This work was supported by UWS and ThermoFisher Scientific. One of the authors (DK) acknowledges the receipt of an Australian Postgraduate Award.

הערה: פרוטוקול זה מכיל הוראות כיצד להשתמש בעמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים במערכת HPLC יחד עם גלאים מרובים לאיתור מרובב. הפרוטוקול נכתב בהנחת שהקורא יש לו ידע בסיסי וניסיון בכרומטוגרפיה ושיטות זיהוי HPLC שונים. זהירות: עיין בגיליונות נתוני בטיחות חומרים (MSDS) עבור כל החומרים וריאגנטים לפני השימוש (כלומר, MSDS למתנול). להבטיח את השימוש של כל נהלי הבטיחות המתאימים בעת טיפול בחומרים ממסים ונוזלית כרומטוגרפיה eluent ביצועים גבוהים (HPLC). להבטיח שימוש נכון של בקרות הנדסה של HPLC, מכשור איזון וגלאי אנליטיות, ולהבטיח את השימוש בציוד מגן אישי (משקפי מגן, כפפות, מעיל מעבדה, מכנסיים באורך מלאים, ונעליים סגורות הבוהן). 1. הגדרה של HPLC Instrument <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מכשיר HPLC עם המים ultrapure (למשל, 100% מים מילי- Q) לליןהדואר ומתנול 100% לקו B כשלב הנייד ולטהר את המשאבות לפי דרישת יצרן. אם אחד מהגלאים משמשים הוא MS, כפי שהוא כאן, להוסיף 0.1% חומצה פורמית לשני שלבים הניידים A ו- B. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת HPLC רכיבים וגלאים סייעו כפי שמודגם באיור 2. זה דורש מיקום נוח של גלאים ביחס לטור כדי למזער את הנפח המת בין הגלאי ועמודה. גמישות בתצורת מערכת HPLC רצויה. </li></ol> 2. התקנה של UV-Vis וגלאי MS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את גלאי UV-Vis לאורך הגל הרצוי התלוי במדגם של עניין (למשל, ננומטר 280). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את גלאי MS במצב חיובי לניתוח רוזן סה&quot;כ יון (TIC) באמצעות שיטת זיהוי סריקה מלאה. גם להתאים את הפרמטרים הבאים MS בהתאם: הטמפרטורה מאדה 500 מעלות צלזיוס, טמפרטורת נימים 350 ° C, גז נדן, בשיעור של 60 יחידות, זרימת גז עזר40 ולטאטא זרימת גז ב 5 יחידות, ומתח תרסיס 3.5 קילו וולט. ניתן לכוונן את הגדרות אלה מאוחר יותר לדרישות משתמש ספציפיות תלויות במדגם להיות מנותח. </li></ol> 3. הכנת 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl הרדיקלי (DPPH •) מגיב התקנה של גלאי מערכת • DPPH <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 25 מ&quot;ג של DPPH • ולפזר ב250 מיליליטר של מתנול בבקבוק נפח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 250 μl של חומצה פורמית למגיב DPPH •. מכסה את הבקבוק בנייר כסף, כדי למנוע חשיפה לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sonicate הבקבוק המכיל מגיב DPPH • במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטהר את משאבת DPPH • עם מגיב DPPH • מוכן לפי הדרישה של היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר את מערכת DPPH • על פי איור 2 על ידי הצמדת קו המשאבה לכניסה של T-פיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף סליל תגובת μl 100 השקע דואר של T-החתיכה ולצרף את הקצה השני של סליל התגובה לגלאי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים בארגז סליל התגובה בתנור טור ולהגדיר את טמפרטורת תנור עמודה עד 60 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את-Vis UV גלאי DPPH • 520 ננומטר. </li></ol> 4. הגדרה של טור כוחות הביטחון הפלסטיניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הכניסה של כוחות הביטחון הפלסטיניים לעמודת מכשיר HPLC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את היציאה המרכזית לגלאי MS, באמצעות אורך 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר יציאה היקפית לגלאי UV-Vis באמצעות אורך 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר אחר יציאה היקפית לT-פיסת מערכת איתור DPPH • שימוש באורך 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חסום את היציאה ההיקפית שאינו בשימוש באמצעות פקק טור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את קצב הזרימה של משאבת HPLC לדקות 1 מיליליטר -1 ב 100% קו B - מתנול 100% (0.1% חומצה פורמית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את העמודה עם 100% ph הנייד מתנולASE עבור 20 דקות לx 250 מ&quot;מ אורך טור 4.6 id מ&quot;מ. הפעם ישתנה בהתאם לממדים של עמודות אחרות המשתמש יכול להעסיק. </li></ol> 5. כוונון טור כוחות הביטחון הפלסטיניים לאיתור Multiplexed <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את המסה של לפחות שני כלי אוסף ריקים (אחד ליציאה המחוברת לגלאי UV-Vis ואחד לגלאי DPPH •) באמצעות איזון אנליטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף שלב נייד מUV-Vis ויציאות DPPH • לשני כלים נפרדים,-שקל מראש אוסף (5.1). רשום את פרק זמן לאיסוף. לאסוף לפחות 500 מ&quot;ג של ממס בכל כלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את כלי האיסוף ולקבוע את המסה של שלב נייד. בהתחשב בצפיפות של מתנול הוא .791 מיליליטר ז -1, לקבוע את עוצמת הקול של שלב נייד שנאסף מכל יציאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על ידי הבדל, כלומר, סט קצב זרימת משאבה נומינלית בניכוי קצב הזרימה דרך • DPPH ו- UV-Vis detectoזרימת יציאות R, לקבוע את קצב הזרימה לגלאי MS. הגעה כל תזרים פרופורציה כאחוז מהסך כל הזרימה. הערה: באופן אידיאלי, זרימת האחוזים הם: לטרשת הנפוצה היא 18% מכלל קצב הזרימה, לUV-Vis 22%, לגלאי DPPH • 60%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם לא, להתאים את זרימת אחוזים על ידי שינוי הלחץ שוב על גלאי UV-Vis. לדוגמא, אם את הזרימה לUV-Vis היא גבוהה מדי, להפחית את השיעור על ידי הוספה להוסיף סעיף 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ ליציאה של גלאי UV-Vis. אז לחזור על שלבי 5.1 עד 5.5. </li></ol> 6. תנאי התקנה סופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב הזרימה של המשאבה מגיב DPPH • לאותו קצב זרימת יציאת היציאה לשקע מחוברת לגלאי DPPH •. הערה: טור כוחות הביטחון הפלסטיניים multiplexed עם UV-Vis, DPPH • וMS מוכן לניתוח עכשיו. </li></ol>

