MC Schiewe רוצה להודות למר יער גארנר במרכז הפריון של לאס וגאס עבור המומחיות הסטטיסטית שלו בניתוח והערכת נתוני CDC ו סארט שנתיים. כמו כן, המחברים מבקשים להודות המנהל הרפואי שלהם, ד&quot;ר רוברט אנדרסון, על התמיכה והאמונה המסורים שלצדו ביכולות שלנו הטכניות ומומחיות.

<ol>
	<li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+appraisal+of+cryopreservation+(slow+cooling+versus+vitrification)+of+human+oocytes+and+embryos.">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li><li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos.">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li><li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+historic+development+and+incorporation+of+four+assisted+reproductive+technologies+shaping+today's+IVF+industry.">The historic development and incorporation of four assisted reproductive technologies shaping today's IVF industry.</a> J. Fertil. In Vitro Reprod. Med. Genet. 4, 2-9 (2016).</li><li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196+degrees+C+by+vitrification.">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li><li>Rall, W. F., Wood, M. J., Kirby, C., Whittingham, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification.">Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> J. Reprod. Fertil. 80, 499-504 (1987).</li><li>Schiewe, M. C., Rall, W. F., Stuart, L. D., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cryoprotectant,+cooling+rate+and+in+situ+straw+dilution+using+conventional+freezing+or+vitrification+for+cryopreserving+sheep+embryos.">Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ straw dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos.</a> Theriogenology. 36, 279-293 (1991).</li><li>Lane, M., Schoolcraft, W. B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique.">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li><li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts.">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 21, 3246-3252 (2006).</li><li>Kuwayama, M., Vatja, G., Ieda, S., Kato, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+open+and+closed+methods+for+vitrification+of+human+embryos+and+elimination+of+potential+contamination.">Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and elimination of potential contamination.</a> Reprod. Biomed. Online. 11, 608-614 (2005).</li><li>Vanderzwalmen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births+after+vitrification+at+morula+and+blastocyst+stages:+effect+of+artificial+reduction+of+the+blastocoelic+cavity+before+vitrification.">Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification.</a> Hum. Reprod. 17, 744-751 (2002).</li><li>Schiewe, M. C., Marco-Jim&#233;nez, F., AkdemirKo&#231;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+factors+influencing+the+successful+and+reliable+implementation+of+oocyte+and+embryo+vitrification.">Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification.</a> Cryopreservation. , (2016).</li><li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+safe,+simple,+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts.">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. Online. 17, 360-367 (2008).</li><li>Panagiotidis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+versus+closed+vitrification+of+blastocysts+from+an+oocyte-donation+programme:+a+prospective+randomized+study.">Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 470-476 (2013).</li><li>Papatheodorou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+versus+closed+oocyte+vitrification+system:+a+prospective+randomized+study.">Open versus closed oocyte vitrification system: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 595-602 (2013).</li><li>Schiewe, M. C., Zozula, S., Anderson, R. E., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+microSecure+vitrification+(&#181;S-VTF)+for+the+effective+cryopreservation+of+human+embryos+and+oocytes.">Validation of microSecure vitrification (&#181;S-VTF) for the effective cryopreservation of human embryos and oocytes.</a> Cryobiology. 71, 264-272 (2015).</li><li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroSecure+vitrification+for+oocytes+and+embryos:+optimum+simplicity,+security+and+cost+and+effectiveness+combining+FDA-approved+products.">MicroSecure vitrification for oocytes and embryos: optimum simplicity, security and cost and effectiveness combining FDA-approved products.</a> J. Clin. Embryol. 13, 33-51 (2010).</li><li>Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+survival+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification.">Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> Cryobiology. 24, 387-402 (1987).</li><li>Seki, S., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+warming+rate+on+the+survival+of+vitrified+mouse+oocytes+and+on+the+recrystallization+of+intracellular+ice.">Effect of warming rate on the survival of vitrified mouse oocytes and on the recrystallization of intracellular ice.</a> Biol. Reprod. 79, 727-737 (2008).</li><li>Schiewe, M. C., Stringfellow, D. A., Givens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+hygiene+and+quality+control+practices+in+an+embryo-production+laboratory.">General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory.</a> Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions. , (2008).</li><li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation.">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. Genet. , (2016).</li><li>Liebermann, L., Conaghan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+collapse+prior+blastocyst+vitrification:+improvement+of+clinical+outcomes.">Artificial collapse prior blastocyst vitrification: improvement of clinical outcomes.</a> J. Clin. Embryol. 16, 107-118 (2014).</li><li>Parmegiani, L., Tatone, C., Cognigni, G. E., Bernardi, S., Troilo, E., Arnone, A., Maccarini, A. M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes:+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol.">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li></ol>

MC Schiewe מכהן כחבר מועצת המנהלים המייעצת המדעית חברות Cryo חדשני כדירקטור טכני אל בשירותיו של בנק זרע קליפורניה. הפקה של מאמר וידאו זה שולמה על ידי פוריות Ovation. יש המחברים אין הסכמים פיננסיים מתחרים או ניגודי עניינים לחשוף לגבי vitrification של גמטות ועוברים.

