פרוטוקול זה הוא משמעותי משום שהוא מציע את המודל הראשון של דלקת רגישה פגיעה מוחית מוקדמת החמוסים שתוצר פגיעה משמעותית ומתמשכת. טכניקה זו כרוכה בעלבונות ממושכים המשלבים רבים מהטריגרים והמנגנונים הביוכימיים שנחשבים לתרום לסוגי הפציעות המוחיות שנראות אצל תינוקות אנושיים מוקדמים. הדגימה של הליך מדידת המוח תהיה קיילי קורי, מדענית מחקר במעבדה שלנו ואוליביה ווייט, סטודנטית לתואר ראשון.
שלושים דקות לפני תחילת הניתוח, לנהל שלושה מיליגרם לקילוגרם LPS IP ערכות בקבוצת הפציעה נפח שווה ערך של מלוחים סטריליים של שלושה microliters לגרם כדי לשלוט בבעלי חיים. לפני תחילת ההליך, השתמש קוצץ בעלי חיים קטנים כדי להסיר את כל השיער על אזור הצוואר הגחוני של החמוס בתבנית מלבנית, דואג למנוע פגיעה בעור או יצירת פריחה בחום. לנהל הרדמה מקומית לאזור מגולח ולחטא את העור עם שלוש ספוגיות לסירוגין של יוד povidone ו70 אחוז אתנול.
לאחר אישור רמה מתאימה של הרדמה על ידי קמצוץ בוהן, לכסות את החיה עם סטרילי, חד פעמי לחתוך וילונות החושפים את אזור הצוואר. עבור קשירה עורק התרדמה הדו-צדדית, השתמש בלהב אזמל מספר עשר לשימוש יחיד כדי לבצע חתך של 1.5 ס"מ במרכז הצוואר ולהשתמש בהמוסטטים עדין ומטחנים מעוגלים כדי לנתח בבוטות עד העורק הראשי השמאלי. לנתח את העורק החשוף הרחק מהחבילה הנוירו-וסקולרית הקשורה.
ולהשתמש בזוג מלקחיים עדין מעוקל לעבור לולאה אורך עשרה סנטימטרים של תפר משי סטרילי 5/0 מתחת לעורק. חותכים את התפר לשניים ולקשור בבטחה את שני אורכי התפר כדי לקשור את העורק, משאיר לפחות שני מילימטרים בין הקשרים. חוצים את העורק הראשי השמאלי בין התפרים, דואגים להשאיר את העצב שלם ולחזור על הניתוח בצד ימין.
ליטוש הפיכה העורק הראשי הימני עם עניבת טבור סטרילית אחת 1/8 אינץ '. ולסגור את הפצע עם קליפי עור כירורגיים. לאחר מכן, לאפשר את החיה להתאושש באמבט מים מבוקר טמפרטורה לפחות שלושים דקות עם ניטור לפני היפוקסיה.
עבור היפוקסיה רציפה, היפרוקסיה וטיפול היפוקסיה, למקם את בעלי החיים בקבוצת הפציעה בתא אטום בתוך אמבט מים. נטר ברציפות את ריכוז החמצן בתוך התא, כמו גם את הטמפרטורה רקטלי לפחות חיית סנטינל אחת. לשטוף את התא עם חמצן לח תשעה אחוזים ו 91 אחוז חנקן ולשמור על קצב זרימה של שלושה עד חמישה ליטר לדקה, בהתאם לגודל התא.
לאחר ריכוז החמצן בתא הגיע תשעה אחוזים, להמשיך את המסירה במשך שלושים דקות. בסוף הטיפול בהיפוקסיה, העבר את אספקת הגז ל-80 אחוז חמצן לח ו-20 אחוז חנקן. לאחר שלושים דקות של היפרוקסיה, פתח את התא כדי לאפשר לו להגיע במהירות רבה יותר לנורמוקסיה, על ידי שיווי משקל עם אוויר החדר, לפני איטום התא ושטיפת עם תשעה אחוזים חמצן לח שוב.