<ol>
	<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+of+a+new+concept+chromatography+column.">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology:+Parallel+segmented+outlet+flow.">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations:+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet.">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology:+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns.">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography.">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li><li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography:+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures.">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection.">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li><li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection.">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li><li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+flow+chromatography+columns:+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+'virtual'+narrow+bore+column.">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li><li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology.">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection:+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products.">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

מחקר זה כלל האפיון ואפיון של קפה באמצעות HPLC עם גילוי ריבוב העסקת עמודה מקבילה זרימה מפולחת (כוחות הביטחון הפלסטיניים). המרובב HPLC באמצעות עמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים מאפשר אפיון וזיהוי של גורמים כימיים מפתח על ידי הפחתת מורכבות נתוני המדגם תוך קבלת מידה רבה יותר של מידע מולקולה ספציפית בתוך שבריר של הזמן שלוקח באמצעות תהליכים רב-גילוי קונבנציונליים. טור כוחות הביטחון הפלסטיניים לא רק מאפשר פלטפורמה לגילוי מרובב, אלא גם שילוב של שניהם גלאים הרסניים ולא הרסניים, ללא נפח מת נוסף וצינורות. DPPH •, UV-Vis ו- MS (TIC) היו multiplexed לניתוח קפה אספרסו. טור כוחות הביטחון הפלסטיניים 4 יציאות נוצל לניתוח המרובב של קפה באמצעות שלושה הגלאים שונים. הנמל לשקע עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים המרכזי היה קשור לגלאי MS ושניים מthreיציאות היקפי הדואר היו קשורות לשתי מערכת איתור DPPH • או גלאי UV-Vis. הנמל ההיקפי זמין השלישי לא היה בשימוש ולכן חסם עם פקק טור, אבל זה היה יכול לשמש לאיסוף הדגימה, או לגלאים אחר. תהליך הכוונון של סט עד מרובב זה היה ספציפי לגלאי, שבו מדידה של זרימת פילוח התרחש לאחר הגלאי לUV-Vis ומערכות גילוי DPPH •. מאז MS הוא גלאי הרסני, זרימת אחוז נקבע על ידי הבדל (זרימה נומינלית כוללת מינוס זרימה מהיציאות לשקע האחרות). במחקר זה, קפה הניתוח עם מגיב DPPH • הביא 20 פסגות גם נפתרו, 13 מהם גם הראו תגובה בגלאי UV-Vis והטרשת נפוץ. איור 3 משווה את chromatograms מתקבל על ידי כל גלאי. ישנם ארבעה אזורים שיש לו פרופיל chromatographic בתוך כלchromatogram, שצוין על ידי התיבות האדומות. בקופסות אלה, שבי UV-Vis וMS הראו תגובה קטנה לתרכובות אלה, היה תגובה חזקה מגלאי DPPH •. ארבעת מרכיבים שהגיבו למגיב DPPH • היו גם לא זוהו על ידי גלאי UV-Vis או MS ושלושה המרכיבים שהגיבו למגיב DPPH • לא נתנו שום תגובת UV-Vis או MS בכלל. המסה המולקולרית של הרכיבים שהגיבו לטרשת הנפוצה שנרשמה בטבלה 1. הרכיב שeluted ב 10 דקות הייתה תגובת DPPH • חזקה, עם אין תגובה מגלאי UV-Vis ותגובה קטנה מאוד רק מגלאי MS . הצימוד של טור AFT במצב כוחות הביטחון הפלסטיניים נתן את ההזדמנות כדי להפעיל גלאים מרובים במצב ריבוב, שבו כל הגלאים ללא קשר לדרישות HPLC-גלאם להפעיל בו זמנית בהזרקה והפרדת יחיד של SAMP המורכב זהle. יציאות מרובות בסופו של עיצוב הולם של טור AFT מציע יתרון הנוסף של מתן הזדמנויות לתהליכי גילוי ריבוב, מניב מידע מדגם מפורט ואמינות מוחלטת בהקצאה של רכיבים בין כל מצב זיהוי. זיהוי מרובב עם עמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים סיפק כמות גדולה של מידע מדגם, שלושה גלאים מופעלים בו זמנית בתוך זמן הריצה הנדרש לגלאי בודד. המשחק של זמן שמירה של פסגות בתוך כל מצב זיהוי המדויק היה אפשרי. שניים מהגלאים השתמשו היו גלאים הרסניים. יכולות הריבוב של טור כוחות הביטחון הפלסטיניים היא, עם זאת מוגבלות על ידי הרכיבים הזמינים HPLC אינסטרומנטלי ומכשור איתור. הטכניקה דורשת מספר שיטות איתור ותוספות הכרחיות לכל מצב ספציפי של גילוי, כלומר, משאבות, סלילי תגובה, תנורים וכו &#39;היתרון העיקרי של גילוי ריבוב באמצעות טור כוחות הביטחון הפלסטיניים הוא הרדוקציהn בזמן ניתוח של עד ארבעה לקפל (אם 4 גלאים משמשים), אשר ממזערת השתנות מדגם בין מנתח לכל מצב יחיד של זיהוי. יתר על כן, הקצאת יחסי המרכיב בתוך המדגם זוהה מגלאי אחד למשנהו היא הרבה יותר פשוט, ונוטה פחות שגיאה מאשר אם כל גלאי הועסק בנפרד. זה ימנע אי-התאמה במשימות רכיב, אשר לעתים קרובות בעיה בניתוח של דגימות מורכבות. חשוב לחזור ולהדגיש כי כימות צריך להתבצע על בסיס הגלאי הממוקם בפתח היציאה המרכזית רדיאלי מאז יעילות הפרדה כאן היא הגבוהה ביותר, ומכאן, תופעות עוקבות שיא הן מינימליות וכימות הוא כך המדויק ביותר. זרימת הפילוח הוכח להיות חזק באמצעות ניתוחים, אבל גם כך, זה תרגול מעבדה טוב כדי לשמור על סטנדרטיזציה הרגילה. מכאן בכל עבודת כמותיים חשוב להפעיל סטנדרטים כמתאימים. אם גלאי משמש טהורly כאמצעי להבנת מורכבות המדגם באמצעות תיאור חזותי של מרכיבי מדגם, לא ייתכן שתידרש כימות, כמו במקרה כאן לפרוטוקול זיהוי תגובה נוגד חמצון. אנחנו הוכחנו כאן דוגמא של גילוי משולש, UV, טרשת נפוצה ואיתור תגובה נוגד חמצון. מערכות גילוי ריבוב באמצעות עמודות AFT ניתן להשתמש כמעט בכל מצב שבו אנליסטים דורש מידע רב ממדי מדגם וזה כרוך בפרוטוקולי זיהוי מרובים. שימוש בעמודות AFT מאוד לפשט ולהאיץ את התהליך של אפיון מדגם.

