטימלי להזרקה. הצבע הכחול של לדלל אוון הוא חומר ניגוד שהוא מועיל במאשר מיקום מזרק מתאים והזרקה. הערה: שימוש במזרק רק 0.3 מיליליטר אינסולין אולטרה דק עם מחט G 8 מ&quot;מ 31 מצורפים לזריקות תוך-השפיר. שימוש במחטי מד גדולים יותר תגרום לאובדן כרוני מי שפיר, מוות עוברי וספיגה של ההריון. כמויות קטנות של דליפה מי שפירה עם הסרת המזרק יכולות להיות mitigated על ידי לחץ ישיר לשק מי השפיר. עוברי עכברים מסוימים עשויים לסבול מידת המיעוט מי שפיר. עם זאת, אובדן חריף מי שפיר מלנקב עם מחטים גדולות מד, או לנקב מקרי וכתוצאה מכך דליפת נוזל כרונית, תוצאות באובדן של העובר ובמקרים חמורים, אובדן ההריונות שכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות את רחם קרנות 3x עם תמיסת מלח סטרילית. </li></ol> 6. סגירת laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, לחזור בזהירות את קרן הרחם לחלל הצפק. הבטחת מרחב מספיק בין שקים מי השפיר וחתך קו האמצע, מחדש משוער קצות שכבת musculofascial באמצעות תפר 3-0 משי ריצה. להיות מודע למיקום של שקים מי השפיר בזמן סגירת חתך השריר. היזהר שלא לתפור לאו באמצעות שק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> -משוער מחדש את שכבת העור, באמצעות תפר 3-0 משי ריצה, סגירת שכבת העור. הערה: laparotomy צריך להיות סגור בשתי שכבות של תפרים רציפים כדי לאפשרלעור והרחבת שרירים עם הגדלת הריון. תפרים רציפים מאפשרים למתח פצע מופץ באופן שווה. תפרים בהפרעה הם פחות רצויים כקשרים מרובים הם מעצבן וניתן לעסו בקלות על ידי החולדה על מתאושש מהרדמה. סיכות כירורגי אינן רצויים. זנבות של הקשרים כירורגית יש לחתוך (&lt;3 מ&quot;מ) קצר מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 מיליליטר של קצוות סביב פצע 0.125% מתחת לעור bupivacaine באמצעות מחט 26 G. לנהל מנה אחת של 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות תת עורי בעורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את isoflurane ועכברוש יבש מגבת לפי צורך. מניחים בכלוב בבית נקי ולעקוב אחר התאוששות מן ההרדמה. ודא עכברוש לא יהפוך היפותרמיה. </li></ol> 7. לאחר ניתוח שחזור וטיפוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג העכברוש כל שעות 8-12 במשך 72 שעות ולאחר מכן מדי יום עד גורים נולדים (כ E22 או E23). לנהל מינונים נוספים של שעות / 72 שעות q8-12 עצירות או PRN כפי שהוכתב על ידי IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חולדות לסימנים של כאב, אי נוחות, דימום מנרתיק או דימום מהאתר כירורגית. בדוק את התפרים וחתך ודואג להבטיח חולדה לא לעיסה או הסרת התפרים שלהם בטרם עת. למרות שנדיר במיוחד, חולדות שתתפשרנה התפרים שלהם נמצאות בסיכון לבקיעת פצע. הערה: לפעמים חולדות עשויות להבלע כמויות עודפות של פריטי מצעים או שאינו מזון, מכונה פיקה, כתופעת לוואי של ממשל עצירות. למרות שמאוד נדיר, חולדות חייבות להיות במעקב לפיקה וחסימת מעי לאחר פוטנציאלית. </li></ol> 8. עיבוד רקמות וCryosectioning <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתכונן לHematoxylin וEosin (H &amp; E) מכתים של המוח לאחר הלידה, להסיר גורים מהכלוב בביתם ביום שלאחר לידה 2 (P2). בעזרת מספריים כירורגיות לערוף גורי חולדה ובעדינות להסיר את המוח מהגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרוק מוח תיקון בצינור חרוטי 15 מיליליטר מכיל 7 מיליליטר של paraformaldehyde 4% בופר פוספט(PBS). מניחים מוח על 4 מעלות צלזיוס ולתקן במשך 72 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 72 שעות, להעביר את המוח לפתרון PBS סטרילי המכיל 30% סוכרוז (w / v) ולחזור ל4 מעלות צלזיוס. הערה: ברגע שהמוח של הירידה בתמיסת סוכרוז הם מוכנים להיות מחולקים על cryostat. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות להקפיא את המוח ולעלות על העלי cryostat לרכישת חלקי העטרה קפוא. חותך 20 מיקרומטר סעיפי העטרה קפוא והר בשקופיות. סעיפים להבטיח נאספים באופן סדרתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר שקופיות לייבוש בטמפרטורת חדר למשך הלילה. חנות שקופיות ב -20 ° C. </li></ol> 9. Hematoxylin וEosin מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שקופיות רכובים סעיפים קפוא וחמות לטמפרטורת חדר. הערה: הכן את כל הפתרונות טריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות מקום בשקופית סט חם עד 50 מעלות צלזיוס במשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת שקופיות למדף מכתים. טובלים שקופיות 10x במים מזוקקים כפולים deionized (DDH 2 O). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בhematoxylin 100% במשך 5 דקות. סִישלי בhematoxylin יכולות להיות מותאם תלות בדרגה של מכתים סגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 15x באלכוהול חומצה (250 מיליליטר אתנול 70% + 1 מיליליטר חומצה הידרוכלורית מרוכז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ב 1% ליתיום קרבונט למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ב -95% אתנול דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 7x ב100% Eosin. מספר מטבלים בEosin יכול להיות שונה בהתאם למידת צביעה הוורודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 5x באתנול 95%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5x שקופיות לטבול בשינוי טרי של 95% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות ב 100% אתנול 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בשינוי טרי של 100% אתנול 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בקסילן 100% במשך 15 דקות. הערה: צעדי קסילן וcoverslipping צריך להתרחש במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בשינויים טריים של קסילן במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslip עם Permount ולתת יבש במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונת שקופיות עם מיקרוסקופ אור. </li></ol>

