פרוטוקול זה יכול לשמש כדי למדוד את פוטנציאל הממברנה של כלי דם נורמליים וחלליים כדי להעריך סוכנים תרופתיים לווסת את פוטנציאל הממברנה, הטון כלי הדם, וזרימת הדם. פוטנציאל הממברנה שנוצר מטכניקה זו קרוב לטווח הפיזיולוגי שכן השרירים החלקים בכלי הדם בתוך כלי נמצאים בסנכרון. לפני תחילת ההליך, מניחים מגבר אלקטרומטר דיפרנציאלי דו-ערוצי קרוב לתא כלי השיט במיקום הרצוי.
השתמש בכבל BNC-BNC כדי לחבר את הפלט של ערוץ המגבר A או B לקלט הערוץ של הדיגיטייזר. הר את הגשוש במיקרומניפולטור, וסובב את המיקרומניפולטור לכיוון המיקרוסקופ והמיוגרף על שולחן ללא רטט. מניחים את הידיות והמתגים בחזית המגבר במיקומים המתאימים לניסוי, כמתואר במדריך.
לאחר מכן חבר את קרקע האמבטיה לקרקע המעגלית של המגבר עם אלקטרודה מתאימה, וודא שהכלוב מקורקע למארז המגבר. כדי להכין את microelectrodes זכוכית borosilicate, להשתמש מושך סטנדרטי כדי להשיג קצר, הדרגתי, שמונה עד 10 מילימטר להתחדד עם קוטר פחות ממיקרומטר אחד, לולאה פעמיים עבור התנגדויות גבוהות יותר וטיפים קטנים יותר. השתמש מזרק מיקרופייבר כדי למלא את microelectrode עם שלושה טוחנות אשלגן כלורי, לאט לסגת הבוכנה במהלך ההזרקה כדי לאפשר מקום לנוזל למלא ולמנוע היווצרות של בועות בתוך microelectrode.
מניחים את המיקרו-אלקטרוד הטעון במלואו על מחזיק המיקרו-אלקטרורוד, ודחפו בזהירות אך בחוזקה את שוק האלקטרודה לתוך המחזיק דרך החור המשועמם. הסר כל נוזל עודף עם רקמת מעבדה, וחבר את מכלול מחזיק האלקטרודה לבדיקה המגבר. לבצע בדיקת אלקטרודה כדי למדוד את עמידות האלקטרודה.
לאחר מכן פתח את תוכנת ההקלטה, הקצה שם לקובץ ושמור את הקובץ לניתוח עתידי. לאחר מכן, לשטוף את תא מיוגרף עם מים מזוקקים מספר פעמים לפני טעינת התא עם חמישה מיליליטר של תמיסת מלח פיזיולוגית נורמלית, או PSS. באמצעות מזרק 5 או 10 מיליליטר, למלא הן קנולה זכוכית צינורות המצורפת עם PSS נורמלי מסונן מבלי להציג את כל בועות אוויר, ולהשתמש מטסים קהה לעשות חצי קשר בשני תפרים ניילון monofilament 10-0.
לאחר מכן, באמצעות מעצורי ניתוח תחת מיקרוסקופ ניתוח, מניחים את קשרי התפר הסגורים חלקית על שתי הנולאס מעט הרחק מהטיפים. לבידוד עורק מוחי באמצע, השתמש במספריים ומדפים באביב כדי לזהות ול לנתח קטע לא משופץ של עורק המוח האמצעי, בקוטר פנימי של 100 עד 200 מיקרומטר, של מוח החולדה. השתמש מדפים עדין כדי לעלות על העורק המוחי האמצעי על cannulas זכוכית, ולהדק את התפרים כדי לאבטח את העורק אל cannula.
סגור את צינורית דיסטל כך שלא תהיה זרימה בתוך העורק, ולחבר את פיפטה הזרימה למאגר של PSS. דמיינו את עורק המוח האמצעי המעוות באמצעות מצלמת התקן מרוכב בטעינה המותקנת על מיקרוסקופ הפוך ותופת הדמיה. הגדר את האורך האקסיאלי של MCA לאורך משוער כך שהוא לא נראה נוקשה ולא רפוי.
לצייד את פתרון האמבטיה עם 95%חמצן ו 5% פחמן דו חמצני ב 37 מעלות צלזיוס. לטבול את הקרקע של המגבר ב PSS של ההייאוגרף. להאיר את תא כלי הקיבול, ולדמיין את קצה microelectrode בת פתרון האמבטיה דרך המיקרוסקופ.
באמצעות micromanipulator, להזיז את קצה microelectrode קרוב לקיר החיצוני של כלי הדם, ולהתחיל את ההקלטה. להזיז לאט את קצה microelectrode לכיוון כלי השיט, מכוון למרכז הספינה. כאשר הקצה מגיע בסמיכות לכלי השיט, לקדם את האלקטרודה קדימה בתנועה מהירה אחת כדי לשפד את קרום השריר.
לאחר חדירת הממברנה, ניתן לראות שינויים בפוטנציאל הממברנה. אל תיגע במיקרומניפולטור ברגע שהמברנה תשולף. לאחר שהשינויים הפוטנציאליים בממברנה נרשמו, השתמש בתפעלן כדי להסיר את המיקרו-אלקטרונירוד בתנועה מהירה אחת, והפסק את ההקלטה לפני שמירת קבצי הנתונים.
אימפלמנט נחשב מוצלח כאשר יש הסטה מהירה לערכים שליליים, פוטנציאל הממברנה יציב למשך 30 שניות לפחות, והמתח חוזר בפתאומיות לאפס מילי-וולט עם הסרת האלקטרודה. לאחר שידול מוצלח וייצוב פוטנציאלי קרום, תרופות מעניינות ניתן לחדור לתוך האמבטיה ושינויים בפוטנציאל הממברנה ניתן לתעד. בניסוי מייצג זה, תרכובת עם אשלגן כלורי depolarized את הממברנה על ידי כשישה מיליוולטים, בעוד תרכובת עם מפעיל תלוי סידן של מוליכות גדולה מופעל אשלגן ערוצי אשלגן היפרפולרתי את הממברנה על ידי כמעט ארבעה מילי-וולט.
הדבר החשוב ביותר שיש לזכור הוא למשוך מיקרואלקטרוניקרודים עמידים מאוד שיש להם קצר, הדרגתי להתחדד עם קוטר פחות ממיקרומטר אחד.
