وأيد هذه الدراسة من المنح المقدمة المجلس الوطني للعلوم للدكتور باى تشوانغ Shyu (NSC 99-2320-B-001-016-MY3، NSC 100-2311-B-001-003-MY3، ومجلس الأمن القومي 102-2320- B-001-026-MY3). وأجري هذا العمل في معهد العلوم الطبية الحيوية، والتي تلقت تمويلا من أكاديمية سينيكا.

تلقى بروتوكول في هذه الدراسة على موافقة من أكاديمية سينيكا المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة استخدام في تايوان. 1. الاستعدادات الحيوانية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على ذكور فئران سبراغ داولي (حوالي 300-400 غرام). الحفاظ على الفئران في غرفة مكيفة الهواء (21-22 درجة مئوية، الرطوبة 50٪) تحت 12 ساعة / 12 ساعة ضوء / دورة الظلام (أضواء على في 08:00) مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء. </li></ol> 2. إجراء التجريبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لجميع من الفئران على التكيف مع البيئة في أقفاص وطنهم ل1 قبل أسبوع من التجارب. خلال التكيف، وأداء فون فراي والاختبارات أخمصي لإنشاء خطوط الأساس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فون فراي اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في الضميمة الاكريليك (30 سم × 30 سم × 80 سم) لمدة 30 دقيقة للسكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على خيوط فون فراي (خيوط لا 11 - 20) التي لها نفس الطول ولكن بأقطار مختلفة لتوفير مجموعةقوات من 2-100 غرام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقييم عتبة انسحاب مخلب في hindpaw الفئران، استخدم خيوط فون فراي لتحفيز مركز hindpaws من خلال منفذ صافي مثل على لوحة اكريليك على فترات intertrial 5 دقائق. لتسجيل أقصى تطبيق الضغط، استخدام خيوط في ترتيب تصاعدي، من على ارتفاع منخفض، حتى يتم تسجيل أقصى تطبيق الضغط. 10 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما الفئران تبدي استجابة انسحاب مخلب إلى التحفيز، تسجيل عدد خيوط. تحديد استجابة الانسحاب في هذه المحاكمة وفقا لأدنى التحفيز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر نفس الإجراء على الفور، ليصبح المجموع ثلاث مرات متتالية في نفس الفئران. تحويل عدد خيوط في القوة المقابلة (في غرام) ومتوسط ​​القيم. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخمصي اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في صندوق زجاجي شفاف (مقسمة إلى أربعة إطارات، 80 سم × 30 سم × 15 سم) لمدة 30 دقيقة للسكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الوقود النووي المشعشعاع rared لتحفيز مركز hindpaw من خلال لوحة من الزجاج. ضبط شدة ضوء الأشعة تحت الحمراء للحصول على متوسط ​​زمن استجابة انسحاب مخلب من حوالي 10 ثانية. إجراء محاكمة بالضغط على المفتاح الذي يتحول على مصدر ضوء الأشعة تحت الحمراء ويبدأ جهاز توقيت الحالة الصلبة الرقمي. التلاعب في مدة شعاع ضوء الأشعة تحت الحمراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل مدة ضوء الأشعة تحت الحمراء عند الفئران تبدي استجابة انسحاب مخلب. يجب أن لا تتجاوز أطول مدة 20 ثانية في كل محاكمة لتجنب تلف الأنسجة. استخدام الفاصلة intertrial من 5 دقائق على الأقل لتجنب التحفيز على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الاختبار مع ثلاث محاكمات لhindpaws الأيمن والأيسر، وحساب المتوسط ​​لكل hindpaw عن كل فأر. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جراحة الآفة كولاجيناز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع 4٪ الأيزوفلورين حتى فقدان استجابة أخمص القدمين قرصة والاستجابات الجسدية للتحدث المحفزات الجراحية. الحفاظ على التخدير مع 1،5-2٪ isoflurانو لمدة الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في جهاز التجسيمي مع وسادة التدفئة بسيطة للحفاظ على درجة حرارة الجسم في 36،5-37،5 درجة مئوية. تطبيق كريم العين على العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق الفراء مع كليبرز الكهربائية تعقيمها، وجعل شق السلس (حوالي 2-2.5 سم) مع مشرط على طول خط الوسط من فروة الرأس. تنظيف البشرة والجمجمة بالتناوب مع اليود العناية الإلهية، و 75٪ من محلول الكحول لتعقيم. خلال المرحلة الجراحية، استخدام 75٪ من الكحول لتعقيم كافة الأجهزة والأدوات، وطاولة العمل للحفاظ على ظروف معقمة. وقبل ذلك، يجب تعقيم جميع المواد الجراحية في الأوتوكلاف بخار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام القفازات وأدوات معقمة، وحفر حفرة صغيرة (مم 3) في الجمجمة بمثقاب كهربائي على VB (بما في ذلك بطني نواة خلفي إنسي مهادي [VPM] وبطني خلفية وحشية النواة المهادية [VPL]) من المهاد (3.0 -3.5 ملم الخلفي، 3،0-3،5 مم الوحشيإلى bregma، و5،5-5،8 مم عمق من سطح الجمجمة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Microinject 0.5 ميكرولتر من محلول ملحي أو 0.125 U من نوع 4 حل كولاجيناز في المجموعتين الضابطة والتجريبية، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على إبرة الحقن في مكان لمدة 5 دقائق إضافية للسماح لنشر المخدرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الاسمنت الأسنان لملء ثقب في الجمجمة، وخياطة الجرح. بعد خياطة الجرح، وتطبيق التخدير مسكن المحلية (ليدوكائين مرهم) على الجرح، وإعادتهم إلى أقفاص وطنهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الجراحة، منفردة إيواء الفئران في أقفاص بلاستيكية حتى أنها تحافظ على الاستلقاء القصية، ويبقى دافئا حتى تعافى من التخدير. