המחקר הנוכחי נתמך על ידי מענקי המועצה הלאומי למדע ד&quot;ר באי-צ&#39;ואנג Shyu (המל&quot;ל 99-2320-B-001-016-MY3, המל&quot;ל 100-2311-B-001-003-MY3, ו המל&quot;ל 102-2320- B-001-026-MY3). העבודה הזאת נעשתה במכון למדעי ביו, אשר קיבלו מימון מהאקדמיה Sinica.

הפרוטוקול במחקר הנוכחי קבל את אישור הטיפול בבעלי החיים המוסדי אקדמית Sinica ועדת ניצול בטייוואן. 1. הכנות בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג חולדות Sprague-Dawley זכר (כ -300 - 400 גרם). לשמור על חולדות בחדר ממוזג (21 - 22 מעלות צלזיוס, 50% לחות) תחת אור 12 שעות / 12 שעות / חושך מחזור (אורות בשעה 8:00 בבוקר) עם גישה חופשית למזון ומים. </li></ol> 2. נוהל ניסיוני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר את כל החולדות כדי להסתגל לסביבה בכלובים בביתם במשך שבוע 1 לפני הניסויים. במהלך הסתגלות, לבצע את פון פריי בדיקות plantar כדי לקבוע קווי התחלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פון פריי מבחן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בחלל סגור אקריליק (30 ס&quot;מ × 30 ס&quot;מ × ס&quot;מ 80) למשך 30 דקות למגורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג חוטי פון פריי (נימה לא 11 -. 20) כי יש אותו האורך אבל משתנה בקטרים ​​לספק מגווןכוחות של 2 - ז 100. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להעריך את סף נסיגת הרגליים בדרך של hindpaw חולדה, להשתמש חוטי פון פריי לעורר במרכז hindpaws דרך יציאת נטו דמוי על צלחת אקריליק במרווחי 5 דקות intertrial. כדי להקליט את הלחץ המופעל מרבית, יש להשתמש חוטים בסדר עולה, מהנמוך לגבוה, עד הלחץ המופעל המקסימלי נרשם. 10 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר חולדות להפגין תגובת נסיגה כפה על הגירוי, לרשום את מספר הנימה. לקבוע את תגובת הנסיגה במשפט הזה על פי הגירוי הנמוך ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על אותו ההליך מייד, עבור סכום כולל של שלוש פעמים ברצף על אותו העכברוש. המרת מספר נימה לכוח המקביל (בגרמים) ומחשבים את הממוצע של הערכים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחן plantar <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בקופסה פרספקס שקוף (מחולק לארבעה מסגרות, 80 ס&quot;מ × 30 ס&quot;מ × 15 ס&quot;מ) למשך 30 דקות למגורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש infקרן rared לעורר במרכז hindpaw באמצעות צלחת זכוכית. התאם את עוצמת אור אינפרא האדומה כדי לקבל חביון תגובת נסיגה כפה ממוצע של כ 10 שניות. לביצוע ניסוי מדכא מפתח המפעיל את מקור האור האינפרא האדום ומתחיל טיימר דיגיטלי מצב מוצק. מניפולציות משך קרן אור אינפרא אדום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את משך הזמן של האור האינפרה-האדום כאשר החולדות להפגין תגובת נסיגה כפה. משך הארוך לא יעלה על 20 שניות בכל ניסיון כדי למנוע נזק לרקמות. השתמש מרווח intertrial של לפחות 5 דקות כדי למנוע גירוי רצוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזרו על הבדיקה עם שלושה ניסויים עבור hindpaws על ימין ועל שמאל, ולחשב את הממוצע עבור כל hindpaw לכל חולדה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כירורגיה Collagenase נגע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדה עם isoflurane 4% עד אובדן התגובה הבוהן קמצוץ ותגובות סומטיות לגירויים כירורגית להתרחש. לשמור על הרדמה עם 1.5 - 2% isoflurAne למשך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את עכברוש מכשיר stereotaxic עם כרית חימום פשוט כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ב 36.5 - C ° 37.5. החל קרם עיניים על העיניים כדי למנוע יובש לאחר הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הפרווה עם קוצץ חשמלי מעוקר, ולעשות חתך חלק (כ 2-2.5 סנטימטר) עם אזמל לאורך קו האמצע של הקרקפת. נקו את עור הגולגולת עם לסירוגין יוד ההשגחה פתרון אלכוהול 75% לחיטוי. בשלב כירורגית, להשתמש 75% אלכוהול לעקר כל המכשירים, הכלים, ואת שולחן העבודה שלו כדי לשמור על תנאים סטריליים. לפני כן, כל החומרים כירורגית יש לעקר ב חיטוי קיטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש כפפות ומכשירים סטרילי, לקדוח חור קטן (3 מ&quot;מ קוטר) בגולגולת עם מקדחה חשמלית על VB (כולל גרעין התלמוס posteromedial הגחון [VPM] והגרעין התלמוס posterolateral הגחון [VPL]) של התלמוס (3.0 -3.5 מ&quot;מ אחורי, 3.0-3.5 מ&quot;מ לרוחבכדי גבחת, ועומק 5.5-5.8 מ&quot;מ מפני שטח גולגולת). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Microinject 0.5 μl של מלח רגיל או 0.125 U של פתרון collagenase סוג 4 בבקרה וקבוצות ניסיון, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את מחט הזריקה במקום במשך 5 דקות נוספות כדי לאפשר דיפוזיה תרופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש דבק דנטלי כדי למלא את החור בגולגולת, תפר את החתך. לאחר תפר את החתך, להחיל את הרדמת כאבים המקומית (משחה לידוקאין) על הפצע, ולהחזיר אותם בכלובים בביתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח, ביחידים לשכן החולדות בכלובי פלסטיק עד שהם לשמור שכיבה sternal, ושומר חם עד התאושש מן ההרדמה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקות התנהגותיות לאחר שחזור כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 7 ימים של התאוששות מניתוח, וחזור על התהליך המתואר בסעיפים 2.2 ו -2.3 עבור בשלב הבדיקה. בצע בדיקות התנהגותיות מעל 4 שבועות תוך מעקב אחר בריאות ומצב