עמודות זרימת טכנולוגיה פעילה עמודות כרומטוגרפיה טכנולוגית זרימה פעילה (AFT) פותחו לאחרונה להתגבר חוסר יעילות בהפרדות הקשורים זרימת ההטרוגניות 1-6 וגם כדי לאפשר זיהוי מרובב. בפירוט שתקשורת מסוים זה התהליך התפעולי של המקביל מפולח זרימת טור (PSF) עם זיהוי מרובב. היתרונות הפונקציונליים המפתח של טור כוחות הביטחון הפלסטיניים הם: (1) התזרים מאזור המרכז הרדיאלי של מיטת העמודה מבודד מאזור הפריפריה או קיר של זרימה, (2) הנפח של שלב נייד שחייבים להיות מעובד על ידי זיהוי מקור מצטמצם, וניתן multiplexed מקורות (3) זיהוי להרחיב מידע מדגם ללא הקניית עיכובי זיהוי פני כל תהליך זיהוי, או לאחר מכן מחייבים את הפיצול של זרימת זרם פוסט עמודת 7,8. התכונה המרכזית בעיצוב של עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים, המאפשרת לdvantage של זיהוי מרובב היא ההרכבה הראויה וfrit לשקע רומן. איור 1 הוא תצלום של טור AFT בהשוואה לטור קונבנציונלי. חשוב להבין כי תהליך הפיצול הושג באמצעות זרימה מפולחת עמודות מקבילות הוא לא אותו הדבר כמו פיצול זרימת הודעה טור זרם. בזרימה הודעה טור זרם לפצל את הלהקה כולה מדגם מהמוביל הקצה לגפיים של הזנב נדגם באותה מידה (כלומר, צירי), ובכך, כל תזרים זרם שווה ביחס ליעילות ורגישות; סדר הגודל של הרגישות ובכך הם מחולקים במספר הפיצולים. בכוחות הביטחון הפלסטיניים, לעומת זאת, דגימות תהליך פיצול הלהקה רדיאלית, לא צירי. ככזה, הדגימות המרכזיות נמל שיא השיא - האזור מרוכז ביותר של השיא. לפיכך, הרגישות כאן היא גבוהה ביותר כשיא אינו מדולל על ידי האזור המפוזר עוקב. מדגם משחררי מהנמלים ההיקפיים הוא לא יעיל כמו בCENTRAאזור l, אבל, מאז הלהקה נדגם רדיאלית, ולא צירי, הרוחב של השיא הוא צר יותר יהיה המקרה לתהליך דגימה שחלק השיא בכיוון הצירי, כלומר, פיצול הודעה עמודה. מכאן הרגישות עם גלאים תלויים ריכוז לא מצטמצמת. בעמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים, ראוי לשקע כולל יציאות יציאה מרובות ועל החלק הפנימי של סוף זה מתאים לשם שוכן frit טבעתי. החלק הפנימי של ערוצי frit טבעתיים זה לזרום החוצה מהטור דרך יציאת השקע המרכזית רדיאלי, ואילו החלק החיצוני של רדיאלי ערוצי frit לשקע לזרום החוצה של העמודה באמצעות הזרימה לשקע יציאות היקפי או קיר אזור. החלקים הפנימיים וחיצוניים של frit לשקע מופרדים על ידי מחסום בלתי חדיר המונע זרימה צולבת בין זרימת האזורים אלה 2. כתוצאה מעיצוב זה זרימת רדיאלי הזרם המרכזי במיטת העמודה מופרד מזרימת תוספות קיר האזורהחביא את הטור. החלק היחסי של זרימה משני אזורים אלה יכול להיות מגוון כמעט לכל יחס רצוי באמצעות ניהול לחץ כדי לייעל את ההיבטים שונים פונקציונליים של טכנולוגית העמודה, כגון יעילות הפרדה או רגישות זיהוי. במהותה, העיצוב הזה ביעילות קובע במסגרת טור הפורמט הגדול עמודה &quot;וירטואלית&quot;, שקוטר פנימי צר, ולכן פונקציות טור כעמודת קיר-פחות נכונה, להתגבר על ההטרוגניות מיטת טור וקיר ההשפעות 9,10. היתרונות העיקריים של כוחות הביטחון הפלסטיניים עמודות שיפורים ביעילות טור, מזעור עיבוד הממס למקור זיהוי (ים) ומאפשר זיהוי מרובב. עם זאת, יתרון נוסף הוא שמאז tailing והאזורים בחזית של כל להקה יוסרו מelution הכולל פרופיל המומס בelution או זיהוי נמצא בריכוז גבוה יותר מאשר היה להיות שנצפה לאותו יםolute הזרקה ועומס ריכוז על עמודה קונבנציונלית, בהתאם ליחס הפילוח המועסק. כתוצאה מכך יש הוא נצפה לעתים קרובות רווח בעוצמת אות להפרדות שנערכו בטורי כוחות הביטחון הפלסטיניים 2. למעשה, אם יחס הפילוח מותאם כך שעל 25% מתזרים יציאות מכל אחת מארבע יציאות היציאה, עוצמת האות שנצפתה באמצעות זיהוי Ultra-סגולה (UV) מראה כמעט זהה עוצמת האות המדויקת כלכאורה באמצעות קונבנציונלי טור שבו כל (100%) של השלב הנייד מנותח 7. יתר על כן, כוונון עדין של היחס בין שקע זרימת האזורים המרכזיים וקיר מאפשר את יעילות הטור להיות מותאמת. הרווחים ביעילות טור נצפו באמצעות עמודות AFT לא ניתן לומר לערך יחיד, מאז רווחים יעילות אלה הם פונקציה של שלושה גורמים: (1) קצב הזרימה, (2) יחס הפילוח, ו- (3) גורם השימור המומס . עם זאת, עלייה ביעילות בהשוואה למרהעמודות entional כמעט תמיד הם נצפו, ולפעמים רווחים אלה במספר הצלחות התיאורטיות 1,2 יותר מ -100%. היכולת לכוון את יחס הפילוח מאפשר למטפל להתאים את הקוטר של הטור &quot;הווירטואלי&quot; ביעילות, ואת זה הוא גורם חשוב ביחס לתהליך זיהוי. לדוגמא, קוטר עמודה וירטואלית 2.1 מ&quot;מ פנימית (ID) הוקמה מעמודת id 4.6 מ&quot;מ פיזי כאשר יחס הפילוח הוא 21% משלב נייד משחררי מנמל היציאה המרכזי רדיאלי. בתנאים אלה, עמודת id 2.1 מ&quot;מ הווירטואלי מבצעת עם יעילות שעשויה להיות יותר מ -70% יותר מעמודת id 2.1 מ&quot;מ הקונבנציונלי, בהתאם לקצב זרימה, וגורם שימור מומס 10. עיצוב עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים הנוכחי המשמש לגילוי ריבוב משלב 4 יציאות לשקע מתאימות, אבל הטור יכול להיות מצויד עם 2 יציאות מתאימות גם הסוף, עם זאת, זה לא מגביל את זיהויo רק שני גלאים. הפעולה הבסיסית של עמודות אלה, עם זאת, אותו, מלבד יכולים להיות יחד כי ארבעת גלאים במקביל לטור כוחות הביטחון הפלסטיניים שקע 4 יציאות הרחבת ההיקף לאיתור מרובב. מלבד צינורות חיבור טור לפני ואחרי, הדרישות נוספות רק לפעול עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים הוא צינור שיכול להיות מחובר ליציאות לשקע ההיקפיים, ואמצעים שבם הסכום של שלב נייד עובר צינור אחד ניתן למדוד, בדרך כלל גם מדידת מסה או מדידת נפח. על מנת להקל על כוונון, הקוטר הפנימי של כל הזרימה לשקע צינורות צריך להיות זהה. זרימת היחס בין יציאות יציאה המרכזיות ההיקפית ורדיאלי אז מגוון באמצעות ניהול לחץ, פשוט על ידי שינוי האורך של הצינור ממוקם בשקע ההיקפי המתאים, או האורך של הודעה צינורות גלאי בפתח היציאה המרכזית רדיאלי. מרובב איתור שימוש בעמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים </strong&gt; יתרון חשוב של עמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים הוא שכל אחד מנמלי יציאת השקע יכול להיות מחובר למקור איתור ישירות, ובכך לאפשר זיהוי מרובב. במערכת איתור מעוצבת היטב ניתוח יחיד עם זיהוי מרובב יכול לספק מידע משמעותי בכל הקשור לטבע של הרכיבים בתוך המדגם. חשוב לציין, ניתן לבצע בדיקות הרסניות ולא הרסניות בדיוק באותו הזמן, ללא דיחוי זיהוי. זה מאפשר הקצאה המוחלטת של, למשל, נוגדי חמצון באמצעות מגיב DPPH •, עם רכיבים שנצפו