המחברים מודים לדן Firl, כריס קורבט וג&#39;סי Denson, PhD. מימון ניתן על ידי NIH NINDS R01 NS060765 לSR, P30 Cobre תכנית הפיילוט לLJ ותכנית חתימת בריאות הילד לLJ באוניברסיטת ניו מקסיקו.

מוסדי טיפול ושימוש בועדות בבית החולים לילדים בבוסטון וגם באוניברסיטת ניו מקסיקו למדעי בריאות המרכז אישרו את כל הפרוצדורות. הערה: לפני תחילת ההליך, החותם, לעקר וחיטוי כל מכשירי הניתוח ווילאות כירורגי. בנוסף, להכין תרופות לאחר ניתוח בבקבוקונים סטריליים כולל bipivucaine 0.125% ו 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות. גם להכין את פתרון lipopolysaccharide (LPS) סטרילי: 0.04 מ&quot;ג / מיליליטר LPS (0111: B4) בתמיסת מלח סטרילית מכילה לדלל צבע הכחול של אוון. 1. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה בחולדת ספראג Dawley עוברית יום 18 (E18) בהריון בתערובת של 3% חנקן isoflurane מאוזן 70% וחמצן 30%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עכברוש מתא האינדוקציה ולמקם את פרקדן החולדה על שמיכת מים במחזור עטופה כירורגית נקבעה על 37 מעלות צלזיוס. העבר את ההרדמה לחרטום ולהפחית isofluraרמת ne עד 2%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להחיל משחת עיניים לכל עין כדי למנוע התייבשות של קרנית. במהלך ההליך לפקח ללא הרף טמפרטורה, קצב נשימה וקצב לב של החיה. הפיסיולוגיה של האם צריכה להישאר יציבה לאורך כל ההליך. </li></ol> 2. הכנת כירורגי וליטוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוצץ חיה קטן באמצעות להסיר את כל השיער באזור הבטן התחתון. לגלח בתבנית מלבנית בזהירות כדי למנוע שסחבו את הפטמות או יצירת פריחה גילוח שיכול להיות מעצבן לסיעוד בעתיד של גורים שנולדו בשידור חי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את עור בטן לסירוגין יישום של לשפשף אתנול povidone- יוד ו -70% עם צמר גפן סטרילי. חזור על השיחים כך שpovidone- יוד ו -70% אתנול הוא כל מיושם 3x לסירוגין אופנה. בואו יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר עומק ההרדמה באמצעות היעדר רפלקס הבוהן קמצוץ. בהיעדר רפלקס וגירויים כאב, להפחית את רמת isoflurane עד 1%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במגבות ניתוח סטרילי,לעטוף את החיה. דואג למקם את הווילאות בזווית מתאימה כזה שהם למקסם את כמות השקיה הנוזל הם סופגים, ואינם חוסמים את זרימת דם לקרני הרחם. </li></ol> 3. הבטן laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל לעשות חתך קו האמצע 3 סנטימטר בעור הבטן מוכן. בבוטות לנתח את שכבת העור מfascia הבטן עם מספריים. בעזרת מלקחיים ומספריים כירורגיות, לרומם את שכבת fascial הבטן ולעשות חתך של alba Linea avascular כדי לקבל גישה לחלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים תחבושות על הצד החיצוני של החתך ולהרטיב עם תמיסת מלח סטרילית. בעזרת מלקחיים בוטים ולחץ חיצוני על הבטן, להסיר בעדינות את קרן הרחם מחלל הצפק ולארגן בגזה הלחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להימנע מהסתבכות בזהירות וקשר עם מעיים. לארגן עוברים באמצעות מלקחיים על ידי יצירת קשר רקמת השריר רק בין שקים מי שפיר הבודדים.לחשוף ולבודד את עורקי רחם 4 באמצעות נתיחה בוטה. יש להקפיד לנתח את עורקי רחם: הערה. רקמה וכלי מקיף את עצמם מאוד עדינים. נזק לכלי אימהיים יכול לגרום לדימום, ובמקרים חמורים, מוות עוברי ואימהי. </li></ol> 4. מיקום של קליפים מפרצת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח קליפ פרצה G עכברוש 30 בכל עורק רחם. להבטיח הפסקת זרימת דם, כוללים הפרוקסימלי וקטניות דיסטלי, ומחשיך של כלי הרחם כולל שליות נפרדות. לכסות את הקרניים חשופות ותחום כירורגית כל עם גזה ולהשקות עם תמיסת מלח סטרילית. דואג לשמור על השדה לח עם השקיה בערך כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 60 דקות, להסיר את הגזה ולהשקות את השדה. ודא שקרן הרחם והכולים טבולה במידה מספקת להסרת סרטון מוצלחת. הוצא בעדינות כל קליפ פרצה באמצעות מלקחיים. יש להיזהר שלא לגרום לטראומה לכלי השיט, ושימורשלמות רקמות עין במהלך ההסרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביסודיות להשקות את קרן הרחם ושדה, דואג להסיר כל אשכולות תועים של גזה מהצ&#39;קים מי השפיר. </li></ol> 5. הזרקה של lipopolysaccharide לשפיר Sacs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבסיסו של כל שק מי שפיר בודד, רק קדמי לצלחת השליה, להזריק של LPS (4 מיקרוגרם / שק) עם הצבע הכחול של אוון בדילול 100 μl למי שפיר. שימוש במלקחיים בוטים לייצב ולסובב כל שק מי שפיר למיקום אופטימלי להזרקה. הצבע הכחול של לדלל אוון הוא חומר ניגוד שהוא מועיל במאשר מיקום מזרק מתאים והזרקה. הערה: שימוש במזרק רק 0.3 מיליליטר אינסולין אולטרה דק עם מחט G 8 מ&quot;מ 31 מצורפים לזריקות תוך-השפיר. שימוש במחטי מד גדולים יותר תגרום לאובדן כרוני מי שפיר, מוות עוברי וספיגה של ההריון. כמויות קטנות של דליפה מי שפירה עם הסרת המזרק יכולות להיות mitigated על ידי לחץ ישיר לשק מי השפיר. עוברי עכברים מסוימים עשויים לסבול מידת המיעוט מי שפיר. עם זאת, אובדן חריף מי שפיר מלנקב עם מחטים גדולות מד, או לנקב מקרי וכתוצאה מכך דליפת נוזל כרונית, תוצאות באובדן של העובר ובמקרים חמורים, אובדן ההריונות שכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות את רחם קרנות 3x עם תמיסת מלח סטרילית. </li></ol> 6. סגירת laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, לחזור בזהירות את קרן הרחם לחלל הצפק. הבטחת מרחב מספיק בין שקים מי השפיר וחתך קו האמצע, מחדש משוער קצות שכבת musculofascial באמצעות תפר 3-0 משי ריצה. להיות מודע למיקום של שקים מי השפיר בזמן סגירת חתך השריר. היזהר שלא לתפור לאו באמצעות שק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> -משוער מחדש את שכבת העור, באמצעות תפר 3-0 משי ריצה, סגירת שכבת העור. הערה: laparotomy צריך להיות סגור בשתי שכבות של תפרים רציפים כדי לאפשרלעור והרחבת שרירים עם הגדלת הריון. תפרים רציפים מאפשרים למתח פצע מופץ באופן שווה. תפרים בהפרעה הם פחות רצויים כקשרים מרובים הם מעצבן וניתן לעסו בקלות על ידי החולדה על מתאושש מהרדמה. סיכות כירורגי אינן רצויים. זנבות של הקשרים כירורגית יש לחתוך (&lt;3 מ&quot;מ) קצר מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 מיליליטר של קצוות סביב פצע 0.125% מתחת לעור bupivacaine באמצעות מחט 26 G. לנהל מנה אחת של 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות תת עורי בעורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את isoflurane ועכברוש יבש מגבת לפי צורך. מניחים בכלוב בבית נקי ולעקוב אחר התאוששות מן ההרדמה. ודא עכברוש לא יהפוך היפותרמיה. </li></ol> 7. לאחר ניתוח שחזור וטיפוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג העכברוש כל שעות 8-12 במשך 72 שעות ולאחר מכן מדי יום עד גורים נולדים (כ E22 או E23). לנהל מינונים נוספים של שעות / 72 שעות q8-12 עצירות או PRN כפי שהוכתב על ידי IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חולדות לסימנים של כאב, אי נוחות, דימום מנרתיק או דימום מהאתר כירורגית. בדוק את התפרים וחתך ודואג להבטיח חולדה לא לעיסה או הסרת התפרים שלהם בטרם עת. למרות שנדיר במיוחד, חולדות שתתפשרנה התפרים שלהם נמצאות בסיכון לבקיעת פצע. הערה: לפעמים חולדות עשויות להבלע כמויות עודפות של פריטי מצעים או שאינו מזון, מכונה פיקה, כתופעת לוואי של ממשל עצירות. למרות שמאוד נדיר, חולדות חייבות להיות במעקב לפיקה וחסימת מעי לאחר פוטנציאלית. </li></ol> 8. עיבוד רקמות וCryosectioning <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתכונן לHematoxylin וEosin (H &amp; E) מכתים של המוח לאחר הלידה, להסיר גורים מהכלוב בביתם ביום שלאחר לידה 2 (P2). בעזרת מספריים כירורגיות לערוף גורי חולדה ובעדינות להסיר את המוח מהגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרוק מוח תיקון בצינור חרוטי 15 מיליליטר מכיל 7 מיליליטר של paraformaldehyde 4% בופר פוספט(PBS). מניחים מוח על 4 מעלות צלזיוס ולתקן במשך 72 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 72 שעות, להעביר את המוח לפתרון PBS סטרילי המכיל 30% סוכרוז (w / v) ולחזור ל4 מעלות צלזיוס. הערה: ברגע שהמוח של הירידה בתמיסת סוכרוז הם מוכנים להיות מחולקים על cryostat. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות להקפיא את המוח ולעלות על העלי cryostat לרכישת חלקי העטרה קפוא. חותך 20 מיקרומטר סעיפי העטרה קפוא והר בשקופיות. סעיפים להבטיח נאספים באופן סדרתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר שקופיות לייבוש בטמפרטורת חדר למשך הלילה. חנות שקופיות ב -20 ° C. </li></ol> 9. Hematoxylin וEosin מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שקופיות רכובים סעיפים קפוא וחמות לטמפרטורת חדר. הערה: הכן את כל הפתרונות טריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות מקום בשקופית סט חם עד 50 מעלות צלזיוס במשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת שקופיות למדף מכתים. טובלים שקופיות 10x במים מזוקקים כפולים deionized (DDH 2 O). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בhematoxylin 100% במשך 5 דקות. סִישלי בhematoxylin יכולות להיות מותאם תלות בדרגה של מכתים סגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 15x באלכוהול חומצה (250 מיליליטר אתנול 70% + 1 מיליליטר חומצה הידרוכלורית מרוכז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ב 1% ליתיום קרבונט למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ב -95% אתנול דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 7x ב100% Eosin. מספר מטבלים בEosin יכול להיות שונה בהתאם למידת צביעה הוורודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 5x באתנול 95%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5x שקופיות לטבול בשינוי טרי של 95% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות ב 100% אתנול 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בשינוי טרי של 100% אתנול 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בקסילן 100% במשך 15 דקות. הערה: צעדי קסילן וcoverslipping צריך להתרחש במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בשינויים טריים של קסילן במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslip עם Permount ולתת יבש במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונת שקופיות עם מיקרוסקופ אור. </li></ol>

