הקושי של תרבות קמפילובקטר עיכב מחקרים בסיסיים כגון כמה מעט חיידקים נדרשים כדי לייצר מחלה. דוגמאות אנליטיות ומאולץ משולבות אלה המשמשות כאן יכולות לטפל בבעיה זו. טכניקה זו מאפשרת לתסמינים קליניים רלוונטיים למטופל להיות מתואמים עם תוצאה חיובית של תרבות צואה ולראשונה, מספר ממשי של חיידקים.
לימוד מספר החיידקים המתואמים עם המחלה יספק אבחון, מטרה חשובה לגילוי ושיטה מוצקה להשוואת ארסיות בין זנים או מינים של קמפילובקטר. תרבות קמפילובקטר היא פשוטה אך היא דורשת הכנה מהירה ומאורגנת כדי לשמור על הכדאיות הכמותית. נדרש גם שיפוט רב כדי לזהות את מושבות קמפילובקטר בין צמחייה צואה מתחרה על צלחת.
לפני תחילת תרבות C.jejuni או C.coli, ללבוש כפפות, חלוק מעבדה, ומשקפי בטיחות, ולהניח יריעת מגן חד פעמית בתוך מכסה המנוע בטיחות זרימה למינארית חיטוי. באמצעות טכניקה סטרילית פס כל מלאי חיידקי hydrated או מופשר על צלחת אגר ספציפי קמפילובקטר ולה מניחים את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות בצנצנת אנאירובית המכילה גז אטמוספרה מיקרואירובי לייצר שקית. 24 שעות לאחר מכן, מכסים באופן רופף בקבוק של מרק BHI ומ מניחים את הבקבוק לתוך צנצנת אנאירובית חדשה עם שקית כי יפיק סביבה מיקרו אירובית עבור דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס.
למחרת בבוקר להשתמש שלושה מיליליטר של מרק מופחת מראש לולאה מאמץ כדי לגרד את הצלחת המתנע של תרבות קמפילובקטר. מעבירים את תרחיף לצינור סטרילי, ולחסן את 97 מיליליטר הנותרים של המרק מופחת מראש עם שלושה מיליליטר של תרחיף שרוט. מניחים את המרק בצנצנת עם שקית הגז ודחוסים את התרבות ב 37 מעלות צלזיוס ו 115 מהפכות לדקה על אינקובטור רועד במשך 48 עד 72 שעות, עד התרבות מגיעה לצפיפות אופטית ב 600 ננומטר של לא יותר מ 4.
כדי לבסס את מספר החיידקים בתרבות מלאי טהורה זו לבצע שמונה 10-פי סדרת דילול של 100 microliters של מרק ב 900 microliters של דילול. באמצעות חרוזי ציפוי סטריליים, להפיץ 100 microliters של אחד פעמים 10 כדי החמישי שלילי כדי 10 כדי דילול השביעי שלילי על כפול מראש מופחת קמפילובקטר צלחות ספציפיות צלחות תווית עם ריכוז דילול לפני הצבת הצלחות לתוך צנצנת אנאירובית שנייה עם גז לייצר שקית במשך 48 עד 72 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. בסוף תקופת הצמיחה לבחור צלחות עם בין 30 ל 300 מושבות לספירה.
לאחר הספירה השתמש בספירה כדי לקבוע את המושבה להרכיב יחידות למיליליטר של תרבות מרק המניות על פי הנוסחה. זה קריטי כי ספירת המושבה האנליטית מדויקים כמו זה ביסוד כל השלבים באמצעות בריכת צואה ממוסקרת. מיד לאחר ציפוי לספירה כפי שהוכח, מערבבים כמויות שוות של מרק ובריכת צואה שלילית קמפילובקטר ולעשות תשעה דילולים כפולים הבאים בבריכה צואה שלילית, הוספת צלחת בקרה עם מרק המכיל לא קמפילובקטר לבריכה צואה כדי לעזור לזהות את המושבות שאינן קמפילובקטר.