לelute עם UV ו / או תגובות זיהוי ספקטרוסקופיית מסות (MS) 7,11. לכן, יכולים להיות מופעלים על ארבעה גלאים עצמאיים בו זמנית עם חלקים מתאימים של זרימה מופנים לכל גלאי באמצעות כל אחת מארבע היציאות לשקע. מאז את הזרימה דרך יציאות אלה יכול להיות מותאמות כמות מומסת להגיע כל הגלאים בקלות יכולה להיות מותאם לחליפההרגישות של מקור הגלאי נתון. יש לציין, עם זאת, כי ההגירה מומסת היעילה ביותר שנצפתה דרך פתח היציאה המרכזית רדיאלי. כל אחד מהנמלים ההיקפיים מציע יעילות הפרדה שווה ערך, שכאשר נקבעו ל- 25% בכל יציאה, היא רק מעט פחות יעיל מאשר טור קונבנציונלי. ככזה, חשוב שהגלאים כמותיים להיות מוגדרים לנתח דגימה מנמל היציאה המרכזית רדיאלי. בעת הגדרת עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים לצורך זיהוי ריבוב יש מספר השיקולים שצריכים להיעשות כדי להשיג תוצאות יעילה ואיכותיות; שממדי צינור לכל יציאה, בחירה של שיציאה לסוג של גלאי וזרימת התאמה. מימדי צינור לכל יציאה בכרומטוגרפיה האורך של צינורות הודעה עמודה ממלא תפקיד מכריע ביעילות וביצועים של ההפרדה. DEA הגדולד-נפח כתוצאה מצינורות id ארוכים או רחבים משקע עמודה לגלאים יגרום להפסד של יעילות, רזולוציה ורגישות. כך, ממדי צינורות מתאימים חייבים להיות מנוצלים בעת הגדרת עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים כדי להשיג את הפוטנציאל המרבי במתן הפרדה יעילה תוך מתן היתרונות של ריבוב. נמל לגלאים איור 2 הוא דוגמה להתקנת דוגמא של גילוי ריבוב (ויולט-גלוי Ultra (U-Vis), ספקטרומטר המסה (MS) ו2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH •) זיהוי). האיור מציג את הנמל המרכזי מחובר לגלאי MS, ואילו • DPPH וגלאי UV-Vis מחוברים ליציאות ההיקפיים. מאז MS הוא הגלאי רגיש ביותר של שלוש, תזרום לגלאי זה הופנה מנמל היציאה המרכזי. כגילוי DPPH • הוא סלקטיבית לpresencדואר של נוגדי חמצון, ורגיש לפחות וסובלני ביותר להרחבת להקה, תזרום לגלאי זה הופנה מנמל היקפי. UV-Vis היה גלאי &#39;גנריות &quot;משניים, כך יזרום לגלאי זה הופנה מנמל היקפי שני. זרימת התאמה ברגע שהצינור המתאים כבר מחובר מיציאה לגלאי, זרימת יציאה מכל אחד מהגלאים יכולה להיות מותאמת לסכום הנדרש. דרך פשוטה למדוד את כמות זרימת יציאה מכל גלאי היא לשקול את הסכום של שלב נייד שelutes דרך כל יציאה על תקופת זמן נתונה. זרימת אחוז ובכך ניתן לקבוע, ויכולים להיות מותאם זרימת היחסים או על ידי קיצור או הארכת צינורות המחוברים לקו לשקע בגלאים בהתאם כדי שיתאים לדרישות של הגלאים של בחירה. יש גלאים שונים יש דרישות שונים של זרימה, למשל, תא הזרימה שלגלאי הקרינה (FLD) אינו קצב הזרימה מוגבל, אך יש להקפיד להימנע על-שמירת לחץ של תא הזרימה. מכאן השליטה של ​​זרימה דרך FLD בדרך כלל השיגה על ידי התאמת הירידה בלחץ על פני הגלאים האחרים ואת יתרת הזרימה אז עוברת דרך FLD. גלאי שרגיש לכמות הזרימה שמועברת הוא הטרשת הנפוצה. בדרך כלל, ספקטרומטרים המוניים סוף גבוה הנוכחיים יכולים בקלות לעבד סביב 1 עד 1.5 מיליליטר / דקה של שלב המימי בינוני נייד. מעל קצב זרימה זו, הצפה של המקור עלולה להפוך את MS שמיש. עם זאת, רגישות זיהוי ברוב ספקטרומטרים מסה נהנתה באמצעות ספיקות נמוכות יותר; ומכאן יכולות פיצול זרימת כוחות הביטחון הפלסטיניים הן מאוד שימושיות עבור יישומים הכוללים איתור טרשת נפוצה. יכולות להיות מנוצלת עמודה גבוהה ספיקות נפח, אבל עם המון נפח נמוך הועברו לגלאי MS. כוונון הזרימה לגלאי MS, לעומת זאת, חייבת להתבצע על ידי התאמת הירידה בלחץ לפניגלאי MS, MS ולא הודעה. כאן, השימוש בצינורות צרים נשא (id 0.1 מ&quot;מ) הוא מאוד שימושי, כמו הלחץ יכול להיות מותאם בקלות מבלי להוסיף נפח מת שאינו הולם. בהתאם לסוג של גלאי ההתאמה של יחס הפילוח ניתן לעשות גלאי או לפני או אחרי. אם גלאי אינו הרסני, כגון משמש UV-Vis, זרימת אחוז יהיה מדוד ומכוון פוסט גלאי. אם גלאי הרסני אחת משמש בקומפלקס להגדיר את זרימת אחוז נקבע על ידי החישוב לאחור ביחס לזרימת נמל האחוזים אחרים. אם גלאי מבוסס מגיב משמש כגון DPPH •, זרימת אחוז נמדד הודעה גלאי ללא התוספת של מגיב; ואם שניים או יותר הרסני גלאים משמשים, אז זרימת היחס נמדד מראש גלאי. איתור מערכות שעשויות לדרוש מכשור נוסף, DPPH • כאמור, יהיה לחץ מערכת נוסף שעשויות לשנות את הזרימהאחוז מצורף פעם אחת למערכת האיתור. לכן, שיקול דעת צריכה להיות משולם על לחץ במערכת של גלאים הרסניים, מראש גלאי בעת כוונון זרימת אחוז. ללא קשר ליחס הזרימה שמוגדר דרך כל היציאות, יש לקבל מידע כמותי באמצעות תקינה מתאימה. ברגע שזרימת היחסים מוגדרים, לעומת זאת, הם חזקים, והם לא ישתנו גם בתנאי elution שיפוע 7, פרוטוקול וידאו מפורט המלווה את כתב היד הזה נועד להראות כיצד להשתמש ומנגינת תפקוד עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים במצב ריבוב של זיהוי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="686">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC instrument</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:185px;">Multiple detectors of choice for multiplexed detection. Detectors of choice may require additional instrumentation i.e. pump.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Parallel Segmented Flow HPLC column</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Not Defined</td>
			<td>Soon to be commercialised</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Methanol</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PEEK tubing</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Various lengths and i.d.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Column stoppers</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For blocking unused peripheral ports.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PEEK tube cutter</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Analytical Scale Balance</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stop watch</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eluent collection vessels</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1-2 mL Sample vials can be used as eluent collection vessels</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tuning a parallel segmented flow column and enabling multiplexed detection