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاختبارات السلوكية بعد استعادة الجراحي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 7 أيام من التعافي من الجراحة، كرر الإجراءات في الأقسام 2.2 و 2.3 للمرحلة الاختبار. أداء الاختبارات السلوكية أكثر من 4 أسابيع في حين رصد الحالة الصحية والتنموية من الحيوانات. </li><li&gt; مراقبة الحالة الصحية للحيوانات (على سبيل المثال، ووزن الجسم، وكمية التغذية، وحرية الحركة) بين المجموعتين الضابطة والتجريبية للمرحلة ما بعد الجراحة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء قنية زرع مع PE-50 أنابيب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع 4٪ الأيزوفلورين، والحفاظ على درجة حرارة الجسم في 36،5-37،5 درجة مئوية مع وسادة التدفئة بسيطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع مشرط، وقطع اثنين من الثقوب (قطرها سم 2 لكل منهما) في خط الوسط من الجزء الظهري للالأمامية وتقاطع الجزء البطني من الكتف الأيسر وتجويف الصدري، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الجلد والعضلات مع زوج من مقص بين اثنين من الثقوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قم بتوصيل أحد طرفي PE- 50 أنابيب (20 سم طول) إلى الوريد الوداجي الخارجي من خلال ثقب بطني. ربط نهاية طرفية من نفس PE- 50 أنابيب إلى حفرة ظهري، ويضعوا على الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام حقنة لحقن محلول ملحي في الوريد الوداجي للتحقق من أن أنابيب PE- 50عدم وجود عقبات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة الفتحة، وحقن الفئران مع 6 ملغ / كغ الجنتاميسين (البريتونى). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدفق أنابيب كل يوم بعد الجراحة مع 0.3 مل من المياه المالحة 0.9٪، تليها 0.1 مل من المياه المالحة مع 20 U / مل الهيبارين. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختبار السلوكي النهائي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أسبوع واحد بعد الخطوة 2.6، كرر الخطوات من 2،2-2،3 للتأكد من أن السلوك غير مستقرة مقارنة مع الخطوة 2.5 بعد الشفاء الجراحي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن المشع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في قفص للراحة 5-10 دقيقة للتكيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الخائن، ربط PE- 50 الأنابيب لمدة 1 مل الحقن. ملء حقنة واحدة مع محلول ملحي وملء الآخر مع [14 C] -IAP حل (125 μCi / كغ في حجم 0،3-0،5 مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن مشعة في الوريد الوداجي الخارجي، واستبدال المحاقن مع حقنة أخرى مليئة كلوريد 3 M البوتاسيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عشر ثوان بعد ينج المشعection، وضخ 3 M كلوريد البوتاسيوم تحت جرعة زائدة من الأيزوفلورين، والتضحية الحيوانات وفقا للأساليب القتل الرحيم القياسية (أي الأيزوفلورين من المرذاذ لمدة 50 دقيقة) استنادا إلى المبادئ التوجيهية للأكاديمية سينيكا المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة استخدام في تايوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 دقيقة، فضح الجمجمة، وتقليم قبالة العضلات المتبقية. باستخدام رينجرز، قشر بعيدا السطح الظهري من الجمجمة من الدماغ. تقليم بعيدا جانبي الجمجمة باستخدام رينجرز. بعد ذلك، باستخدام ملعقة، وقطع بصيلات الشم وصلات عصبية على طول السطح البطني من الدماغ، وإزالة المخ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأمثل درجة حرارة القطع (أكتوبر) مركب لتجميد الدماغ في الثلج الجاف وmethylbutane (حوالي -55 درجة مئوية). تخزين أنسجة المخ في الفريزر. 11، 12 </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدماغ التقطيع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه الأنسجة في مشراح، مع الدماغ المؤخر أسفل. استخدام ناظم البرد لشريحة الدماغ إلى 20 &amp;# 181؛ أقسام م سميكة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع شرائح الدماغ على شرائح المجهر في ناظم البرد عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، مع فاصل زمني 240 ميكرون بين كل شريحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الشرائح المجهر وخمس ورقات التصفية القياسية مع النشاط الإشعاعي متدرج إلى أشرطة تعرض لمدة 3 أيام في -20 درجة مئوية. وفقا لتسلسل شرائح الدماغ، وترتيب الشرائح المجهر من أعلى إلى أسفل. وأخيرا، ضع أوراق الترشيح في الجزء السفلي من الأشرطة 12 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الفوسفور الشاشة من أشرطة التعرض، واستخدام جهاز تصوير متغير وضع لقراءة الشاشة الفوسفور وتوليد الصور لإظهار [14 C] امتصاص -IAP لشرائح الدماغ. </li></ol></li></ol> تحليل 3. البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الخطوة 2.9.4، وضبط الصور باستخدام الخرائط الإحصائية البارامترية (SPM) وبرنامج ImageJ. إعادة جميع الصور باستخدام أقسام الاكليلية التسلسلية. على نحو سلس وتطبيع الصور وفقا لنموذج الدماغ إشارة الفئران.12، 13 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقييم الكمية، وقياس المنطقة من الفائدة (ROI) من الصور الدماغ باستخدام برنامج ImageJ لتحديد كثافة إشارة بكسل، واستخدام البرامج الإحصائية لتحليل 12، 13 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتحقيق في الاتصالات بين نوى الدماغ المختلفة، واستخدام MATLAB البرمجيات تحليل الارتباط لعرض نسبة النشاط الإشعاعي في مصفوفة الارتباط بين الأقاليم، ووضع تصور لالمصفوفات كما خرائط ملونة. وأخيرا، استخدام البرمجيات Pajek لتحليل الشبكة. 12، 13 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 2 × 5 تحليل مختلط في اتجاهين التباين (ANOVA)، مع مجموعة والأسابيع كعوامل، مقارنة بمدة تحمل الحرارة في اختبار أخمصي والقوة الميكانيكية في اختبار فون فراي في مجموعة صورية وCPSP في الأساس و أسابيع 1 - 5. استخدام اتجاهين 2 × 31 ANOVA لقياس نسبة النشاط الإشعاعي وفقا لمجموعة ومنطقة الدماغ. عند الاقتضاء، إجراء الفرق كبير وبصراحة توكي في (HSD) اللاحق الاختبارات. كالculate ارتباط بيرسون معاملات لتقييم العلاقات المتبادلة بين جميع مناطق المخ المحدد في الشام والجماعات CPSP. </li></ol>