<ol>
	<li>Blencowe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+birth+associated+neurodevelopmental+impairment+estimates+at+regional+and+global+levels+for+2010.">Preterm birth associated neurodevelopmental impairment estimates at regional and global levels for 2010.</a> Pediatr Res. 74, 17-34 (2013).</li><li>Mwaniki, M. K., Atieno, M., Lawn, J. E., Newton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+neurodevelopmental+outcomes+after+intrauterine+and+neonatal+insults+a+systematic+review.">Long term neurodevelopmental outcomes after intrauterine and neonatal insults a systematic review.</a> Lancet. 379, 445-452 (2012).</li><li>Dammann, O., Leviton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittent+or+sustained+systemic+inflammation+and+the+preterm+brain.">Intermittent or sustained systemic inflammation and the preterm brain.</a> Pediatr Res. 75, 376-380 (2014).</li><li>Leviton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiologic+and+histologic+characteristics+of+the+extremely+preterm+infant's+placenta+predict+white+matter+damage+and+later+cerebral+palsy.">Microbiologic and histologic characteristics of the extremely preterm infant's placenta predict white matter damage and later cerebral palsy.</a> the ELGAN study Pediatr Res. 67, 95-101 (2010).</li><li>Redline, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+responses+in+the+placenta+and+umbilical+cord.">Inflammatory responses in the placenta and umbilical cord.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 11, 296-301 (2006).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+chorioamnionitis+is+the+most+common+placental+lesion+in+late+preterm+birth.">Chronic chorioamnionitis is the most common placental lesion in late preterm birth.</a> Placenta. 34, 681-689 (2013).</li><li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+histologic+chorioamnionitis+is+a+risk+factor+for+adverse+neonatal+outcome+in+late+preterm+birth+after+preterm+premature+rupture+of+membranes.">Acute histologic chorioamnionitis is a risk factor for adverse neonatal outcome in late preterm birth after preterm premature rupture of membranes.</a> PloS one. 8, e79941 (2013).</li><li>Pappas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chorioamnionitis+and+early+childhood+outcomes+among+extremely+low+gestational+age+neonates.">Chorioamnionitis and early childhood outcomes among extremely low gestational age neonates.</a> JAMA Peds. 168, 137-147 (2014).</li><li>Gaillard, R., Arends, L. R., Steegers, E. A., Hofman, A., Jaddoe, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+and+third+trimester+placental+hemodynamics+and+the+risks+of+pregnancy+complications+the+Generation+R+Study.">Second and third trimester placental hemodynamics and the risks of pregnancy complications the Generation R Study.</a> Am J Epidemiol. 177, 743-754 (2013).</li><li>Trivedi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+placental+inflammation+but+not+adrenal+activation+is+associated+with+extreme+preterm+delivery.">Fetal placental inflammation but not adrenal activation is associated with extreme preterm delivery.</a> Am J Obstet Gynecol. 206, 236 (2012).</li><li>Yanowitz, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+disturbances+in+premature+infants+born+after+chorioamnionitis+association+with+cord+blood+cytokine+concentrations.">Hemodynamic disturbances in premature infants born after chorioamnionitis association with cord blood cytokine concentrations.</a> Pediatr Res. 51, 310-316 (2002).</li><li>Jantzie, L. L., Corbett, C. J., Firl, D. J., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+Erythropoietin+Mitigates+Impaired+Cerebral+Cortical+Development+Following+Subplate+Loss+from+Prenatal+Hypoxia+Ischemia.">Postnatal Erythropoietin Mitigates Impaired Cerebral Cortical Development Following Subplate Loss from Prenatal Hypoxia Ischemia.</a> Cereb Cortex. , (2014).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+attenuates+loss+of+potassium+chloride+co+transporters+following+prenatal+brain+injury.">Erythropoietin attenuates loss of potassium chloride co transporters following prenatal brain injury.</a> Mol Cell Neurosci. 61, 152-162 (2014).</li><li>Jantzie, L. L., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+signaling+promotes+oligodendrocyte+development+following+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+brain+injury.">Erythropoietin signaling promotes oligodendrocyte development following prenatal systemic hypoxic ischemic brain injury.</a> Pediatric Res. 74, 658-667 (2013).</li><li>Mazur, M., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+erythropoietin+treatment+mitigates+neural+cell+loss+after+systemic+prenatal+hypoxic+ischemic+injury.">Postnatal erythropoietin treatment mitigates neural cell loss after systemic prenatal hypoxic ischemic injury.</a> J Neurosurg Peds. 6, 206-221 (2010).</li><li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+induced+by+graded+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+insults+in+rats.">Developmental changes induced by graded prenatal systemic hypoxic ischemic insults in rats.