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms of efficiency and sensitivity and to enable multiplexed detection. This form of AFT uses a parallel segmented flow (PSF) column. A PSF column outlet end-fitting consists of 2 or 4 ports, which can be multiplexed to connect up to 4 detectors. The PSF column not only allows a platform for multiplexed detection but also the combination of both destructive and non-destructive detectors, without additional dead volume tubing, simultaneously. The amount of flow through each port can also be adjusted through pressure management to suit the requirements of a specific detector(s). To achieve multiplexed detection using a PSF column there are a number of parameters which can be controlled to ensure optimal separation performance and quality of results; that is tube dimensions for each port, choice of port for each type of detector and flow adjustment. This protocol is intended to show how to use and tune a PSF column functioning in a multiplexed mode of detection.

ניתוח HPLC מרובב בוצע באמצעות טור AFT במצב כוחות הביטחון הפלסטיניים (איור 1) ולהגדיר כפי שמודגם באיור 2. סוג זה של התקנה אפשר קפה מדגם להיות מנותח בו זמנית באמצעות UV-Vis, DPPH • ו- MS בסך הכל רוזן יון מצב (TIC). התרכובות של קפה המדגם שהגיב לDPPH • אז יכולות להיות מתאימות בקלות עד UV-Vis וMS - תגובות TIC מבוססות על היישור של זמן שמירה כפי שמודגמות באיור 3, מאז chromatograms נרשמו בו זמנית. איפה תגובה חיובית ראתה מגלאי MS-TIC, המסה המולקולרית של השיא נרשמה. טבלה 1 רשימות הפעמים השמירה של פסגות DPPH •, והתגובה של פסגות כאלה בUV-Vis ו / או MS גלאי, שבכך סיפק את המסה המולקולרית. הקלות בפסגות בין תהליכי זיהוי שונים התאמה אפשרה לAFטופס AST ויעיל יותר של הקרנה ואפיון למדגם מורכב, כגון קפה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53448/53448fig1.jpg" /> איור 1. תמונה של טור זרימת טכנולוגיה פעיל בהשוואה לטור קונבנציונלי. טור AFT מצויד בשקע מתאים ארבעה נמל שבו שוכן frit טבעתי המאפשר דגימת שיא פני חתך רדיאלי של להקת מדגם. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53448/53448fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53448/53448fig2highres.jpg" width="700" /> איור 2. איור דוגמא להסדר HPLC מרובב, באמצעות טור כוחות הביטחון הפלסטיניים עם DPPH •, UV-Vis וגלאי MS. כל detecto<html> R הוא מחובר ליציאה לשקע נפרדת. במקרה זה MS משמש לכימות ומוגדרת כדי לאסוף דגימה מנמל השקע המרכזי רדיאלי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53448/53448fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53448/53448fig3highres.jpg" width="500" /> איור 3. chromatograms של קפה מדגם ניתח באמצעות מערכת HPLC מרובבת, באמצעות טור כוחות הביטחון הפלסטיניים עם DPPH •, UV-Vis וגלאי MS: (א) DPPH • 520 ננומטר, (ב) UV-Vis 280 ננומטר, (ג ) MS - TIC. כל עקבות גלאי היא ביחד בצורה מושלמת בזמן, ולכן אין התאמה לקזז נדרש כדי לפצות על זמן מת בין כל גלאי.arget = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr height="26"><td colspan="6" height="26" style="height:26px;width:384px;"> קפה DPPH • שיא תגובה והמוני </td></tr><tr height="24"><td height="45" rowspan="2" style="height:45px;"> DPPH • שיא </td><td> שמירת זמן </td><td> DPPH • </td><td> UV-Vis </td><td rowspan="2"> MS - TIC תגובה </td><td rowspan="2"> מַסָה </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> (דקות) </td><td> תְגוּבָה </td><td> תְגוּבָה </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 1 </td><td> 6.74 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 123.84 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 2 &lt;/ Td&gt; <td> 7.54 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 125.83 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 3 </td><td> 8.94 </td><td> כֵּן </td><td> לא </td><td> לא </td><td> - </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 4 </td><td> 10.05 </td><td> כֵּן </td><td> לא </td><td> כֵּן </td><td> 135.83 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 5 </td><td> 13.15 </td><td> כֵּן </td><td> לא </td><td> לא </td><td> - </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 6 </td><td> 16.22 </td><td> כֵּן </td><td> לא </td><td> לא </td><td> - </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 7 </td><td> 18.14 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 126.82 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 8 </td><td> 19.4 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><html><td> 162.81 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 9 </td><td> 20.46 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 187.89 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 10 </td><td> 24.71 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 162.81 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 11 </td><td> 26.27 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 162.8 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 12 </td><td> 26.97 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 194.87 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 13 </td><td> 31.84 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 162.8 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 14 </td><td> 32.02 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 162.78 </td></tr>&quot;&gt; <td height="21" style="height:21px;"> 15 </td><td> 32.56 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 176.82 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 16 </td><td> 33.94 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 176.83 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 17 </td><td> 41.26 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> לא </td><td> - </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 18 </td><td> 42.72 </td><td> כֵּן </td><td> לא </td><td> כֵּן </td><td> 284.93 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 19 </td><td> 46.07 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 190.83 </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> 20 </td><td> 49.21 </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> כֵּן </td><td> 162.75 </td></tr></tbody></table> שולחן 1. </stRong&gt; • DPPH זוהה פסגות תגובה לקרינת UV-Vis וMS - TIC.