התפתחותי של החיות. </li><li&gt; מציג את תנאי בריאות החיה (למשל, משקל גוף, כמות האכלה, ותנועה חופשית) בין מלא קבוצות ניסוי עבור השלב שלאחר הניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע קנית השרשה עם PE-50 Tubing <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדה עם 4% isoflurane, וכן לשמור על טמפרטורת הגוף ב 36.5 - 37.5 ° C עם כרית חימום פשוטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם אזמל, לחתוך שני חורים (בקוטר 2 ס&quot;מ כל אחד) ב קו האמצע של החלק הגבי של forelimbs ואת החיתוך של החלק הגחוני של הכתף השמאלי חלל בית החזה, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתק את העור והשרירים עם זוג מספריים בין שני החורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר קצה אחד של 50 צינורות PE- (20 ס&quot;מ אורך) אל וריד הצוואר חיצוני דרך חור הגחון. חבר את הקצה הסופי של צינורות אותה 50 PE- אל החור הגבי, והדבק על העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מזרק להזריק מלוחים לתוך וריד הצוואר כדי לוודא כי צינורות 50 PE-אינו חסום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את החתך, ולהזריק את חולדות עם 6 מ&quot;ג / ק&quot;ג gentamycin (intraperitoneally). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את צינורות פעם ביומיים לאחר הניתוח עם 0.3 מ&quot;ל של 0.9% מלוחים, ואחריו 0.1 מ&quot;ל של תמיסת מלח עם 20 הפרין U / ml. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחן התנהגותי סופי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבוע אחרי צעד 2.6, חזור על שלבים 2.2-2.3 כדי לאשר התנהגות כי הוא יציב לעומת שלב 2.5 לאחר ההתאוששות אחרי הניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקת radiotracer <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בכלוב מנוחתם 5 - 10 דקות להסתגלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מפצל, להתחבר PE- 50 צינורות לשני 1 מ&quot;ל מזרקים. מלאו מזרק אחד עם מלח רגיל ומלא והשני עם [14 C] -IAP פתרון (125 μCi / ק&quot;ג בנפח של 0.3 - 0.5 מ&quot;ל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את radiotracer לתוך וריד הצוואר חיצוני, ולהחליף את המזרק עם מזרק נוסף מלא 3 M אשלגן כלורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עשר שניות לאחר inj radiotracerשיקוף, להזריק 3 M אשלגן כלורי תחת ממנת יתר של isoflurane, ולהקריב את בעלי החיים על פי שיטות המתת חסד סטנדרטיות (כלומר, isoflurane מ מאדה למשך 50 דקות) על פי ההנחיות של הטיפול בבעלי החיים המוסדי אקדמית Sinica ועדת ניצול בטייוואן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 1 דקות, לחשוף את הגולגולת, לקצץ את השריר הנותרים. שימוש rongeurs, לקלף את פני השטח הגבי של הגולגולת מן המוח. חתוך משם בצידי הגולגולת באמצעות rongeurs. לאחר מכן, בעזרת מרית, לחתוך את נורות חוש הריח ואת קשרים עצביים לאורך משטח הגחון של המוח, ולהסיר את המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשימוש בטמפרטורה חיתוך אופטימלי (אוקטובר) מתחם להקפיא את המוח בקרח יבש methylbutane (כ -55 ° C). אחסן את רקמת המוח במקפיא. 11, 12 </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוח חיתוך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוריינט רקמת microtome, עם למוח האחורי פונה כלפי מטה. השתמש cryostat לחתוך את המוח לתוך 20 &amp;# 181; סעיפים מטר בעובי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את פרוסות המוח על שקופיות מיקרוסקופ בתוך cryostat ב -20 ° C, עם מרווח 240 מיקרומטר בין כל פרוסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את השקופיות מיקרוסקופ וחמישה ניירות לסנן רגילים עם רדיואקטיביות מדורגת לתוך קלטות חשיפה במשך 3 ימים ב -20 מעלות צלזיוס. על פי הרצף של פרוסות המוח, לסדר את השקופיות מיקרוסקופ מלמעלה למטה. לבסוף, הניח את הניירות לסנן בתחתית של הקלטות. 12 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המסך זרחן מן קלטות חשיפה, ולהשתמש תרמי משתנה מצב לקרוא את המסך זרחן וליצור תמונות להראות [14 C] ספיגת -IAP עבור פרוסות המוח. </li></ol></li></ol> .3 ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שלב 2.9.4, להתאים את התמונות באמצעות מיפוי פרמטרית סטטיסטי (SPM) ותוכנת ImageJ. לשחזר את כל התמונות באמצעות חלקי העטרת סדרתי. חלקה לנרמל את התמונות על פי מודל במוח חולדה התייחסות.12, 13 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת הערכות כמותיות, למדוד באזור של עניין (ROI) של תמונות המוח באמצעות תוכנת ImageJ כדי לקבוע את עוצמת האות פיקסל, ולהשתמש בתוכנות סטטיסטיות לניתוח. 12, 13 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לחקור את הקשר בין מרכזי מוח השונים, להשתמש בתוכנת ניתוח מתאם MATLAB להציג יחס רדיואקטיביות מטריקס קורלציה בין-אזורי, ולדמיין את המטריצות כמפות צבע. לבסוף, להשתמש בתוכנת Pajek לניתוח רשת. 12, 13 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 2 × 5 דו סטרי ניתוח מעורב של שונות (ANOVA), עם קבוצה ושבועות כגורמים, להשוות את משך הסובלנות חומה במבחן plantar ואת הכח מכאני במבחן פון פריי בקבוצות הזיוף ו CPSP בתחילת המחקר שבועות 1 - 5. השתמש 2 × 31 דו כיוונית ANOVA למדוד את יחס רדיואקטיביות בהתאם לקבוצה ואזור המוח. בעת הצורך, לנהל הבדל משמעותי בכנות של Tukey (HSD) בדיקות פוסט הוק. קאלמתאם culate פירסון מקדם להעריך מתאמים בין כל אזורי המוח שנבחרו הדמה וקבוצות CPSP. </li></ol>