<ol>
	<li>Blencowe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+birth+associated+neurodevelopmental+impairment+estimates+at+regional+and+global+levels+for+2010.">Preterm birth associated neurodevelopmental impairment estimates at regional and global levels for 2010.</a> Pediatr Res. 74, 17-34 (2013).</li><li>Mwaniki, M. K., Atieno, M., Lawn, J. E., Newton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+neurodevelopmental+outcomes+after+intrauterine+and+neonatal+insults+a+systematic+review.">Long term neurodevelopmental outcomes after intrauterine and neonatal insults a systematic review.</a> Lancet. 379, 445-452 (2012).</li><li>Dammann, O., Leviton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+or+sustained+systemic+inflammation+and+the+preterm+brain.">Intermittent or sustained systemic inflammation and the preterm brain.</a> Pediatr Res. 75, 376-380 (2014).</li><li>Leviton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiologic+and+histologic+characteristics+of+the+extremely+preterm+infant's+placenta+predict+white+matter+damage+and+later+cerebral+palsy.">Microbiologic and histologic characteristics of the extremely preterm infant's placenta predict white matter damage and later cerebral palsy.</a> the ELGAN study Pediatr Res. 67, 95-101 (2010).</li><li>Redline, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+responses+in+the+placenta+and+umbilical+cord.">Inflammatory responses in the placenta and umbilical cord.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 11, 296-301 (2006).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+chorioamnionitis+is+the+most+common+placental+lesion+in+late+preterm+birth.">Chronic chorioamnionitis is the most common placental lesion in late preterm birth.</a> Placenta. 34, 681-689 (2013).</li><li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+histologic+chorioamnionitis+is+a+risk+factor+for+adverse+neonatal+outcome+in+late+preterm+birth+after+preterm+premature+rupture+of+membranes.">Acute histologic chorioamnionitis is a risk factor for adverse neonatal outcome in late preterm birth after preterm premature rupture of membranes.</a> PloS one. 8, e79941 (2013).</li><li>Pappas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioamnionitis+and+early+childhood+outcomes+among+extremely+low+gestational+age+neonates.">Chorioamnionitis and early childhood outcomes among extremely low gestational age neonates.</a> JAMA Peds. 168, 137-147 (2014).</li><li>Gaillard, R., Arends, L. R., Steegers, E. A., Hofman, A., Jaddoe, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+and+third+trimester+placental+hemodynamics+and+the+risks+of+pregnancy+complications+the+Generation+R+Study.">Second and third trimester placental hemodynamics and the risks of pregnancy complications the Generation R Study.</a> Am J Epidemiol. 177, 743-754 (2013).</li><li>Trivedi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+placental+inflammation+but+not+adrenal+activation+is+associated+with+extreme+preterm+delivery.">Fetal placental inflammation but not adrenal activation is associated with extreme preterm delivery.</a> Am J Obstet Gynecol. 206, 236 (2012).</li><li>Yanowitz, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+disturbances+in+premature+infants+born+after+chorioamnionitis+association+with+cord+blood+cytokine+concentrations.">Hemodynamic disturbances in premature infants born after chorioamnionitis association with cord blood cytokine concentrations.</a> Pediatr Res. 51, 310-316 (2002).</li><li>Jantzie, L. L., Corbett, C. J., Firl, D. J., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+Erythropoietin+Mitigates+Impaired+Cerebral+Cortical+Development+Following+Subplate+Loss+from+Prenatal+Hypoxia+Ischemia.">Postnatal Erythropoietin Mitigates Impaired Cerebral Cortical Development Following Subplate Loss from Prenatal Hypoxia Ischemia.</a> Cereb Cortex. , (2014).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+attenuates+loss+of+potassium+chloride+co+transporters+following+prenatal+brain+injury.">Erythropoietin attenuates loss of potassium chloride co transporters following prenatal brain injury.</a> Mol Cell Neurosci. 61, 152-162 (2014).</li><li>Jantzie, L. L., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+signaling+promotes+oligodendrocyte+development+following+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+brain+injury.">Erythropoietin signaling promotes oligodendrocyte development following prenatal systemic hypoxic ischemic brain injury.</a> Pediatric Res. 74, 658-667 (2013).</li><li>Mazur, M., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+erythropoietin+treatment+mitigates+neural+cell+loss+after+systemic+prenatal+hypoxic+ischemic+injury.">Postnatal erythropoietin treatment mitigates neural cell loss after systemic prenatal hypoxic ischemic injury.</a> J Neurosurg Peds. 6, 206-221 (2010).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+induced+by+graded+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+insults+in+rats.">Developmental changes induced by graded prenatal systemic hypoxic ischemic insults in rats.