Watch this Scientific Journal Video about Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection at JoVE.com

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Here, we present a protocol for the operation and tuning of parallel segmented flow chromatography columns to enable multiplexed detection.

כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Google

Research

JoVE Journal

Chemistry

7.3K Views.  University of Western Sydney. Here, we present a protocol for the operation and tuning of parallel segmented flow chromatography columns to enable multiplexed detection. 

Video: Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Multiplexed Fluorescent Microarray for Human Salivary Protein Analysis Using Polymer Microspheres and Fiber-optic Bundles

Herein, we describe a protocol for simultaneously measuring six proteins in saliva using a fiber-optic microsphere-based antibody array. The immuno-array technology employed combines the advantages of microsphere-based suspension array fabrication with the use of fluorescence microscopy. As described in the video protocol, commercially available 4.5 &#956;m polymer microspheres were encoded into seven different types, differentiated by the concentration of two fluorescent dyes physically trapped inside the microspheres. The encoded microspheres containing surface carboxyl groups were modified with monoclonal capture antibodies through EDC/NHS coupling chemistry. To assemble the protein microarray, the different types of encoded and functionalized microspheres were mixed and randomly deposited in 4.5 &#956;m microwells, which were chemically etched at the proximal end of a fiber-optic bundle. The fiber-optic bundle was used as both a carrier and for imaging the microspheres. Once assembled, the microarray was used to capture proteins in the saliva supernatant collected from the clinic. The detection was based on a sandwich immunoassay using a mixture of biotinylated detection antibodies for different analytes with a streptavidin-conjugated fluorescent probe, R-phycoerythrin. The microarray was imaged by fluorescence microscopy in three different channels, two for microsphere registration and one for the assay signal. The fluorescence micrographs were then decoded and analyzed using a homemade algorithm in MATLAB.