היום, קיימת ציפייה גבוהה של השגת הישרדות הבלסטוציסט מלאה (&gt; 95%) והשיג הצלחת השתלה דומה לזה של עוברים טריים. קבוצות אחדות הציעו כי שיעורי לידת חי מחזורי חזרת עוברת מזוגגים הם אולי אפילו גבוהים יותר מאשר blastocysts הטרי כאשר העובר cryopreserved שלמים המושתל לתוך רחם בריא, שאינו הורמונלי מגורה. הנתונים שלנו מצביעים בבירור כי vitrification ביעילות ובאמינות שומרת את הכדאיות של העובר הטרי. יתר על כן, הוכחנו כי ספטית שלנו, שיטה סגורה, שנקרא vitrification MicroSecure (מיקרו-שניות-VTF), יכול להשיג תוצאה אופטימלית דומה או גדול יותר סטנדרטים מסחריים (כלומר, מערכות המכשיר פתוח) המשמש בתעשיית IVF. וריאציה קשורה דירות טכניות ואמינות בין אנשים באמצעות שפע של מכשירי vitrification / שיטות. לעומת זאת, זה הביא inconsistencies בין תוכניות החלת vitrification. לכן, אין זה מפתיע כי היכרות מכשיר הוא גורם חשוב לגבי בקיאות מעבדה ותוצאות מוצלחות. זהו זה רעיון של &quot;חתימה טכנית&quot; 11 זה מסביר למה דירות בין התוכניות עשויות להיות בעייתיות. לא רק יש את הפיתוח של יותר מתריסר מכשירים מסחריים מסובך תופעה זו, זה יצר בעיות בקרת איכות. למרבה המזל, סגור מערכות vitrification, כמו מיקרו-שניות-VTF, ראפיד-לי, וכאילו VitriSafe, נמצאים כעת להוכיח להיות יעיל באותה מידה לפתוח מערכות המכשיר 12, 13, 14. MicroSecure VTF היא טכניקת vitrification רומן, מזוהם פתחה בקלות טכנית, אמינות, אבטחת קריו בראש. על ידי שילוב של השימוש בשני-שאושרו בעבר, התקני ה- FDA תואמים, מדוברת במערכת vitrification לא מסחרי wה- i היתרון המובהק של בעל עלות נמוכה הוקמה, בניגוד התקנים מיוחדים. בנוסף, tamperproof הייחודי מערכת תיוג הכפולה בצבע הפנימה, כמו גם יתרונות בקרת איכות רבות אחרים, הפכו מיקרו-שניות-VTF 11 אפשרות העולמית אטרקטיבית. בתור מכשיר VTF שאינו מסחרי, עם זאת, יישום התעשייה הענף שלה מתפתח לאט. רק דרך המשך פרסום של בטיחות, ביטחון, ואת היעילות הקלינית תרוויח מיקרו-שניות-VTF גדל ניצול. בחודש אוגוסט 2014, כאשר הוא מתמודד עם חוסר היכולת לרכוש את קש העובר 0.3 מ&quot;ל המקורי מיוצרים עם תקע הידרופובי הפנימי, הלא הפתילה, הצלחנו לשנות את השיטה מיקרו-שניות-VTF באופן מהימן. בקיצור, קשיות 0.3 מ&quot;ל זרע / העובר החדש עם אטמי כותנה-PVP שלהם הותאמו ביעילות. זו הושגה פשוט על ידי יצירת חותם פנימי לפני תקע הכותנה, ובכך למנוע מגע נוזל הפתילה עםפתוח קצה VTF (כלומר, flexipette המכיל את העובר או ביצים). יתר על כן, אם מוטות מזהים 40 מ&quot;מימ אינן נגישות, נושא הציפה הקשורים מוטה 30 המ&quot;מ הבהיר ניתן counterweighted באמצעות שני מיסבים. צעדים נוספים אלה הפכו את הטכניקה מעט פחות פשוטה, אבל עדיין יעיל מאוד. היום, כלכלה ויעילות הופכות דאגות חשובות יותר ויותר, כמו blastocysts ביופסיה בדרך כלל מזוגגות בנפרד, עד מצב euploidy שלהם הוא אשר על דו&quot;ח גנטיקה. Blastocysts עם מעמד aneuploidy לא-ישים אשר בדרך כלל נמחק, בהסכמת מטופל, תוך מספר שבועות. כך, רוב (&gt; 50%) של התקני VTF מבוטלים לאחר אחסון לטווח קצר, גרימת בעלות שנתית הסלמה כאשר משתמשים במכשירים מסחריים. בסך הכל, מיקרו-שניות-VTF היא הליך מאוד יעיל, אמין, הדיר עבור cryopreservation של blastocysts האדם. Securel עיצוב בקרת איכות מעולהתוויות y ובבטחה המאחסן עובר / ביציות תוך ביטול כישלון התאוששות ואופטימיזציה הישרדות כדאיות מחממים פוסט, אשר מצדיקה את השימוש של המערכה כגישה אוניברסלית vitrification העובר.