<ol>
	<li>Finnerup, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+central+neuropathic+pain+states.">A review of central neuropathic pain states.</a> Curr Opin Anaesthesiol. 21 (5), 586-589 (2008).</li><li>Andersen, G., Vestergaard, K., Ingeman-Nielsen, M., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+central+post-stroke+pain.">Incidence of central post-stroke pain.</a> Pain. 61 (2), 187-193 (1995).</li><li>Chen, B., Stitik, T. P., Foye, P. M., Nadler, S. F., DeLisa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+post-stroke+pain+syndrome:+yet+another+use+for+gabapentin?.">Central post-stroke pain syndrome: yet another use for gabapentin?.</a> Am J Phys Med Rehabil. 81 (9), 718-720 (2002).</li><li>Greenspan, J. D., Ohara, S., Sarlani, E., Lenz, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allodynia+in+patients+with+post-stroke+central+pain+(CPSP)+studied+by+statistical+quantitative+sensory+testing+within+individuals.">Allodynia in patients with post-stroke central pain (CPSP) studied by statistical quantitative sensory testing within individuals.</a> Pain. 109 (3), 357-366 (2004).</li><li>Klit, H., Finnerup, N. B., Jensen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+post-stroke+pain:+clinical+characteristics,+pathophysiology,+and+management.">Central post-stroke pain: clinical characteristics, pathophysiology, and management.</a> Lancet Neurol. 8 (9), 857-868 (2009).</li><li>Kumar, G., Soni, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+post-stroke+pain:+current+evidence.">Central post-stroke pain: current evidence.</a> J Neurol Sci. 284 (1-2), 10-17 (2009).</li><li>Denk, F., McMahon, S. B., Tracey, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+vulnerability:+a+neurobiological+perspective.">Pain vulnerability: a neurobiological perspective.</a> Nat Neurosci. 17 (2), 192-200 (2014).</li><li>Ji, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+impairment+in+pain+through+amygdala-driven+prefrontal+cortical+deactivation.">Cognitive impairment in pain through amygdala-driven prefrontal cortical deactivation.</a> J Neurosci. 30 (15), 5451-5464 (2010).</li><li>Jungehulsing, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Levetiracetam+in+patients+with+central+neuropathic+post-stroke+pain:+a+randomized,+double-blind,+placebo-controlled+trial.">Levetiracetam in patients with central neuropathic post-stroke pain: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial.</a> Eur J Neurol. 20 (2), 331-337 (2013).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53, 55-63 (1994).</li><li>Jay, T. M., Luciqnani, G., Crane, A. M., Jehle, J., Sokoloff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+local+cerebral+blood+flow+with+[14C]iodoantipyrine+in+the+mouse.">Measurement of local cerebral blood flow with [14C]iodoantipyrine in the mouse.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8 (1), 121-129 (1988).</li><li>Lu, H. C., Chang, W. J., Kuan, Y. H., Huang, A. C., Shyu, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+[14C]iodoantipyrine+study+of+inter-regional+correlations+of+neural+substrates+following+central+post-stroke+pain+in+rats.">A [14C]iodoantipyrine study of inter-regional correlations of neural substrates following central post-stroke pain in rats.</a> Mol Pain. 11 (1), (2015).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+brain+activation+during+retrieval+of+visceral+pain-conditioned+passive+avoidance+in+the+rat.">Functional brain activation during retrieval of visceral pain-conditioned passive avoidance in the rat.</a> Pain. 152, 2746-2756 (2011).</li><li>Wasserman, J. K., Koeberle, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+hemorrhagic+rat+model+of+central+post-stroke+pain.">Development and characterization of a hemorrhagic rat model of central post-stroke pain.</a> Neuroscience. 161 (1), 173-183 (2009).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