We describe a procedure for profiling salivary proteins using multiplexed microsphere-based antibody arrays. Monoclonal antibodies were covalently linked to fluorescent dye-encoded 4.5 &#x03BC;m polymer microspheres using carbodiimide chemistry. The modified microspheres were deposited in fiber-optic microwells to measure protein levels in saliva using fluorescence sandwich immunoassays.

הריבוב פלורסנט Microarray לניתוח חלבוני רוק אדם שימוש מיקרוסכמות פולימרים ואגדים של סיבים אופטיים

Herein, we describe a protocol for simultaneously measuring six proteins in saliva using a fiber-optic microsphere-based antibody array. The immuno-array ...

Exploring the Radical Nature of a Carbon Surface by Electron Paramagnetic Resonance and a Calibrated Gas Flow

While the first Electron Paramagnetic Resonance (EPR) studies regarding the effects of oxidation on the structure and stability of carbon radicals date back to the early 1980s the focus of these early papers primarily characterized the changes to the structures under extremely harsh conditions (pH or temperature)1-3. It is also known that paramagnetic molecular oxygen undergoes a Heisenberg spin exchange interaction with stable radicals that extremely broadens the EPR signal4-6. Recently, we reported interesting results where this interaction of molecular oxygen with a certain part of the existing stable radical structure can be reversibly affected simply by flowing a diamagnetic gas through the carbon samples at STP7. As flows of He, CO2, and N2 had a similar effect these interactions occur at the surface area of the macropore system.
This manuscript highlights the experimental techniques, work-up, and analysis towards affecting the existing stable radical nature in the carbon structures. It is hoped that it will help towards further development and understanding of these interactions in the community at large.

Stable radicals that are present in carbon substrates interact with paramagnetic oxygen through a Heisenberg spin exchange. This interaction can be significantly reduced under STP conditions by flowing a diamagnetic gas over the carbon system. This manuscript describes a simple method to characterize the nature of those radicals.

היכרות עם הטבע הרדיקלי של משטח פחמן על ידי אלקטרונים פאראמגנטיים תהודה ומכוילת גז Flow

While the first Electron Paramagnetic Resonance (EPR) studies regarding the effects of oxidation on the structure and stability of carbon radicals date ...

Transport of Surface-modified Carbon Nanotubes through a Soil Column

Carbon nanotubes (CNTs) are widely manufactured nanoparticles, which are being utilized in a number of consumer products, such as sporting goods, electronics and biomedical applications. Due to their accelerating production and use, CNTs constitute a potential environmental risk if they are released to soil and groundwater systems. It is therefore essential to improve the current understanding of environmental fate and transport of CNTs. The transport and retention of CNTs in both natural and artificial media have been reported in literature, but the findings widely vary and are thus not conclusive. There are a number of physical and chemical parameters responsible for variation in retention and transport. In this study, a complete procedure of selected multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs) is presented starting from their surface modification to a complete set of laboratory column experiments at critical physical and chemical scenarios. Results indicate that the stability of the commercially available MWCNTs are critical with their attached surface functional group which can also influence the transport and retention of MWCNT through the surrounding medium.

Surface properties of a nanoparticle are important for their interaction with the surrounding medium. Therefore the surface modification of carbon nanotubes can be critical for their transport and retention through porous media. Here, lab scale column experiments are used to understand the possible transport and retention of these nanoparticles.

הובלה של פחמן-שונה Surface דרך טור קרקע

Carbon nanotubes (CNTs) are widely manufactured nanoparticles, which are being utilized in a number of consumer products, such as sporting goods, ...

Ethylene Polymerizations Using Parallel Pressure Reactors and a Kinetic Analysis of Chain Transfer Polymerization

We demonstrate a method for high-throughput catalyst screening using a parallel pressure reactor starting from the initial synthesis of a nickel &#945;-diimine ethylene polymerization catalyst. Initial polymerizations with the catalyst lead to optimized reaction conditions, including catalyst concentration, ethylene pressure and reaction time. Using gas-uptake data for these reactions, a procedure to calculate the initial rate of propagation (kp) is presented. Using the optimized conditions, the ability of the nickel &#945;-diimine polymerization catalyst to undergo chain transfer with diethylzinc (ZnEt2) during ethylene polymerization was investigated. A procedure to assess the ability of the catalyst to undergo chain transfer (from molecular weight and 13C NMR data), calculate the degree of chain transfer, and calculate chain transfer rates (ke) is presented.

A protocol for the high-throughput analysis of polymerization catalyst, chain transfer polymerizations, polyethylene characterization, and reaction kinetic analysis is presented.

Polymerizations אתילן באמצעות כורי לחץ מקבילים וניתוח קינטי של העברת פלמור שרשרת

We demonstrate a method for high-throughput catalyst screening using a parallel pressure reactor starting from the initial synthesis of a nickel ...

Highly Stereoselective Synthesis of 1,6-Ketoesters Mediated by Ionic Liquids: A Three-component Reaction Enabling Rapid Access to a New Class of Low Molecular Weight Gelators

In organic chemistry ionic liquids (ILs) have emerged as safe and recyclable reaction solvents. In the presence of a base ILs can be deprotonated to form catalytically active N-Heterocyclic Carbenes (NHCs). Here we have used ILs as precatalysts in the addition of &#945;,&#946;-unsaturated aldehydes to chalcones to form 1,6-ketoesters, incorporating an anti-diphenyl moiety in a highly stereoselective fashion. The reaction has a broad substrate scope and several functional groups and heteroaromatics can be integrated into the ketoester backbone in generally good yields with maintained stereoselectivity. The reaction protocol is robust and scalable. The starting materials are inexpensive and the products can be obtained after simple filtration, avoiding solvent-demanding chromatography. Furthermore, the IL can be recycled up to 5 times without any loss of reactivity. Moreover, the 1,6-ketoester end product is a potent gelator in several hydrocarbon based solvents. The method enables rapid access to and evaluation of a new class of low molecular weight gelators (LMWGs) from recyclable and inexpensive starting materials.

Ionic liquids (ILs) mediate fast, simple and cheap access to 1,6-ketoesters in high diastereoselectivities and good yields. The reaction protocol is robust and the 1,6-ketoesters can be obtained in gram scale after a simple filtration protocol. Moreover, the 1,6-ketoesters are potent gelators in hydrocarbon solvents.