Vitrification הוא טיפולי פוריות השפעה ביותר יחיד הפריה חוץ גופית (IVF) בתעשייה מאז הפיתוח של הזרקת זרע intracytoplasmic. היום, blastocysts הוא cryopreserved ללא אובדן כדאיות עובר הקשורים בעבר עם שיטות קונבנציונליות איטית-הקפאת 1. עם הישרדות העובר שלאחר התחממות אמינה, תעשיית הפוריות הוא והפכה את השימוש המועדף של מחזורי חזרת עוברת cryopreserved, אשר להניב תוצאות הריון דומות או גבוהות יותר עוברים טריים מסורתיים. בשיתוף עם ביופסיה הבלסטוציסט והקרנה גנטית preimplantation (PGS), vitrification הפך לכלי קליני חיוני להשגת תוצאות אופטימליות לידת חי בריאה באמצעות העברה עוברים יחיד euploid 2, 3. Vitrification העובר Murine פותח באמצע 1980 4, </sup&gt; 5 ומותאמת חקלאות בעלי חיים ב -1990 6. בהתבסס על ההנחה כי פתרונות vitrification להקים מדינת glasseous metastable, ללא פגיעת היווצרות קרח קריסטל, היא הוכיחה בצורה יעילה יותר לשמור על שלמות הסלולר השלמה של עוברים. מעניין לציין, כי קבלת המבטיח של vitrification לתוך אמבריולוגיה אדם לא החלה להתממש עד המאה ה -21. פרסומים מוקדמים קידום שימוש vitrification התרחשו במקביל להתפתחותה של התקני מערכת &quot;פתוחים&quot; ייחודיים 7, 8, 9. עם זאת, אימוץ vitrification לתוך פרקטיקה קלינית היה איטי, כפי שהוא בא בזמן שיפורי הקפאת הבלסטוציסט איטי גם התרחשו. הקפאה איטית ממדרגה קונבנציונלית מוצלחת, בנוסף vitrification, העולה בקנה אחד עם שיפורים במערכות תרבות העוברת, כמו גם עם incorporatיון של גישות blastocoele-קורסת, שהגדיל את רמת ההישרדות הכוללת הן של trophectoderm, ולאחר מכן, השתלה 10. בעשור האחרון, טכנולוגיית vitrification החליפה שיטות הקפאה קונבנציונליות במהירות. במידה רבה, זה היה עקב ההתפתחות של מכשירי vitrification מיוחדים. יתכן שחלק מהמכשירים הללו נכה הבטיחות, היעילות הכוללת של vitrification הקליני על ידי החדרת פגמים בעיצוב טבועים מכשירים המשמשים בתעשיית IVF 11. ואכן, את הדקויות של מכשירים שונים להציג וריאציה טכנית משמעותית בין תוכניות, המכונית גם &quot;חתימות טכניות&quot; 12. לפיכך, כתבי עת מדעיים, כמו Journal of ניסויים דמיינו (יופיטר), יכול לשמש משאב יקר ערך עבור הוכחת פרטים טכניים, אשר יסייע להפחית וריאציה התוצאה. בעיה מתמשכת נוספת היא כי הסעיףשתי embryologists ממשיך להיות מידע מוטעה, גם היום, על בסיס הטענות כי &quot;קירור אולטרה-המהיר של עוברים או ביציות בתוך &#39;מערכת vitrification פתוחה&quot; (כלומר, קשר עובר ישיר עם חנקן נוזלי (LN 2)) הוא תנאי הכרחי כדי אופטימיזציה אחוזי הצלחה. &quot; האמונה ברורה, זה לא מדויק, מבוסס על ההצלחה המוכחת של ספטית סגורת מערכות 13, 14, 15. בהתבסס על עקרונות cryobiological של vitrification, את היעילות של vitrification היא יותר גבוה בהתחשב בשעורי התחממות מאשר על קירור שיעורים 16, 17, 18. באופן כללי, ללא תלות בהתקן vitrification בשימוש, שיעור ההתחממות יעלה את קצב הקירור להבטיח בהישרדותם. שיעורי התחממות גבוהים למזער את ההזדמנות עבור כל צמיחת קרח (כלומר, recrystallization של זיהומים בעלי גרעין בפתרונות-קריו) בשלב devitrification של ההתחממות. אמנם, יציבות פתרון vitrification (כלומר, הסוג וריכוז סוכני cryoprotective בשימוש) עשויה להיות השפעה מבלבלת, אבל זה מופנה בפרסום נפרד 11. בהתחשב בעיות קצב הקירור מחמם, vitrification MicroSecure (מיקרו-שניות-VTF) פותחה בשנת 2008 שיטה זולה, לא מסחרי, FDA תואמי אופטימיזציה ההיבטים-בקרת איכות של vitrification. זה היה ייחודי בכך שהוא הציע לחבל הוכחה, הפנים, תיוג כפול בצבע. יתר על כן, על ידי טעינה ואחסון עובר ישירות flexipette סטרילי משמש pipetting (כלומר, ללא pipetting למשטח התקן משני) ועל ידי שימוש בקשיות ionomeric-שרף לחלוטין חותם לרתך באמצעות אוטם אוטומטי, וריאציה טכנית מוגרת ביעילות. בהערכות גompleteness של מכשירי vitrification לשימוש פוטנציאלי, ישנם גורם בקרת איכות כמה שצריך להילקח בחשבון, כולל: 1) תיוג תוויות &quot;בסדר.&quot; &quot;החנות פוטנציאל להיות דבקות בצורה מאובטחת? האם הם tamperproof? האם הם מציעים פוטנציאל זיהוי כפול צבע? האם זה דורש תווית משנית, והוא יכול התווית להסירו בקלות לצורכי רישום ומעקב (כלומר, אימות חולה) שלאחר ההתחממות? 2) בקלות טכנית עוברת &quot;בסדר.&quot; &quot;החנות לטעון בקלות לתוך / על גבי המכשיר במועד וזיהה פשוט ואיתר מחמם פוסט? 3) פשטות פרוצדורלי / נשנה -Does פשטות הצעת vitrification השיטה ואמינות המאפשרת בקלות עבור דירות, אשר ממזערת את השונות בין טכנאים (פנימיים) ותוכניות (חיצוניות)? 4) קיבולת אחסון LN 2 &quot;בסדר.&quot; &quot;החנות המכשירים להיות בקלות ובבטחה טיפל וזיהה? האם שלהם STOזעם פוטנציאל המרחב ביותר? האם מציעים אבטחה ובטיחות המכשיר מפני נזק פיזי או מזהמים אפשריים כמערכת סגורה ספטית? 5) פוטנציאל Recovery / שרידות -זה עיצוב המכשיר נוטה בעיות פוטנציאליות בהתאוששות המובטחת של עוברים, האם הם מהימנים לַהֲפוֹך לִזְכוּכִית ולשמור שלמויות הסלולר להשלים מחמם פוסט? חשש האיכות הספציפית האחרון, קצב ההתאוששות, למעשה מוזער מפתיע בדוחות שפורסמו; זה נעשה על ידי הסתרת התוצאה השלילית בדרך כלל (כלומר, עובר או ביצה אבודות) בשיעורי הישרדות בדרך כלל-טובים. כל מכשיר נוטה להחלמה עקבית (&lt;99%) הוא פגום ברצינות מהווה התחייבות פרוצדורליים. ספטית, נסגרה שיטה מיקרו-שניות-VTF פותחה אסטרטגית לתת דין וחשבון על כל מידה בקרת איכות. עם זאת, לאחר 5 שנים של הצלחה קלינית מעולה ואימות 14, ההליך היה לאo להיות שונה. הקשיות העובר 0.3 מ&quot;ל המקורי (בעל תקע הידרופובי) הוסרו מתעשיית IVF והחליפו עם קש זרע 0.3 מ&quot;ל בעל תקע סטנדרטי כותנה / PVP (כלומר, relabeled כקש זרע / העובר). נייר פרוצדורליים זה מתאר את הצעדים ואסטרטגיות הספציפיים הדרושים כדי ליישם מיקרו-שניות-VTF בבטחה, בפשטות, ביעילות. יתר על כן, אנו מדגישים את השינוי (ים) צריך לתת דין וחשבון מהימן עבור מגבלות היצע, עד הזמן אפשר אריזת קש אידיאלית חלופית מחדש בחזרה למעבדה הקלינית.