في الاختبارات السلوكية، أظهرت مجموعة CPSP تخفيض عتبة انسحاب مخلب في اختبار الألم الحراري والقوة الميكانيكية في اختبار فون فراي في الأساس والأسابيع 1 - كانت 5. النتائج متسقة مع دراسة سابقة 14 يعتمد [14 C] -IAP الطريقة على كثافة...

وقد تبين السكتة الدماغية نزيف تحدث في أكثر من 8٪ من المرضى الذين يعانون من ألم الأعصاب، ويشار إلى ألم ما بعد السكتة الدماغية كما المركزي (CPSP). 1-3 CPSP يمكن أن تنجم عن اختلال وظيفي الحسية الجسدية، وبالتالي إحداث فرط الحساسية وآلام جلدية. 4 ولكن ، لا تزال الآليات المرضية في جسم المريض من اختلال وظيفي الحسية الجسدية في CPSP غير مؤكدة. على سبيل المثال، وفقدان الأحاسيس الجسدية نتائج من إزالة التدفعات الواردة الخلايا العصبية في منطقة الدماغ النزفية. قد يكون سبب فرط التألم من فرط الاستثارية من الخلايا العصبية المركزية مسبب للألم أو إزالة التثبيط المركزي و 5 و 6 ولكن ركائز العصبية التي تشارك في الأعراض CPSP لا تزال مجهولة. وقد اقترحت بعض الدراسات أن قشرة الفص الجبهي ظهراني (dPFC)، منقاري الحزامية الأمامية القشرة (ACC)، اللوزة، الحصين، والرمادي المحيطة بالمسال (باغ)، منقاري النخاع بطني إنسي، وعلاقاتهم مع بعضهم البعض توسط معالجة مسبب للألم. 7 إضافيةعرضت لاي، سطي الفص الجبهي القشرة (mPFC) الدوائر -amygdala أن تشارك في إدراك الألم ذات الصلة. 8 بيانات حول الآليات الفيزيولوجية المرضية من CPSP هي متنوعة، وتفعيل ركائز العصبية في CPSP يحتاج إلى مزيد من التمحيص. يستخدم [14 C] -Iodoantipyrine (IAP) امتصاص لمراقبة غير مباشرة تدفق الدم إلى المخ الإقليمي (rCBF)، على افتراض وجود علاقة بين نشاط الدماغ والبرازيلي. على الرغم من [14 C] -IAP لا يمكن تقييم نشاط الدماغ في الوقت الحقيقي، كما هو الحال مع التصوير بالرنين المغناطيسي الوظيفي (fMRI)، لديها العديد من المزايا. على سبيل المثال، [14 C] -IAP هو مناسبة لقياس بشكل عفوي تحدث أحداث الدماغ أثناء الحالات المرضية. 9 وعلاوة على ذلك، يتم قياس [14 C] امتصاص -IAP بدون تخدير. يكلف أيضا أقل من أساليب التصوير الأخرى، بما في ذلك الرنين المغناطيسي الوظيفي والتصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني (PET). وقد اقترح [14 C] -IAP طريقة ليكون مناسبا لmeasurinز ألم عفوية (على سبيل المثال، CPSP) التي يسببها آفات النواة القاعدية البطنية (VB) من المهاد. 9 يصف هذا البروتوكول كيفية تنفيذ [14 C] -IAP طريقة لتقييم مشاركة ركائز العصبية من CPSP التي يسببها آفات VB من المهاد في نموذج حيواني. تقدم هذه التقنية وسيلة لتحديد الآليات المرضية التي تكمن وراء الأعراض CPSP على المستويات السلوكية والعصبية.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Anesthetic:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Halocarbon Products Corporation&amp;nbsp;</td><td>NDC 12164-002-25</td><td>4%</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Surgery&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>homeothermic blanket system</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Model 50&amp;ndash;7079</td><td>body temperature were maintained at 36.5 - 37.5 &amp;deg;C.</td></tr><tr><td>10 &amp;micro;l micro syringe</td><td>Hamilton</td><td>80008, Model 1701SN</td><td>injected with collagenase</td></tr><tr><td>polyethylene-50 tubing</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427411</td><td>catheterized into external jugular vein</td></tr><tr><td>1 c.c syringe</td><td>Terumo Medical Products</td><td>SS-01T</td><td>injected with &lt;sup&gt;14&lt;/sup&gt;C-IAP and saline.</td></tr><tr><td>saline (Sodium Chloride 0.9 gm)</td><td>Taiwan Biotech Co., LTD.