</a> Neurobiol Dis. 18, 568-581 (2005).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroanatomical+sensorimotor+and+cognitive+deficits+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia.">Neuroanatomical sensorimotor and cognitive deficits in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Brain Pathol. 22, 1-16 (2012).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+prenatal+ischemia+on+behavior+cognitive+abilities+and+neuroanatomy+in+adult+rats+with+white+matter+damage.">Impact of prenatal ischemia on behavior cognitive abilities and neuroanatomy in adult rats with white matter damage.</a> Behav Brain Res. 232, 233-244 (2012).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+musculoskeletal+and+locomotor+alterations+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia.">Mild musculoskeletal and locomotor alterations in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Intl J Devel Neurosci. 29, 593-607 (2011).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+pattern+of+interaction+between+in+utero+hypoxia+ischemia+and+intra+amniotic+inflammation+disrupts+brain+development+and+motor+function.">Complex pattern of interaction between in utero hypoxia ischemia and intra amniotic inflammation disrupts brain development and motor function.</a> J Neuroinflam. 11, 131 (2014).</li><li>Back, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+vulnerability+of+late+oligodendrocyte+progenitors+to+hypoxia+ischemia.">Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia ischemia.</a> J Neurosci. 22, 455-463 (2002).</li><li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+Expression+of+N+Methyl+d+Aspartate+(NMDA)+Receptor+Subunits+in+Human+White+and+Gray+Matter+Potential+Mechanism+of+Increased+Vulnerability+in+the+Immature+Brain.">Developmental Expression of N Methyl d Aspartate (NMDA) Receptor Subunits in Human White and Gray Matter Potential Mechanism of Increased Vulnerability in the Immature Brain.</a> Cereb Cortex. 25, 482-495 (2015).</li><li>Jantzie, L. L., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Models+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">Preclinical Models of Encephalopathy of Prematurity.</a> Devel Neurosci. , (2015).</li><li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species.">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).</li><li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+neurotransmitter+systems+during+critical+periods.">Development of neurotransmitter systems during critical periods.</a> Exper Neurol. 190, S8-S21 (2004).</li><li>Kelsom, C., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+specification+of+GABAergic+cortical+interneurons.">Development and specification of GABAergic cortical interneurons.</a> Cell Biosci. 3, 19 (2013).</li><li>Kinney, H., Back, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+oligodendroglial+development+Relationship+to+periventricualr+leukomalacia.">Human oligodendroglial development Relationship to periventricualr leukomalacia.</a> Semin Pediatr Neuro. 5, 180-189 (1998).</li><li>Robinson, S., Li, Q., DeChant, A., Cohen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+loss+of+gamma+amino+butyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury.">Neonatal loss of gamma amino butyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg Peds. 104, 396-408 (2006).</li><li>Xu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+development+of+the+GABAergic+system+in+the+human+cerebral+cortex+and+white+matter.">Late development of the GABAergic system in the human cerebral cortex and white matter.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 70, 841-858 (2011).</li><li>Segovia, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arrested+oligodendrocyte+lineage+maturation+in+chronic+perinatal+white+matter+injury.">Arrested oligodendrocyte lineage maturation in chronic perinatal white matter injury.</a> Ann Neurol. 63, 520-530 (2008).</li><li>Robinson, S., Li, Q., Dechant, A., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+loss+of+gamma+aminobutyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury.">Neonatal loss of gamma aminobutyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg. 104, 396-408 (2006).</li><li>Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prenatal+infection+on+brain+development+and+behavior+a+review+of+findings+from+animal+models.">Effects of prenatal infection on brain development and behavior a review of findings from animal models.</a> Brain Behav Immun. 24, 881-897 (2010).</li><li>Burd, I., Brown, A., Gonzalez, J. M., Chai, J., Elovitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes.">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li><li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation.">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice.">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 .</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