<ol>
	<li>Finnerup, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+central+neuropathic+pain+states.">A review of central neuropathic pain states.</a> Curr Opin Anaesthesiol. 21 (5), 586-589 (2008).</li><li>Andersen, G., Vestergaard, K., Ingeman-Nielsen, M., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+central+post-stroke+pain.">Incidence of central post-stroke pain.</a> Pain. 61 (2), 187-193 (1995).</li><li>Chen, B., Stitik, T. P., Foye, P. M., Nadler, S. F., DeLisa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+post-stroke+pain+syndrome:+yet+another+use+for+gabapentin?.">Central post-stroke pain syndrome: yet another use for gabapentin?.</a> Am J Phys Med Rehabil. 81 (9), 718-720 (2002).</li><li>Greenspan, J. D., Ohara, S., Sarlani, E., Lenz, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allodynia+in+patients+with+post-stroke+central+pain+(CPSP)+studied+by+statistical+quantitative+sensory+testing+within+individuals.">Allodynia in patients with post-stroke central pain (CPSP) studied by statistical quantitative sensory testing within individuals.</a> Pain. 109 (3), 357-366 (2004).</li><li>Klit, H., Finnerup, N. B., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+post-stroke+pain:+clinical+characteristics,+pathophysiology,+and+management.">Central post-stroke pain: clinical characteristics, pathophysiology, and management.</a> Lancet Neurol. 8 (9), 857-868 (2009).</li><li>Kumar, G., Soni, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+post-stroke+pain:+current+evidence.">Central post-stroke pain: current evidence.</a> J Neurol Sci. 284 (1-2), 10-17 (2009).</li><li>Denk, F., McMahon, S. B., Tracey, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+vulnerability:+a+neurobiological+perspective.">Pain vulnerability: a neurobiological perspective.</a> Nat Neurosci. 17 (2), 192-200 (2014).</li><li>Ji, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+impairment+in+pain+through+amygdala-driven+prefrontal+cortical+deactivation.">Cognitive impairment in pain through amygdala-driven prefrontal cortical deactivation.</a> J Neurosci. 30 (15), 5451-5464 (2010).</li><li>Jungehulsing, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levetiracetam+in+patients+with+central+neuropathic+post-stroke+pain:+a+randomized,+double-blind,+placebo-controlled+trial.">Levetiracetam in patients with central neuropathic post-stroke pain: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Eur J Neurol. 20 (2), 331-337 (2013).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53, 55-63 (1994).</li><li>Jay, T. M., Luciqnani, G., Crane, A. M., Jehle, J., Sokoloff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+local+cerebral+blood+flow+with+[14C]iodoantipyrine+in+the+mouse.">Measurement of local cerebral blood flow with [14C]iodoantipyrine in the mouse.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8 (1), 121-129 (1988).</li><li>Lu, H. C., Chang, W. J., Kuan, Y. H., Huang, A. C., Shyu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+[14C]iodoantipyrine+study+of+inter-regional+correlations+of+neural+substrates+following+central+post-stroke+pain+in+rats.">A [14C]iodoantipyrine study of inter-regional correlations of neural substrates following central post-stroke pain in rats.</a> Mol Pain. 11 (1), (2015).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+brain+activation+during+retrieval+of+visceral+pain-conditioned+passive+avoidance+in+the+rat.">Functional brain activation during retrieval of visceral pain-conditioned passive avoidance in the rat.</a> Pain. 152, 2746-2756 (2011).</li><li>Wasserman, J. K., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+hemorrhagic+rat+model+of+central+post-stroke+pain.">Development and characterization of a hemorrhagic rat model of central post-stroke pain.</a> Neuroscience. 161 (1), 173-183 (2009).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