</td><td>100-130-0201</td><td>To flush the tube</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Drugs&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>type 4 collagenase</td><td>Sigma</td><td>C5138-500MG</td><td>0.125 U</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma</td><td>G1264-250MG</td><td>6 mg/kg</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H9399</td><td>20 U/ml; 0.1 ml/day</td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;14&lt;/sup&gt;C-iodoantipyrine (IAP)</td><td>PerkinElmer</td><td>NEC712</td><td>125 mCi/kg in 300 ml of 0.9% saline</td></tr><tr><td>Potassium chloride</td><td>Merck</td><td>1.04936.1000</td><td>3 M</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Behavior system:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>von Frey esthesiometer</td><td>Fabrication Enterprises, Inc.</td><td>Baseline Tactile Monofilaments 12-1666</td><td>mechanical hyperalgesia was assessed by measuring the withdrawal response to a mechanical stimulus</td></tr><tr><td>plantar test apparatus</td><td>IITC Life Science</td><td>IITC 390G Plantar Test</td><td>Thermal hyperalgesia was assessed by measuring the hind paw withdrawal latency in response to radiant heat.</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Brain slice:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature compound</td><td>Sakura Fintek Inc</td><td>4583</td><td>embedded the brain</td></tr><tr><td>dry ice</td><td></td><td></td><td>frozen in dry ice/methylbutane (approximately &amp;minus;55 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>methylbutane</td><td>Sigma</td><td>M32631-1L</td><td>frozen in dry ice/methylbutane (approximately &amp;minus;55 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>&amp;nbsp;Leica Biosystems Nussloch GmbH, Germany</td><td>Leica CM1850</td><td>Coronal brain slice were sectioned on this machine.</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Data analyze&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>exposure cassettes with a phosphor screen</td><td>Amersham Biosciences&amp;nbsp;</td><td>20 cm x 25 cm</td><td>The slices were dried on glass slides and placed alongside five standard filter papers with graded radioactivity. All of the slides were exposed to the cassettes at &amp;minus;20 &amp;deg;C.</td></tr><tr><td>&amp;gamma;-counter</td><td>Beckman Coulter</td><td>Beckman LS 6500 Liquid Scintillation Counter</td><td>To measure the radioactivity count of the filter papers.</td></tr><tr><td>Typhoon 9410 Variable Mode Imager</td><td>&amp;nbsp;GMI, Inc.</td><td>WS-S9410</td><td>To read&amp;nbsp; phosphor screen which was exposed by brain slice</td></tr><tr><td>Statistical Parametric Mapping (SPM)</td><td>Wellcome Centre for Neuroimaging</td><td>version 8</td><td>all of the brains were averaged to create the final brain template. To determine significant differences between the images in these two groups, the images were derived by subtracting the sham group from the CPSP group.</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>http://imagej.nih.gov/ij</td><td>version 1.46</td><td>Adjacent sections were aligned both manually and using Stack- Reg, an automated pixel-based registration algorithm in ImageJ software. All of the original three-dimensionally reconstructed brains were smoothed and normalized to the reference rat brain model.</td></tr><tr><td>Matlab</td><td>MathWorks</td><td>version 2009b</td><td>used Pearson correlation coefficients to examine the relationships between the CPSP and sham groups. An inter-regional correlation matrix was calculated across animals from each group.</td></tr><tr><td>Pajek</td><td>http://Pajek.imfm.si/</td><td>version 3.06</td><td>Graphical theoretical analysis was performed on networks defined by the above correlation matrices using Pajek software.</td></tr></tbody></table>

autoradiographic measurements of [14c]-iodoantipyrine in rat brain following central post-stroke pain