<table><tbody><tr><td>Aluminum Cane</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>Ball bearings, 3/32&quot;</td><td>VXB.com</td><td>KIT15977</td><td>stainless steel</td></tr><tr><td>CBS semen/embryo straw, 0.3 mL</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td><td>individual sterile</td></tr><tr><td>Color, ID rods, 30 mm</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td><td>weighted</td></tr><tr><td>Culture tubes, 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td>Conical</td></tr><tr><td>Culture tubes, 10 mL</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td>Snap-cap</td></tr><tr><td>Cryosleeves</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Filter, 250 mL</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0.22 &amp;mu;m</td></tr><tr><td>Flasks, Tissue Culture 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Flexipettes, 300 &amp;mu;m ID</td><td>Cook Med.</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>Sterile, 20/pack</td></tr><tr><td>Forcep, Large</td><td>Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>Forcep, Splinter - fine</td><td>Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>Goblet</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>Heat Sealer, SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V or 220 V with adapter</td></tr><tr><td>Hepes-buffered media&amp;nbsp;</td><td>Life Global or</td><td>LGGH-100; 100&amp;nbsp;mL, or</td><td>stored at 2 - 8 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 mL</td><td>with non-essential AA&#039;s</td></tr><tr><td>Labels, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td>Various colors</td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen Tank, 40&amp;nbsp;L</td><td>MVE or Taylor Warton</td><td>various</td><td>liquid storage&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>LN&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; Dewar flask, 0.5&amp;nbsp;L</td><td>Hampton Research</td><td>HR4-695</td><td>Stainless steel</td></tr><tr><td>6-well Custer Dishes</td><td>Biogenics</td><td>015/020</td><td>plasticware by case</td></tr><tr><td>Pipette Bulb, Micro Cap</td><td>Drummond</td><td>Fisher#13681451</td><td>Hole on bulb apex</td></tr><tr><td>Petri Dishes, 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 58 mm</td><td>Nunc</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tips, ART long</td><td>Fisher Sci.</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 &amp;mu;L</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond or Falcon</td><td>various</td><td>rechargeable</td></tr><tr><td>Pipetting Device, Stripper</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 1&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 2&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 5&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 10&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>Scissors, Surgical Mayo</td><td>Miltex</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Nikon, Olympus, Leica</td><td>various</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Gauze pads, 4&quot; x 4&quot;</td><td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic serum</td><td>Life Global, or</td><td>LGPS-20; 20 mL, or</td><td>stored at 2 - 8 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 mL</td><td>purchase low endotoxin lot</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Chemical Co.</td><td>#S9378</td><td>Aliquot into 50&amp;nbsp;mL flasks, 1 year;&lt;br/&gt;
17.1 g/flask + Medium to 50 mL;&lt;br/&gt;
makes a 1 M solution;&lt;br/&gt;
Filter with 0.22 &amp;micro;m unit</td></tr><tr><td>Timer</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Thawing Solution</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-TS (&amp;le;1.0 M Sucrose)</td><td>T1, T2, T3, T4; tored at 2 - 8 &amp;ordm;C for &amp;le;1 month after opening</td></tr><tr><td>Vitrification Solution*,**</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&amp;ge;7.9 M [Glycerol/EG])</td><td>V1, V2, V3; stored at 2 - 8 &amp;ordm;C for &amp;le;1 month after opening</td></tr><tr><td colspan="4">* Non-permeating cryoprotective additives may include: sucrose, ficoll and sodium hyaluronate&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">** Other commercial preparations are typically ethylene glycol (EG)/dimethyl sulfoxide (DMSO; 30% v/v; 4.8 M), but could be EG/propylene glycol (32% v/v; 5.2 M). Mixed solutions are typically used to reduce cryo-toxicity concerns of a high molar solution. Commercial solutions typically include an ES and VS solution. The formulation of commercial preparation is typically proprietary property.</td></tr></tbody></table>

modified microsecure vitrification: a safe, simple and highly effective cryopreservation procedure for human blastocysts

Vitrification עובר קליני התפתח עם התפתחות מכשירי vitrification ייחודיים במאה ה -21 ועם התפיסה המוטעית כי קירור אולטרה-מהיר מערכת &quot;פתוחה&quot; (כלומר, מגע ישיר LN 2) היה הכרח כדי לייעל הצלחת vitrification. הדוגמא סביב חשיבות שיעורי קירור הובילה נהלי שימוש לא בטוחים נתונים לשינויים טכניים ליצירת התקני vitrification כי התעלמו גורמי בקרת איכות חשובות (למשל, קל שימוש, דירות, אמינות, אבטחת תיוג, ובטיחות אחסון). הבנת הליקויים-בקרת איכות של מכשירים אחרים אפשר את התפתחותה של שיטה בטוחה ומאובטחת, הדיר, ואמין מיקרו-שניות-VTF שמטרתה למזער וריאציה התוך והבין-טכנאי. לא פחות חשוב, זה בשילוב הזמין של שני מכשירים FDA תואמים קיימים: 1) קשית עובר שרף 0.3 מיליליטר ionomeric עם הפנים, כפול בצבע, לחבל-pתיוג גג עם פוטנציאל חותמים לרתך דיר; ו -2) קצר, נפוץ בשימוש, 300 מיקרומטר מזהה flexipettes סטרילי כדי לטעון את העובר ישירות (ים) כדי ליצור מכשיר vitrification העולמי יעיל. כמו-ספטית אחרים, סגור מערכות vitrification (למשל, vitrification אבטחה גבוהה (HSV), ראפיד-i, ו VitriSafe) להשתמש ביעילות ברפואה הרבייה, vitrification microSecure (מיקרו-שניות-VTF) הוכיחה שהיא יכולה להשיג הישרדות והריון שלאחר התחממות גבוהה תוצאות עם לידיעתה לפשטות, וריאציה טכנית מופחתת. למרות קש העובר 0.3-מ&quot;ל המכיל תוסף הידרופובי הפנימי הוחלף מסחרית עם קשית זרע סטנדרטי בעל כותנה-פוליוויניל pyrrolidone (PVP) תקעים, שמרה על הרכב שרף ionomeric להבטחת איטום לרתך. עם זאת, אטמי כותנה יכול הפתיל את תכולת נוזל העובר של flexipettes לנוגע בהם. שיטה שונה מיקרו-שניות-VTF הותאמה לכלול לרתך פנימיות נוספותלאטום לפני תקע בצד טעינת המכשיר. השלב הטכני הוסיף לנוהל מיקרו-שניות-VTF לא השפיע יישום מוצלח שלה, כמו בהישרדותם (&gt; 95%) ושיעורי ההריון ממשיכים היום.