בשנת בדיקות התנהגותיות, הקבוצה CPSP הציג ירידות של סף הנסיגה כפה במבחן הכאב תרמי כוח מכני במבחן פון פריי בתחילת המחקר ובשבועות 1 -. 5. הממצאים היו עקביים עם מחקר קודם 14 ה- [14 C] השיטה -IAP מסתמכת על עוצמת פיקסל של תמונות מוח לני...

דימום שבץ הוכח להתרחש במשך יותר מ -8% מחולים הסובלים מכאב נוירופתי, התייחס כאב שלאחר הפעימות מרכזיות כמו (CPSP). 1-3 CPSP יכול לנבוע תפקוד חושי, ובכך גרימת רגישות יתר ו Allodynia. 4 עם זאת , את מנגנוני pathophysiological של חוסר תפקוד חושי ב CPSP להישאר בטוחים. לדוגמה, אובדן תחושות גופניות נובע deafferentation העצבית באזור המוח המורגי. Hyperalgesia עלולה להיגרם על ידי לרגשנות היתר של נוירונים nociceptive המרכזיים או ביטול עכבות מרכזיים, 5, 6, אבל התשתית העצבית המעורבים סימפטומי CPSP אינה ידועה. מספר מחקרים הראו כי קליפת המוח הקדם חזיתית דורסולטרלי (dPFC), cingulate קורטקס מקורי (ACC), האמיגדלה, ההיפוקמפוס, אפור periaqueductal (PAG), לשד הוונטרומדיאלי מקורי, והקשרים שלהם אחד עם השני לתווך עיבוד nociceptive. 7 נוספיםly, קליפת מוח קדם חזיתית המדיאלי (mPFC) -amygdala המעגלים הוצגו להיות מעורב בתפיסה הקשורות כאב. 8 נתונים על מנגנוני pathophysiological של CPSP הם מגוונים, ואת ההפעלה של מצעים עצביים CPSP צריכה בדיקה נוספת. [14 C] -Iodoantipyrine (IAP) ספיגת משמש בעקיפין להתבונן זרימת הדם האזורית במוח הקטן (rCBF), בהנחה לקשר בין פעילות המוח CBF. למרות [14 C] -IAP אינה יכולה להעריך את פעילות המוח בזמן אמת, כגון עם דימות תהודה מגנטית תפקודית (fMRI), יש לו כמה יתרונות. לדוגמה, [14 C] -IAP הוא מתאים למדידת ספונטני התרחשות אירועים מוחיים במהלך מצבים פתולוגיים. 9 יתר על כן, [14 C] ספיגת -IAP נמדדת בלי הרדמה. זה גם עולה פחות מאשר שיטות הדמיה אחרות, לרבות שיטת ה- fMRI טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET). ה- [14 C] השיטה -IAP הוצעה להיות מתאים מודדגרם כאב ספונטני (למשל, CPSP) כי הוא המושרה על ידי נגעים של הגרעין הבסיסי הגחון (VB) של התלמוס. 9 הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד לבצע את [14 C] -IAP שיטה להעריך את מעורבותם של התשתית העצבית של CPSP כי הוא המושרה על ידי נגעים של VB של התלמוס במודל חיה. הטכניקה מציעה דרך של קביעת מנגנוני pathophysiological העומד בבסיס סימפטומי CPSP ברמות התנהגותיות עצביות.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Anesthetic:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Halocarbon Products Corporation&amp;nbsp;</td><td>NDC 12164-002-25</td><td>4%</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Surgery&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>homeothermic blanket system</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Model 50&amp;ndash;7079</td><td>body temperature were maintained at 36.5 - 37.5 &amp;deg;C.</td></tr><tr><td>10 &amp;micro;l micro syringe</td><td>Hamilton</td><td>80008, Model 1701SN</td><td>injected with collagenase</td></tr><tr><td>polyethylene-50 tubing</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427411</td><td>catheterized into external jugular vein</td></tr><tr><td>1 c.c syringe</td><td>Terumo Medical Products</td><td>SS-01T</td><td>injected with &lt;sup&gt;14&lt;/sup&gt;C-IAP and saline.</td></tr><tr><td>saline (Sodium Chloride 0.9 gm)</td><td>Taiwan Biotech Co., LTD.</td><td>100-130-0201</td><td>To flush the tube</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Drugs&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>type 4 collagenase</td><td>Sigma</td><td>C5138-500MG</td><td>0.125 U</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma</td><td>G1264-250MG</td><td>6 mg/kg</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H9399</td><td>20 U/ml; 0.1 ml/day</td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;14&lt;/sup&gt;C-iodoantipyrine (IAP)</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC712</td><td>125 mCi/kg in 300 ml of 0.9% saline</td></tr><tr><td>Potassium chloride</td><td>Merck</td><td>1.04936.1000</td><td>3 M</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Behavior system:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>von Frey esthesiometer</td><td>Fabrication Enterprises, Inc.