</a> Neurobiol Dis. 18, 568-581 (2005).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroanatomical+sensorimotor+and+cognitive+deficits+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia.">Neuroanatomical sensorimotor and cognitive deficits in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Brain Pathol. 22, 1-16 (2012).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+prenatal+ischemia+on+behavior+cognitive+abilities+and+neuroanatomy+in+adult+rats+with+white+matter+damage.">Impact of prenatal ischemia on behavior cognitive abilities and neuroanatomy in adult rats with white matter damage.</a> Behav Brain Res. 232, 233-244 (2012).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+musculoskeletal+and+locomotor+alterations+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia.">Mild musculoskeletal and locomotor alterations in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Intl J Devel Neurosci. 29, 593-607 (2011).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+pattern+of+interaction+between+in+utero+hypoxia+ischemia+and+intra+amniotic+inflammation+disrupts+brain+development+and+motor+function.">Complex pattern of interaction between in utero hypoxia ischemia and intra amniotic inflammation disrupts brain development and motor function.</a> J Neuroinflam. 11, 131 (2014).</li><li>Back, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+vulnerability+of+late+oligodendrocyte+progenitors+to+hypoxia+ischemia.">Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia ischemia.</a> J Neurosci. 22, 455-463 (2002).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Expression+of+N+Methyl+d+Aspartate+(NMDA)+Receptor+Subunits+in+Human+White+and+Gray+Matter+Potential+Mechanism+of+Increased+Vulnerability+in+the+Immature+Brain.">Developmental Expression of N Methyl d Aspartate (NMDA) Receptor Subunits in Human White and Gray Matter Potential Mechanism of Increased Vulnerability in the Immature Brain.</a> Cereb Cortex. 25, 482-495 (2015).</li><li>Jantzie, L. L., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Models+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">Preclinical Models of Encephalopathy of Prematurity.</a> Devel Neurosci. , (2015).</li><li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species.">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).</li><li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+neurotransmitter+systems+during+critical+periods.">Development of neurotransmitter systems during critical periods.</a> Exper Neurol. 190, S8-S21 (2004).</li><li>Kelsom, C., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+specification+of+GABAergic+cortical+interneurons.">Development and specification of GABAergic cortical interneurons.</a> Cell Biosci. 3, 19 (2013).</li><li>Kinney, H., Back, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+oligodendroglial+development+Relationship+to+periventricualr+leukomalacia.">Human oligodendroglial development Relationship to periventricualr leukomalacia.</a> Semin Pediatr Neuro. 5, 180-189 (1998).</li><li>Robinson, S., Li, Q., DeChant, A., Cohen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+loss+of+gamma+amino+butyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury.">Neonatal loss of gamma amino butyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg Peds. 104, 396-408 (2006).</li><li>Xu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+development+of+the+GABAergic+system+in+the+human+cerebral+cortex+and+white+matter.">Late development of the GABAergic system in the human cerebral cortex and white matter.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 70, 841-858 (2011).</li><li>Segovia, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrested+oligodendrocyte+lineage+maturation+in+chronic+perinatal+white+matter+injury.">Arrested oligodendrocyte lineage maturation in chronic perinatal white matter injury.</a> Ann Neurol. 63, 520-530 (2008).</li><li>Robinson, S., Li, Q., Dechant, A., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+loss+of+gamma+aminobutyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury.">Neonatal loss of gamma aminobutyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg. 104, 396-408 (2006).</li><li>Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prenatal+infection+on+brain+development+and+behavior+a+review+of+findings+from+animal+models.">Effects of prenatal infection on brain development and behavior a review of findings from animal models.</a> Brain Behav Immun. 24, 881-897 (2010).</li><li>Burd, I., Brown, A., Gonzalez, J. M., Chai, J., Elovitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes.">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li><li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation.">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice.">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 .</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