1,341 blastocysts מזוגגת היו מחוממים בין השנים 2012 עד יוני 2014, ו 1,341 עוברים התאושש (100%) בעוד 1,316 שרדו (98.1%). blastocysts ביופסיה חווה במהלך הישרדות 99.5%. עם העברת יחיד, גנטי נבדק בעיקר, euploid, עובר מזוגג, הצלחנו להשיג חלק משיעורי ההשתלה הגבוה ביותר ושיעורי לידת חי בארצות הברית, ללא קשר לגיל (איור 3) 20, על פי סטטיסטיקה לאומית האחרונה דווחה על ידי המרכז לבקרת מחלות וחברת טכנולוגיות רביית Assisted (לוחות 1 ו -2). הערכת אוכלוסייה חולה פרוגנוזה טובה (פחות מ 35 שנים) לאופני cryopreserved לבד (טבלת 1), במעבדה שלנו ביצועים טובים יותר מהממוצע הארצי הוא שיעורי ההשרשה (כלומר, את היעילות של עובר להקים הריון) ובסופו של דבר לחיות שיעורי ילודה<html> על ידי למעלה מ -30%. בנוסף, אימות / אימות ראשו של קשיות האחסון השונות שלנו באמצע -2014 באמצעות 70 blastocysts מחקר הסכים, מחדש מזוגגים aneuploid הביאה התאוששות של 100% ו -100% הישרדות. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg" /> איור 1. הגדרת MicroSecure VTF. מנת VTF (א) מורכבת עם 3 שורות נפרדות של פתרונות vitrification, אשר מנצלות 3 טיפות לשטוף לפני השמה בטיפות החזקה ברורות, ממוספרות. בנוסף, טפטפות פרט עם טיפי VTF מקוצרים (כלומר, 300 מיקרומטר מזהה flexipettes) מובטחות ומאורגנות מתל צינור קלקר (B), אשר ניתן לסובב לשימוש מסודר. שימו לב הרכבת pipetting micropipette נורה פנויה נציג נחה על מדף הקלקר.<html> arget = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg" /> איור 2. השתנה הבלסטוציסט דירוג המערכת. המערכת לדירוג הבלסטוציסט גרדנר שלנו שונה מהווה פריצת המושרה של תאי TE כדי להקל ביופסיה הבלסטוציסט. שינוי רואה הבקיעה המוקדמת של blastocysts המלא (A: כיתה 3 = פחות מ בקיע 10%) ו blastocysts המורחב (B: כיתה 4 = עד 50% בקיעים), בעוד הבלסטוציסט בקיע (C) יש יותר מ -50% בקיעים 16. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 54871fig3.jpg &quot;/&gt; איור 3. תוצאות הריון השוואתיות. במהלך מרווח 1.5 שנתי מצטבר, נתונים ההריון הושוו להעריך את ההשפעות של העברת blastocysts euploid מזוגגת חימם (n = 172 מחזורים / 144 העברות) לעומת מחזורי שאינו PGS (n = 160 מחזורים / 153 העברות) מעורבים בעיקר טרי מעביר 18. לצורך הניסוי שלנו, נתונים אלה עולה בבירור כי blastocysts ביופסיה מזוגגת ידי הליך מיקרו-שניות-VTF לשמור על כדאיות שלהם. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מקור מידע </td><td> מחזורים # </td><td> Mean # של עוברי העבירה </td><td> מחירי השרשה (%) </td><td> מחירי לידת חי (%) </td></tr><tr><td> מעבדת NB * </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00% </td><td> 74.50% </td></tr><tr><td> לאומי ממוצע </td><td> 20,423 </td><td> 1.7 </td><td> 39.60% </td><td> 44.10% </td></tr><tr><td colspan="5"> * נתונים היו בממוצע מבוסס על ביצועי 2014 פוריות אורנג &#39;קאונטי, מרכז פוריות דרום קליפורניה והמרכז דרום קליפורניה עבור מרפאות לרפואת פוריות באמצעות המעבדה לפוריות Ovation הנוכחי (Lab NB) אשר ייסד את ההליך vitrification microSecure בשנת 2008. </td></tr></tbody></table> לוח 1. 2014 CDC Assisted Reproductive לסטטיסטיקה. נתוני הריון העובר העברה קפוא של נשים מתחת לגיל 35 שנים משלוש דיווח מרפאות רופא בעזרת מעבדת NB שלנו בהשוואה לממוצע הלאומי של ארה&quot;ב 2013 של מעל 450 מרפאות דיווח. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> הממוצע הארצי סארט </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> מרפאת - מדינה </td><td> נשים </td><td> נשים </td><td> נשים </td><td> נשים </td></tr><tr><td></td><td> &lt;35 yrs </td><td> 35-37 yrs </td><td> 38-40 yrs </td><td> 41-42 yrs </td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63.1% </td><td> 58.3% </td><td> 40.6% </td><td> 32.3% </td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64.7% </td><td> 61.5% </td><td> 40.4% </td><td> 32.2% </td></tr><tr><td> RMA-NJ * </td><td> 63.2% </td><td> 59.7% </td><td> 34.6% </td><td> 18.7% </td></tr><tr><td> לאומי ממוצע </td><td> 48.6% </td><td> 38.3% </td><td> 24.3% </td><td> 12.3% </td></tr><tr><td colspan="5"> SCCRM-דרום קליפורניה המרכז לרפואת פוריות; CCRM-קולורדו המרכז לרפואת פוריות; ו RMA-ReprodAssociates לרפואה uctive </td></tr><tr><td colspan="5"> * מרפאות מובילות אלה יש את כל בעיקר מיושמים מחזורי חזרת עוברת מזוגגים, בשיתוף עם בדיקות גנטיות preimplantation, לפועל שלהם רמת הטיפול המטופל כדי לייעל הצלחת לידה חייה לכל עובר המושתל. </td></tr></tbody></table> טבלת 2. 2014 שיעורי לידה חי מצטברים, כפי שדווח על ידי אגודת טכנולוגיות רביית Assisted (סארט), עבור &#39;מרפאת SCCRM בעזרת מעבדת פוריות Ovation שלנו בניופורט ביץ&#39;, קליפורניה, בניגוד מספר תוכניות מכובדות אחרות, כמו גם עם סארט ממוצע ארצי.

