This work was supported by UWS and ThermoFisher Scientific. One of the authors (DK) acknowledges the receipt of an Australian Postgraduate Award.

<ol>
	<li>Srijaranai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+1-(2-pyridylazo)-2-naphthol+as+the+post+column+reagent+for+ion+exchange+chromatography+of+heavy+metals+in+environmental+samples.">Use of 1-(2-pyridylazo)-2-naphthol as the post column reagent for ion exchange chromatography of heavy metals in environmental samples.</a> Microchem. J. 99, 152-158 (2011).</li><li>Kubickova, A., Kubicek, V., Coufal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UV-VIS+detection+of+amino+acids+in+liquid+chromatography:+online+post-column+solid-state+derivatization+with+Cu(II)+ions.">UV-VIS detection of amino acids in liquid chromatography: online post-column solid-state derivatization with Cu(II) ions.</a> J Sep Sci. 34, 3131-3135 (2011).</li><li>Quinto, M., Spadaccino, G., Palermo, C., Centonze, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+aflatoxins+in+cereal+flours+by+solid-phase+microextraction+coupled+with+liquid+chromatography+and+post-column+photochemical+derivatization-fluorescence+detection.">Determination of aflatoxins in cereal flours by solid-phase microextraction coupled with liquid chromatography and post-column photochemical derivatization-fluorescence detection.</a> J. Chromatogr. A. 1216, 8636-8641 (2009).</li><li>Lee, M., Lee, Y., Soltermann, F., von Gunten, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+N-nitrosamines+and+other+nitro(so)+compounds+in+water+by+high-performance+liquid+chromatography+with+post-column+UV+photolysis/Griess+reaction.">Analysis of N-nitrosamines and other nitro(so) compounds in water by high-performance liquid chromatography with post-column UV photolysis/Griess reaction.</a> Water Res. 47, 4893-4903 (2013).</li><li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+isoflavonoids+in+Radix+Puerariae+for+quality+control+using+on-line+high+performance+liquid+chromatography-diode+array+detector-electrospray+ionization-mass+spectrometry+coupled+with+post-column+derivatization.">Identification of isoflavonoids in Radix Puerariae for quality control using on-line high performance liquid chromatography-diode array detector-electrospray ionization-mass spectrometry coupled with post-column derivatization.</a> Food Res Int. 48, 528-537 (2012).</li><li>Zacharis, C. K., Tzanavaras, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography+coupled+to+on-line+post+column+derivatization+for+the+determination+of+organic+compounds:+a+review+on+instrumentation+and+chemistries.">Liquid chromatography coupled to on-line post column derivatization for the determination of organic compounds: a review on instrumentation and chemistries.</a> Anal. Chim. Acta. 798, 1-24 (2013).</li><li>Dousa, M., Brichac, J., Gibala, P., Lehnert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+hydrophilic+interaction+chromatography+determination+of+lysine+in+pharmaceutical+preparations+with+fluorescence+detection+after+postcolumn+derivatization+with+o-phtaldialdehyde.">Rapid hydrophilic interaction chromatography determination of lysine in pharmaceutical preparations with fluorescence detection after postcolumn derivatization with o-phtaldialdehyde.</a> J Pharm Biomed Anal. 54, 972-978 (2011).</li><li>Iijima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+an+Online+Post-Column+Derivatization+System+for+Ultra+High-Performance+Liquid+Chromatography+(UHPLC)+and+Its+Applications+to+Analysis+of+Biogenic+Amines.">Optimization of an Online Post-Column Derivatization System for Ultra High-Performance Liquid Chromatography (UHPLC) and Its Applications to Analysis of Biogenic Amines.</a> Anal Sci. 29, 539-545 (2013).</li><li>Cunico, R. L., Schlabach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Ninhydrin+and+o-Phthalaldehyde+Postcolumn+Detection+Techniques+for+High+Performance+Liquid+Chromatography+of+Free+Amino.">Comparison of Ninhydrin and o-Phthalaldehyde Postcolumn Detection Techniques for High Performance Liquid Chromatography of Free Amino.</a> J. Chromatogr. A. 1983, 461-470 (1983).</li><li>Donahue, E. P., Brown, L. L., Flakoll, P. J., Abumrad, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Measurement+of+Leucine-specific+Activity+in+Biological+Fluids+by+Ion-exchange+Chromatography+and+Post-column+Ninhydrin+Detection.">Rapid Measurement of Leucine-specific Activity in Biological Fluids by Ion-exchange Chromatography and Post-column Ninhydrin Detection.</a> J. Chromatogr. A. 571, 29-36 (1998).</li><li>Udenfriend, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescamine:+A+Reagent+for+Assay+of+Amino+Acids,+Peptides,+Proteins+and+Primary+Amines+in+the+Picomole+Range.">Fluorescamine: A Reagent for Assay of Amino Acids, Peptides, Proteins and Primary Amines in the Picomole Range.</a> Science. 1972, 871-872 (1972).</li><li>Samejima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+Fluorescamine+Derivitices+of+Aliphatic+Diamines+and+Polyamines+by+High+Speed+Liquid+Chromatography.">Separation of Fluorescamine Derivitices of Aliphatic Diamines and Polyamines by High Speed Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 96, 250-254 (1974).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+antioxidant+activity+of+ten+compounds+in+different+tea+samples+by+means+of+an+on-line+HPLC-DPPH+assay.">Evaluation of antioxidant activity of ten compounds in different tea samples by means of an on-line HPLC-DPPH assay.</a> Food Res Int. 53, 847-856 (2013).</li><li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+anti-oxidants+in+Flos+Chrysanthemi+by+HPLC-DAD-ESI/MS(n)+and+HPLC+coupled+with+a+post-column+derivatisation+system.">Identification of the anti-oxidants in Flos Chrysanthemi by HPLC-DAD-ESI/MS(n) and HPLC coupled with a post-column derivatisation system.</a> Phytochem Anal. 24, 59-68 (2013).</li><li>Raudonis, R., Bumblauskiene, L., Jakstas, V., Pukalskas, A., Janulis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+validation+of+post-column+assay+for+screening+of+radical+scavengers+in+herbal+raw+materials+and+herbal+preparations.">Optimization and validation of post-column assay for screening of radical scavengers in herbal raw materials and herbal preparations.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 7690-7698 (2010).</li><li>Raudonis, R., Raudone, L., Jakstas, V., Janulis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+evaluation+of+post-column+free+radical+scavenging+and+ferric+reducing+antioxidant+power+assays+for+screening+of+antioxidants+in+strawberries.">Comparative evaluation of post-column free radical scavenging and ferric reducing antioxidant power assays for screening of antioxidants in strawberries.</a> J. Chromatogr. A. 1233, 8-15 (2012).</li><li>Zakrzewski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Methimazole+in+Pharmaceutical+Preparations+using+an+HPLC+Method+Coupled+with+an+Iodine-Azide+Post-Column+Reaction.">Determination of Methimazole in Pharmaceutical Preparations using an HPLC Method Coupled with an Iodine-Azide Post-Column Reaction.</a> J. Liq. Chrom. Rel. Technol. 32, 383-398 (2008).</li><li>Zakrzewski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+reversed-phase+HPLC+method+with+post-column+iodine-azide+reaction+for+the+determination+of+thioguanine.">Development and validation of a reversed-phase HPLC method with post-column iodine-azide reaction for the determination of thioguanine.</a> J. Anal. Chem. 64, 1235-1241 (2009).</li><li>Gritti, F., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+measurements+of+the+true+column+efficiency+and+of+the+instrument+band+broadening+contributions+in+the+presence+of+a+chromatographic+column.">Accurate measurements of the true column efficiency and of the instrument band broadening contributions in the presence of a chromatographic column.</a> J. Chromatogr. A. 1327, 49-56 (2014).</li><li>Stewart, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post+cotumn+derivatization+methodology+in+high+performance+liquid+chromatography+(HPLC).">Post cotumn derivatization methodology in high performance liquid chromatography (HPLC).</a> Trends Anal. Chem. 1, 170-174 (1982).</li><li>Rigas, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-column+labeling+techniques+in+amino+acid+analysis+by+liquid+chromatography.">Post-column labeling techniques in amino acid analysis by liquid chromatography.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 7957-7992 (2013).</li><li>Frei, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+Detectors+in+Modern+Liquid+Chromatography.">Reaction Detectors in Modern Liquid Chromatography.</a> Chromatographia. 15, 161-166 (1982).</li><li>Pravadil-Cekic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Reaction+Flow+Chromatography+for+the+Analysis+of+Amino+Acid:+Derivatisation+With+Fluorescamine+Reagent.">Using Reaction Flow Chromatography for the Analysis of Amino Acid: Derivatisation With Fluorescamine Reagent.</a> Microchem. J. , (2015).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection:+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products.">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li><li>Koleva, I. I., Niederlander, H. A. G., van Beek, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+On-Line+HPLC+Method+for+Detection+of+Radical+Scavenging+Compounds+in+Complex+Mixtures.">An On-Line HPLC Method for Detection of Radical Scavenging Compounds in Complex Mixtures.</a> Anal Chem. 72, 2323-2328 (2000).</li><li>Selim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Two-component+Post-column+Derivatisation+Method+Utilsing+Reaction+Flow+Chromatography.">A Two-component Post-column Derivatisation Method Utilsing Reaction Flow Chromatography.</a> Microchem. J. 116, 87-91 (2014).</li><li>Bigley, F. P., Grob, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Phenols+in+Water+and+Wastewater+by+Post-column+Reaction+Detection+High-performance+Liquid+Chromatography.">Determination of Phenols in Water and Wastewater by Post-column Reaction Detection High-performance Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 350, 407-416 (1985).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+flow+chromatography+for+rapid+post+column+derivatisations:+The+analysis+of+antioxidants+in+natural+products.">Reaction flow chromatography for rapid post column derivatisations: The analysis of antioxidants in natural products.</a> J. Chromatogr. A. 1303, 62-65 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