</td><td>Baseline Tactile Monofilaments 12-1666</td><td>mechanical hyperalgesia was assessed by measuring the withdrawal response to a mechanical stimulus</td></tr><tr><td>plantar test apparatus</td><td>IITC Life Science</td><td>IITC 390G Plantar Test</td><td>Thermal hyperalgesia was assessed by measuring the hind paw withdrawal latency in response to radiant heat.</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Brain slice:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature compound</td><td>Sakura Fintek Inc</td><td>4583</td><td>embedded the brain</td></tr><tr><td>dry ice</td><td></td><td></td><td>frozen in dry ice/methylbutane (approximately &amp;minus;55 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>methylbutane</td><td>Sigma</td><td>M32631-1L</td><td>frozen in dry ice/methylbutane (approximately &amp;minus;55 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>&amp;nbsp;Leica Biosystems Nussloch GmbH, Germany</td><td>Leica CM1850</td><td>Coronal brain slice were sectioned on this machine.</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Data analyze&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>exposure cassettes with a phosphor screen</td><td>Amersham Biosciences&amp;nbsp;</td><td>20 cm x 25 cm</td><td>The slices were dried on glass slides and placed alongside five standard filter papers with graded radioactivity. All of the slides were exposed to the cassettes at &amp;minus;20 &amp;deg;C.</td></tr><tr><td>&amp;gamma;-counter</td><td>Beckman Coulter</td><td>Beckman LS 6500 Liquid Scintillation Counter</td><td>To measure the radioactivity count of the filter papers.</td></tr><tr><td>Typhoon 9410 Variable Mode Imager</td><td>&amp;nbsp;GMI, Inc.</td><td>WS-S9410</td><td>To read&amp;nbsp; phosphor screen which was exposed by brain slice</td></tr><tr><td>Statistical Parametric Mapping (SPM)</td><td>Wellcome Centre for Neuroimaging</td><td>version 8</td><td>all of the brains were averaged to create the final brain template. To determine significant differences between the images in these two groups, the images were derived by subtracting the sham group from the CPSP group.</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>http://imagej.nih.gov/ij</td><td>version 1.46</td><td>Adjacent sections were aligned both manually and using Stack- Reg, an automated pixel-based registration algorithm in ImageJ software. All of the original three-dimensionally reconstructed brains were smoothed and normalized to the reference rat brain model.</td></tr><tr><td>Matlab</td><td>MathWorks</td><td>version 2009b</td><td>used Pearson correlation coefficients to examine the relationships between the CPSP and sham groups. An inter-regional correlation matrix was calculated across animals from each group.</td></tr><tr><td>Pajek</td><td>http://Pajek.imfm.si/</td><td>version 3.06</td><td>Graphical theoretical analysis was performed on networks defined by the above correlation matrices using Pajek software.</td></tr></tbody></table>

autoradiographic measurements of [14c]-iodoantipyrine in rat brain following central post-stroke pain