Approximately 8% of stroke patients present symptoms of central post-stroke pain (CPSP). CPSP is associated with allodynia and hypersensitivity to nociceptive stimuli. Although some studies have shown that neuropathic pain may involve the dorsolateral prefrontal cortex, rostral anterior cingulate cortex, amygdala, hippocampus, periaqueductal gray, rostral ventromedial medulla, and medial thalamus, the neural substrates and their connections that mediate CPSP remain unclear. [14C]-Iodoantipyrine (IAP) uptake can be measured to evaluate spontaneously active pain. It can be used to assess the activation of neural substrates that may be involved in CPSP in an animal model. The [14C]-IAP method in rats is less expensive to perform compared with other brain mapping techniques. The present [14C]-IAP protocol is used to measure the activation of neural substrates that are involved in CPSP that is induced by lesions of the ventral basal nucleus (VB) of the thalamus in a rodent model.

الشكل 1A يصور الجدول الزمني التجريبي. تم تعيين الفئران إلى الشام والجماعات CPSP للاختبارات سلوكية (أي فون فراي اختبار وأخمصي اختبار). في اليوم الأول من التجربة بمثابة الأساس، وتكررت التجارب في الأسابيع 1 - تم تنفيذ 5. PE-50 قسطرة في الوريد الو...

Watch this Scientific Journal Video about Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain at JoVE.com

Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

We present a protocol to measure [14C]-iodoantipyrine (IAP) uptake and assess the activation of neural substrates that are involved in central post-stroke pain (CPSP) in a rodent model.

القياسات Autoradiographic من [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine في دماغ الفئران بعد البريد المركزي-السكتة الدماغية الألم

Approximately 8% of stroke patients present symptoms of central post-stroke pain (CPSP). CPSP is associated with allodynia and hypersensitivity to ...

autoradiographic-measurements-14c-iodoantipyrine-rat-brain-following

Research

JoVE Journal

Medicine

Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

8.7K Views.  Fo Guang University. We present a protocol to measure [14C]-iodoantipyrine (IAP) uptake and assess the activation of neural substrates that are involved in central post-stroke pain (CPSP) in a rodent model.

Video: Autoradiographic Measurements of [14C]-Iodoantipyrine in Rat Brain Following Central Post-Stroke Pain

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ischemia produces damage to specific brain regions shown to be highly sensitive to ischemia 1. Hippocampal neurons have higher sensitivity to ischemic insults compared to other cell populations, and specifically, the CA1 region of the hippocampus is particularly vulnerable to ischemia/reperfusion 2.
The design of therapeutic interventions, or study of mechanisms involved in cerebral damage, requires a model that produces damage similar to the clinical condition and in a reproducible manner. Bilateral carotid vessel occlusion with hypotension (2VOH) is a model that produces reversible forebrain ischemia, emulating the cerebral events that can occur during cardiac arrest and resuscitation. We describe a model modified from Smith et al. (1984) 2, as first presented in its current form in Sanderson, et al. (2008) 3, which produces reproducible injury to selectively vulnerable brain regions 3-6. The reliability of this model is dictated by precise control of systemic blood pressure during applied hypotension, the duration of ischemia, close temperature control, a specific anesthesia regimen, and diligent post-operative care. An 8-minute ischemic insult produces cell death of CA1 hippocampal neurons that progresses over the course of 6 to 24 hr of reperfusion, while less vulnerable brain regions are spared. This progressive cell death is easily quantified after 7-14 days of reperfusion, as a near complete loss of CA1 neurons is evident at this time.
In addition to this brain injury model, we present a method for CA1 damage quantification using a simple, yet thorough, methodology. Importantly, quantification can be accomplished using a simple camera-mounted microscope, and a free ImageJ (NIH) software plugin, obviating the need for cost-prohibitive stereology software programs and a motorized microscopic stage for damage assessment.

Bilateral carotid occlusion coupled with systemic hypotension produces global brain ischemia in the rat, resulting in damage to the hippocampus with reproducible severity. Animal subjects are impaired with predictable patterns of brain damage, they recover expediently, and mortality rates are comparatively low.

2 الأوعية الدموية الانسداد / انخفاض ضغط الدم: نموذج الفئران من نقص التروية الدماغية العالمية

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of all ischemic stroke patients suffer from PSD, a disorder considered to be an ischemic stroke-related precursor for increased death and degradation in health. The pathophysiology of PSD is still obscure. To study the mechanism of development and occurrence of PSD further, and to find out a therapy, we attempted to develop a new protocol that requires occluding the middle cerebral artery (MCA) via the internal carotid artery (ICA) in rats. This protocol describes a model of PSD induced in rats through the middle cerebral artery occlusion (MCAO). Also used in the experiment are the Porsolt forced swim test and the sucrose preference test to confirm and evaluate the depressive mood of the rats under investigation. Rather than inserting the catheter through the external carotid artery (ECA), as stipulated for the original procedure, this MCAO technique has the monofilament passing directly through the ICA. This MCAO technique was developed a few years ago and leads to a reduction in mortality and variability. It is generally accepted that the criteria used are preferred in the selection of biological models. The data obtained with this protocol show that this model of MCAO could be a way of inducing PSD in rats and could potentially lead to the understanding of the pathophysiology and the future development of new drugs and other neuroprotective agents.