אנצפלופתיה של פגות קשה לדגמן בבעלי חיים בגלל האינטראקציה המורכבת של אטיולוגיה, כמובן זמן התפתחות נוירולוגית, מורכבות של מערך רשת מוחי אנושי, חופפות מנגנונים של פגיעה, ופנוטיפים השונים של מערכת העצבים המרכזית מעליב באו לידי ביטוי בפגים אנושיים. EOP קשור נקודות תורפה ס?...

עם מעל 12% מתינוקות שנולדו בארצות הברית לפני גיל הריון מוערך 37 שבועות 1, פגיעה מוחית סביב הלידה (PBI) מפגות היא גורם משמעותי לנכות קבועה. PBI מפגות, אנצפלופתיה מכונה גם של פגות (EOP), משפיעה על כל מערכת העצבים המרכזית (CNS). פגיעה במערכת העצבים המרכזית לעתים קרובות מתחילה ברחם, ומחריפה על ידי תהליכים טרום-לידתי כולל chorioamnionitis וסיבוכים לאחר לידה כגון היפוקסיה ואלח דם. PBI מעלבונות מערכתיים משנה התפתחות נוירולוגית ומוביל לשיתוק מוחין, אפילפסיה, עיכוב קוגניטיבי והפרעות נוירו-פסיכיאטריות רבות המשפיעים על ויסות רגשית, זיכרון ותפקוד ביצועי 1,2. למרות התקדמות רבה נעשתה, הבנה מוגבלת שרידים איך ההשלכות התאיות ומולקולריות של פגיעה במערכת העצבים המרכזית מלידה מוקדמת לתרגם למספר רב של השלכות נוירולוגיות בילדים שנולדו פגים. זה חוסר ידע האחוריERS אבחון בזמן אמת של חומרת פציעה של מערכת העצבים המרכזית ומינון הודיע ​​התערבויות המתעוררות. בנוסף, אסטרטגיות טיפוליות מתאים לגיל לאוכלוסיית חולים זו פגיעה להישאר חמקמקות. דלקת תוך רחמי היא מאוד נפוצה בפגות קיצוניות וכרוך מפל דלקתי עוברי-אימהי-שליה מורכבת 3. הזיהום תוך רחמי הוא לעתים קרובות תת-קליני. ממצאי שליה ספציפיים בקנה אחד עם דלקת חריפה, או chorioamnionitis היסטולוגית, הם גורמים עיקריים לתגובה הדלקתית העוברית והם ביחד עם פגיעה מוחית הקשורים לידה מוקדמת 3-5. ואכן, יש התגובה הדלקתית העוברית השלכות קליניות מובהקות לתוצאות ארוכת טווח מלידה מוקדמת. תינוקות שהם קטנים לגיל הריון (SGA) או שחווים זיהום פגיעים במיוחד ל3,4 גירעונות נוירולוגיות. Chorioamnionitis היא לידה מוקדמת אבחנה פתולוגית טיפוסית הבאה <sup&gt; 6,7, ובדיקה היסטולוגית מגלה סימנים של דלקת ב- 70% של שליות מתינוקות שנולדו פגים מאוד 4. יתר על כן, chorioamnionitis קשור עם ליקוי קוגנטיבי בשנתי 8. ראיות של כלי דם האימהי underperfusion בשליה של תינוקות שנולדו פגים מאוד קשורות גם עם שיתוק מוחין בילדות 9. ההשפעה סינרגיסטית של פגמי זלוף chorioamnionitis והשליה מודגמת היטב על ידי גבוה להפליא הסיכון של תוצאות נוירולוגיות חריגות באוכלוסיית חולים זו בגיל שנתי 10,11. לחקות פגמים אנושיים מערכתיים זלוף השליה וchorioamnionitis קשורים לדלקת נגרם לפתוגן, פיתחנו מודל של היפוקסיה-איסכמיה לפני הלידה החולפת המערכתית (תשי&quot;ב) בשילוב עם lipopolysaccharide תוך מי שפיר (LPS) בחולדות. המטרה שלנו הייתה להתאים המודל של תשי&quot;ב לבד בחולדות 12-16 לכלול דלקת תוך רחמי,כדי להקל על מודלים פרה-קליניים של פגיעה במערכת העצבים המרכזית הקשורים ללידה מוקדמת. תשי&quot;ב לבד חשף אובדן מתמשך של תאי שושלת oligodendroglial, תאי עצב בקליפת המוח, גדל מוות של תאים, ורמות גבוהות ציטוקינים פרו-דלקתיות, עם מרווחי איסכמי מתקדמים המובילים לדפוס מדורג של פגיעה בקנה אחד עם פגיעה המוחית לפני הלידה 16. גם שינויים במרכיבי איסכמי של מודל זה הוכיחו גירעונות בקידוד זיכרון, קצר וזיכרון לטווח ארוך ושינויים קלים בשרירים ושלד חולדות כשהם מזדקנים 17-19. ואכן, יש לנו הפגנו בעבר כי השילוב של תשי&quot;ב + LPS משחזר סימני ההיכר של pathophysiological EOP, כוללים oligodendrocyte ואובדן עצבי, פגיעת axonal, דלקת סלולרית והפרעות תפקודיות 20.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td >Saline Solution, 0.9%</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >S8776</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LPS 011B4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Evan&#39;s Blue Dye</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical gloves</td>
			<td>Biogel</td>
			<td>40870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OR Towels</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>287000-008</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PDI Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mini Arco Rechargeable Clippers</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine surgical scrub</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>67618-151-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eye Lubricant</td>
			<td>Refresh Lacri Lube</td>
			<td>00023-0312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Blunt Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14002-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td>25G 5/8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305128</td>
			<td>30G 1</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton-tipped Applicators</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>23-400-114</td>
			<td>Small, 6 inch sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle Holders</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>INS600109</td>
			<td>12.5 CM STR</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vessel Clips</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>INS600120</td>
			<td>30G Pressure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3-0 Perma Hand Silk Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>1684G</td>
			<td>Black braided, 3-0 (2 metric), 18&#34;, non-absorbable,&#160; PS-1 24mm needle, 3/8 circle</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>328438</td>
			<td>0.3cc 3mm 31G</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pentobarbital</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bupivacaine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Lithium Carbonate</td>
			<td>Acros Chemicals</td>
			<td>554-13-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801521</td>
			<td>Surgipath Gill II Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801601</td>
			<td>Surgipath Eosin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylenes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>X3S-4</td>
			<td>Histological Grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Permount</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>SP15-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coverglass</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-548-5P</td>
			<td>Fisher Finest Premium Coverglass</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling encephalopathy of prematurity using prenatal hypoxia-ischemia with intra-amniotic lipopolysaccharide in rats