Approximately 8% of stroke patients present symptoms of central post-stroke pain (CPSP). CPSP is associated with allodynia and hypersensitivity to nociceptive stimuli. Although some studies have shown that neuropathic pain may involve the dorsolateral prefrontal cortex, rostral anterior cingulate cortex, amygdala, hippocampus, periaqueductal gray, rostral ventromedial medulla, and medial thalamus, the neural substrates and their connections that mediate CPSP remain unclear. [14C]-Iodoantipyrine (IAP) uptake can be measured to evaluate spontaneously active pain. It can be used to assess the activation of neural substrates that may be involved in CPSP in an animal model. The [14C]-IAP method in rats is less expensive to perform compared with other brain mapping techniques. The present [14C]-IAP protocol is used to measure the activation of neural substrates that are involved in CPSP that is induced by lesions of the ventral basal nucleus (VB) of the thalamus in a rodent model.

איור 1 א מציג את ציר הזמן הניסיון. חולדות הומחו דמה וקבוצות CPSP עבור בדיקות התנהגותיות (כלומר, מבחן ו plantar פון פריי). היום הראשון של הניסוי שמש בסיס, ובדיקות חזרו בשבועות 1 - 5. PE-50 צנתור בוצע וריד הצוואר החיצוני בשבוע 4. הפרין (20 U / ml, 0.1 מיליליט...

Watch this Scientific Journal Video about Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain at JoVE.com

Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

We present a protocol to measure [14C]-iodoantipyrine (IAP) uptake and assess the activation of neural substrates that are involved in central post-stroke pain (CPSP) in a rodent model.

מדידות Autoradiographic של [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine ב במוח חולדה בעקבות מרכזי פוסט-שבץ כאב

Approximately 8% of stroke patients present symptoms of central post-stroke pain (CPSP). CPSP is associated with allodynia and hypersensitivity to ...

autoradiographic-measurements-14c-iodoantipyrine-rat-brain-following

Research

JoVE Journal

Medicine

Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

8.7K Views.  Fo Guang University. We present a protocol to measure [14C]-iodoantipyrine (IAP) uptake and assess the activation of neural substrates that are involved in central post-stroke pain (CPSP) in a rodent model.

Video: Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ischemia produces damage to specific brain regions shown to be highly sensitive to ischemia 1. Hippocampal neurons have higher sensitivity to ischemic insults compared to other cell populations, and specifically, the CA1 region of the hippocampus is particularly vulnerable to ischemia/reperfusion 2.
The design of therapeutic interventions, or study of mechanisms involved in cerebral damage, requires a model that produces damage similar to the clinical condition and in a reproducible manner. Bilateral carotid vessel occlusion with hypotension (2VOH) is a model that produces reversible forebrain ischemia, emulating the cerebral events that can occur during cardiac arrest and resuscitation. We describe a model modified from Smith et al. (1984) 2, as first presented in its current form in Sanderson, et al. (2008) 3, which produces reproducible injury to selectively vulnerable brain regions 3-6. The reliability of this model is dictated by precise control of systemic blood pressure during applied hypotension, the duration of ischemia, close temperature control, a specific anesthesia regimen, and diligent post-operative care. An 8-minute ischemic insult produces cell death of CA1 hippocampal neurons that progresses over the course of 6 to 24 hr of reperfusion, while less vulnerable brain regions are spared. This progressive cell death is easily quantified after 7-14 days of reperfusion, as a near complete loss of CA1 neurons is evident at this time.
In addition to this brain injury model, we present a method for CA1 damage quantification using a simple, yet thorough, methodology. Importantly, quantification can be accomplished using a simple camera-mounted microscope, and a free ImageJ (NIH) software plugin, obviating the need for cost-prohibitive stereology software programs and a motorized microscopic stage for damage assessment.

Bilateral carotid occlusion coupled with systemic hypotension produces global brain ischemia in the rat, resulting in damage to the hippocampus with reproducible severity. Animal subjects are impaired with predictable patterns of brain damage, they recover expediently, and mortality rates are comparatively low.

ספיגה של 2 כלי השיט / תת לחץ דם: מודל עכברוש של איסכמיה המוח הגלובלית

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of all ischemic stroke patients suffer from PSD, a disorder considered to be an ischemic stroke-related precursor for increased death and degradation in health. The pathophysiology of PSD is still obscure. To study the mechanism of development and occurrence of PSD further, and to find out a therapy, we attempted to develop a new protocol that requires occluding the middle cerebral artery (MCA) via the internal carotid artery (ICA) in rats. This protocol describes a model of PSD induced in rats through the middle cerebral artery occlusion (MCAO). Also used in the experiment are the Porsolt forced swim test and the sucrose preference test to confirm and evaluate the depressive mood of the rats under investigation. Rather than inserting the catheter through the external carotid artery (ECA), as stipulated for the original procedure, this MCAO technique has the monofilament passing directly through the ICA. This MCAO technique was developed a few years ago and leads to a reduction in mortality and variability. It is generally accepted that the criteria used are preferred in the selection of biological models. The data obtained with this protocol show that this model of MCAO could be a way of inducing PSD in rats and could potentially lead to the understanding of the pathophysiology and the future development of new drugs and other neuroprotective agents.