RF-PCD מאפשר ערבוב יעיל של מגיב derivatization עם הפוסט-טור בשפכים HPLC ללא שימוש סלילי התגובה, למזער את ההשפעות של הרחבת הלהקה ושיפור ביצועים ההפרדה. שיטות RF-PCD גם הראו שיפורים בתגובה האות ביחס שיטת הזיהוי. Camenzuli et al. 28 היה הראשון לדווח על השימוש בעמודי זרימת תגובה עם DPPH • לצורך זיהוי של ROS ב מדגם קפה אספרסו. המחקר כלל ניתוח ואופטימיזציה של תנאי RF כדי להשיג ביצועים מרביים, בדיקות טווח הריכוזים DPPH • עם ספיקות DPPH • מגיב שונים. זה היה להסיק כי ריכוז DPPH • של 0.1 מ&quot;ג מיליליטר -1 עם קצב זרימה מגיב DPPH • של 0.5 מיליליטר דקות -1 היה אופטימלי עבור ביצועי הפרדה משופרת (כלומר, יעיל ורגיש) תחת RF-PCDתנאים בהשוואה לשיטת PCD הקונבנציונלית של derivatization DPPH •. איור 5 מראה שני chromatograms ניצול assay DPPH • של נוגדי חמצון מדגם קפה אספרסו. מעניין במיוחד הפסגות בעצמה הגבוהות עם פעמי שמירה של כ 5 דקות. ניתן לראות כי כאשר באמצעות לולאת תגובת 500 μl, אשר אופייני של שיטות derivatization המסורתיות DPPH •, לשיא יחיד, רחבה ניתן לצפות. עם זאת, כאשר מיושם שיטת RF-PCD משמשת ללא צורך לולאת תגובה, מתברר כי שיאו היחיד נצפה באמצעות לולאת 500 μl היא למעשה שני שיאים. יתר על כן, פירוט נוסף ניתן לראות לאחר 5.5 דקות כאשר באמצעות הגדרת RF-PCD. לכן, לצורך הניתוח של ROS בדגימות באמצעות DPPH •, הטכניקה של RF-PCD התברר עדיף על השיטות הקונבנציונליות של ניתוח ROS באמצעות DPPH •. RF-PCD עםמגיב fluorescamine נוצל לניתוח של חומצות אמינו עיקריות ובהשוואה בצורות המקובלות של PCD עם fluorescamine 20. מאז הטור RF סוף הולם גם נתן במה לגילוי מרובב, הזרימה המרכזי underivatized היה פיקוח באמצעות UV-Vis, בעוד derivatization בין בשפכים fluorescamine נערך באזור החיצוני של RF סוף-ראויה ולא לאתר באמצעות UV- Vis. סדרת תקני בדיקה המכיל ארבע חומצות אמינו נותחו בתנאי RF-PCD מרובב. איור 6 משווה את פרופיל chromatographic עבור השיטה המקובלת של PCD (איור 6 א) ו- RF-PCD (זיהוי של derivatized (איור 6) ואת underivatized (איור 6C)) של הסדרה של חומצות אמינו. איור 7 הוא כיסוי של שני אותות חומצות אמינו שהושגו באמצעות PCD הקונבנציונלי RF-PCD. ניתן לראות כי ההפרדה הנצפית יעילה יותר בשל tהוא הסרת לולאת התגובה הובילה תגובת אות גדולה, למרות העובדה שלא כל קולחי הטור derivatized. יתר על כן, את ערכת הערבוב מגיב derivatization היעיל יותר הביאה רעש בסיס נמוך, נוסף להגדיל את יחס האות לרעש. אפקט זה הוא מובל החוצה את הגבולות התחתונים של איתור quantitation שחושב שיטת RF-PCD לעומת שיטת PCD הקונבנציונלית בטבלת 1. מגמה זו גם ניתן לראות באיור 5 שבו התגובה הנוגדת חמצון DPPH • גדולה עבור שיטת RF-PCD לעומת שיטת PCD הקונבנציונלית. ניתן לצפות להידרדרות שיא משמעותית chromatograms שבו התקנה קונבנציונלית PCD שמשה אשר מובילה את תגובת האות הנמוכה של שיטה זו. איור 8 משווה את פרופיל השיא של טריפטופן כאשר נותחו על ידי RF-PCD (שני הזרמים derivatized ו underivatized) ו PCD קונבנציונאלי. כשפרופיל השיא הוא זמם נגד הזמן רוחבי שיא כל להיראות (איור 8 א) דומה רחב. השיפורים נמצאים RF-PCD לעומת PCD הקונבנציונלי ברורים כאשר פרופיל השיא זמם נגד נפח שיא (האיור 8B). כאשר זממו נגד נפח שיא, ברור כי בעוד שיא RF-PCD תערוכות כמות קטנה של שפלה לעומת שיא underivatized, השפלה, לעומת זאת, היא מזערית לעומת מה שנצפה משייטת PCD הקונבנציונלית. השיפורים יעילים הפרדת RF-PCD לעומת PCD הקונבנציונלי גם הם הפגינו איור 7 אשר משווה את צורות השיא של גליצין לאוצין לאחר derivatization ידי שני PCD הקונבנציונלי RF-PCD. ניתן לראות כי במצב PCD קונבנציונלי פסגות גליצין לאוצין הן בקושי בסיס מתפצלות בעת במצב RF-PCD האות בתחילת מחקר עבור תקופה ארוכה יותר בין שתי הפסגות. יתרון נוסף של RF-PCD בהשוואה לשיטות קונבנציונליות PCD הוא היכולת לנטר שפכי underivatized מהנמל המרכזי של טור RF המאפשר זיהוי מרובב. זה אפשרי כמו העיצוב של frit בתוך הולם סוף RF אינו מאפשר את הזרימה באזור מרכז רדיאלי לערבב עם הזרם באזור הפריפריה של הסוף ההולם, ובכך לאפשר ניטור של נחל derivatized מהאזור החיצוני של הולם וכן ניטור של הנחל underivatized מהנמל המרכזי. יכולת זו מודגשת על ידי התוצאות שהתקבלו עבור טריפטופן בטבלה 1, אשר ידוע יש תגובה עם קליטה חלשה אחרי derivatization ידי fluorescamine 20, לעומת זאת, שלא כמו חומצות אמינו אחרות זה מראה בתגובה גלאי UV כאשר underivatized (ב 280 ננומטר) . עבור שתי מערכות derivatization את גבולות איתור quantitation היו גבוהים יחסית, אולם את גבולות איתור quantitation היו נמוכות בהרבה עבור tהוא underivatized זרם. באמצעות היכולת לנטר שני זרמי שפכי derivatized ו underivatized פרמטרי זיהוי ניתן שנועדו להעניק את הרמה הגדולה ביותר של ביצועים עבור כל חומצת אמינו. עיצוב multiport של הולם סוף RF המאפשר ניתוח מגיב derivatization כפול. סלים ואח &#39;. 