אנצפלופתיה של פגות קשה לדגמן בבעלי חיים בגלל האינטראקציה המורכבת של אטיולוגיה, כמובן זמן התפתחות נוירולוגית, מורכבות של מערך רשת מוחי אנושי, חופפות מנגנונים של פגיעה, ופנוטיפים השונים של מערכת העצבים המרכזית מעליב באו לידי ביטוי בפגים אנושיים. EOP קשור נקודות תורפה ס?...

עם מעל 12% מתינוקות שנולדו בארצות הברית לפני גיל הריון מוערך 37 שבועות 1, פגיעה מוחית סביב הלידה (PBI) מפגות היא גורם משמעותי לנכות קבועה. PBI מפגות, אנצפלופתיה מכונה גם של פגות (EOP), משפיעה על כל מערכת העצבים המרכזית (CNS). פגיעה במערכת העצבים המרכזית לעתים קרובות מתחילה ברחם, ומחריפה על ידי תהליכים טרום-לידתי כולל chorioamnionitis וסיבוכים לאחר לידה כגון היפוקסיה ואלח דם. PBI מעלבונות מערכתיים משנה התפתחות נוירולוגית ומוביל לשיתוק מוחין, אפילפסיה, עיכוב קוגניטיבי והפרעות נוירו-פסיכיאטריות רבות המשפיעים על ויסות רגשית, זיכרון ותפקוד ביצועי 1,2. למרות התקדמות רבה נעשתה, הבנה מוגבלת שרידים איך ההשלכות התאיות ומולקולריות של פגיעה במערכת העצבים המרכזית מלידה מוקדמת לתרגם למספר רב של השלכות נוירולוגיות בילדים שנולדו פגים. זה חוסר ידע האחוריERS אבחון בזמן אמת של חומרת פציעה של מערכת העצבים המרכזית ומינון הודיע ​​התערבויות המתעוררות. בנוסף, אסטרטגיות טיפוליות מתאים לגיל לאוכלוסיית חולים זו פגיעה להישאר חמקמקות. דלקת תוך רחמי היא מאוד נפוצה בפגות קיצוניות וכרוך מפל דלקתי עוברי-אימהי-שליה מורכבת 3. הזיהום תוך רחמי הוא לעתים קרובות תת-קליני. ממצאי שליה ספציפיים בקנה אחד עם דלקת חריפה, או chorioamnionitis היסטולוגית, הם גורמים עיקריים לתגובה הדלקתית העוברית והם ביחד עם פגיעה מוחית הקשורים לידה מוקדמת 3-5. ואכן, יש התגובה הדלקתית העוברית השלכות קליניות מובהקות לתוצאות ארוכת טווח מלידה מוקדמת. תינוקות שהם קטנים לגיל הריון (SGA) או שחווים זיהום פגיעים במיוחד ל3,4 גירעונות נוירולוגיות. Chorioamnionitis היא לידה מוקדמת אבחנה פתולוגית טיפוסית הבאה <sup&gt; 6,7, ובדיקה היסטולוגית מגלה סימנים של דלקת ב- 70% של שליות מתינוקות שנולדו פגים מאוד 4. יתר על כן, chorioamnionitis קשור עם ליקוי קוגנטיבי בשנתי 8. ראיות של כלי דם האימהי underperfusion בשליה של תינוקות שנולדו פגים מאוד קשורות גם עם שיתוק מוחין בילדות 9. ההשפעה סינרגיסטית של פגמי זלוף chorioamnionitis והשליה מודגמת היטב על ידי גבוה להפליא הסיכון של תוצאות נוירולוגיות חריגות באוכלוסיית חולים זו בגיל שנתי 10,11. לחקות פגמים אנושיים מערכתיים זלוף השליה וchorioamnionitis קשורים לדלקת נגרם לפתוגן, פיתחנו מודל של היפוקסיה-איסכמיה לפני הלידה החולפת המערכתית (תשי&quot;ב) בשילוב עם lipopolysaccharide תוך מי שפיר (LPS) בחולדות. המטרה שלנו הייתה להתאים המודל של תשי&quot;ב לבד בחולדות 12-16 לכלול דלקת תוך רחמי,כדי להקל על מודלים פרה-קליניים של פגיעה במערכת העצבים המרכזית הקשורים ללידה מוקדמת. תשי&quot;ב לבד חשף אובדן מתמשך של תאי שושלת oligodendroglial, תאי עצב בקליפת המוח, גדל מוות של תאים, ורמות גבוהות ציטוקינים פרו-דלקתיות, עם מרווחי איסכמי מתקדמים המובילים לדפוס מדורג של פגיעה בקנה אחד עם פגיעה המוחית לפני הלידה 16. גם שינויים במרכיבי איסכמי של מודל זה הוכיחו גירעונות בקידוד זיכרון, קצר וזיכרון לטווח ארוך ושינויים קלים בשרירים ושלד חולדות כשהם מזדקנים 17-19. ואכן, יש לנו הפגנו בעבר כי השילוב של תשי&quot;ב + LPS משחזר סימני ההיכר של pathophysiological EOP, כוללים oligodendrocyte ואובדן עצבי, פגיעת axonal, דלקת סלולרית והפרעות תפקודיות 20.