Here we present a protocol to induce post-stroke depression in rats by occluding the middle cerebral artery via the internal carotid artery. We use the Porsolt forced swim test and the sucrose preference test to confirm and evaluate induced depressive moods.

עורק מוחין בינוני טכניקת הסגר לגרימת שלאחר שבץ דיכאון בחולדות

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of ...

Behavior

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

Neuroscience

Measurement of Glutamate Uptake using Radiolabeled L-[3H]-Glutamate in Acute Transverse Slices Obtained from Rodent Resected Hippocampus

Glutamate removal from the extracellular space by high-affinity Na+-dependent transporters is essential to ensure that the brain&#39;s intrinsic connectivity mechanisms work properly and homeostasis is maintained. The hippocampus is a unique brain structure that manages higher cognitive functions, and is the subject of several studies regarding neurologic diseases. The investigation of physiological and pathological mechanisms in rodent models can benefit from acute hippocampal slice (AHS) preparations. AHS has the advantage of providing reliable information on cell function since the cytoarchitecture and synaptic circuits are preserved. Although AHS preparations are commonly used in neurochemistry laboratories, it is possible to find some methodological differences in the literature. Considering that distinctive slice preparation protocols might change the hippocampal regions analyzed, this current protocol proposes a standard technique for obtaining transverse AHS from resected hippocampus. This simple-to-perform protocol may be used in mice and rats&#39; experimental models and allow several ex vivo approaches investigating neurochemical dynamics (in dorsal, intermediate and ventral hippocampus) in different backgrounds (e.g., transgenic manipulations) or after in vivo manipulations (e.g., pharmacological treatments or suitable rodent models to study clinical disorders). After dissecting the hippocampus from the rodent brain, transverse slices along the septo-temporal axis (300 &#181;m thick) were obtained. These AHS contain distinct parts of the hippocampus and were subjected to an individual neurochemical investigation (as an example: neurotransmitter transporters using their respective substrates). As the hippocampus presents a high density of excitatory synapses, and glutamate is the most important neurotransmitter in the brain, the glutamatergic system is an interesting target for in vivo observed phenomena. Thus, the current protocol provides detailed steps to explore glutamate uptake in ex vivo AHS using L-[3H]-Glutamate. Using this protocol to investigate hippocampal function may help to better understand the influence of glutamate metabolism on mechanisms of neuroprotection or neurotoxicity.

<meta charset="utf8"></head><body>מדידת ספיגת גלוטמט באמצעות L-[3H]-גלוטמט עם תווית רדיו בפרוסות רוחביות חריפות המתקבלות מההיפוקמפוס שנכרת על ידי מכרסמים

This article describes a reliable and simple way to obtain ex vivo acute hippocampal transverse slices from mice and rats using a tissue chopper. Slices obtained from resected hippocampi can be submitted for functional glutamate uptake analysis to investigate glutamatergic system homeostasis.

מדידת ספיגת גלוטמט באמצעות L-[3H]-גלוטמט עם תווית רדיו בפרוסות רוחביות חריפות המתקבלות מההיפוקמפוס שנכרת על ידי מכרסמים

Glutamate removal from the extracellular space by high-affinity Na+-dependent transporters is essential to ensure that the brain&#39;s intrinsic ...

Biochemistry

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

הדמיה לא פולשנית וניתוח של מוחין איסכמיה בחולדות Living שימוש Positron פליטת טומוגרפיה עם<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the development of effective therapeutics. Intracranial pharmacology presents an important tool for understanding the molecular and cellular mechanisms of pain in the brain, as well as for novel treatments. Here we present a protocol that integrates intracranial pharmacology with pain behavior testing. Specifically, we show how to infuse analgesic drugs into a select brain region, which may be responsible for pain modulation. Furthermore, to determine the effect of the candidate drug in the central nerve system, pain assays are performed after intracranial treatment. Our results demonstrate that intracranial administration of analgesic drugs in a targeted region can provide relief of pain in rodents. Thus, our protocol successfully demonstrates that intracranial pharmacology, combined with pain behavior testing, can be a powerful tool for the study of pain mechanisms in the brain.

Here we present a protocol to perform intracranial pharmacological experiments followed by pain behavior assays in rodents. This protocol allows researchers to deliver molecular and cellular targets in the brain, for pharmacologic agents in the treatment of pain.