23 חקרו את הביצועים של שני חומרים כימיים (4-aminoantipyrene ו ferricyanide אשלגן) באמצעות תנאי RF-PCD לניתוח של תרכובות פנוליות לעומת הטכניקה המקובלת של PCD באמצעות ferricyanide 4-aminoantipyrene ואשלגן. סוג זה של טכניקת PCD דורש שתי משאבות ותגובת לולאות לכל מגיב derivatization בניגוד לולאת משאבה ותגובה אחת עבור DPPH •. תרכובות פנוליות ו alkylbenzene שונות נותחו בתנאים קונבנציונליים RF PCD. מעניין, תרכובות פנוליות שאינם כי לא אותרו תחת השיטה המקובלת היו למעשה מזוהות unדר התנאים RF-PCD. איור 9 מציג את התגובה chromatographic-Vis UV והתגובה colorimetric-PCD RF כדי שילוב מבחן סטנדרטי. RF-PCD ספק טכניקת PCD פשוטה מבחינת מכשור, ללא פשרות של ביצועי הפרדה כפי שנצפה באיור 10. איור 10 משווים את פרופיל השיא של -cresol p כאשר נותחו על ידי RF-PCD וגם ללא derivatization. ניתן לראות כי רוחב השיא של chromatogram RF-PCD דומה מאוד לזה של chromatogram underivatized. ההבדל העיקרי בין שני chromatograms הוא כי הכרומתוגרמה RF-PCD היא מעט רחבה יותר בבסיס. זה מראה כי יש לא מעט על מנת פיזור שיא עקב טכניקת RF-PCD. תגובה דומה נצפתה איור 9 שמראה שזה לא רק השיא p -cresol כי יש רוחב השיא דומה כאשר derivatized על ידי RF-PCD לעומת השיא underivatized שלה, אבל כל פנולים alkylbenzenes שהשיב את ערכת derivatization הראה מגמה זו זהה. אמנם, RF-PCD עם השימוש בשני ריאגנטים derivatization השיג ביצועי הפרדה דומה לשיטה הלא-derivatization הרגילה, RF-PCD מותר לצורך זיהוי סלקטיבי של תרכובות פנוליות, שאחד מהם כי לא זוהה בתנאים שאינם derivatized . כפי RF-PCD הוא פיתוח שיטות HPLC-PCD קונבנציונליים, כל כלי הכוונון זמינים שיטות HPLC כלליות כמו רכב שלב נייד וספיקה, נפח הזרקה ואורך גל ניתוח החלות על שיטות RF-PCD. יתר על כן, כלי כוונון זמינים שיטות HPLC-PCD קונבנציונליים, כגון השלב הנייד יחס קצב זרימה מגיב PCD וכן הרכב מגיב PCD החלות על שיטות RF-PCD. כלי כוונון נוספים זמינים בעת שימוש RF-PCD שאינו זמין בשיטות PCD קונבנציונליות הוא היחס בין תזרים המאגף המרכזי והיקפייציאות של הטור. התזרימים נשלטים על ידי שינוי הלחץ חזרה יחסית על כל אחד המקווים ידי שליטה על האורך ו / או הקוטר פנימי של הגלאי פוסט (או לפרסם טור אם זרימת קרובים מהנמל המרכזי אינה שתראה) צינורות. היחס האופטימלי של מרכזי תזרים פריפריה תלוי התגובה מדוברת, כמו גם גורמים אחרים, כגון, האם הנמל המרכזי שיראה או לא. יחס תזרים של 60% היקפיים ו -40% מרכזיים הוא לעתים קרובות נקודת התחלה טובה. כמו במקרה של פרמטרי הכוונון, רבים מהנושאים שיכולים להתעורר עם השימוש של טור RF-PCD גם הם נפוצים עם שיטות PCD קונבנציונליות. פרמטר אחד מסוים כי chromatographer צריך להיות מודע בעת ביצוע RF-PCD המנתח הוא היציבות של הזרימה לחץ במערכת, במיוחד זה של המשאבה הגיב (ים). אם הזרימה במערכת אינה יציבה, זה יכול לגרום לחוסר יציבות בסיס ולכן הפחתהיחס אות לרעש ובהמשך גבולות quantitation וזיהוי. כרומטוגרפיה RF-PCD פותחה כדי להתגבר על קשיים בהתאמת תגובות PCD לעמודות ומערכות HPLC מודרניות. היתרון העיקרי של RF-PCD בהשוואה לשיטות PCD מקובלות הוא ערבוב יעיל יותר בגלל זה מתרחש בתוך frit בתוך הולם בסוף טור RF, ערבוב זה בלחץ גבוה מעט לאחור. זה מאפשר המזעור או אפילו החיסול של לולאות תגובת נפח הגדולות המשמשות שיטות PCD קונבנציונליות רבות. עם מזעור זה של נפח מת טור פוסט, הפרדות יעילות יותר עם רזולוצית chromatographic יותר יכולות להתבצע. מצב RF-PCD הביא והתייעלות הפרדה, צורת שיא אות לרעש בהשוואה לשיטות PCD קונבנציונליות. עם זאת, חשוב לציין כי שיפורי אות הם גלאים תלויים. עבור גלאי לדוגמאכי כמות המדגם תלויה לא יכולה להציג גידול בתגובת אות בתנאי RF-PCD בהשוואה לשיטות קונבנציונליות. זה כל כך כי תחת שיטות קונבנציונליות 100% של המדגם על עמודה מזוהה, שבו בתנאי RF-PCD אחוז מסוים רק על המדגם בעמודה מזוהה בהתאם יחס פילוח. הוא לעומת זאת, צפוי כי תגובות RF-PCD תוכלנה להיות מותאם לכל מגיב אחד או שניים (כל עוד שני ריאגנטים מתווספים בעת ובעונה האחת) תגובת PCD עם מחדש אופטימיזציה מינימאלי שההטבות שנצפו עבור כל השלושה תגובות עד כה נבדקות תתרגמנה כל תגובות PCD האחרות.

כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC) בשילוב עם פוסט טור derivatization (PCD) היא כלי רב עצמה כי הוא שימושי בפתרון מספר בעיות במעבדה האנליטית. זה יכול לשמש כדי לזהות תרכובות שאינן אחר לגילוי עם החבילה של גלאי זמין 1,2, להגדיל את האות של אנליטי היעד, המאפשר גבולות נמוכים של גילוי quantitation 3-5 או סלקטיבי derivatize אנליטי יעד על מנת למנוע תופעות מטריקס 6. בשימוש נפוץ התגובות PCD כוללים התגובה של אמינים, כגון חומצות אמינו, עם-phthaladehyde אורתו 7-9, ninhydrin 9,10 או fluorescamine 11,12, את derivatization של מינים חמצן תגובתי (ROS) עם 2,2-diphenyl- 1-picrylhydrazil הרדיקלי (DPPH •) 13,14 או 2,2&#39;-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic חומצה (ABTS) 15,16, ושימוש מגיב-אזיד יודיד כדי derivatize ג גופריתתרכובות ontaining 17,18. יש, עם זאת, חסרונות רבים לשימוש תגובות PCD עם מערכות HPLC 6. בעיקר בקרב אלה הוא השימוש סליל תגובה בין נקודת תוספת של מגיב derivatization (ים) ו הגלאי, המאפשר זמן לערבוב והתגובה להתרחש 8. יש תגובה אלה לולאות לעתים קרובות כרכים של 500 μl או יותר, אשר גבוה משמעותית לעומת היקף שאר המערכת HPLC 19. שימוש תגובה בנפח גבוה אלה לולאות תוצאות רחבות שיא גדל לעומת מה יהיה ציין ללא הנוכחות של לולאת התגובה. התוצאה היא קצרות, פסגות רחבות יותר כי יש גבולות גבוהים של quantitation וזיהוי ואפקטים שלילי רזולוצית chromatographic. איורי 1 ו -2 להדגיש את ההידרדרות של צורת שיא הנגרמות כתוצאה מהתוספת של כרכי לולאת תגובה שונים פוסט עמודה. ניתוח זהבוצע באמצעות רכב שלב נייד של מתנול 94% ו -6% מי מילי- Q. קצב הזרימה של השלב הנייד היה 1 מ&quot;ל / דקה, את עוצמת הזריקה היה 20 μl ואת אורך הגל הניתוח היה 265 ננומטר. סלילי של כמויות משתנות מת מ -20 μl 1,000 μl הוכנסו בין הטור לבין הגלאי כדי לדמות את ההשפעה של נפח מת לולאת תגובה בשיטות PCD. לולאות אלה הוכנו מ צינורות נירוסטה של ​​קוטר פנימי 0.5 מ&quot;מ. הניסוי בוצע על מערכת HPLC המורכבת של בקר (SCL-10AVP), בלחץ נמוך Gradient Valve (FCL-10ALVP), משאבה (LC-20AD), מזרק (SIL-10ADVP), וגלאי PDA ( SPD-M10ADVP). השלב הנייד נשאב באמצעות מסלק גזים לפני המבוא למערכת HPLC. ההפרדה בוצעה באמצעות טור 250 מ&quot;מ x 4.6 מ&quot;מ id 5 מיקרומטר. תנאי הניסוי נבחרו להיות אופייני של תגובות PCD אשר פורסמו לאחרונה בספרות. הפשוט, התקנת כור טור פוסט הנפוץ ביותר נקראת כור צינורי הלא מפולח אשר הוא למעשה צינור ארוך, דק שדרכו הנוזל יכול לזרום ואת התגובה יכולה להתרחש. בשנת שיא במערכת זו רחבה תלויה לא רק את הנפח מת להוסיף למערכת, אלא גם את הקוטר הפנימי של הצינור כפי מודגש על ידי Iijima et al. 8. יתר על כן, גיאומטרית סליל ממלא תפקיד הרחבת המותג ציינה. סטיוארט 20 נאמר כי התפתלות של הכור משנה את פרופילי זרימה משני, וכתוצאה מכך ערבוב טוב יותר, כלומר הנפח המת יכול להיות ממוזער. זה כבר נאמר כי הרחבת השיא הוא לא משמעותי בעת שימוש צינורי פתוח סרוגים סליל 21. כאשר הרחבת השיא היא גדולה מדי, סוגים אחרים של כורים יכולים גם להיחשב 20,22. אלה עשויים לכלול כורי מיטה או כורי תזרים מפולחים. כורים אלה הם שימושיים במיוחד עבור תגובות איטיות שאחרת requirלולאות התגובה הגדולה הדואר. כמו כורי צינורי הלא מפולחים הם הסוגים הנפוצים ביותר של כורים המשמשים ליישומי PCD, שאר מאמר זה עוסק בסוג זה של התקנת כור. העיצוב של זרימת תגובה (RF) טור משלבת הולמת סוף מרובה יציאות מאפשרת בשלב נייד כדי לצאת (או להיכנס) בעמודה או דרך יציאה אחת הממוקמת באזור המרכז הרדיאלי של העמודה או שלוש יציאות הממוקמים בחלק החיצוני קיר באזור של הטור (ראה איור 3). זרמים אלה שני מופרדים באמצעות הולם סוף המכיל frit נקבובי מרכזי מוקפת טבעת חדירה כי הוא בתורו המוקף frit הנקבובי חיצוני המשתרע החוצה אל קיר העמודה. בשל זרימת צלב טבעת המרכזית החדירה אינו אפשרי בין שני האזורים הנקבוביים. במהלך כרומטוגרפיה זרימת תגובה, מגיב derivatization (ים) נשאבים נגד כיוון זרימה בשלב נייד לאחת או TWo הנמלים החיצוניים של טור זרימת תגובה. Eluent הטור הוא מעורבב עם מגיב derivatization (הים) frit החיצוני והעביר אל הגלאי דרך יציאה חיצונית בחינם. זרימת תגובה יכולה לשמש אחת מעמד derivatization מגיב יחיד (1 נמלית מגיב derivatization, 1 יציאה להעביר את eluent העמודה אל הגלאי ו -1 היציאה החסומה) או מערכת מגיב כפולה (2 יציאות עבור ריאגנטים derivatization ו -1 יציאה להעביר את eluent עמודה אל הגלאי). תזרים מן הזרם המרכזי או שניתן להשתמש בהם כדי לזהות את eluent טור underivatized, ריבוב ביעילות זיהוי 23, או עבר לבזבז. טכניקת כוונון אחד עיקרית זמינה בעת הפעלת כרומטוגרפיה RF-PCD הוא היחס של התזרים המרכזי ואת הפריפריה. היחס האופטימלי עבור כל derivatization תלוי במספר גורמים כגון האם הזרם המרכזי יזוהו או עבר לבזבז. לכן פעם היחס האופטימלי נקבע, יש להבטיח את זה כי יחס התזרים הנכון מושגת לפני כל סיבוב מתבצע. זה כבר נמצא כי השימוש של frit לערבב את זרם eluent עמודה מגיב derivatization בתוצאות RF-PCD ב ערבוב יעיל יותר לעומת טכניקות ערבוב המסורתי שבדרך כלל להעסיק נפח מת אפס מת נפח T-piece או נמוך פ- חתיכה לערבב שני הזרמים. זו אפשרה את השימוש של לולאות תגובה קטנות יחסית, או אפילו החיסול של לולאת התגובה כלילה. צמצום תוצאות גודל לולאת תגובת פסגות חדות בהשוואה לשיטות derivatization טור פוסט מסורתיות. משמעות דבר היא כי, על אף העובדה כי לא כל eluent העמודה derivatized, אות גדולה יחס רעש הם נצפו ולכן גבולות נמוכים של גילוי quantitation יכולים להיות מושגת. כרומטוגרפיה זרימת תגובה פותחה כדי להתגבר על קשיים עם התאמת תגובת PCD<html> ים לעמודות ומערכות HPLC מודרניים, במיוחד מההפסד היעיל הנגרם על ידי להקת הרחבה בשל כרכים מתו טור פוסט גדולים הנובעים מהצורך להעסיק תגובת נפח גדולה לולאות. תהליכי הערבוב היעילים יותר ב RF-PCD לעומת PCD הקונבנציונלי אומרים כרכי לולאת תגובה קטנה יכולים להיות מועסקים מובילים לעלייה יעילה הפרדה נצפית. יתר על כן כרומטוגרפיה RF-PCD מראה הן גדלו אות וירידת רעש לעומת טכניקות PCD קונבנציונליות וכתוצאה מכך גבולות נמוכים של גילוי quantitation בהשוואה לשיטות PCD קונבנציונליים. יתרון נוסף של RF-PCD בהשוואה לשיטות PCD קונבנציונאלי היא היכולת לנטר את זרם underivatized כי elutes מהנמל המרכזי של הטור RF כמו גם את זרם derivatized כי elutes מאזור הפריפריה של הטור. RF-PCD היא טכניקה חדשה יחסית אך מבטיח המציג יתרונות רבים על פני שיטות PCD המסורתית. &gt; חיבור של טור RF מושג כמעט באותו אופן כמו טור HPLC קונבנציונלי עם ההבדל העיקרי להיות מספר אבזרי קצה על עמודת RF. אבזרים המשמשים לחיבור טור HPLC תקן למערכת HPLC מסוגלים לשמש לחיבור טור RF למערכת HPLC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>HPLC instrument</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1290 Series HPLC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Additional Pump(s) for derivatisation system</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>LC-20A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RF colum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Non-commercial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z227307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Column stoppers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided with column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tube cutter</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z290882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Scale Balance</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>4-point analytical balance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stop watch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Non-Scientific equiptment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eluent collection vials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any Small vial with a flat bottom will do e.g. HPLC vials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Vials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Will depend on instrument used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessels for mobile phase and derivatisation solution(s)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z232211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General Laboratory glassware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Volumetric Flasks, pippettes, etc. Quantity and volumes will depend on sample preparation method</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPPH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>17836</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonia</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>320145</td>
			<td>Corrosive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-aminoantipyrene&#160;</td>
			<td>Acros Organics BVBA</td>
			<td>AC103151000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium ferricyanide&#160;</td>
			<td>AnalaR</td>
			<td>B10204-30</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

