שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר במדעי המוח על איך אות טרנסדוקציה מצע תחבורה פינוי פסולת להתרחש בחללים חוץ תאיים במוח. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת דגימה וכימות של מולקולות חוץ-תאיות גדולות בנוזל הבין-תאי או ב- ISF של בעלי חיים ערים הנעים בחופשיות. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, הסר את השיער מהגולגולת של עכבר הרדמה ולהשתמש בפסי האוזן ומהדק האף כדי לתקן את החיה בבטחה על מתאם.
יש למרוח משחה על עיני החיה ולהחיל את המתאם על המנגנון הסטריאוטקסי. השתמש אזמל כדי להפוך חתך בעור sagittally על הגולגולת ולצרף מקדחה על המניפולטור של מסגרת סטריאוטוקסית. מנמיך את התרגיל עד שהוא נוגע בעדינות lambda ולאפס את קואורדינטת DV של התרגיל לאפס.
לאחר מכן, הזיזו את התרגיל ל-bregma לאיפוס קואורדינטות AP ו- ML לאפס. העבר את התרגיל מברגמה לתיאום האנכי. מנמיך את המקדחה לגולגולת והגדר את קואורדינטת DV לאפס שוב.
לאחר חזרה על ההליך עבור קואורדינטת שלישית, לקדוח חור בר בזהירות על קואורדינטת היעד, ואחריו חור שני בצד הנגדי של עצם קודקודית. הכנס בורג עצם לתוך החור השני והצב את פיסת הנעילה ממכסה צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר על הגולגולת, כך חורי בר נמצאים בתוך המעגל. לאחר מכן, מניחים cannula מדריך על הזרוע הקצרה יותר של מתאם סטריאוטוקסי להדק את cannula עם אגוז כובע.
הגדר את הזרוע הארוכה יותר של המתאם הסטריאוטוקסי על מהדק האלקטרודה והצמד את הזרוע על המניפולטור של המנגנון הסטריאוטקסי. סובב את ההרכבה הסטריאוטוקסית DV על זרוע המניפולטור ב -12 מעלות והזז את המדריך cannula לחור בר. לאחר מכן, לאט להוריד את המדריך cannula 1.2 מילימטרים לתוך המוח.
מוסיפים מלט דנטלי לכתר עד שחלק המתכת של צינורית המדריך, בורג העצם וכל גולגולת חשופה מכוסים ומאובטחים ומאפשרים למלט להתייבש. לאחר 12 עד 20 דקות, הסר את המתאם הסטריאוטוקסי ממהדק האלקטרודה, הסר את אגוז המכסה והחלף את המתאם הסטריאוטקסי בבדיקה דמה. לאחר מכן, refasten אגוז כובע, לשחרר את העכבר מן המנגנון הסטריאוטוקסי, והאוס העכבר לבד בכלוב בודד.
לפני הגדרת microdialysis, למלא מזרק חד פעמי אחד מיליליטר עם מים מזוקקים ולהשתמש צינור ויטון כדי לחבר את המזרק לשקע של בדיקה microdialysis. מכסים ידנית את חורי האוורור ומדכאים בעדינות את בוכנה המזרק כדי להחדיר את הגשוש במים. ודא כי מים מופיעים במבונית החללית כי יש דליפה על פני השטח של קרום microdialysis.
כדי להפעיל את החללית, להטביע את קרום החללית ב 70-100% אתנול במשך שתי שניות, ואחריו עירוי מים מזוקק שני. חבר מחט חיבור למפרצה אחת ולקו שקע אחד וטען מזרק חד פעמי של שלושה מיליליטר עם חיץ תדלוק טרי. חבר מזרק המצויד במחט קהה לקצה התוך של הצינורות ולהשתמש במשאבת מזרק כדי למלא את הצינור כולו עם חיץ תדלוק.
כאשר הצינור מלא, החלף את מחט החיבור בין קווי התוך והשקע עם בדיקה microdialysis מופעל ואגוז כובע ולהעלות צינור רולר לתוך צינורות שקע על משאבת רולר. הפעל את משאבת המזרק ב 10 microliters לדקה ואת משאבת רולר ב 9.5-9.8 microliters לדקה. עכשיו מניחים את הצווארון סביב הצווארון של המדריך הרדמה cannula מושתל בעלי חיים ולהסיר את אגוז כובע בדיקה דמה.
הכנס לאט את בדיקה microdialysis דרך cannula מדריך להדק את אגוז הכובע. לאחר מכן, מקם את העכבר בכלוב המחובר למערכת הנעה בחופשיות ו לקשור את העכבר עם הצווארון. לאחר שעה אחת לפחות, עצרו ברצף את משאבת הגלילה ומשאבת המזרק, הפעילו מחדש את המשאבות עם משאבת המזרק מוגדרת ל-20% מהר יותר ממשאבת הגלילה והכניסו את הקצה החופשי של צינורות השקע על אספן שברים בקירור כדי לאסוף את ספק השירות של המוח.
כאשר אמצעי האחסון הניסיוני המתאים הושג, להסיר את החללית ולטפל בהתאוששות העכבר כפי שהוכח רק. בקנה אחד עם תצפיות קודמות, כאשר 50 מיקרומולרי Picrotoxin מנוהל באמצעות microdialysis הפוך כפי שהוכח בעכברים C57B6J ער, עלייה ברמות טאו אנדוגני interstitial נצפתה בהשוואה לרמות שנמדדו בבעלי חיים שטופלו בבקרת רכב. בנוסף למינהלי תרופות, מיקרודיאליזה יכולה להיות משולבת עם שיטות אחרות vivo כמו הקלטת EEG או אופטוגנטיקה כדי לענות על שאלות נוספות על איך פעילות עצבית משפיעה על ריכוז המצע ב- ISF.