Pharmacotherapy תוך-גולגולתי, מבחני כאב בחולדות

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Quantitative Autoradiographic Method for Determination of Regional Rates of Cerebral Protein Synthesis In Vivo

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it is thought that dysregulation of protein synthesis in the nervous system may be a core phenotype in some developmental disorders. Accurate measurement of rates of cerebral protein synthesis in animal models is important for understanding these disorders. The method that we have developed was designed to be applied to the study of awake, behaving animals. It is a quantitative autoradiographic method, so it can yield rates in all regions of the brain simultaneously. The method is based on the use of a tracer amino acid, L-[1-14C]-leucine, and a kinetic model of the behavior of L-leucine in the brain. We chose L-[1-14C]-leucine as the tracer because it does not lead to extraneous labeled metabolic products. It is either incorporated into protein or rapidly metabolized to yield 14CO2 which is diluted in a large pool of unlabeled CO2 in the brain. The method and the model also allow for the contribution of unlabeled leucine derived from tissue proteolysis to the tissue precursor pool for protein synthesis. The method has the spatial resolution to determine protein synthesis rates in cell and neuropil layers, as well as hypothalamic and cranial nerve nuclei. To obtain reliable and reproducible quantitative data, it is important to adhere to procedural details. Here we present the detailed procedures of the quantitative autoradiographic L-[1-14C]-leucine method for the determination of regional rates of protein synthesis in vivo.

Protein synthesis is&#160;a critical biological process for cells. In brain, it is required for adaptive changes. Measurement of rates of protein synthesis in the intact brain requires careful methodological considerations. Here we present the L-[1-14C]-leucine quantitative autoradiographic method for determination of regional rates of cerebral protein synthesis in vivo.

השיטה הכמותית האוטומטית לקביעת שיעורי הסינתזה של חלבון מוחי בVivo

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it ...

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide critical insights into the temporal dynamics and role of certain neuroimmune interactions in stroke. Specifically, Positron Emission Tomography (PET) imaging of translocator protein 18 kDa (TSPO), a marker of activated microglia and peripheral myeloid-lineage cells, provides a means to detect and track neuroinflammation in vivo. Here, we present a method to accurately quantify neuroinflammation using [11C]N,N-Diethyl-2-[2-(4-methoxyphenyl)-5,7-dimethylpyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]acetamide ([11C]DPA-713), a promising second generation TSPO-PET radiotracer, in distal middle cerebral artery occlusion (dMCAO) compared to sham-operated mice. MRI was performed 2 days post-dMCAO surgery to confirm stroke and define the infarct location and volume. PET/Computed Tomography (CT) imaging was carried out 6 days post-dMCAO to capture the peak increase in TSPO levels following stroke. Quantitation of PET images was conducted to assess the uptake of [11C]DPA-713 in the brain and spleen of dMCAO and sham mice to assess central and peripheral levels of inflammation. In vivo [11C]DPA-713 brain uptake was confirmed using ex vivo autoradiography.

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Positron Emission Tomography (PET) imaging of translocator protein 18 kDa (TSPO) provides a non-invasive means to visualize the dynamic role of neuroinflammation in the development and progression of brain diseases. This protocol describes TSPO-PET and ex vivo autoradiography to detect neuroinflammation in a mouse model of ischemic stroke.

ללטף הדמיה של Neuroinflammation באמצעות [11ג] DPA-713 במודל של עכברים של שבץ איסכמי

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide ...

Autoradiography as a Simple and Powerful Method for Visualization and Characterization of Pharmacological Targets

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The method is based on the specific binding of a radioligand to its biological target. Therefore, frozen tissue sections are incubated with radioligand solution, and the binding to the target is subsequently localized by the detection of radioactive decay, for example, by using photosensitive film or phosphor imaging plates. Resulting digital autoradiograms display remarkable spatial resolution, which enables quantification and localization of radioligand binding in distinct anatomical structures. Moreover, quantification allows for the pharmacological characterization of ligand affinity by means of dissociation constants (Kd), inhibition constants (Ki) as well as the density of binding sites (Bmax) in selected tissues. Thus, the method provides information about both target localization and ligand selectivity. Here, the technique is exemplified with autoradiographic characterization of the high-affinity &#947;-hydroxybutyric acid (GHB) binding sites in mammalian brain tissue, with special emphasis on methodological considerations regarding the binding assay parameters, the choice of the radioligand and the detection method.

The method of autoradiography is routinely used to study binding of radioligands to tissue sections for determination of qualitative or quantitative pharmacology.

Autoradiography כאל שיטה פשוטה ורבת -עוצמה עבור ויזואליזציה ואפיון של מטרות תרופתי

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The ...

מדידות Autoradiographic של [

Summary

Explore More Videos