post column derivatization using reaction flow high performance liquid chromatography columns

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented. A major difficulty in adapting PCD to modern HPLC systems and columns is the need for large volume reaction coils that enable reagent mixing and then the derivatization reaction to take place. This large post column dead volume leads to band broadening, which results in a loss of observed separation efficiency and indeed detection in sensitivity. In reaction flow post column derivatization (RF-PCD) the derivatization reagent(s) are pumped against the flow of mobile phase into either one or two of the outer ports of the reaction flow column where it is mixed with column effluent inside a frit housed within the column end fitting. This technique allows for more efficient mixing of the column effluent and derivatization reagent(s) meaning that the volume of the reaction loops can be minimized or even eliminated altogether. It has been found that RF-PCD methods perform better than conventional PCD methods in terms of observed separation efficiency and signal to noise ratio. A further advantage of RF-PCD techniques is the ability to monitor effluent coming from the central port in its underivatized state. RF-PCD has currently been trialed on a relatively small range of post column reactions, however, there is currently no reason to suggest that RF-PCD could not be adapted to any existing one or two component (as long as both reagents are added at the same time) post column derivatization reaction.

שיטת PCD הראשונה הותאמה לשימוש על ידי RF-PCD הייתה derivatization של נוגדי חמצון באמצעות 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil הרדיקלי (DPPH •) 24. תגובה זו הונהגה על ידי ואח Koleva. 25 כבר בשימוש נרחב מאז. הגילוי מסתמך על הַדהָיָה של DPPH • הרדיקלי בנוכחות של מיני חמצן תגובתי, ומכאן הנוכחות של תוצאות נוגדות חמצון טיפה הספיגה ציינה. תגובת DPPH • לעתים קרובות מעסיקה לולאות תגובה גדולות של 500 μl או יותר 13-15, אולם נמצא כי בעת השימוש בעמודת RF-PCD לא לולאת תגובה נדרשה. איור 5 מראה שני chromatograms של מדגם של קפה Ristretto derivatized באמצעות DPPH • רדיקלי הוא באמצעות PCD קונבנציונלי ומכשור RF-PCD. שיטת PCD השנייה הותאמה לשימוש על ידי RF-PCD היא דרivatization של ארבע חומצות אמינו (גליצין, לאוצין, פנילאלנין ו טריפטופן) באמצעות fluorescamine כמו מגיב derivatization 23. השיטה הותאמה מהעבודה ידי Udenfriend et al. 11 עם רכב השלב הנייד, ריכוז fluorescamine ואת קצב זרימת fluorescamine המותאם לשימוש עם עמודות RF. השיטה המקובלת מנוצלת מערכת derivatization שתי מגיב שבו pH 9.0 חיץ התווסף הנחל בשפכים לפני התוספת של מגיב fluorescamine, בעוד שיטת RF-PCD מנוצלת שלב נייד שהיה שנאגר כבר, ובכך רק מערכה derivatization מגיב יחידה היה צורך. עבור יישום זה הנחל derivatized נותח בבית 390 ננומטר באמצעות גלאי Visible-UV, אשר תואם את גל העירור משמש לגילוי על ידי קרינה. זרם derivatized ניתן היה לזהות באמצעות גלאי קרינה, מתן אות יותר לרעש ולכן גבולות נמוכים של גילוי קוואנטitation, על פי יצירתו של Udenfriend et al. 11. יתר על כן, eluent הקרוב מהנמל המרכזי של התקנת RF-PCD היה פיקוח באמצעות גלאים UV-Visible שניים. המופע של שיטת RF-PCD עבור derivatization של חומצות אמינו הושווה שיטת PCD הקונבנציונלי. טבלת 1 מפרט את הגבולות המחושבים של quantitation וזיהוי עבור כל אחד חומצות אמינו נתחו בשני RF-PCD מצבי PCD קונבנציונליים. המגבלה של זיהוי הוגדרה להיות הריכוז שבו יחס אות לרעש של 2 הושגה בעוד שההגבלה של quantitation הוגדרה להיות הריכוז שבו יחס אות לרעש של 10 הושגה. איור 6 מציג הכרומתוגרמה של הארבעה חומצות אמינו נתחו בשיטת PCD הקונבנציונלית, שיטת RF-PCD וזרם underivatized משיטת RF-PCD. איור 7 הן השוואה של האותות שהתקבלה עבור האפונהks בשל גליצין לאוצין הן באמצעות שיטת PCD קונבנציונאלי שיטת RF-PCD. איור 8 משווה את רוחב השיא של השיא טריפטופן בעת ניתוח בשיטת PCD קונבנציונאלי, שיטת RF-PCD והזרם underivatized מן RF- שיטת PCD. שיטת PCD הסופית הותאמה לשימוש על ידי RF-PCD 26 היא derivatization של ארבעה פנולים (פנול, 4-methoxyphenol, p -cresol ו טוקופרול). השיטה הותאמה מעבודה של ביגלי ו גרוב 27 עם שינויים קלים כדי לייעל את השיטה לשימוש עם עמודות RF. עבודה זו מנוצלת תגובת derivatization דו רכיבים שבו פתרונות של שני ferricyanide 4-amionantiprine ואשלגן נוספו eluent הטור ב הולם בסוף טור RF. נמצא כי בעת שימוש בעמודה RF עבור התגובה לא לולאות תגובה נוספת פוסט העמודה צריכה לשמש. איור 9 מציג דוגמה של הכרומתוגרמה שםמדגם הבדיקה 21-מרכיב שהכיל כמה רכיבים להראות תגובה לתוכנית derivatization וכמה שאינם, הופרדו, derivatized ואובחנה (זכר שחור). באותה התערובת גם הופרדה ואובחנה underivatized להשוואה (זכר אדום). באיור 9 התגובה RF-PCD הוצגה כתגובה שלילית עבור הבחנה חזותית קלה (תגובת גלאי המתקבל הייתה חיובית). איור 10 מציג השוואה של צורת השיא של p -cresol הוא derivatized שימוש בעמודת RF-PCD ו underivatized. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig1.jpg" /> איור 1. זיהוי תכונות חומרי כיסוי של hexylbenzene מוזרק על מערכת HPLC עם כרכים מתים שונים הוסיפו בין הטור לבין הגלאי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig1large.jpg" target="_blank">אנא</a><html> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig2.jpg" /> איור 2. כיסוי זיהוי תכונות חומרים של טולואן, ethylbenzene ו propylbenzene מוזרק על מערכת HPLC עם כרכים מתים שונים הוסיפו בין הטור לבין הגלאי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig3.jpg" /> איור 3. איור של עיצוב עמודת זרימת תגובה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> tp_upload / 53,462 / 53462fig4.jpg &quot;/&gt; איור 4. Instrumental להגדיר של RF-PCD. (א) מגיב יחיד (כלומר, DPPH • או חומרים כימיים derivatization fluorescamine) ו- (ב) מגיב כפול (כלומר, 4-aminoantipyrene ואשלגן ferricyanide ריאגנטים derivatization). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig5.jpg" /> איור 5. chromatograms הפרדת קפה Ristretto עם זיהוי לאחר derivatization פוסט העמודה באמצעות 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil הרדיקלי (DPPH •). Derivatization בוצע באמצעות טור קונבנציונלי עם סליל התגובה μl 500 (א) ו טור זרימת תגובה (B </st<html> רונג&gt;). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig5large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig6.jpg" /> איור 6. כיסוי זיהוי תכונות החומרים של ארבע חומצות אמינו (גליצין (G), לאוצין (L), פנילאלנין (P) ו טריפטופן (T)) על פני טווח של 10 עד 1,000 עמודים לדקה זוהה על ידי פוסט טור derivatization באמצעות fluorescamine בתור מגיב PCD לאחר הפרדה על ידי HPLC. Chromatograms הן כדלקמן: (א) PCD קונבנציונאלי, (B) RF-PCD, ו- (ג) מרכזי (underivatized) יציאת מ- RF-PCD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <html> _upload / 53,462 / 53462fig7.jpg &quot;/&gt; איור 7. השוואת האותות המתקבלים עבור גליצין (השיא הראשון) ו לאוצין (שיא שני) מ PCD הקונבנציונלי (זכר אדום) ו- RF-PCD (זכר שחור). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig7large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="הספרה 8" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig8.jpg" /> איור 8. שיא רוחב השוואה של השיא עקב טריפטופן מבוסס על (א) זמן שמירה ו- (ב) נפח שיא. לעקב השחור מראה את שיטת PCD הקונבנציונלית, העקבות האדומות מציגה את שיטת RF-PCD ואת העקבות הירוקות מראות את זרם underivatized מהנמל המרכזי של שיטת RF-PCD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig8large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> אוהל &quot;FO: keep-together.within-page =&quot; 1 &quot;&gt; <img alt="איור 9" src="/files/ftp_upload/53462/53462fig9.jpg" /> איור 9. פרדת chromatographic של מדגם מלאכותי. הרכיבים כוללים פנול (P), 4-methoxyphenol (M), עמ &#39;-cresol (C) טוקופרול (T) וכן alkylbenzenes רב, פחמימנים ארומטיים polynuclear, anisole, phentanole, קפאין, פנילאלנין ו benzamide. פסגות שכותרתו I, II ו- III הם alkylbenzenes שענו במפתיע לתוכנית derivatization. העקב השחור מייצג את התגובה underivatized באמצעות גלאי UV ב 254 ננומטר בעוד זכר אדום מייצג את התגובה derivatized ב 500 ננומטר. הערה כדי לקבל בהירות חזותית תגובת derivatized כבר הפוכה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig9large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 10" src=&quot;/files/ftp_upload/53462/53462fig10.jpg&quot; /&gt; איור 10. זיהוי תכונות החומרים התגובה של p -cresol. העקב השחור מייצג את התגובה underivatized באמצעות גלאי UV ב 254 ננומטר בעוד זכר אדום מייצג את התגובה derivatized (RF-PCD) ב 500 ננומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53462/53462fig10large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a> <table fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td fo:width="0.9in" rowspan="2" style="width:100px"> סוג התגובה </td><td colspan="2"> גליצין </td><td colspan="2"> לאוצין </td><td colspan="2"> פנילאלנין </td><td colspan="2"> טריפטופן </td></tr><tr><td> לוד (ppm) </td><td> LOQ (ppm) </td><td> לוד (ppm) </td><td> LOQ (ppm) </td><td> לוד (ppm) </td><td> LOQ (ppm) </td><td> לוד (ppm) </td><td> LOQ (ppm) </td></tr><tr><td> RF-PCD </td><td> 6 </td><td> 25 </td><td> 10 </td><td> 100 </td><td> 25 </td><td> 250 </td><td> 50 </td><td> 250 </td></tr><tr><td> הנמל המרכזי RF-PCD (underivatized) </td><td colspan="2"> לא זוהה </td><td colspan="2"> לא זוהה </td><td colspan="2"> לא זוהה </td><td> 1 </td><td> 10 </td></tr><tr><td> PCD קונבנציונלי </td><td> 10 </td><td> 100 </td><td> 50 </td><td> 500 </td><td> 50 </td><td> 500 </td><td> 100 </td><td> 500 </td></tr></tbody></table> טבלה 1. גבולות איתור quantitation של ארבע חומצות אמינו שונות זוהו על ידי מערכות derivatization טור פוסט שונות באמצעות fluorescamine כמו הגיב derivatization לאחר הפרדה על ידי HPLC.