Here we present a protocol to induce post-stroke depression in rats by occluding the middle cerebral artery via the internal carotid artery. We use the Porsolt forced swim test and the sucrose preference test to confirm and evaluate induced depressive moods.

أسلوب انسداد الشريان الدماغي الأوسط للحث علي الاكتئاب بعد السكتة الدماغية في الفئران

Post-stroke depression (PSD) is the most recurrent of all psychiatric complications resulting from an ischemic stroke. A greater majority (about 60%) of ...

Behavior

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

Neuroscience

Measurement of Glutamate Uptake using Radiolabeled L-[3H]-Glutamate in Acute Transverse Slices Obtained from Rodent Resected Hippocampus

Glutamate removal from the extracellular space by high-affinity Na+-dependent transporters is essential to ensure that the brain&#39;s intrinsic connectivity mechanisms work properly and homeostasis is maintained. The hippocampus is a unique brain structure that manages higher cognitive functions, and is the subject of several studies regarding neurologic diseases. The investigation of physiological and pathological mechanisms in rodent models can benefit from acute hippocampal slice (AHS) preparations. AHS has the advantage of providing reliable information on cell function since the cytoarchitecture and synaptic circuits are preserved. Although AHS preparations are commonly used in neurochemistry laboratories, it is possible to find some methodological differences in the literature. Considering that distinctive slice preparation protocols might change the hippocampal regions analyzed, this current protocol proposes a standard technique for obtaining transverse AHS from resected hippocampus. This simple-to-perform protocol may be used in mice and rats&#39; experimental models and allow several ex vivo approaches investigating neurochemical dynamics (in dorsal, intermediate and ventral hippocampus) in different backgrounds (e.g., transgenic manipulations) or after in vivo manipulations (e.g., pharmacological treatments or suitable rodent models to study clinical disorders). After dissecting the hippocampus from the rodent brain, transverse slices along the septo-temporal axis (300 &#181;m thick) were obtained. These AHS contain distinct parts of the hippocampus and were subjected to an individual neurochemical investigation (as an example: neurotransmitter transporters using their respective substrates). As the hippocampus presents a high density of excitatory synapses, and glutamate is the most important neurotransmitter in the brain, the glutamatergic system is an interesting target for in vivo observed phenomena. Thus, the current protocol provides detailed steps to explore glutamate uptake in ex vivo AHS using L-[3H]-Glutamate. Using this protocol to investigate hippocampal function may help to better understand the influence of glutamate metabolism on mechanisms of neuroprotection or neurotoxicity.

Measurement of Glutamate Uptake using Radiolabeled L-[3H]-Glutamate in Acute Transverse Slices Obtained from Rodent Resected Hippocampus

This article describes a reliable and simple way to obtain ex vivo acute hippocampal transverse slices from mice and rats using a tissue chopper. Slices obtained from resected hippocampi can be submitted for functional glutamate uptake analysis to investigate glutamatergic system homeostasis.

Glutamate removal from the extracellular space by high-affinity Na+-dependent transporters is essential to ensure that the brain&#39;s intrinsic ...

Biochemistry

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

التصوير غير الغازية وتحليل الدماغي نقص التروية في الفئران الحية عن طريق تقنية متقدمة في البوزيتروني مع<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the development of effective therapeutics. Intracranial pharmacology presents an important tool for understanding the molecular and cellular mechanisms of pain in the brain, as well as for novel treatments. Here we present a protocol that integrates intracranial pharmacology with pain behavior testing. Specifically, we show how to infuse analgesic drugs into a select brain region, which may be responsible for pain modulation. Furthermore, to determine the effect of the candidate drug in the central nerve system, pain assays are performed after intracranial treatment. Our results demonstrate that intracranial administration of analgesic drugs in a targeted region can provide relief of pain in rodents. Thus, our protocol successfully demonstrates that intracranial pharmacology, combined with pain behavior testing, can be a powerful tool for the study of pain mechanisms in the brain.

Here we present a protocol to perform intracranial pharmacological experiments followed by pain behavior assays in rodents. This protocol allows researchers to deliver molecular and cellular targets in the brain, for pharmacologic agents in the treatment of pain.