פס 10 microliters של כל דילול צואה קמפילובקטר על כפול מראש מופחת קמפילובקטר צלחות אגר ספציפיות להדגיר את הצלחות בצנצנת אנאירובית עם גז לייצר שקית ב 37 מעלות צלזיוס במשך כ 48 שעות. בסוף הדגירה בוחנים ויזואלית את הלוחות המפוספסים למושבות הדומות לאלה מתרבויות קמפילובקטר טהורות. כדי לאשר כי המושבות הן למעשה קמפילובקטר לבחור קמפילובקטר מרובים כמו מושבות עבור כתמי גרם לדמיין אזור פסים דק על ידי מיקרוסקופיה אור באמצעות עדשת טבילה שמן לזהות גרם שלילי מעוקל, ספירלה, או סיגר בצורת חיידקים קטנים.
לוחית בקרה שלילית ללא תוספת קמפילובקטר חשובה לסיוע בזיהוי צמחייה צואה אחרת. שקול את הדילול האחרון המכיל מושבה חזותית דמוית קמפילובקטר גרם שלילי הגבול של זיהוי תרבות. ולהשתמש בנוסחה כדי לחשב את המושבה להרכיב יחידות למיליליטר של דילול חיובי בדגימה צואה קלינית מאולץ.
כדי לקבוע את הכדאיות של קמפילובקטר מאוחסן בתחבורה בינונית לערבב מיליליטר אחד של תרבות מרק קמפילובקטר עם מיליליטר אחד של בריכת צואה שלילית ולהכין 10 כפול דילולים סדרתיים בבריכת צואה שלילית. מדללים עוד יותר כל דילול ביחס נוסף של 1-4 במדיום קארי-בלייר ומאחסנים את 20 צינורות הדילול ושליטה שלילית במדיום קארי-בלייר בצינורות כובע בשתיים עד שמונה מעלות צלזיוס למשך 96 שעות. החל מהזמן אפס וכל 24 שעות לאחר מכן פס 10 aliquots microliter של כל דילול על צלחות אגר סלקטיבי קמפילובקטר דגירה הצלחות ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות.
מכיוון שאין שיטה עצמאית לביסוס מספרי חיידקים מדויקים מדגימות מטופלים, ניתן לעשות שתי מדידות בו זמנית עם מלאי חיידקי טהור אחד. בדיקה אחת משמשת לגילוי חזותי של מושבות קמפילובקטר מדילול סדרתי של חיידקי המניות במטריצה צואה, המדמה דגימות קליניות. הבדיקה השנייה משמשת באופן אנליטי, לכמת את המושבה להרכיב יחידות למיליליטר נוכח באותה תרבות מלאי חיידקים המשמשים spiking.
פרמטר מרכזי להצלחה הוא זיהוי המושבות בגודל נקודתי בקרב הצומח הצואה המתחרה, כפי שמודגם על ידי צלחת מייצגת זו של תרבות צואה ממוסמרת. כאן, ניתן לראות נתונים אופייניים משבעה ניסויים עצמאיים. פשוט זיהוי מושבות הדומות לקמילובקקטר בתוך תרבויות הצואה אינו מספיק.
כל המושבות צריך להיות מאושר עם כתם גרם או שיטות מתקדמות יותר. אנו משתמשים immunoassay אנזים כי הוא מדויק יותר מאשר תרבות כדי לזהות מינים נדירים כגון C.upsaliensis או C.lari, אשר גדלים גרוע על אנטיביוטיקה סטנדרטית המכילה אגר. טכניקה זו מניחה את היסודות הדרושים לחקר דברים כמו הכרכרה הלא סימפטומטית של קמפילובקטר והאם עומסים חיידקיים גבוהים לשים חולה בסיכון גבוה יותר להשלכות חמורות של זיהום קמפילובקטר.
תמיד ללבוש PPE בעת עבודה עם חיידקים, אשר לעתים קרובות זיהומיות יכול להיות מסוכן, ועם מאגר צואה שלילי אשר עשוי להכיל פתוגנים לא ידועים גם כאשר נאספים מתורמים בריאים.