אנצפלופתיה של פגות (EOP) היא מונח המקיף את מערכת העצבים המרכזית (CNS) מומים הקשורים ללידה מוקדמת. למטרות translational מראש הטובות ביותר ולחשוף אסטרטגיות טיפוליות חדשות לפגיעה במוח הקשורים ללידה מוקדמת, מודלים פרה של EOP חייבים לכלול מנגנונים דומים פציעה העולמית לפני הלידה נצפה בבני אדם וכרוך במספר רכיבים של המערכת האימהית-שליה-העוברית. באופן אידיאלי, צריכים לייצר מודלים ספקטרום דומה של ליקויים תפקודיים בבעלי החיים הבוגרים ולשחזר היבטים רבים של הפתופיזיולוגיה. לחקות פגמים אנושיים מערכתי שליה זלוף, underperfusion שליה ו / או chorioamnionitis קשורים לדלקת נגרם לפתוגן בלידה מוקדמת מוקדם, פיתחנו מודל של היפוקסיה-איסכמיה לפני הלידה החולפת המערכתית (תשי&quot;ב) בשילוב עם lipopolysaccharide תוך מי שפיר (LPS). בחולדות ספראג Dawley הריון, תשי&quot;ב באמצעות o חסימת עורק הרחםn יום עוברי 18 (E18) גורם פגם underperfusion שליה מדורג קשור עם העלייה בניזק במערכת העצבים המרכזית בעובר. בשילוב עם זריקות LPS פנים-השפיר, דלקת שליה היא גדלה ונזק במערכת העצבים המרכזית הוא מורכב עם חריגות עניין, הליכה והדמיה לבנה קשורות. העלבונות טרום לידה הקורס הכנה ללידה תשי&quot;ב ותשי&quot;ב + LPS לפגוש כמה מהקריטריונים של מודל EOP כולל משחזר את העלבון תוך רחמי, גורמים לאובדן של תאי עצב, oligodendrocytes ואקסונים, אובדן subplate, וליקויים תפקודיים בבעלי חיים מבוגרים המחקים אלו שנצפו בילדים שנולדו מאוד פגים. יתר על כן, מודל זה מאפשר לנתיחה של דלקת נגרמת על ידי סוגים מסתעפים פציעה.