<table><tbody><tr><td>Saline Solution, 0.9%</td><td>Sigma</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>LPS 011B4</td><td>Sigma</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Evan&#039;s Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Surgical gloves</td><td>Biogel</td><td>40870</td><td></td></tr><tr><td>OR Towels</td><td>Cardinal Health</td><td>287000-008</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>PDI Alcohol Prep Pads</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>Mini Arco Rechargeable Clippers</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>Betadine surgical scrub</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Eye Lubricant</td><td>Refresh Lacri Lube</td><td>00023-0312</td><td></td></tr><tr><td>Blunt Forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-6808</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>F.S.T.</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Syringe</td><td>BD</td><td>309628</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>Needle</td><td>BD</td><td>305122</td><td>25G 5/8</td></tr><tr><td>Needle</td><td>BD</td><td>305128</td><td>30G 1</td></tr><tr><td>Cotton-tipped Applicators</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-114</td><td>Small, 6 inch sterile</td></tr><tr><td>Cotton Gauze Sponge</td><td>Fisherbrand</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Needle Holders</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS600109</td><td>12.5 CM STR</td></tr><tr><td>Vessel Clips</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS600120</td><td>30G Pressure</td></tr><tr><td>3-0 Perma Hand Silk Sutures</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td>Black braided, 3-0 (2 metric), 18&quot;, non-absorbable,&amp;nbsp; PS-1 24 mm needle, 3/8 circle</td></tr><tr><td>Insulin Syringes</td><td>BD</td><td>328438</td><td>0.3 cc 3 mm 31G</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lithium Carbonate</td><td>Acros Chemicals</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Microscope Slides</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Leica</td><td>3801521</td><td>Surgipath Gill II Hematoxylin</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>Surgipath Eosin</td></tr><tr><td>Xylenes</td><td>Fisherbrand</td><td>X3S-4</td><td>Histological Grade</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisherbrand</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Coverglass</td><td>Fisherbrand</td><td>12-548-5P</td><td>Fisher Finest Premium Coverglass</td></tr></tbody></table>

modeling encephalopathy of prematurity using prenatal hypoxia-ischemia with intra-amniotic lipopolysaccharide in rats

אנצפלופתיה של פגות (EOP) היא מונח המקיף את מערכת העצבים המרכזית (CNS) מומים הקשורים ללידה מוקדמת. למטרות translational מראש הטובות ביותר ולחשוף אסטרטגיות טיפוליות חדשות לפגיעה במוח הקשורים ללידה מוקדמת, מודלים פרה של EOP חייבים לכלול מנגנונים דומים פציעה העולמית לפני הלידה נצפה בבני אדם וכרוך במספר רכיבים של המערכת האימהית-שליה-העוברית. באופן אידיאלי, צריכים לייצר מודלים ספקטרום דומה של ליקויים תפקודיים בבעלי החיים הבוגרים ולשחזר היבטים רבים של הפתופיזיולוגיה. לחקות פגמים אנושיים מערכתי שליה זלוף, underperfusion שליה ו / או chorioamnionitis קשורים לדלקת נגרם לפתוגן בלידה מוקדמת מוקדם, פיתחנו מודל של היפוקסיה-איסכמיה לפני הלידה החולפת המערכתית (תשי&quot;ב) בשילוב עם lipopolysaccharide תוך מי שפיר (LPS). בחולדות ספראג Dawley הריון, תשי&quot;ב באמצעות o חסימת עורק הרחםn יום עוברי 18 (E18) גורם פגם underperfusion שליה מדורג קשור עם העלייה בניזק במערכת העצבים המרכזית בעובר. בשילוב עם זריקות LPS פנים-השפיר, דלקת שליה היא גדלה ונזק במערכת העצבים המרכזית הוא מורכב עם חריגות עניין, הליכה והדמיה לבנה קשורות. העלבונות טרום לידה הקורס הכנה ללידה תשי&quot;ב ותשי&quot;ב + LPS לפגוש כמה מהקריטריונים של מודל EOP כולל משחזר את העלבון תוך רחמי, גורמים לאובדן של תאי עצב, oligodendrocytes ואקסונים, אובדן subplate, וליקויים תפקודיים בבעלי חיים מבוגרים המחקים אלו שנצפו בילדים שנולדו מאוד פגים. יתר על כן, מודל זה מאפשר לנתיחה של דלקת נגרמת על ידי סוגים מסתעפים פציעה.

בעקבות תשי&quot;ב + LPS בE18, hematoxylin והכתים eosin חושפים ליקויים משמעותיים ההיסטופתולוגיים בשתי השליה (איור 1) ובמוח (איור 2). שליות נבדקו על E19 וE21 הן גס בצקים עם מיקרו-דימום, ונמק בכל decidua והמבוך. חודר לתוך דלקתי משמעותי וכלי דם מוגברים הוא ציינו גם. המוח נבדק על...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats at JoVE.com

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

modeling-encephalopathy-prematurity-using-prenatal-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

11.2K Views.  University of New Mexico. Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

Video: Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature infants and the most common antecedent of cerebral palsy. PVL is characterized by periventricular white matter damage with prominent oligodendroglial injury. Hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation are the primary causes of PVL. We use P6 mice to create models of neonatal brain injury by the induction of hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation with unilateral carotid ligation followed by exposure to hypoxia with or without injection of the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Immunohistochemistry of myelin basic protein (MBP) or O1 and electron microscopic examination show prominent myelin loss in cerebral white matter with additional damage to the hippocampus and thalamus. Establishment of mouse models of PVL will greatly facilitate the study of disease pathogenesis using available transgenic mouse strains, conduction of drug trials in a relatively high throughput manner to identify candidate therapeutic agents, and testing of stem cell transplantation using immunodeficiency mouse strains.

We established mouse models of periventricular leukomalacia (PVL), the predominant brain injury in premature infants characterized by periventricular white matter lesions. Hypoxia/ischemia with/without systemic infection are the primary causes of PVL. Unilateral carotid ligation and hypoxia exposure with/without lipopolysaccharide injection creates PVL-like lesions in P6 mice.