ניטור רציף של כל בעלי החיים במהלך הסיבוב השני של היפוקסיה, לשים לב לכל בעלי החיים המציגים bradypnea. לאחר ריכוז החמצן בתא הגיע תשעה אחוזים, להמשיך את הטיפול היפוקסיה במשך שלושים דקות. בסוף הטיפול, השתמשו במקלות מעוגלים כדי לזהות ולשחרר את הקלטת הטבורה מהעורק הראשי הימני.
לתבודד את הפצע עם קליפים עור כירורגיים. ואז להחזיר את כל הערכות לג'יל במשך 60 דקות לסיעוד והתאוששות. בתום תקופת ההחלמה, החזירו את בעלי החיים הפצועים לאמבטיות המים בטמפרטורה של 37 עד 40 מעלות צלזיוס למשך שש שעות, והתאמת טמפרטורת המים לפי הצורך, כדי לשמור על טמפרטורות רקטליות של 36 עד 37 מעלות צלזיוס.
לאחר מכן, להחזיר ערכות לג'יל שלהם שוב. לאחר קציר המוח וקיביעה בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, מניחים את קצות הקליפר האלקטרוני על ההיבטים הגביים והגחוניים של כל מוח כדי למדוד את הגובה של כל מוח פצוע ולא פצוע. מניחים את קצות הקליפר בחלקים הרוחביים ביותר של האונות הרקתיות כדי למדוד את הרוחב של כל מוח ולשקול כל מוח.
השתמש בקאליפר כדי למדוד את סדק האורך, את כל sulci מההתחלה והסוף של החלק המובהק ביותר של סולקוס המתאים, ואת כל gyri מההיבט הרחב ביותר של כל gyrus המתאים. לאחר מכן, מניחים קצה אחד של הקליפר בנקודה האחורית ביותר של סדק האורך ואת הקצה השני של caliper בחלק האחורי ביותר של המוח הקטן כדי למדוד את כמות המוח הקטן חשוף. מתוך 34 בעלי חיים מששת המלטה שנחשפו לעלבון במחקר זה, חמישה בעלי חיים נפצעו באורח בינוני וארבעה בעלי חיים נפצעו באורח קשה.
עם פציעה גוברת, צמצום של gyri באונות הרקתיות ו / או העורפית נצפתה, עם קיצור זועף הקשורים והרחבת הסקור האורך ואת האזורים הגדולים יותר של אובדן רקמת סיסטיק בבעלי החיים שנפגעו קשה ביותר. במהלך תקופת בדיקת הרפלקס, בעלי החיים הפצועים מציגים זמן איטי יותר להסתובב במשימה הגיאוטקסית השלילית. זמן איטי יותר להסתובב הרחק מהקצה במשימה סלידה מצוק קצת יותר זמן ימינה.
על המסלול, בעלי חיים פצועים להפגין מהירות ממוצעת דומה פקדים אבל להציג מידה גדולה יותר באופן משמעותי של וריאציה מהירות במהלך כל ריצה. המרחק המותאם למשקל בין כפות הרגליים לכפות הרגליים האחוריות גדול משמעותית בבעלי חיים פצועים, עם פחות לחץ המופעל לכל אזור כפות רגליים יחידה, דרך ארבע כפות הרגליים. בשטח הפתוח, בעלי החיים הפצועים מכסים מרחק פחות מוחלט, עוצרים בתדירות גבוהה יותר ומבלים זמן רב יותר במרכז השדה ופחות זמן בפינות.
כאן, ניתן לצפות במפות חום מייצגות של שליטה ובעלי חיים פצועים. יש לדאוג לנתח את העורק מן העצב הנלווה ולאפשר את הזמן המרבי האפשרי היפוקסיה. צעדים אלה יבטיחו שרוב בעלי החיים ישרדו, וגם יסבלו מפציעה.
בעקבות הליך זה, ניתן להעריך כל תוצאות ביוכימיות, פתולוגיות או התנהגותיות, כולל הערכות המוגבלות בדרך כלל למודלים של מכרסמים של פגיעה מוחית.