בעקבות תשי&quot;ב + LPS בE18, hematoxylin והכתים eosin חושפים ליקויים משמעותיים ההיסטופתולוגיים בשתי השליה (איור 1) ובמוח (איור 2). שליות נבדקו על E19 וE21 הן גס בצקים עם מיקרו-דימום, ונמק בכל decidua והמבוך. חודר לתוך דלקתי משמעותי וכלי דם מוגברים הוא ציינו גם. המוח נבדק על...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats at JoVE.com

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

modeling-encephalopathy-prematurity-using-prenatal-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

11.2K Views.  University of New Mexico. Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

Video: Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

הדמיה לא פולשנית וניתוח של מוחין איסכמיה בחולדות Living שימוש Positron פליטת טומוגרפיה עם<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

דגם חזרזיר של ילודים חוסר חמצן-איסכמי אנצפלופתיה

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they typically rely upon lengthy and costly in vivo animal challenge studies. A number of in vitro assays have been developed to aid in measuring prion species barriers, thereby reducing animal use and providing quicker results than animal bioassays. Here, we present the protocol for a rapid in vitro prion conversion assay called the conversion efficiency ratio (CER) assay. In this assay cellular prion protein (PrPC) from an uninfected host brain is denatured at both pH 7.4 and 3.5 to produce two substrates. When the pH 7.4 substrate is incubated with TSE agent, the amount of PrPC that converts to a proteinase K (PK)-resistant state is modulated by the original host&#8217;s species barrier to the TSE agent. In contrast, PrPC in the pH 3.5 substrate is misfolded by any TSE agent. By comparing the amount of PK-resistant prion protein in the two substrates, an assessment of the host&#8217;s species barrier can be made. We show that the CER assay correctly predicts known prion species barriers of laboratory mice and, as an example, show some preliminary results suggesting that bobcats (Lynx rufus) may be susceptible to white-tailed deer (Odocoileus virginianus) chronic wasting disease agent.