العلاج الصيدلاني داخل الجمجمة وفحوصات الألم في القوارض

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

Quantitative Autoradiographic Method for Determination of Regional Rates of Cerebral Protein Synthesis In Vivo

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it is thought that dysregulation of protein synthesis in the nervous system may be a core phenotype in some developmental disorders. Accurate measurement of rates of cerebral protein synthesis in animal models is important for understanding these disorders. The method that we have developed was designed to be applied to the study of awake, behaving animals. It is a quantitative autoradiographic method, so it can yield rates in all regions of the brain simultaneously. The method is based on the use of a tracer amino acid, L-[1-14C]-leucine, and a kinetic model of the behavior of L-leucine in the brain. We chose L-[1-14C]-leucine as the tracer because it does not lead to extraneous labeled metabolic products. It is either incorporated into protein or rapidly metabolized to yield 14CO2 which is diluted in a large pool of unlabeled CO2 in the brain. The method and the model also allow for the contribution of unlabeled leucine derived from tissue proteolysis to the tissue precursor pool for protein synthesis. The method has the spatial resolution to determine protein synthesis rates in cell and neuropil layers, as well as hypothalamic and cranial nerve nuclei. To obtain reliable and reproducible quantitative data, it is important to adhere to procedural details. Here we present the detailed procedures of the quantitative autoradiographic L-[1-14C]-leucine method for the determination of regional rates of protein synthesis in vivo.

Protein synthesis is&#160;a critical biological process for cells. In brain, it is required for adaptive changes. Measurement of rates of protein synthesis in the intact brain requires careful methodological considerations. Here we present the L-[1-14C]-leucine quantitative autoradiographic method for determination of regional rates of cerebral protein synthesis in vivo.

طريقة الأوتوراديوغرافية الكمية لتحديد المعدلات الإقليمية لتخليق البروتين الدماغي في فيفو

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it ...

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide critical insights into the temporal dynamics and role of certain neuroimmune interactions in stroke. Specifically, Positron Emission Tomography (PET) imaging of translocator protein 18 kDa (TSPO), a marker of activated microglia and peripheral myeloid-lineage cells, provides a means to detect and track neuroinflammation in vivo. Here, we present a method to accurately quantify neuroinflammation using [11C]N,N-Diethyl-2-[2-(4-methoxyphenyl)-5,7-dimethylpyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]acetamide ([11C]DPA-713), a promising second generation TSPO-PET radiotracer, in distal middle cerebral artery occlusion (dMCAO) compared to sham-operated mice. MRI was performed 2 days post-dMCAO surgery to confirm stroke and define the infarct location and volume. PET/Computed Tomography (CT) imaging was carried out 6 days post-dMCAO to capture the peak increase in TSPO levels following stroke. Quantitation of PET images was conducted to assess the uptake of [11C]DPA-713 in the brain and spleen of dMCAO and sham mice to assess central and peripheral levels of inflammation. In vivo [11C]DPA-713 brain uptake was confirmed using ex vivo autoradiography.

PET Imaging of Neuroinflammation Using [11C]DPA-713 in a Mouse Model of Ischemic Stroke

Positron Emission Tomography (PET) imaging of translocator protein 18 kDa (TSPO) provides a non-invasive means to visualize the dynamic role of neuroinflammation in the development and progression of brain diseases. This protocol describes TSPO-PET and ex vivo autoradiography to detect neuroinflammation in a mouse model of ischemic stroke.

الحيوانات الأليفة تصوير نيوروينفلاميشن استخدام [11ج] اتفاق دارفور للسلام-713 في نموذج الفأر من السكتة الدماغية

Neuroinflammation is central to the pathological cascade following ischemic stroke. Non-invasive molecular imaging methods have the potential to provide ...

Autoradiography as a Simple and Powerful Method for Visualization and Characterization of Pharmacological Targets

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The method is based on the specific binding of a radioligand to its biological target. Therefore, frozen tissue sections are incubated with radioligand solution, and the binding to the target is subsequently localized by the detection of radioactive decay, for example, by using photosensitive film or phosphor imaging plates. Resulting digital autoradiograms display remarkable spatial resolution, which enables quantification and localization of radioligand binding in distinct anatomical structures. Moreover, quantification allows for the pharmacological characterization of ligand affinity by means of dissociation constants (Kd), inhibition constants (Ki) as well as the density of binding sites (Bmax) in selected tissues. Thus, the method provides information about both target localization and ligand selectivity. Here, the technique is exemplified with autoradiographic characterization of the high-affinity &#947;-hydroxybutyric acid (GHB) binding sites in mammalian brain tissue, with special emphasis on methodological considerations regarding the binding assay parameters, the choice of the radioligand and the detection method.

The method of autoradiography is routinely used to study binding of radioligands to tissue sections for determination of qualitative or quantitative pharmacology.

أوتوراديوجرافي كطريقة بسيطة وقوية للتصور وتوصيف الأهداف الدوائية

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

قياس الوذمة الدماغية بعد السكتة الدماغية، منطقة إنفاركت وانهيار حاجز الدم والدماغ في مجموعة واحدة من عينات الدماغ القوارض

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

القياسات Autoradiographic من [

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video