Watch this Scientific Journal Video about Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns at JoVE.com

Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented.

הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

post-column-derivatization-using-reaction-flow-high-performance

Google

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Analytical Chemistry

Chemistry

Unit 1

Principles of Chromatography

SCIENTISTS IN ACTION

14.9K Views.  University of Western Sydney. A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented.

Video: Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to investigate metabolism. The approach offers an unbiased and in-depth analysis that can enable the development of diagnostic tests, novel therapies, and further our understanding of disease processes. The inherent chemical diversity of the metabolome creates significant analytical challenges and there is no single experimental approach that can detect all metabolites. Additionally, the biological variation in individual metabolism and the dependence of metabolism on environmental factors necessitates large sample numbers to achieve the appropriate statistical power required for meaningful biological interpretation. To address these challenges, this tutorial outlines an analytical workflow for large scale non-targeted metabolite profiling of serum by UPLC-MS. The procedure includes guidelines for sample organization and preparation, data acquisition, quality control, and metabolite identification and will enable reliable acquisition of data for large experiments and provide a starting point for laboratories new to non-targeted metabolite profiling by UPLC-MS.

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry UPLC-MS

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to investigate metabolism. This article outlines a typical workflow utilized for non-targeted metabolite profiling of serum including sample organization and preparation, data acquisition, data analysis, quality control, and metabolite identification.

בקנה מידה גדול Profiling metabolomic ללא ממוקד של סרום על ידי כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים-Mass ספקטרומטריית Ultra (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to ...

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

Metabolomics לא ממוקדים ממקורות ביולוגיים באמצעות Ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית-רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Isolation and Preparation of Bacterial Cell Walls for Compositional Analysis by Ultra Performance Liquid Chromatography

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the face of turgor pressures several atmospheres in magnitude. Across the diverse shapes and sizes of the bacterial kingdom, the cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by short peptides. Peptidoglycan&#8217;s central importance to bacterial physiology underlies its use as an antibiotic target and has motivated genetic, structural, and cell biological studies of how it is robustly assembled during growth and division. Nonetheless, extensive investigations are still required to fully characterize the key enzymatic activities in peptidoglycan synthesis and the chemical composition of bacterial cell walls. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is a powerful analytical method for quantifying differences in the chemical composition of the walls of bacteria grown under a variety of environmental and genetic conditions, but its throughput is often limited. Here, we present a straightforward procedure for the isolation and preparation of bacterial cell walls for biological analyses of peptidoglycan via HPLC and Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC), an extension of HPLC that utilizes pumps to deliver ultra-high pressures of up to 15,000 psi, compared with 6,000 psi for HPLC. In combination with the preparation of bacterial cell walls presented here, the low-volume sample injectors, detectors with high sampling rates, smaller sample volumes, and shorter run times of UPLC will enable high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition and fundamental bacterial cell biology in most biological laboratories with access to an ultracentrifuge and UPLC.

The bacterial cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by peptides. Ultra Performance Liquid Chromatography provides high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition. We present a procedure for the isolation of cell walls (sacculi) and their subsequent preparation for analysis via UPLC.

בידוד והכנת קירות תא חיידקי לניתוח קומפוזיציוני על ידי כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה ביצועים

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the ...

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms of efficiency and sensitivity and to enable multiplexed detection. This form of AFT uses a parallel segmented flow (PSF) column. A PSF column outlet end-fitting consists of 2 or 4 ports, which can be multiplexed to connect up to 4 detectors. The PSF column not only allows a platform for multiplexed detection but also the combination of both destructive and non-destructive detectors, without additional dead volume tubing, simultaneously. The amount of flow through each port can also be adjusted through pressure management to suit the requirements of a specific detector(s). To achieve multiplexed detection using a PSF column there are a number of parameters which can be controlled to ensure optimal separation performance and quality of results; that is tube dimensions for each port, choice of port for each type of detector and flow adjustment. This protocol is intended to show how to use and tune a PSF column functioning in a multiplexed mode of detection.

Here, we present a protocol for the operation and tuning of parallel segmented flow chromatography columns to enable multiplexed detection.

כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially purpose built multiport end-fitting(s). Curtain Flow (CF) columns belong to the AFT suite of columns, specifically the CF column is designed so that the sample is injected into the radial central region of the bed and a curtain flow of mobile phase surrounding the injection of solute prevents the radial dispersion of the sample to the wall. The column functions as an 'infinite diameter' column. The purpose of the design is to overcome the radial heterogeneity of the column bed, and at the same time maximize the sample load into the radial central region of the column bed, which serves to increase detection sensitivity. The protocol described herein outlines the system and CF column set up and the tuning process for an optimized infinite diameter 'virtual' column.

Here, we present a protocol for the operation and optimization of Active Flow Technology (AFT) column in Curtain flow (CF) mode for enhanced separation performance.

הרמת מסך טור זרימה: אופטימיזציה של יעילות ורגישות

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular identity and function. Each of the seven PtdInsPs varies in their distribution and abundance, which are tightly regulated by specific kinases and phosphatases. The abundance of PtdInsPs can change abruptly in response to various signaling events or disturbance of the regulatory machinery. To understand how these events lead to changes in the amount of PtdInsPs and their resulting impact, it is important to quantify PtdInsP levels before and after a signaling event or between control and abnormal conditions. However, due to their low abundance and similarity, quantifying the relative amounts of each PtdInsP can be challenging. This article describes a method for quantifying PtdInsP levels by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, which is incorporated into PtdInsPs. Phospholipids are then precipitated and deacylated. The resulting soluble 3H-glycero-inositides are further extracted, separated by high-performance liquid chromatography (HPLC), and detected by flow scintillation. The labeling and processing of yeast samples is described in detail, as well as the instrumental setup for the HPLC and flow scintillator. Despite losing structural information regarding acyl chain content, this method is sensitive and can be optimized to concurrently quantify all seven PtdInsPs in cells.

Phosphoinositides are signaling lipids whose relative abundance rapidly changes in response to various stimuli. This article describes a method to measure the abundance of phosphoinositides by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, followed by extraction and deacylation. Extracted glycero-inositides are then separated by high-performance liquid chromatography and quantified by flow scintillation.