סינתזה מאוד Stereoselective של 1,6-Ketoesters מתווכת על ידי נוזלים יוניים: תגובת שלושה רכיבי הפעלה מהירה גישה לסוג חדש של נמוך Gelators משקל המולקולרי

In organic chemistry ionic liquids (ILs) have emerged as safe and recyclable reaction solvents. In the presence of a base ILs can be deprotonated to form ...

Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented. A major difficulty in adapting PCD to modern HPLC systems and columns is the need for large volume reaction coils that enable reagent mixing and then the derivatization reaction to take place. This large post column dead volume leads to band broadening, which results in a loss of observed separation efficiency and indeed detection in sensitivity. In reaction flow post column derivatization (RF-PCD) the derivatization reagent(s) are pumped against the flow of mobile phase into either one or two of the outer ports of the reaction flow column where it is mixed with column effluent inside a frit housed within the column end fitting. This technique allows for more efficient mixing of the column effluent and derivatization reagent(s) meaning that the volume of the reaction loops can be minimized or even eliminated altogether. It has been found that RF-PCD methods perform better than conventional PCD methods in terms of observed separation efficiency and signal to noise ratio. A further advantage of RF-PCD techniques is the ability to monitor effluent coming from the central port in its underivatized state. RF-PCD has currently been trialed on a relatively small range of post column reactions, however, there is currently no reason to suggest that RF-PCD could not be adapted to any existing one or two component (as long as both reagents are added at the same time) post column derivatization reaction.

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented.

הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially purpose built multiport end-fitting(s). Curtain Flow (CF) columns belong to the AFT suite of columns, specifically the CF column is designed so that the sample is injected into the radial central region of the bed and a curtain flow of mobile phase surrounding the injection of solute prevents the radial dispersion of the sample to the wall. The column functions as an 'infinite diameter' column. The purpose of the design is to overcome the radial heterogeneity of the column bed, and at the same time maximize the sample load into the radial central region of the column bed, which serves to increase detection sensitivity. The protocol described herein outlines the system and CF column set up and the tuning process for an optimized infinite diameter 'virtual' column.

Here, we present a protocol for the operation and optimization of Active Flow Technology (AFT) column in Curtain flow (CF) mode for enhanced separation performance.

הרמת מסך טור זרימה: אופטימיזציה של יעילות ורגישות

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid and deployment of renewable energy technologies. Among the many flow battery chemistries, non-aqueous flow batteries have the potential to achieve high energy density because of the broad voltage windows of non-aqueous electrolytes. However, significant technical hurdles exist currently limiting non-aqueous flow batteries to demonstrate their full potential, such as low redox concentrations, low operating currents, under-explored battery status monitoring, etc. In an attempt to address these limitations, we recently reported a non-aqueous flow battery based on a highly soluble, redox-active organic nitronyl nitroxide radical compound, 2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide (PTIO). This redox material exhibits an ambipolar electrochemical property, and therefore can serve as both anolyte and catholyte redox materials to form a symmetric flow battery chemistry. Moreover, we demonstrated that Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy could measure the PTIO concentrations during the PTIO flow battery cycling and offer reasonably accurate detection of the battery state of charge (SOC), as cross-validated by electron spin resonance (ESR) measurements. Herein we present a video protocol for the electrochemical evaluation and SOC diagnosis of the PTIO symmetric flow battery. With a detailed description, we experimentally demonstrated the route to achieve such purposes. This protocol aims to spark more interests and insights on the safety and reliability in the field of non-aqueous redox flow batteries.

We present the protocols for electrochemically evaluating a symmetric non-aqueous organic redox flow battery and for diagnosing its state of charge using FTIR.

פרוטוקול הערכות אלקטרוכימיות ומדינת האבחון הממונה על סוללת חמזור תזרים אורגנית סימטרי

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

A Continuous-flow Photocatalytic Reactor for the Precisely Controlled Deposition of Metallic Nanoparticles

In this work, a novel photocatalytic reactor for the pulsed and controlled excitation of the photocatalyst and the precise deposition of metallic nanoparticles is developed. Guidelines for the replication of the reactor and its operation are provided in detail. Three different composite systems (Pt/graphene, Pt/TiO2, and Au/TiO2) with monodisperse and uniformly distributed particles are produced by this reactor, and the photodeposition mechanism, as well as the synthesis optimization strategy, are discussed. The synthesis methods and their technical aspects are described comprehensively. The role of the ultraviolet (UV) dose (in each excitation pulse) on the photodeposition process is investigated and the optimum values for each composite system are provided.

For a continuous and scalable synthesis of noble-metal-based nanocomposites, a novel photocatalytic reactor is developed and its structure, operation principles, and product quality optimization strategies are described.

כור זרימה רציפה Photocatalytic לתצהיר בדיוק מבוקרת של חלקיקים מתכתיים

In this work, a novel photocatalytic reactor for the pulsed and controlled excitation of the photocatalyst and the precise deposition of metallic ...

Tuning the Acidity of Pt/ CNTs Catalysts for Hydrodeoxygenation of Diphenyl Ether

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid nanosheets, a series of Pt/xHMNO6/CNTs with different solid acid compositions (x = 5, 20 wt%; M = Nb, Ta; N = Mo, W) have been prepared by carbon nanotube pretreatment, protonic exchange, solid acid exfoliation, aggregation and finally Pt particles impregnation. The Pt/xHMNO6/CNTs are characterized by X-ray diffraction, scanning electron microscopy, transmission electron microscopy and NH3-temperature programmed desorption. The study revealed that HNbWO6 nanosheets were attached on CNTs, with some edges of the nanosheets being bent in shape. The acid strength of the supported Pt catalysts increases in the following order: Pt/CNTs &#60; Pt/5HNbWO6/CNTs &#60; Pt/20HNbMoO6/CNTs &#60; Pt/20HNbWO6/CNTs &#60; Pt/20HTaWO6/CNTs. In addition, the catalytic hydroconversion of lignin-derived model compound: diphenyl ether using the synthesized Pt/20HNbWO6 catalyst has been investigated.

A protocol for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs is presented.

כוונון החומציות של מזרזים Pt/CNTs להידרוחמצון אתר

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid ...