שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח של הטרוגניות האוכלוסייה באמצעות הערכה מורפולוגית של התאים. במיקרוסקופיה של situ מאפשרת חקר תנאי טיפוח, תפוקות תהליכים ואיכות המוצר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא מדידה במקום, המספק נתונים בזמן אמת ללא דגימה או להביא סיכון לזיהום.
במיקרוסקופיה של situ, יחד עם זיהוי תמונה אוטומטי, ניתן לספק מידע נוסף אודות מבנים תאיים, צורה והתגנונות תאים מעבר לגודלם. אפשר גם למדוד ריכוזי תאים. השיטה הוכיחה להיות כלי אמין.
שום שיטה חלופית אינה מספקת את אותו מידע בזמן כה קצר ובמאמץ נמוך להכנת מדגם. השיטה הותאמה לביו-מעבדים ומיקרואורגניזמים שונים, פטריות סיסיביות SEG, מיקרו אלרגיה ושמרים. הגשוש משמש בשילוב עם מחשב.
החומרה מורכבת מבדיקה מוט יחיד עם מצלמת CCD ברזולוציה גבוהה. תאים העוברים דרך רווח מדידה מתכוונן תצלמו על-ידי המצלמה. האור נכנס לפער מול המצלמה, כלומר התאורה היא על ידי שידור.
הגדר את פרמטרי החומרה באמצעות ריכוזי תאים המשתרעים על-פני הטווח הצפוי. התחל לבצע הכנות למדידות לא מקוונות. השתמש במד עובי כדי להתאים את רווח המדידה.
לאחר מכן סובבו את אגוז בורג החללית כדי להגדיר את פער המדידה ל-5 או פי 10 מהקטר המרבי הצפוי של התא. במחשב, פתח את תוכנת בקר הבדיקה. בתוכנה, בחר את הבדיקה הרצויה ולעבור לפעולות סעיף.
לאחר מכן הקש Connect. לאחר מכן, עבור אל הכרטיסיה בקרת בדיקה ופתח אותה. התחל הזרמת וידאו על-ידי לחיצה על לחצן ההפעלה.
תקן את הגשוש חצובה ובצע את השלבים הבאים עבור כל מדידה. עבוד עם הגשוש ותרסס אתנול בפער המדידה. יש לנגב בזהירות כל אבק או לכלוך באמצעות נייר אופטי.
במחשב, השתמש בתצוגה חיה כדי לבדוק כי הזכוכית של החיישן הוא ללא חלקיקים. לאחר מכן, מקם נייר אופטי יבש בפער המדידה להתמקדות. סובב את בורג הכריכה כדי להזיז את המוקד באופן ידני.
הפסק להתמקד כאשר סיבים בודדים של הנייר בפער המדידה נראים בבירור. עכשיו, קבל צינור מלא במרק תרבות. טובלים את המיקרוסקופ במרק, כך שהפער מכוסה לחלוטין בהשעיית תאים.
השתמש בברגים מחייבים כדי לכוונן את המוקד על התאים. לאחר התמקדות זו נעשית, לא לשנות את זה שוב במהלך הניסוי. חזור לתוכנה לניסוי.
עבור לתפריט מפעיל. תחת תפריט מפעיל, הגדר את קצב המסגרות. הרץ אחד מומלץ למדידות לא מקוונות.
משם, עבור לשדה מסגרות לכל גורם מפעיל והגדר אותו לפי הצורך עבור סטטיסטיקה טובה. הנה, בערך 200. כמו כן, עבור לתפריט כללי.
שם, בחר את הספריה שבה יישמרו התמונות. התחל רכישת תמונה באמצעות לחצן התחל רכישת גורם מפעיל של תמונה. הזז בעדינות את הצינור כדי לגרום לזרימה בפער המדידה.
השתמש בתמונות מההפעלה הראשונה של הניסוי כסט אימונים. יש את תוכנת קוד פתוח פיג'י מוכן ושחרר את התמונות מהניסוי לתוך החלון שלה. לאחר שתסיים, בחר נתח ולאחר מכן לחץ על כלים ולאחר מכן על מנהל ההשקעות.
לאחר מכן, בחרו כלי בחירה. בתמונה, החלט על חלקיק כדי להוסיף ביאורים בפוקוס. צייר עיגול סביבו בעזרת כלי הבחירה.
לחץ על הוסף כדי להוסיף את הביאור למנהל ההשקעות. לאחר מכן, בחרו כלי מברשת ובחרו גודל פיקסל מתאים. השתמש בכלי המברשת כדי למקד את הבחירה.
המשך לסמן את כל האובייקטים המעניינים באותו אופן בכ- 15 תמונות. שמור את הקבצים המבארים ולהשתמש בהם כסט אימונים. כאשר אלגוריתם הזיהוי מאומן ומוכן, השתמש בו כדי להמחיש תוצאות.
במנתח התוצאות, עבור אל קובץ ואחריו ייבוא קובץ. שם, בחר את קובץ התוצאות הרצוי. המשך על-ידי לחיצה על לחצן צור תרשים.
בחר תרשים תפוצה. זה יציג את ההתפלגות המורפולוגית של התרבות. חזור אל יצירת תרשים כדי לבחור התוויית רגישות.
המידע המוצג יכול לסייע בקביעת מספר התאים שיש לנתח כדי להשיג את הדיוק הרצוי. בצע מדידות מקוונות לאחר השלמת מדידות לא מקוונות. למדידות מקוונות, חבר את הגשוש ישירות לביו-ריירקטור.
לאחר ההתחברות, יש לעקר כראוי את ההרכבה. בחר פיקוח בלוח המחוונים. יש כפתור הפעלה כדי להתחיל רכישת תמונה ולחצן עצירה כדי לסיים אותו.
לחץ על לחצן ההפעלה. בביו-ריירקט, התחילו לחיסון התרבות. המצלמה תלכוד וידאו של התאים ותזהה אותם באופן אוטומטי לניתוח.
הניטור מספק נתונים מקוונים של גדלי תאים וצורות של מורולוגיות תאים שונות במהלך התסיסה כולה. ניתן לעצב את התוצאות בזמן אמת בדרכים שונות וגם לייצא אותן לניתוח נוסף. חלקה זו של התפלגויות מצטברות של קוטר תא S.Cerevisiae נוצרת מנתונים שנותחו באמצעות טכניקה זו.
הוא מדגים את זיהוי התאים האוטומטי מסוגל להבחין בין תאים ניצנים ותאים שאינם ניצנים. העקומה המוצקה היא ההתפלגות במהלך הטיפוח בשלוש שעות. העקומה המנוקדת היא התפלגות של אותו טיפוח בשבע שעות.
העקומה המקווקות מייצגת נתונים שנאספו ב- 13 שעות. הליך הביאור גוזל זמן רב, אך הוא המפתח להשגת הדיוק הרצוי עבור זיהוי התא. בהליך זה, אם זמני המדידה קצרים יותר מדינמיקת התהליך, ניתן להשתמש במדידה בזמן אמת לבקרת פרוצס.
טכניקה זו סוללת את הדרך לשימוש במדידת הטרוגניות האוכלוסייה כפי פרמטר תהליך לגידול מיקרוביאלית מהצעדים המוקדמים של פיתוח תהליכים לקנה מידה של ייצור.