Radiolabeling וכימות של רמות סלולריות של Phosphoinositides ידי נצנץ זרימה מצמיד כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Synthesis of Programmable Main-chain Liquid-crystalline Elastomers Using a Two-stage Thiol-acrylate Reaction

This study presents a novel two-stage thiol-acrylate Michael addition-photopolymerization (TAMAP) reaction to prepare main-chain liquid-crystalline elastomers (LCEs) with facile control over network structure and programming of an aligned monodomain. Tailored LCE networks were synthesized using routine mixing of commercially available starting materials and pouring monomer solutions into molds to cure. An initial polydomain LCE network is formed via a self-limiting thiol-acrylate Michael-addition reaction. Strain-to-failure and glass transition behavior were investigated as a function of crosslinking monomer, pentaerythritol tetrakis(3-mercaptopropionate) (PETMP). An example non-stoichiometric system of 15 mol% PETMP thiol groups and an excess of 15 mol% acrylate groups was used to demonstrate the robust nature of the material. The LCE formed an aligned and transparent monodomain when stretched, with a maximum failure strain over 600%. Stretched LCE samples were able to demonstrate both stress-driven thermal actuation when held under a constant bias stress or the shape-memory effect when stretched and unloaded. A permanently programmed monodomain was achieved via a second-stage photopolymerization reaction of the excess acrylate groups when the sample was in the stretched state. LCE samples were photo-cured and programmed at 100%, 200%, 300%, and 400% strain, with all samples demonstrating over 90% shape fixity when unloaded. The magnitude of total stress-free actuation increased from 35% to 115% with increased programming strain. Overall, the two-stage TAMAP methodology is presented as a powerful tool to prepare main-chain LCE systems and explore structure-property-performance relationships in these fascinating stimuli-sensitive materials.

A novel methodology is presented to synthesize and program main-chain liquid-crystalline elastomers using commercially available starting monomers. A wide range of thermomechanical properties was tailored by adjusting the amount of crosslinker, while the actuation performance was dependent on the amount of applied strain during programming.

סינתזה של אלסטומרים נוזליים-גבישים לתכנות ראשי-שרשרת באמצעות תגובת תיאול-acrylate שני שלבים

This study presents a novel two-stage thiol-acrylate Michael addition-photopolymerization (TAMAP) reaction to prepare main-chain liquid-crystalline ...

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil quality, food flavoring, and human health. The biological activity of glucosinolates is released upon tissue damage, when they are mixed with the enzyme myrosinase. This results in the formation of pungent and toxic breakdown products, such as isothiocyanates and nitriles. Currently, more than 130 structurally different glucosinolates have been identified. The chemical structure of the glucosinolate is an important determinant of the product that is formed, which in turn determines its biological activity. The latter may range from detrimental (e.g., progoitrin) to beneficial (e.g., glucoraphanin). Each glucosinolate-containing plant species has its own specific glucosinolate profile. For this reason, it is important to correctly identify and reliably quantify the different glucosinolates present in brassicaceous leaf, seed, and root crops or, for ecological studies, in their wild relatives. Here, we present a well-validated, targeted, and robust method to analyze glucosinolate profiles in a wide range of plant species and plant organs. Intact glucosinolates are extracted from ground plant materials with a methanol-water mixture at high temperatures to disable myrosinase activity. Thereafter, the resulting extract is brought onto an ion-exchange column for purification. After sulfatase treatment, the desulfoglucosinolates are eluted with water and the eluate is freeze-dried. The residue is taken up in an exact volume of water, which is analyzed by high-pressure liquid chromatography (HPLC) with a photodiode array (PDA) or ultraviolet (UV) detector. Detection and quantification are achieved by conducting comparisons of the retention times and UV spectra of commercial reference standards. The concentrations are calculated based on a sinigrin reference curve and well-established response factors. The advantages and disadvantages of this straightforward method, when compared to faster and more technologically advanced methods, are discussed here.

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography HPLC

Here, we describe in great detail an established and robust protocol for the extraction of glucosinolates from ground plant materials. After an on-column sulfatase treatment of the extracts, the desulfoglucosinolates are eluted and analyzed by high-pressure liquid chromatography.

שיטה פשוטה עבור Glucosinolate הפקה וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and related diseases, but their precise measurement is still a challenge. Many protocols have been described for neurotransmitter measurement by a variety of instruments, including high-pressure liquid chromatography (HPLC). However, there are shortcomings, such as complicated operation or hard-to-detect multiple targets, which cannot be avoided, and presently, the dominant analysis technique is still HPLC coupled with sensitive electrochemical or fluorimetric detection, due to its high sensitivity and good selectivity. Here, a detailed protocol is described for the pretreatment and detection of catecholamines with high pressure liquid chromatography with electrochemical detection (HPLC-ECD) in real urine samples of infants, using electrospun composite nanofibers composed of polymeric crown ether with polystyrene as adsorbent, also known as the packed-fiber solid phase extraction (PFSPE) method. We show how urine samples can be easily precleaned by a nanofiber-packed solid phase column, and how the analytes in the sample can be rapidly enriched, desorbed, and detected on an ECD system. PFSPE greatly simplifies the pretreatment procedures for biological samples, allowing for decreased time, expense, and reduction of the loss of targets. 
Overall, this work illustrates a simple and convenient protocol for solid-phase extraction coupled to an HPLC-ECD system for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters (norepinephrine (NE), epinephrine (E), dopamine (DA)) and two of their metabolites (3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) and 3,4-dihydroxy-phenylacetic acid (DOPAC)) in infants' urine. The established protocol was applied to assess the differences of urinary catecholamines and their metabolites between high-risk infants with perinatal brain damage and healthy controls. Comparative analysis revealed a significant difference in urinary MHPG between the two groups, indicating that the catecholamine metabolites may be an important candidate marker for early diagnosis of cases at risk for brain damage in infants.

We present a convenient solid-phase extraction coupled to high-pressure liquid chromatography (HPLC) with electrochemical detection (ECD) for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters and two of their metabolites in infants' urine. We also identify the metabolite MHPG as a potential biomarker for the early diagnosis of brain damage for infants.

שיטה נוחה עבור חילוץ וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה של נוירוטרנסמיטורים קטכולאמין מטבוליטים שלהם

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Continuous Flow Chemistry: Reaction of Diphenyldiazomethane with p-Nitrobenzoic Acid

Continuous flow technology has been identified as instrumental for its environmental and economic advantages leveraging superior mixing, heat transfer and cost savings through the &#34;scaling out&#34; strategy as opposed to the traditional &#34;scaling up&#34;. Herein, we report the reaction of diphenyldiazomethane with p-nitrobenzoic acid in both batch and flow modes. To effectively transfer the reaction from batch to flow mode, it is essential to first conduct the reaction in batch. As a consequence, the reaction of diphenyldiazomethane was first studied in batch as a function of temperature, reaction time, and concentration to obtain kinetic information and process parameters. The glass flow reactor set-up is described and combines two types of reaction modules with &#34;mixing&#34; and &#34;linear&#34; microstructures. Finally, the reaction of diphenyldiazomethane with p-nitrobenzoic acid was successfully conducted in the flow reactor, with up to 95% conversion of the diphenyldiazomethane in 11 min. This proof of concept reaction aims to provide insight for scientists to consider flow technology&#39;s competitiveness, sustainability, and versatility in their research.

Continuous Flow Chemistry: Reaction of Diphenyldiazomethane with p-Nitrobenzoic Acid

Flow chemistry carries environmental and economic advantages by leveraging superior mixing, heat transfer and cost benefits. Herein, we provide a blueprint to transfer chemical processes from batch to flow mode. The reaction of diphenyldiazomethane (DDM) with p-nitrobenzoic acid, conducted in batch and flow, was chosen for proof of concept.

זרימה רציפה כימיה: התגובה של Diphenyldiazomethane עם חומצה - Nitrobenzoic p

Continuous flow technology has been identified as instrumental for its environmental and economic advantages leveraging superior mixing, heat transfer and ...