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Measuring the barrier to the interspecies transmission of prion diseases is challenging and typically involves animal challenges or biochemical assays. Here, we present an in vitro prion protein conversion assay with the ability to predict species barriers.

הערכת מחסומי transmissible מינים ספגו מוח עם<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay המרת חלבון הפריון

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they ...

Simultaneous PET/MRI Imaging During Mouse Cerebral Hypoxia-ischemia

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics disturbance in affected cells. Diffusion weighted magnetic resonance imaging (MRI) identifies regions that are damaged, potentially irreversibly, by hypoxia-ischemia. Alterations in glucose utilization in the affected tissue may be detectable by positron emission tomography (PET) imaging of 2-deoxy-2-(18F)fluoro-&#7429;-glucose ([18F]FDG) uptake. Due to the rapid and variable nature of injury in this animal model, acquisition of both modes of data must be performed simultaneously in order to meaningfully correlate PET and MRI data. In addition, inter-animal variability in the hypoxic-ischemic injury due to vascular differences limits the ability to analyze multi-modal data and observe changes to a group-wise approach if data is not acquired simultaneously in individual subjects. The method presented here allows one to acquire both diffusion-weighted MRI and [18F]FDG uptake data in the same animal before, during, and after the hypoxic challenge in order to interrogate immediate physiological changes.

The method presented here uses simultaneous positron emission tomography and magnetic resonance imaging. In the cerebral hypoxia-ischemia model, dynamic changes in diffusion and glucose metabolism occur during and after injury. The evolving and irreproducible damage in this model necessitates simultaneous acquisition if meaningful multi-modal imaging data are to be acquired.

ההדמיה PET / MRI בו זמנית בעכבר מוחין היפוקסיה-איסכמיה

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA thrombolysis) rarely produces benefits in mechanical occlusion-based experimental models, which dominate preclinical stroke research. This split between the bench and bedside suggests the need to employ tPA-responsive models in preclinical stroke research. To this end, a simple and tPA-reactive thrombotic stroke model is invented and described here. This model consists of transient occlusion of the unilateral common carotid artery and delivery of 7.5% oxygen through a face mask in adult mice for 30 min, while maintaining the animal rectal temperature at 37.5 &#177; 0.5 &#176;C. Although reversible ligation of the unilateral carotid artery or hypoxia each suppressed cerebral blood flow only transiently, the combination of both insults caused lasting reperfusion deficits, fibrin and platelet deposition, and large infarct in the middle cerebral artery-supplied territory. Importantly, tail-vein injection of recombinant tPA at 0.5, 1, or 4 hr post-tHI (10 mg/kg) provided time-dependent reduction of the mortality rate and infarct size. This new stroke model is simple and can be standardized across laboratories to compare experimental results. Further, it induces thrombosis without craniectomy or introducing pre-formed emboli. Given these unique merits, the tHI model is a useful addition to the repertoire of preclinical stroke research.

Thromboembolic stroke models are vital tools for optimizing the recanalization therapy. Here we report a murine thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxic-ischemic (tHI) insult, which triggers thrombosis and infarction, and responds favorably to tissue plasminogen activator (tPA)-mediated fibrinolysis in a therapeutic window similar to those in stroke patients.