עכבר מודלים של לויקומלציה periventricular

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature ...

Neuroscience

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

Biology

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

דגם חזרזיר של ילודים חוסר חמצן-איסכמי אנצפלופתיה

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI brain injury by studying neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated (i.e., normal) mice. During the study, Rice-Vannucci&#39;s method was used to induce neonatal HI brain damage in postnatal day 7-10 (P7-10) mice. The HI operation was performed on the pups by unilateral carotid artery ligation and exposure to hypoxia (8% O2 and 92% N2 for 90 min). One week after the operation, the damaged brains were evaluated with the naked eye through the semi-transparent skull and were categorized into subgroups based on the absence (&#34;no cortical injury&#34; group) or presence (&#34;cortical injury&#34; group) of cortical injury, such as a lesion in the right hemisphere. On week 6, the following neurobehavioral tests were performed to evaluate the cognitive and motor functions: passive avoidance task (PAT), ladder walking test, and grip strength test. These behavioral tests are helpful in determining the effects of neonatal HI brain injury and are used in other mouse models of neurodegenerative diseases. In this study, neonatal HI brain injury mice showed motor deficits that corresponded to right hemisphere damage. The behavioral test results are relevant to the deficits observed in human neonatal HI patients, such as cerebral palsy or neonatal stroke patients. In this study, a mouse model of neonatal HI brain injury was established and showed different degrees of motor deficits and cognitive impairment compared to non-operated mice. This work provides basic information on the HI mouse model. MRI images demonstrate the different phenotypes, separated according to the severity of brain damage by motor and cognitive tests.

We performed unilateral carotid artery occlusion on postnatal day 7-10 CD-1 mouse pups to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of HI brain injury. We studied neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated normal mice.

Neurobehavioral הערכות במודל של עכברים של פגיעה מוחית לפציעה Hypoxic-איסכמי Neonatal

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies of this phenomenon have been performed in either models with severe intrauterine ischemia or models with gradient degree of intrauterine hypoperfusion. No study has been performed in a model on uniform mild intrauterine hypoperfusion (MIUH). Two models have been used for studies of MIUH: a model based on suture ligation of either side of the arterial arcade formed with the uterine and ovarian arteries, and a transient model based on clipping the bilateral ovarian arteries and aorta having patency. Those two rodent models of MIUH have some limitations, e.g., not all fetuses are subjected to MIUH, depending on their position in the uterine horn. In our MIUH model, all fetuses are subjected to a comparable level of intrauterine hypoperfusion. MIUH was achieved by mild stenosis of all four arteries feeding the uterus, i.e., the bilateral uterine and ovarian arteries.
Arterial stenosis was induced by metal microcoils wrapped around the feeding arteries. Producing arterial stenosis with microcoils allowed us to control, optimize, and reproduce decreased blood flow with very little inter-animal variability and a low mortality rate, thus enabling accurate evaluation. When microcoils with an inner diameter of 0.24 mm were used, the blood flow in both the placenta and fetus was mildly decreased (approximately 30% from the pre-stenosis level in the placenta). The offspring of our MIUH model clearly demonstrates long-lasting alterations in neurological, neuroanatomical and behavioral test results.

Mild intrauterine hypoperfusion was produced by artery stenosis with metal microcoils wrapped around the uterine and ovarian arteries in rats at embryonic day 17. This procedure produced prenatal hypoperfusion and intrauterine growth restriction.

מודל עכברוש של זילוח תוך רחמי קלה עם היצרות Microcoil

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for infants with the neurological sequela of prematurity. Ferrets are ideal candidates for modeling the preterm human brain, as they are born lissencephalic and develop gyrencephalic brains postnatally. At birth, ferret brain development is similar to a 13 week human fetus, with postnatal-day (P) 17 kits considered to be equivalent to an infant at 32&#8211;36 weeks&#39; gestation. We describe an injury model in the P17 ferret, where lipopolysaccharide administration is followed by bilateral cerebral ischemia, hypoxia, and hyperoxia. This simulates the complex interaction of prolonged inflammation, ischemia, hypoxia, and oxidative stress experienced in a number of neonates who develop brain injury. Injured animals display a range of gross injury severity, with morphological changes in the brain including narrowing of multiple cortical gyri and associated sulci. Injured animals also show slowed reflex development, slower and more variable speed of locomotion in an automated catwalk, and decreased exploration in an open field. This model provides a platform in which to test putative therapies for infants with neonatal encephalopathy associated with inflammation and HI, study mechanisms of injury that affect cortical development, and investigate pathways that provide resilience in unaffected animals.

The method describes inflammation-sensitized hypoxic-ischemic and hyperoxic brain injury in the P17 ferret to model the complex interaction between prolonged inflammation and oxidative brain injury experienced in a number of late preterm infants.

מודל של החמוס של דלקת-מארוי מאוחר לטווח קדם-הסכמי פגיעה במוח

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and lifelong neurological deficits. While PHH can be treated by temporary and permanent cerebrospinal fluid (CSF) diversion procedures (ventricular reservoir and ventriculoperitoneal shunt, respectively), there are no pharmacological strategies to prevent or treat IVH-induced brain injury and hydrocephalus. Animal models are needed to better understand the pathophysiology of IVH and test pharmacological treatments. While there are existing models of neonatal IVH, those that reliably result in hydrocephalus are often limited by the necessity for large-volume injections, which may complicate modeling of the pathology or introduce variability in the clinical phenotype observed.
Recent clinical studies have implicated hemoglobin and ferritin in causing ventricular enlargement after IVH. Here, we develop a straightforward animal model that mimics the clinical phenotype of PHH utilizing small-volume intraventricular injections of the blood breakdown product hemoglobin. In addition to reliably inducing ventricular enlargement and hydrocephalus, this model results in white matter injury, inflammation, and immune cell infiltration in periventricular and white matter regions. This paper describes this clinically relevant, simple method for modeling IVH-PHH in neonatal rats using intraventricular injection and presents methods for quantifying ventricle size post injection.

We present a model of neonatal intraventricular hemorrhage using rat pups that mimics the pathology seen in humans.

דוגמנות דימום תוך חדרי ילודים באמצעות הזרקה תוך-חדרית של המוגלובין

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...

Early Pathological and Magnetic Resonance Detection of Cerebral Injury Using a Rat Model of Neonatal Hypoxic Ischemic Encephalopathy

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term neurodevelopmental outcomes. Early diagnosis is critical to identifying infants who may benefit from intervention; however, early diagnosis relies heavily on clinical criteria. No molecular or radiological tests have shown promise in detecting early cerebral injury. Studies have shown that magnetic resonance imaging (MRI) can show changes in both blood flow/ischemia and metabolic disruption. However, they have all been used to evaluate the secondary phase of the disease (&gt;12 h) after the onset of the injury. Early diagnosis is critical to rapidly starting therapeutic hypothermia in eligible infants, which is currently recommended to be initiated within 6 h of birth. The rat model of hypoxic-ischemic injury was developed in 1981 and has been validated and used extensively to study changes in brain perfusion, cerebral injury markers, and morphology. However, it has primarily been used as a "late model", evaluating injury several days after the initial ischemic insult. The model has been known to have poor sensitivity in evaluating reliable and reproducible early cerebral changes. The objective of this study was to develop a reliable model to study early gross morphological and radiological markers of HIE using pathological staining and cerebral magnetic resonance imaging/magnetic resonance spectroscopy.

The present protocol describes a rodent model of newborn hypoxic-ischemic injury for identifying early changes in cerebral tissue by gross morphology and magnetic resonance imaging. This has benefits over existing models, which can be used to study late injury but do not allow the evaluation of reproducible early changes.

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term ...

Modeling Posthemorrhagic Hydrocephalus of Prematurity in Rats

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) is a serious sequela of severe intraventricular hemorrhage (IVH) in very preterm infants less than 32 weeks gestational age (GA). PHHP is defined by the accumulation of cerebrospinal fluid (CSF) associated with clinical symptoms of elevated intracranial pressure (ICP). Infants with PHHP suffer lifelong shunt dependence, with half requiring repeat surgery in the first year of life and many requiring multiple additional surgeries throughout the lifespan. Prenatal chorioamnionitis predisposes preterm infants to severe IVH and the need for surgical treatment of PHHP trends with neonatal sepsis. These clinical features suggest that systemic inflammation is an integral component of PHHP pathophysiology. 
Here, we define an animal model that recapitulates all clinical aspects and essential features of PHHP in rats. The goal of this protocol is to illustrate how in utero chorioamnionitis and postnatal IVH using lysed red blood cells can be combined to yield PHHP. This preclinical approach yields progressive macrocephaly and domed craniums, elevated intracranial pressure, and ventriculomegaly that can be detected via magnetic resonance imaging (MRI) or via microscopy. In addition to sustained disruption in CSF dynamics, rats also have cognitive delay and functional disability into adulthood. Accordingly, this preclinical platform facilitates unique and unparalleled translational studies of PHHP that can incorporate molecular, cellular, biochemical, histologic, imaging, and functional outcome measures. It can also be used for rigorous analysis of the choroid plexus, ependymal motile cilia, and glymphatic system in parallel. Last, it can also be an invaluable preclinical tool for the investigation of novel surgical intervention strategies and non-surgical therapeutic approaches for the treatment of hydrocephalus.

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) can be modeled in neonatal rats by combining chorioamnionitis and intraventricular hemorrhage. The combination of these prenatal and postnatal events accurately recapitulates the clinical hallmarks of PHHP, including macrocephaly, ventriculomegaly, and elevated intracranial pressure, through the lifespan.

מידול הידרוצפלוס פוסט-דימומי של פגות בחולדות

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) is a serious sequela of severe intraventricular hemorrhage (IVH) in very preterm infants less than 32 ...

Induction of Cerebral Microhemorrhages in a Rat Model Using Lipopolysaccharide

Source: Li, D., et al. <a href="https://app.jove.com/v/58423">Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats.</a> J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the process of inducing blood-brain barrier (BBB) disruption and cerebral microhemorrhages in a rat model using lipopolysaccharide (LPS). It highlights the sequence of immune responses that lead to increased BBB permeability and subsequent brain tissue damage.

השראת מיקרו-דימומים מוחיים במודל חולדה באמצעות ליפופוליסכריד

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...