Watch this Scientific Journal Video about Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts at JoVE.com

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

Vitrification MicroSecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל Cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

modified-microsecure-vitrification-safe-simple-highly-effective

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

11.9K Views.  Ovation Fertility. MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

Video: Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal and postnatal consequences. To ensure the innocuousness of ART applications, studies in animal models are necessary. In addition, as a last step, embryo development studies require evaluation of their capacity to develop full-term healthy offspring. Here, embryo transfer to the uterus is indispensable to perform any ARTs-related experiment.
The rabbit has been used as a model organism to study mammalian reproduction for over a century. In addition to its phylogenetic proximity to the human species and its small size and low maintenance cost, it has important reproductive characteristics such as induced ovulation, a chronology of early embryonic development similar to humans and a short gestation that allow us to study the consequences of ART application easily. Moreover, ARTs (such as intracytoplasmic sperm injection, embryo culture, or cryopreservation) are applied with suitable efficiency in this species.
Using the laparoscopic embryo transfer technique and the cryopreservation protocol presented in this article, we describe 1) how to transfer embryos through an easy, minimally invasive technique and 2) an effective protocol for long-term storage of rabbit embryos to provide time-flexible logistical capacities and the ability to transport the sample. The outcomes obtained after transferring rabbit embryos at different developmental stages indicate that morula is the ideal stage for rabbit embryo recovery and transfer. Thus, an oviductal embryo transfer is required, justifying the surgical procedure. Furthermore, rabbit morulae are successfully vitrified and laparoscopically transferred, proving the effectiveness of the described techniques.

Assisted reproductive techniques (ARTs) are in continuous evaluation to improve outcomes and reduce the associated risks. This manuscript describes a minimally invasive embryo transfer procedure with an efficient cryopreservation protocol that allows the use of rabbits as an ideal animal model of human reproduction.

העברת העובר פולשני המינימלי העובר ויטריפיקציה בשלב העובר אופטימלית במודל ארנב

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Human Blastocyst Biopsy and Vitrification

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow entails a safe and efficient vitrification protocol, due to the turnaround time of the diagnostic techniques and to transfer the selected embryo(s) on a physiological endometrium in a following natural cycle. A biopsy approach encompassing the sequential opening of the zona pellucida and retrieval of 5-10 trophectoderm cells (ideally 7-8) limits both the number of manipulations required and the exposure of the embryo to sub-optimal environmental conditions. After proper training, the technique was reproducible across different operators in terms of timing of biopsy (~8 min, ranging 3-22 min based on the number of embryos to biopsy per dish), conclusive diagnoses obtained (~97.5%) and live birth rates after vitrified-warmed euploid blastocyst transfer (&#62;40%). The survival rate after biopsy, vitrification and warming was as high as 99.8%. The re-expansion rate at 1.5 h from warming was as high as 97%, largely dependent on the timing between biopsy and vitrification (ideally &#8804;30 min), blastocyst morphological quality and day of biopsy. In general, it is better to vitrify a collapsed blastocyst; therefore, in non-PGT cycles, laser-assisted artificial shrinkage might be performed to induce embryo collapse prior to cryopreservation. The most promising future perspective is the non-invasive analysis of the IVF culture media after blastocyst culture as a putative source of embryonic DNA. However, this potential avant-garde is still under investigation and a reliable protocol yet needs to be defined and validated.

Blastocyst biopsy and vitrification are required to efficiently conduct preimplantation genetic testing. An approach entailing the sequential opening of the zona pellucida and retrieval of 7-8 trophectoderm cells in day 5-7 post-insemination limits both the number of manipulations required and the exposure of the embryo to sub-optimal environmental conditions.

ביופסיה של האדם בלסטוציסטה וויטריפיקציה

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow ...

Minimum Volume Vitrification of Immature Feline Oocytes

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to promote biodiversity preservation. In felids, most species are threatened with extinction, and domestic breeds are used as a model to increase the efficiency of protocols for germplasm banking. Among oocyte cryopreservation techniques, vitrification is more and more popular in human and veterinary assisted reproduction. Cryotop vitrification, which was at first developed for human oocytes and embryos, has demonstrated to be well-suited for cat oocytes. This method offers several advantages, such as the feasibility in field conditions and the speed of the procedure, which can be helpful when several samples need to be processed. However, the efficiency is strongly dependent on the operator&#8217;s skills, and intra- and inter-laboratory standardization are needed, as well as personnel training. This protocol describes minimum volume vitrification of immature feline oocytes on a commercial support in a step by step field-friendly protocol, from oocyte collection to warming. Following the protocol, preservation of oocyte integrity and viability at warming (as high as 90%) can be expected, although there is still room for improvement in post-warming maturation and embryonic development outcomes.

This manuscript describes a protocol for the minimum volume vitrification of immature cat oocytes with laboratory-made media on commercial supports. It covers every step from oocyte isolation from ex vivo gonads to vitrification and warming.

כמות מינימלית של ויטריפיקציה של חתולים לא בוגרים

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to ...