דגם שבץ טרומבוטיים בהתבסס על היפוקסיה-איסכמיה מוחית חולפת

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Circumscribed Capsular Infarct Modeling Using a Photothrombotic Technique

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for white matter stroke has hampered research investigations. Here, we describe a novel method for creating a circumscribed capsular infarct that minimizes damage to neighboring gray matter structures. We used pre-surgery neural tracing with adeno-associated virus-green fluorescent protein (AAV-GFP) to identify somatotopic organization of the forelimb area within the internal capsule. The adjustment of light intensity based on different optical properties of gray and white matter contributes to selective destruction of white matter with relative preservation of gray matter. Accurate positioning of optical-neural interface enables destruction of entire forelimb area in the internal capsule, which leads to a marked and persistent motor deficit. Thus, this technique produces highly replicable capsular infarct lesions with a persistent motor deficit. The model will be helpful not only to study white matter stroke (WMS) at the behavioral, circuit, and cellular levels, but also to assess its usefulness for development of new therapeutic and rehabilitative interventions.

This manuscript describes a modeling technique of capsular infarct. Here we utilized a modified photothrombotic technique with low intensity of light after pre-surgery target mapping. Using this technique, we created a circumscribed capsular infarct model with persistent motor impairment.

דוגמנות מוגבלת Capsular אוטם בעזרת טכניקת Photothrombotic

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

הכנת פיגומים בכליות Decellularized בחולדות

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...

Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is enhanced after processing with vinegar, CR processed with vinegar (CRV) is generally used clinically. However, the mechanism by which the analgesic effect is enhanced by vinegar processing is unclear. In this study, the ultra-high pressure liquid chromatographytandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) technique was used to examine changes in the blood levels of the exogenous constituents and metabolites between CR-treated and CRV-treated rats with dysmenorrhea. The results revealed differing levels of 15 constituents and two metabolites in the blood of these rats. Among them, the levels of (-)-myrtenol and [(1R,2S,3R,4R)-3-hydroxy-1,4,7,7-tetramethylbicyclo[2.2.1]hept-2-yl]acetic acid in the CRV group were considerably higher than in the CR group. CRV reduced the level of 2-series prostanoids and 4-series leukotrienes with proinflammatory, platelet aggregation, and vasoconstriction activities and provided analgesic effects by modulating arachidonic acid and linoleic acid metabolism and the biosynthesis of unsaturated fatty acids. This study revealed that vinegar processing enhances the analgesic effect of CR and contributes to our understanding of the mechanism of action of CRV.

Here, a comparative analysis of raw and processed Cyperi rhizoma (CR) samples is presented using ultra-high performance liquid chromatography-high-resolution tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) in rats with primary dysmenorrhea. The changes in blood levels of the metabolites and the sample constituents were examined between rats treated with CR and CR processed with vinegar (CRV).

ניתוח דגימות Rhizoma Cyperi גולמיות ומעובדות באמצעות ספקטרומטריית מסה כרומטוגרפית נוזלית-טנדם בחולדות עם דיסמנוריאה ראשונית

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

מניפולציה מתוקננת של Tuina לדלקת מפרקים ניוונית בברך בחולדות

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its mechanism. Therefore, the manipulation of animal models of knee osteoarthritis is critical. This protocol provides a standard process for Tuina manipulation on KOA rats and a preliminary exploration of the mechanism of Tuina for KOA. The press and kneading manipulation method (a kind of Tuina manipulation that refers to pressing and kneading the specific area of the body surface) is applied on 5 acupoints around the knee joint of rats. The force and frequency of the manipulation were standardized by finger pressure recordings, and the position of the rat during manipulation is described in detail in the protocol. The effect of manipulation can be measured by pain behavior tests and microscopic findings in synovial and cartilage. KOA rats showed significant improvement in pain behavior. The synovial tissue inflammatory infiltration was reduced in the Tuina group, and the expression of tumor necrosis factor (TNF)-&#945; was significantly lower. Compared to the control group, chondrocyte apoptosis was less in the Tuina group. This study provides a standardized protocol for Tuina manipulation on KOA rats and preliminary proof that the therapeutic effects of Tuina may be related to reducing synovial inflammation and delayed chondrocyte apoptosis.

מחבר זרקור: הבנת מנגנון המניפולציה של טווינא בחולדות 

We present a protocol for Tuina manipulation performed on plaster-immobilized-induced knee osteoarthritis rats. Based on the preliminary results, it suggested that the efficacy of the method relied on the reduction of inflammation and cartilage loss.

מניפולציה Tuina כדי להפחית דלקת ואובדן סחוס בחולדות osteoarthritis הברך

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...