Vitrification of In Vitro Matured Oocytes Collected from Adult and Prepubertal Ovaries in Sheep

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily obtained from a slaughterhouse. Adult ovaries always bear several antral follicles, while in pre-pubertal donors the maximal numbers of oocytes are available at 4 weeks of age, when ovaries bear peak numbers of antral follicles. Thus, 4 weeks old lambs are considered good donors, even if the developmental competence of prepubertal oocytes is lower compared to their adult counterpart. 
Basic research and commercial applications would be boosted by the possibility of successfully cryopreserving vitrified oocytes obtained from both adult and prepubertal donors. The vitrification of oocyte collected from prepubertal donors would also allow shortening the generation interval and thus increasing the genetic gain in breeding programs. However, the loss of developmental potential after cryopreservation makes mammalian oocytes probably one of the most difficult cell types to cryopreserve. Among the available cryopreservation techniques, vitrification is widely applied to animal and human oocytes. Despite recent advancements in the technique, exposures to high concentrations of cryoprotective agents as well as chilling injury and osmotic stress still induce several structural and molecular alterations and reduce the developmental potential of mammalian oocytes. Here, we describe a protocol for the vitrification of sheep oocytes collected from juvenile and adult donors and matured in vitro prior to cryopreservation. The protocol includes all the procedures from oocyte in vitro maturation to vitrification, warming and post-warming incubation period. Oocytes vitrified at the MII stage can indeed be fertilized following warming, but they need extra time prior to fertilization to restore damage due to cryopreservation procedures and to increase their developmental potential. Thus, post-warming culture conditions and timing are crucial steps for the restoration of oocyte developmental potential, especially when oocyte are collected from juvenile donors.

The protocol aims at providing a standard method for the vitrification of adult and juvenile sheep oocytes. It includes all the steps from the preparation of the in vitro maturation media to the post-warming culture. Oocytes are vitrified at the MII stage using Cryotop to ensure the minimum essential volume.

ויטריפיקציה של אין ויטרו התבגר אוציטס שנאספו מן השחלות למבוגרים טרום-פוברטל בכבשים

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily ...

Morphometric Protocol for the Objective Assessment of Blastocyst Behavior During Vitrification and Warming Steps

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a blastocyst&#39;s volume changing during individual phases before and after vitrification. The method can be useful in searching for the most optimal timing of blastocyst exposure to different concentrations of cryoprotectants by observing blastocyst shrinkage and re-expansion in different pre- and post-vitrification phases. With this methodology, the blastocyst vitrification protocol can be optimized. For a better demonstration of the usefulness of this morphometric method, two different blastocyst preparation protocols for vitrification are compared; one with using an artificial blastocoel collapsing and one without this intervention before vitrification. Both blastocysts&#39; volume changes are followed by time-lapse microphotography and measured by photo-editing software tools. The measurements are taken every 20 seconds in previtrification phases and every 5 minutes in the post-warming period. The changes of the blastocyst dimensions per time unit are presented graphically in line diagrams. The results show a long equilibration previtrification phase in which the intact blastocyst first shrinks and then slowly refills the blastocoel, entering vitrification with a fluid-filled blastocoel. The artificially collapsed blastocyst remains in its shrunken stage through the entire equilibration phase. During the vitrification phase, it also does not change its volume. Since the blastocyst morphometry shows a constant volume of the artificially collapsed blastocysts during the previtrification step, it seems that this stage could be shorter. The described protocol provides many additional comparative parameters of blastocyst behavior during and after cryopreservation on the basis of the speed and intensity of the volume changes, the number of partial blastocoel contractions or total blastocyst collapses, and the time to a total blastocoel re-expansion or the time to hatching.

Here we present a time-lapse morphometric protocol to follow the intensity of blastocyst shrinkage and re-expansion during previtrification interventions and post-warming recovery. The application of the protocol is possible in in vitro fertilization laboratories equipped with time-lapse microscopes and is recommended in the development of an optimal blastocyst vitrification method.

פרוטוקול Morphometric להערכה אובייקטיבית של הבלסטוציסט התנהגות במהלך ויטריפיקציה והשלבים התחממות כדור הארץ

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a ...

Bioengineering

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic modifications and the number is consistently increasing year by year. Its technical development started with slow freezing methods in the 1970s1, then followed by vitrification methods developed in the late 1980s2. Generally, the latter technique is advantageous in its quickness, simplicity, and high survivability of recovered embryos. However, the cryoprotectants contained are highly toxic and may affect subsequent embryo development. Therefore, the technique was not applicable to certain strains of mice, even when the solutions are cooled to 4&deg;C to mitigate the toxic effect during embryo handling. At the RIKEN BioResource Center, more than 5000 mouse strains with different genetic backgrounds and phenotypes are maintained3, and therefore we have optimized a vitrification technique with which we can cryopreserve embryos from many different strains of mice, with the benefits of high embryo survival after vitrifying and thawing (or liquefying, more precisely) at the ambient temperature4.
Here, we present a vitrification method for mouse embryos that has been successfully used at our center. The cryopreservation solution contains ethylene glycol instead of DMSO to minimize the toxicity to embryos5. It also contains Ficoll and sucrose for prevention of devitrification and osmotic adjustment, respectively. Embryos can be handled at room temperature and transferred into liquid nitrogen within 5 min. Because the original method was optimized for plastic straws as containers, we have slightly modified the protocol for cryotubes, which are more easily accessible in laboratories and more resistant to physical damages. We also describe the procedure of thawing vitrified embryos in detail because it is a critical step for efficient recovery of live mice. These methodologies would be helpful to researchers and technicians who need preservation of mouse strains for later use in a safe and cost-effective manner.

An ethylene glycol-based vitrification method for mouse embryos is described. It is advantageous to other methods in its simplicity and low embryonic toxicity, and therefore can be broadly applicable to many strains of mice, including inbred and gene-modified mice.

Cryopreservation של עוברי עכברים ידי Vitrification אתילן גליקול מבוסס

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

Biology

Bulk Droplet Vitrification for Primary Hepatocyte Preservation

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. Vitrification requires extremely fast cooling rates to achieve transition of water into the glass phase while avoiding injurious ice formation. Although pre-incubation with cryoprotective agents (CPA) can reduce the critical cooling rate of biological samples, high concentrations are generally needed to enable ice-free cryopreservation by vitrification. As a result, vitrification is hampered by CPA toxicity and restricted to small samples that can be cooled fast. It was recently demonstrated that these inherent limitations can be overcome by bulk droplet vitrification. Using this novel method, cells are first pre-incubated with a low intracellular CPA concentration. Leveraging rapid osmotic dehydration, the intracellular CPA is concentrated directly ahead of vitrification, without the need to fully equilibrate toxic CPA concentrations. The cellular dehydration is performed in a fluidic device and integrated with continuous high throughput generation of large sized droplets that are vitrified in liquid nitrogen. This ice-free cryopreservation method with minimal CPA toxicity is suitable for large cell quantities and results in increased hepatocyte viability and metabolic function as compared to classical slow-freezing cryopreservation. This manuscript describes the methods for successful bulk droplet vitrification in detail.

This manuscript describes an ice-free cryopreservation method for large quantities of rat hepatocytes whereby primary cells are pre-incubated with cryoprotective agents at a low concentration and vitrified in large droplets.

בצובר Droplet ויטריפיקציה עבור שימור ההירופציט הראשי

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation is recognized by several international scientific societies as the gold standard for fertility preservation in postpubertal women, for both medical and non-medical indications. The main medical indications are oncologic diseases, gynecologic diseases such as severe endometriosis, systemic diseases compromising the ovarian reserve, and genetic conditions involving premature menopause. This paper describes the whole clinical and laboratory work-up of a fertility preservation treatment by outlining recommendations for objective and evidence-based counseling. Furthermore, it focuses on the effectiveness of the procedure and describes the most appropriate strategies to fully exploit the ovarian reserve and maximize the number of oocytes retrieved in the shortest possible time. The evaluation of the ovarian reserve, the definition of an ideal stimulation protocol, as well as oocyte retrieval, denudation, and vitrification procedures have been detailed along with approaches to maximize their efficacy, efficiency, and safety.

Oocyte cryopreservation is recognized by several international scientific societies as the gold standard for fertility preservation in postpubertal women. Appropriate clinical and laboratory strategies ensure maximum efficacy, efficiency, and safety of fertility preservation treatments.

שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Medicine

Single Cell Collection of Trophoblast Cells in Peri-implantation Stage Human Embryos

Human implantation, the apposition and adhesion to the uterine surface epithelia and subsequent invasion of the blastocyst into the maternal decidua, is a critical yet enigmatic biological event that has been historically difficult to study due to technical and ethical limitations. Implantation is initiated by the development of the trophectoderm to early trophoblast and subsequent differentiation into distinct trophoblast sublineages. Aberrant early trophoblast differentiation may lead to implantation failure, placental pathologies, fetal abnormalities, and miscarriage. Recently, methods have been developed to allow human embryos to grow until day 13 post-fertilization in vitro in the absence of maternal tissues, a time-period that encompasses the implantation period in humans. This has given researchers the opportunity to investigate human implantation and recapitulate the dynamics of trophoblast differentiation during this critical period without confounding maternal influences and avoiding inherent obstacles to study early embryo differentiation events in vivo. To characterize different trophoblast sublineages during implantation, we have adopted existing two-dimensional (2D) extended culture methods and developed a procedure to enzymatically digest and isolate different types of trophoblast cells for downstream assays. Embryos cultured in 2D conditions have a relatively flattened morphology and may be suboptimal in modeling in vivo three-dimensional (3D) embryonic architectures. However, trophoblast differentiation seems to be less affected as demonstrated by anticipated morphology and gene expression changes over the course of extended culture. Different trophoblast sublineages, including cytotrophoblast, syncytiotrophoblast and migratory trophoblast can be separated by size, location, and temporal emergence, and used for further characterization or experimentation. Investigation of these early trophoblast cells may be instrumental in understanding human implantation, treating common placental pathologies, and mitigating the incidence of pregnancy loss.

Here, we describe a method for warming vitrified human blastocysts, culturing them through the implantation period in vitro, digesting them into single cells and collecting early trophoblast cells for further investigation.

אוסף תאים בודדים של תאי טרופוביסט בעוברים אנושיים שלב השתלה פרי

Human implantation, the apposition and adhesion to the uterine surface epithelia and subsequent invasion of the blastocyst into the maternal decidua, is a ...

<meta charset="utf8"></head><body>הערכת כדאיות זקיקים ברקמות קליפת המוח השחלתית האנושית המבחנה

Vitrification of Ovarian Cortex Tissue to Achieve a Glassy State of Aggregation

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or for pre-pubertal girls, it is often the only option for fertility protection. Cryopreservation can be performed either by vitrification or by slow freezing. Slow freezing is currently the standard approach. An increasing number of studies indicate that vitrification can replace slow freezing in the state-of-the-art in vitro fertilization (IVF) laboratories, significantly improving thawing survival rates and simplifying the technical aspects of cryopreservation. A metal grid-based, high-throughput protocol for rapid vitrification of ovarian cortex tissue, suitable for clinical routine, is described. The sterilization of metal grids and liquid nitrogen ensures high quality, meeting good manufacturing practice (GMP) standards. Vitrification was conducted to ensure ultra-rapid cooling rates. Instead of slowly thawing, samples were rapidly warmed. To assess follicular viability, calcein staining was performed both prior to cryopreservation and after rapid warming. The successful application of vitrification and rapid warming using metal grids is reported. No significant differences in follicular viability were observed prior to vitrification and after rapid warming. These results substantiate the high capacity of tissue vitrification for clinical routine applications as a potential substitute for the widely used slow-freezing method.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: קידום שימור פוריות אצל חולות סרטן צעירות באמצעות ויטריפיקציה של רקמת השחלות וצמיחה זקיקית חוץ גופית

A protocol for the vitrification of ovarian tissue, as an alternative cryopreservation method to the widely used slow freezing protocol, is presented.

ויטריפיקציה של רקמת קליפת המוח השחלתית להשגת מצב זגוגי של צבירה

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or ...